CS256960B1 - Peptides with properties of antigenic determinants and method of their production - Google Patents
Peptides with properties of antigenic determinants and method of their production Download PDFInfo
- Publication number
- CS256960B1 CS256960B1 CS858286A CS828685A CS256960B1 CS 256960 B1 CS256960 B1 CS 256960B1 CS 858286 A CS858286 A CS 858286A CS 828685 A CS828685 A CS 828685A CS 256960 B1 CS256960 B1 CS 256960B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- arg
- lys
- gly
- ser
- leu
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 31
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 6
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 claims description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 3
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical group C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 3
- PMQXMXAASGFUDX-SRVKXCTJSA-N Ala-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CCCCN PMQXMXAASGFUDX-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 2
- PAPSMOYMQDWIOR-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PAPSMOYMQDWIOR-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 2
- SZNGQSBRHFMZLT-IHRRRGAJSA-N Asn-Pro-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SZNGQSBRHFMZLT-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 2
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 2
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 17
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 abstract description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 abstract description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 abstract 1
- 229940126577 synthetic vaccine Drugs 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 9
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N dichloromethane Natural products ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 4
- -1 Boc group Chemical group 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Chemical class O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-4-oxo-4-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(1h-indol-2-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC2=C1 WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N (2s,3r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLHCBQAPPJAULW-UHFFFAOYSA-N 4-methylbenzenethiol Chemical compound CC1=CC=C(S)C=C1 WLHCBQAPPJAULW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 1
- PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)CN=C(N)N PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- YIWFXZNIBQBFHR-LURJTMIESA-N Gly-His Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 YIWFXZNIBQBFHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- ONSARSFSJHTMFJ-STQMWFEESA-N Gly-Trp-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ONSARSFSJHTMFJ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- LVXFNTIIGOQBMD-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LVXFNTIIGOQBMD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRNYOVHEKOBTEF-YUMQZZPRSA-N Val-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O KRNYOVHEKOBTEF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 108010021889 valylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/863—Mycobacterium
- Y10S435/865—Mycobacterium fortuitum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/22—Viral peptide or viral protein
- Y10S930/221—Retrovirus related, or human immunodeficiency virus related, or simian immunodeficiency virus related
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Vynález se týká peptidů s vlastnostmi antigenních determinant obecného vzorce I
H-Val-x-Y (I).
kde X značí
Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asn-Pro-Leu nebo Phe-Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly nebo Val-Pro-Arg-Arg-Lys-Ala-Lys-Ile nebo Leu-His-Thr-Gly-Glu-Arg-Asp-Trp-His-Leu-Gly · nebo Ser-Gly-Lys-Ala-Arg-Gly-Trp-Phe nebo Ser-Ile-Glu-Trp-Arg-Lys-Lys-Arg-Tyr-Ser, a Y značí skupinu hydroxylovou nebo aminovou, a způsobu jejich výroby.
Látky podle vynálezu jsou nové a byly u nich prokázány vlastnosti antigenních determinant lidského T-buňky infikujícího lymfotropního viru typu III (HTLV-III). Mohou sloužit jako vhodná diagnostika к detekci protilátek proti viru způsobující syndrom získané imunodeficience (AIDS). Dále jsou potenciálně též použitelné pro produkci monodeterminantních protilátek a výhledově i jako bezpečná imunizace proti infekci virem, který způsobuje syndrom získané imunodeficience.
V současné době se AIDS diagnostikuje přítomností protilátek proti viru HTLV-III v krevním séru pacientů. Stanovení je prováděné za pomoci tzv. ELISA testu, který je založen na interakci protilátek v séru s antigenem, t. j. virem HTLV-III, inaktivovaným detergentem, jímž jsou ELISA destičky potaženy.
Virus je získáván poměrně složitým postupem, nejdříve je produkován v tkáňové kultuře infikovanými buňkami a potom je virus izolován z tkáňového média a dále několikastupňové purifikován, než je ho možné použít к potahování ELISA destiček. Jedná se o práci velice složitou a nákladnou, ale hlavně vysoce nebezpečnou, neboř se pracuje po celou dobu s vysoce infekčním materiálem.
Destičky ELISA, i když jsou potaženy inaktivovaným virovým preparátem, je nutno považovat za potenciálně infekční materiál a podle toho je nutno s nimi zacházet. Na výše zmíněném postupu jsou založeny prakticky všechny laboratorní soupravy к vyšetření onemocnění AIDS, vyráběné předními světovými výrobci, jako jsou např. Abbot, Sorino, Lab Systém, Inst. Pasteur, Electronucleonic, Wellcome, Sel avo, Organon, DuPont a další. Přitom test není zcela specifický, dává určité malé procento falešně pozitivních výsledků, způsobených i přes intenzívní purifikaci některými kontaminujícími složkami z tkáňové kultury. Proto je nutno u pozitivních případů provádět konfirmační testy, založené na jiném principu, a to bud imunofluorescenci nebo tzv. metoda Western blot. V roce 1986 se očekává uvedení na trh prvních bezpečných diagnostických souprav, které místo celého viru HTLV-III budou obsahovat jako antigen jen některé strukturální bílkoviny, získané metodou genové manipulace v produkčním bakteriálním nebo eukaryontním systému (fy Abbot, Genentech a další).
Tím by měla odpadnout nutnost konfirmačních testů, neboř by se používal jeden definovaný antigen a ne jejich směs, jak to je při použití celého viru. Tyto soupravy budou zřejmě vysoce specifické a umožní, vzhledem ke genetické variabilitě viru, vedle lepší diagnostiky, zřejmě i stanovení prognózy onemocnění. Podobných výsledků by mělo být dosaženo i s použitím některých epitopů proteinů viru HTLV-III, kde se zatím podobná souprava nevyrábí, ale je již na trhu souprava monoklonálních protilátek proti oligopeptidům z vnitřní virové bílkoviny p24 (fy Biochrom), a jsou očekávány v nejbližší době práce o imunogenních peptidech syntetizovaných na základě analýzy primární sekvence obalových proteinů viru HLTV-III.
Látky podle vynálezu byly syntetizovány způsobem podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se na polymerní nosič polystyrénového typu s chlormetylovými nebo benz3 hydrylaminovými skupinami zakotví karboxyterminální aminokyselina a postupnou kondenzací se vystaví peptidický řetězec. Poté se získaný peptid acidolyticky odštěpí z polymerního nosiče a přečistí se.
Peptidy obecného vzorce I byly připraveny Merrifieldovou metodou syntézy peptidů v pevné fázi. Jako polymerní nosič byl použit polystyren šíbovaný divinylbenzenem, s výhodou jedním procentem, s funkčními skupinami chlormetylovými nebo benzhydrylaminovými. aminoskupiny byly chráněny acidolabilní chrániči skupinou, s výhodou Boc skupinou, její odštěpování v jednotlivých fázích syntézy bylo prováděno acidolyticky, s výhodou směsí TFA a DCM. Postranní funkční skupiny vícefuknčních aminokyselin byly chráněny skupinami benzylového typu. Kondenzace chráněných aminokyselin byly prováděny vhodně aktivovanými deriváty, s výhodou symetrickými anhydridy nebo HOBt estery.
Po ukončené syntéze byly peptidy z pryskyřice odštěpeny a současně byly odstraněny chránící skupiny vícefunkčních aminokyselin acidolyticky, s výhodou působením kapalného HF nebo TFMSA ve směsi s TFA a thioanisolem. Surové produkty byly čištěny bud pomocí sloupcové chromatografie na nosičích používaných v chemii peptidů, s výhodou silikagelu, potaženém hydrofobními uhlíkatými řetezci nebo nosičů fungujících jako molekulární síta. Peptidy byly charakterizovány aminokyselinovou analýzou a jejich čistota byla ověřena chromatografickými a elektroforetickými metodami.
Minokyselinové sekvence peptidů obecného vzorce I byly odvozeny z aminokyselinové sekvence proteinu lidského T-buňky infikujícího viru typu III tak, aby zahrnovaly antigenní determinanty zmíněných proteinu. Peptidy mohou sloužit pro diagnostické účely, což bylo prokázáno autory vynálezu, pro produkci monodeterminantních protilátek a výhledově i jako bezpečná aktivní imunizace proti infekci tímto virem nebo viru, jež patří do této skupiny.
Podstatou diagnostické reakce je interakce syntetických peptidů podle vynálezu s protilátkami vytvořenými v organismu, který byl infikován virem. Syntetické peptidy obecného vzorce I jsou určeny pro detekci protilátek produkovaných infikovanými jedinci proti virálním proteinům lidského T-buňky infikujícího lymfotropního viru typu III. Při praktickém použití lze s výhodou použít např. enzymoimunologický test (ELISA), který byl autory vynálezu proveden tak, že jamky polystyrénových mikrotitračních destiček byly plněny roztokem peptidů obecného vzorce I, případně jeho konjugátem s vhodným nosičem, s výhodou kozí nebo hovězí sérový albumin, želatina, případně jiný polymerní nosič, umožňující adhezi na materiál ELISA destičky a neinterferující ve vlastním testu, který byl rozpuštěn ve fosfátovém pufru při pH 7 nebo uhličitanovém pufru při pH 9,5.
Po inkubaci 4 h při 20 °C a pak 44 h při 4 °C byl roztok obsahující nenavázaný peptid slit a použit pro další potahování. Jamky pak byly propláchnuty fosfátovým pufrem а к zablokování volných vazebných míst na polystyrénovém povrchu byl přidán 3% roztok kravského serumalbuminu ve fosfátovém pufru. Po inkubaci 1 h při 37 °C byly jamky promyty fosfátovým pufrem a pak byla přidána testovaná lidská séra, ředěná 1:100. Po inkubaci 2 h při 37 °C byly jamky promyty fosfátovým pufrem a vodou a byl přidán konjugát imunoglobulinu proti lidským imunoglobulinům s křenovou peroxidázou. Po inkubaci 2 h při 37 °C byly jamky důkladně promyty a byla vyvolána barevná reakce. Vyvolání barevné rekace bylo provedeno běžnou technikou, doba vyvolání barvy může trvat až 30 minut.
Barevná reakce byla odečtena na spektrofotometru. Reakce s peptidem vykazovala v v průměru 41,6% absorbance oproti kontrolní hodnotě 100 %, jež vykazoval antigen připravený z viru HLTV-III. Reakce s kontrolním negativním sérem se pohybovala na úrovni pozadí.
Peptidy podle vynálezu je možno dále použít pro produkci monodeterminantních protilátek proti proteinům HLTV-III směrovaných proti antigenní determinantě, kterou zahrnuje peptid, kterým byla imunizace prováděna.
Autoři vynálezu prováděli imunizaci pokusných zvířat, s výhodou králíků, peptidy obecného vzorce I s výhodou polymerizovaných glutaraldehydem nebo metodou aktivních esterů nebo po navázání na vhodnou bílkovinu, s výhodou kravský sérumalbumin, thyreoglobulin . nebo hemocyanin z keyhole limpetu, za použití kondenzačního činidla, s výhodou glutaraldehydu, karbodiimidu, bifunkčních činidel nebo pomocí aktivních esterů. Jako imunoadjuvans použili Freundovo kompletní adjuvans nebo MDP.
. Peptidy podle vynálezu je možno dále potenciálně použít jako možného přístupu к řešení problému aktivní imunizace proti lidskému T-buňky infikujícímu lymfotropnímu viru typu III, který způsobuje syndrom získané imunodeficience (AIDS). S výhodou lze imunizaci provádět volnými peptidy podle vynálezu, jejich směsí, peptidy navázanými na vhodný nosič, nebo polymerovanými pyptidy za použití glutaraldehydu nebo metodou aktivních esterů.
Na připojené tabulce 1 jsou zachyceny výsledky ELISA testu se séry negativními (NS - průměrná hodnota z více měření), se séry pacientů s positivní přítomností protilátek (SPI - SP3) proti HIV (ověřeno metodou Western blot). Séra byla ředěna 1:100 a reakce byla odečítána na fotometru Flow při 2 vlnových délkách. Jako kontrolní séra byla použita komerční positivní séra výrobců Abbott, Wellcome, Sorino, Pasteur.
| Tabulka | 1 | |||||||
| sérum | NS | SPI | SP2 | SP3 | SPA | SPW | SPS | SPP |
| absorbance O.D. | 0,005 | 1,19 | 1,43 | 1,43 | 1,8 | 1,02 | 1,08 | 1,04 |
Mimo tato séra bylo analyzováno ještě dalších 11 positivních sér, ověřených metodou Western blot na přítomnost protilátek, u kterých byly při ředění 1:100 naměřeny hodnoty absorbancí od 0,6 do 1,7. Souběžně měřená kontrolní negativní séra poskytla hodnoty pod 0,1. Na zachycení nespecifických positivních reakcí bylo analysováno 50 sér pacientů s lymfomy resp. s jinými nádorovými onemocněními. Tato séra byla ředěna 1:10 a 1:50, vždy v tripletech. Naměřené hodnoty nepřevyšovaly 0,1 O.D., pouze u 2 sér při ředění 1:10 byla zjištěna nespecifická positivní reakce o hodnotě absorbance okolo 0,2.
(O.D. optická densita)
V následující tabulce 2 jsou uvedeny průměrné hodnoty absorbancí v ELISA testu pozitivními a kotrolními negativními séry pro jednotlivé peptidy obecného vzorce I.
Tabulka 2
Průměrné hodnoty absorbancí pozitivních a negativních sér.
| Peptid obecného vzorce I | Průměrná | absorbance sér | |
| X | Y | požit. | negat. |
| Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asn-Pro-Leu | OH | 1,73 | 0,08 |
| Phe-Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly | nh2 | 0,35 | 0,06 |
| Leu-His-Thr-Gly-Glu-Arg-Asp-Trp-His-Leu-Gly | NH2 | 0,47 | 0,03 |
| Ser-Gly-Lys-Ala-Arg-Gly-Trp-Phe | NH2 | 0,11 | 0,02 |
Získané výsledky ukazují, že peptidy podle vynálezu je možno použít jako diagnostika, pro produkci monodeterminantních protilátek a potenciálně к aktivní imunizaci jako vakcíny proti AIDS.
Následující příklady provedení látky a způsob podle vynálezu pouze dokládají, ale nikterak neomezují.
Příklad 1
Do reakční nádoby syntetizátoru peptidů bylo umístěno 2,5 g chlormetylované polystyrénové pryskyřice sířované 1% divinylbenzenu a esterifikované Вос-Leu (obsah Leu 0,6 mmol/g pryskyřice). Syntéza zahrnovala 9 cyklů, sestávajících z následujících kroků: (1) štěpení chránících skupin, TFA:DCM (1:1), 1x5 min, 1 x 30 min; (2) promývání, DCM, 2x1 min;
(3) promývání, 2-propanol, 2x1 min; (4) promývání, DCM, 2x1 min; (5) neutralizace, TEA:DCM (1:9), lxl min, 1x3 min; (6) promývání DCM, 6x1 min; (7) kondenzace pomocí předem připravených symetrických anhydridu (3násobný přebytek), do negativní reakce na aminoskupiny; (8) promývání, DCM, 3x1 min.
V jednotlivých cyklech byly kondenzovány následující chráněné aminokyseliny: Boc-Pro, Boc-Asn, kondenzace 3násobkem HOBt esteru, Boc-Arg(Tos), kondenzace smícháním Boc-Arg(Tos) a DCC v reakční nádobce, Boc-Ser(Bzl), Boc-Asp(OBzl), Boc-Arg(Tos), kondenzace jako u předchozího Arg, Boc-Tyr(Z), Boc-Tyr(Z), a Вос-Val. Po ukončené syntéze bylo získáno 4,1 g peptidyl-pryskyřice. Peptidyl-pryskyřice (0,5 g) byla suspendována ve směsi TFMSA (0,75 ml), TFA (2,5 ml) a thioanisolu (1 ml).
Po 1 h míchání za laboratorní teploty byl produkt sražen 100 ml absolutního éteru, produkt a pryskyřice odfiltrovány, promyty absolutním éterem a produkt extrahován do 1 M kyseliny octové, lyofilizován a čištěn na koloně (1 x 100 cm) obsahující jako stacionární fázi polyakrylamidový gel, mobilní fáze 1 M kyselina octová, průtok 7 ml/h. Frakce obsahující homogenní produkt byly spojeny a lyofilizovány. Výsledný produkt měl aminokyselinovou anylýzu shodnou s teoretickými hodnotami, čistota produktu byla potvrzena při analytickém HPLC, Rt 7,9 (40% MeOH, 60% vodné 0,1% TFA), chromatografií na tenké vrstvě a elektroforéze na papíře při pH 2,5, Rf = 0,45.
Výtěžek: 113 mg H-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asn-Pro-Leu-OH.
Příklad 2
Do reakční nádobky syntetizátoru peptidů bylo umístěno 1,5 g benzhydrylaminové pryskyřice (obsah aminokyselin 0,7 mmol/g pryskyřice). Syntéza zahrnovala 12 cyklů, které sestávaly ze stejných kroků jako v příkladě 1 s tím rozdílem, že první cyklus začínal krokem č. (4) a kondenzace byly prováděny 3 molárním přebytkem předem připravených HOBt esterů. V jednotlivých cyklech byly kondenzovány následující aminokyseliny: Вос-Leu, Boc-Hijs (Boc), Boc-Trp(For), Boc-Asp(OBzl), Boc-Arg(Tos), kondenzace jako u Arg v příkladě 1, Boc-Glu(OBzl), Boc-Gly, Boc-Thr(Bzl), Boc-His(Boc), Вос-Leu a Boc-Val.
Po ukončené syntéze bylo získáno 3,1 g peptidyl-pryskyřice. Peptid byl z peptidyl-pryskyřice (0,5 g) odštěpen a současně byly odštěpeny chránící skupiny v 10 ml kapalného HF obsahujícího 10 % p-thiokresolu, 1 h při 0 °C. Surový produkt byl čištěn preparativní HPLC na koloně (2 x 50 cm) obsahující jako stacionární fázi silikagel potažený hydrofobními uhlíkatými řetězci, jako mobilní fáze byla použita voda, obsahující 25 % metanolu a 0,1 %. TFA. Frakce obsahující homogenní látku byly spojeny a lyofilizovány, Výsledný produkt měl aminokyselinovou analýzu shodnou s teoretickými hodnotami, jeho čistota byla potvrzena při nanalytické HLPC, Rt 8,2 (40% MeOH, 60% vodné 0,1% TFA), chromatografií na tenké vrstvě a papírové elektroforéze při pH 2,5, Rf = 0,40.
Výtěžek: 72 mg H“Val-Leu-His-Thr-Gly-Glu-Arg-Asp-Trp-His-Leu-Gly-NH2»
Příklad 3
Postupem podle příkladu 1 byly připraveny následující čisté produkty:
| Výtěžek: | 57 mg H-Val-Phe-Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly-OH, Rt 6,8 (45% MeOH, 55% vodné 0,1% TFA), Rf = 0,15. |
| Výtěžek: | 79 mg H-Val-Val-Pro-Arg-Arg-Lys-Ala-Lys-Ile-OH, Rt 6,1 (35% MeOH, 65% vodné 0,1% TFA), Rf = 0,22. |
Příklad 4
Postupem podle příkladu 2 byly připraveny následující čisté produkty:
| Výtěžek: | 72 mg H-Val-Ser-Gly-Lys-Ala-Arg-Gly-Trp-Phe-Nř^, Rt 7,1 (40% MeOH, 60% vodné 0,1% TFA), Rf = 0,50. |
| Výtěžek: | 46 mg H-Val-Ser”Ile-Glu-Trp-Arg-’Lys-Lys-Arg-Tyr-Ser”NH2, Rt 5,7 (35% MeOH, 65% vodné 0,1% TFA), Rf = 0,47. |
Vysvětlivky ke zkratkám použitým v textu:
| HTLV | lidský T-buňky infikující lymfotropní virus |
| ARC | komplex chorob příbuzných AIDS |
| AIDS | syndrom získané imunodeficience |
| ELISA | enzymoimunologický test |
| HPLC | vysokoúčinná kapalinová chromatografie |
| TFA | kyselina trifluoroctová |
| DCM | dichlormetan |
| TFMSA | kyselina trifluormetansulfonová |
| HOBt | N-hydroxybenztriazol |
| TEA | trietylamin |
| Boc | t-butyloxykarbonyl |
| Tos | p-toluensulfonyl |
| Bzl | benzyl |
| Z | benzyloxykarbonyl |
| BrZ | o-brombenzyloxykarbonyl |
| DCC | N,N'-dicyklohexylkarbodiimid |
| HF | fluorovodík |
| For | formyl |
| Rt | retenční čas v minutách |
| Rf | hodnota Rf v soustavě butanol : octová kyseliqa : voda, 4:1:1 |
| Ala | alanin |
| Arg Asp Asn | arginin kyselina asparagová asparagin |
| Glu | kyselina glutamová - |
| Gin | glutamin |
| Gly His | glycin histidin |
| Ile | isoleucin |
| Leu | leucin |
| Lys Phe | lysin phenylalanin |
| Pro | prolin |
| Ser | serin |
| Thr | threonin |
| Trp Tyr Val | tryptofan tyrosin valin |
Claims (2)
- PŘEDMĚT vynálezu1. Peptidy s vlastnostmi antigenních determinant obecného vzorce I,H-Val-X-Y
kde X značí Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asn-Pro-Leu nebo Phe-Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly nebo Val-Pro-Arg-Arg-Lys-Ala-Lys-Ile nebo Leu-His-Thr-Gly-Glu-Arg-Asp-Trp-His-Leu-Gly nebo Ser-Gly-Lys-Ala-Arg-Gly-Trp-Phe nebo a Y značí Ser-Ile-Glu-Trp-Arg-Lys-Lys-Arg-Tyr-Ser, skupinu hydroxylovou nebo aminovou. - 2. Způsob výroby peptidů obecného vzorce I podle bodu 1, vyznačující se tím, že se na polymerní nosič polystyrénového typu s chlormetylovými nebo benzhydrylaminovými skupinami zakotví karboxylterminální aminokyselina a postupnou kondenzací se vystaví peptidický řetězec, načež se zíkaný peptid acidolyticky odštěpí z polymerního nosiče a přečistí.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS858286A CS256960B1 (en) | 1985-11-16 | 1985-11-16 | Peptides with properties of antigenic determinants and method of their production |
| EP86308617A EP0225066A3 (en) | 1985-11-16 | 1986-11-05 | Antigen determinant peptides and a process for the preparation thereof |
| JP61265725A JPS62120399A (ja) | 1985-11-16 | 1986-11-10 | 抗原決定ペプチド及びそれらの製造方法 |
| US07/929,703 US4833072A (en) | 1985-11-16 | 1986-11-13 | Antigentic peptides and process for their preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS858286A CS256960B1 (en) | 1985-11-16 | 1985-11-16 | Peptides with properties of antigenic determinants and method of their production |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS828685A1 CS828685A1 (en) | 1987-09-17 |
| CS256960B1 true CS256960B1 (en) | 1988-04-15 |
Family
ID=5433239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS858286A CS256960B1 (en) | 1985-11-16 | 1985-11-16 | Peptides with properties of antigenic determinants and method of their production |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4833072A (cs) |
| EP (1) | EP0225066A3 (cs) |
| JP (1) | JPS62120399A (cs) |
| CS (1) | CS256960B1 (cs) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5075211A (en) * | 1986-03-26 | 1991-12-24 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| US4880779A (en) * | 1987-07-31 | 1989-11-14 | Research Corporation Technologies, Inc. | Method of prevention or treatment of AIDS by inhibition of human immunodeficiency virus |
| ATE111485T1 (de) * | 1988-02-10 | 1994-09-15 | Immulogic Pharma Corp | Peptidbehandlung von hartnäckigen infektionskrankheiten. |
| US6083504A (en) * | 1989-08-24 | 2000-07-04 | Bioclonetics Incorporated | Human monoclonal antibodies directed against the transmembrane glycoprotein (GP41) of human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) |
| US6008044A (en) * | 1989-08-24 | 1999-12-28 | Bioclonetics | Human monoclonal antibodies directed against the transmembrane glycoprotein (gp41) of human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) and detection of antibodies against epitope (GCSGKLIC) |
| US5459060A (en) * | 1989-08-24 | 1995-10-17 | Bioclonetics Incorporated | Human monoclonal antibodies directed against the transmembrane glycoprotein (gp41) of human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) |
| US5650489A (en) * | 1990-07-02 | 1997-07-22 | The Arizona Board Of Regents | Random bio-oligomer library, a method of synthesis thereof, and a method of use thereof |
| CN1055701C (zh) * | 1993-10-19 | 2000-08-23 | 味之素株式会社 | 能诱导对hiv免疫应答的肽及含有该肽的预防、治疗aids的药物 |
| EP0980388A1 (en) * | 1997-05-20 | 2000-02-23 | YISSUM RESEARCH DEVELOPMENT COMPANY of the Hebrew University of Jerusalem | Vif-derived hiv protease inhibitors |
| US5891994A (en) * | 1997-07-11 | 1999-04-06 | Thymon L.L.C. | Methods and compositions for impairing multiplication of HIV-1 |
| US6399067B1 (en) * | 2000-04-28 | 2002-06-04 | Thymon L.L.C. | Methods and compositions for impairing multiplication of HIV-1 |
| EP1851247A2 (en) | 2005-02-15 | 2007-11-07 | Thymon L.L.C. | Methods and compositions for impairing multiplication of hiv-1 |
| ES2625406T3 (es) | 2010-03-25 | 2017-07-19 | Oregon Health & Science University | Glicoproteínas de CMV y vectores recombinantes |
| SI2691530T1 (en) | 2011-06-10 | 2018-08-31 | Oregon Health & Science University | CMV glycoproteins and recombinant vectors |
| US20130189754A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-07-25 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
| EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| US10174292B2 (en) | 2015-03-20 | 2019-01-08 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
-
1985
- 1985-11-16 CS CS858286A patent/CS256960B1/cs unknown
-
1986
- 1986-11-05 EP EP86308617A patent/EP0225066A3/en not_active Withdrawn
- 1986-11-10 JP JP61265725A patent/JPS62120399A/ja active Pending
- 1986-11-13 US US07/929,703 patent/US4833072A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62120399A (ja) | 1987-06-01 |
| US4833072A (en) | 1989-05-23 |
| EP0225066A2 (en) | 1987-06-10 |
| CS828685A1 (en) | 1987-09-17 |
| EP0225066A3 (en) | 1988-07-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS256960B1 (en) | Peptides with properties of antigenic determinants and method of their production | |
| CA1220420A (en) | Method of determining antigenically active amino acid sequences | |
| JPH07121959B2 (ja) | Ｈｔｌｖ−▲ｉｉｉ▼エンベロ−プ蛋白質 | |
| KR930004055B1 (ko) | 펩티드 및 그의 용도 | |
| EP0602046B2 (en) | Detection of feline immunodeficiency viruses | |
| KANDA et al. | Synthesis of polyamide supports for use in peptide synthesis and as peptide‐resin conjugates for antibody production | |
| US4761470A (en) | Immunogenic synthetic peptide capable of eliciting herpes simplex virus neutralizing antibody | |
| EP0326490B2 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| JP2598245B2 (ja) | Ｈｔｌｖ−ｉｉｉ／ｌａｖウイルス関連ペプチドに対する抗体 | |
| EP0538283B2 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting hiv antibodies | |
| US4596674A (en) | Immunogenic HAV peptides | |
| US7053175B1 (en) | Synthetic peptides useful in biological assays for detecting infections caused by group O HIV-1 viruses | |
| JP4258271B2 (ja) | ポリアミノ酸担体 | |
| US6210874B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| US6214537B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| US6218102B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| CS258289B1 (cs) | Peptid s vlastnostmi antigennfch determinant a způsob jeho výroby | |
| CS258288B1 (cs) | Peptid s vlastnostmi antigennich determinant a způsob jeho výroby | |
| CS258290B1 (cs) | Peptid s vlastnostmi antigennlch determinant a způsob jeho výroby | |
| CS277003B6 (cs) | Peptidy s vlastnostmi antigenních determinant bílkovinného produktu genu env viru HIV-1 | |
| JPH05230097A (ja) | Ｂ型肝炎ウイルスのＨＢｃ抗原由来の合成ペプチド、このウイルスによる感染を検出すること及び抗Ｂ型肝炎ワクチンのための該ペプチドの使用 | |
| CS272926B1 (en) | Peptides with properties of hpv-virus protein's antigen determinant and method of their production | |
| JPH0291097A (ja) | プロウロキナーゼ配列を有するペプチドおよびその製法 | |
| CZ169293A3 (en) | Set for detection of antibodies against human cytomegalovirus and peptides exhibiting immunodominant determinant properties nd conjugates thereof | |
| CZ279073B6 (en) | Peptides with properties of immuno-dominant determinant of glycoprotein gp41 of hiv-1 virus, and process for preparing thereof |