CS255089B1 - Způsob výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi - Google Patents

Způsob výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi Download PDF

Info

Publication number
CS255089B1
CS255089B1 CS864961A CS496186A CS255089B1 CS 255089 B1 CS255089 B1 CS 255089B1 CS 864961 A CS864961 A CS 864961A CS 496186 A CS496186 A CS 496186A CS 255089 B1 CS255089 B1 CS 255089B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
column
solid phase
synthesis
peptides
boc
Prior art date
Application number
CS864961A
Other languages
English (en)
Other versions
CS496186A1 (en
Inventor
Viktor Krchnak
Milan Krojidlo
Ludek Lepsa
Original Assignee
Viktor Krchnak
Milan Krojidlo
Ludek Lepsa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Viktor Krchnak, Milan Krojidlo, Ludek Lepsa filed Critical Viktor Krchnak
Priority to CS864961A priority Critical patent/CS255089B1/cs
Publication of CS496186A1 publication Critical patent/CS496186A1/cs
Publication of CS255089B1 publication Critical patent/CS255089B1/cs

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Řeší se způsob výroby peptidů metodou v pevné fázi v kolonovém uspořádání, jehož podstata spočívá v tom, že polymerni nosič, na kterém postupná výstavba peptidického řetězce probíhá, se umístí do kolony, a ta se promývá veškerými roztoky a rozpouštědly použitými při syntéze tím způsobem, že se mění po jednotlivých cyklech směr promývání. Toto uspořádání znemožňuje ucpávání frity drobnými částmi pryskyřice, neboř změna směru promývání zamezuje usazování drobných částic pryskyřice, které by mohlo snižovat průtok, a zrychluje a zjednodušuje celou syntézu peptidů.

Description

Vynález se týká způsobu výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi.
Syntéza peptidů metodou v pevné fázi doznala v posledních letech neobvyklého rozšíření a v dnešní době se peptidy připravují prakticky výlučně touto metodou. V jejím dnes již klasickém uspořádání se provádějí veškeré reakce na polymerním nosiči, který je umístěn v reakční nádobě a všechny roztoky a rozpouštědla se dávkují do této nádoby, promíchají s polymerní pryskyřicí a po zvoleném čase se roztok nebo rozpouštědlo odstraní např. odsátím.
Modifikovaný postup, který spočíval v umístění polymerního nosiče do kolony a promývání kolony s nosičem všemi zvolenými roztoky a rozpouštědly, narážel na problém postupného ucpávání spodní frity kolony drbonými částečkami pryskyřice, což vedlo ke snižování průtoku kolonou a k nutnosti zvyšovat neúměrně tlak na kolonu, aby se dosáhlo únosného průtoku. Takovéto syntetizátory vyžadovaly speciální konstrukce, které připomínaly zařízení pro vysokotlakou kapalinovou chromatografii. Někteří autoři se snažili tento nedostatek odstranit přípravou speciálních polymerních nosičů, které vykazovaly po stránce fyzikálních vlastností zvýšenou odolnost proti drolení.
Uvedené nevýhody odstraňuje způsob výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi, podle vynálezu jehož podstata spočívá v tom že se postupná výstavba peptidického řetězce provádí na polymerním nosiči umístěném v koloně a směr průtoku mobilní fáze se vždy mění po připojení další aminokyseliny.
Způsob podle vynálezu popisuje postup, který nevyžaduje ani speciálních polymerních nosičů ani zvláštního zařízení, které by vyvolávalo vysoké tlaky na kolonu. Do normální skleněné kolony se umístí tolik’polystyrénové pryskyřice sířované divinylbenzenem (nejběžněji používaný polymerní nosič pro syntézu peptidů v pevné fázi), aby objem nabobtnalé pryskyřice vyplnil celý objem kolony. Veškeré reakce a promývání, které -syntéza peptidů v pevné fázi zahrnuje, se provádějí tím způsobem, že po jednotlivých cyklech se mění směr promývání kolony s polymerním nosičem. Při tomto uspořádání nedochází k postupnému zanášení frity drobnými kousky pryskyřice, neboř tyto jsou umášeny proudem kapaliny střídavě nahoru nebo dolů.
Při vlastním provádění syntézy podle vynálezu se autorům vynálezu osvědčil postup, při kterém jsou zásobní nádoby, které obsahují roztoky a rozpouštědla použité při syntéze, natlakovány na mírný přetlak (20 až 30 kPa) např. dusíkem, a spojovací hadičkou z inertního materiálu, např. teflonu, je tímto přetlakem kolona s polymerním nosičem promývána. Průtok se tak řídí přetlakem plynu. Oba konce kolony jsou napojeny na čtyřcestný ventil, jehož třetí vývod je spojen přes šesticestný ventil se zásobními nádobami a čtvrtý vývod je umístěn do odpadu. Přepínáním čtyřcestného ventilu po jednotlivých cyklech se dosáhne změny směru průtoku kolonou.
Způsob podle vynálezu byl s úspěchem ověřen v praxi. Došlo ke zjednodušení syntézy peptidů, k úspoře surovin a ke zrychlení celé přípravy žádaných peptidů.
Následující příklady provedení způsob podle vynálezu dokumentují, ale nikterak neomezují
Příklad 1
Do skleněné kolony (2x9 cm) se umístí 5g chlormetylované polystyrénové pryskyřice sítované 1% divinylbenzenu a esterifikované Boc-Gly (obsah Gly 0,5 mmol/pryskyřice).
Syntéza peptidů zahrnuje 8 cyklů, sestávajících z následujících kroků: (1) TFA:DCM (1:), 30 min., (2) DCM, do neutrální reakce, (3) TEA:DCM (1:9), 3 min., (4) DCM, do neutrální reakce, (5) předem připravené HOBt estery (5 mmol) v 30 ml DCMíDMF (4:1), (6) DCM, 5 min. Pokud je test na volné aminoskupiny pozitivní, opakovat kroky č. 5 a 6. Každý krok představuj promývání kolony s polymerním nosičem uvedenými roztoky a rozpouštědly přetlakem 20 kPa, aplikovaným do zásobní nádoby s kapalinou.
V jednotlivých cyklech byly kondenzovány následující chráněné aminokyseliny: Boc-Thr(Bzl), Boc-Ser(Bzl), Boc-Thr(Bzl·), Boc-Thr(Bzl), Boc-Ser(Bzl), Boc-Ser(Bzl), Boc-Gly, Boc-Pro,
Boc-Phe. Po syntéze bylo získáno 7,1 g peptidyl-pryskiřice. Peptidyl-pryskyřice (1 g) byla suspendována ve směsi TFMSA (1,5 ml), TFA (5 ml), tioanisol (2 ml) a míchána 1 h při lab. teplotě. Produkt byl srážen 100 ml absolutního éteru a extrahován do 20% kyseliny octové.
Po lyofilizaci byl přečištěn na koloně (1x100 cm) obsahující polyakrylamidový gel, mobilní fáze 1 M kyselina octová. Frakce obsahující jednotky produkt byly spojeny a lyofilizovány. Přečištěný produkt měl vyhovující aminokyselinovou analýzu a choval se jako jednotná látka při chromatografii na tenké vrstvě v soustavě 1-butanol : pyridin : kyseina octová : voda (30:20:6:12) a při papírové elektrofreze v pufru pH 2,5.
Výtěžek: 157 mg Phe-Pro-Gly-Ser-Ser-Thr-Thr-Ser-Thr-Gly.
Příklad 2
Do skleněné kolony (2x9 cm) bylo umístěno 5 g benzhydrylaminové pryskyřice (polystyreno/é) sířované 1% divinylbenzenu (obsah aminoskupin 0,6 mmol/g pryskyřice). Syntéza zahrnovala 3 cykly, které sestávaly ze stejných kroků jako v příkladu 1, s výjimkou prvého cyklu, který zařínal krokem č. 3. V jednotlivých cyklech byly kondenzovány následující aminokyseliny: Boc-Gly, Boc-Leu a Boc-Pro. Po syntéze bylo získáno 5,9 g peptidyl-pryskyřice. Peptid byl z peptidyl-pryskyřice /5,9 g/ odštěpen v 60 ml kapalného HF, extrahován do 20% kyseliny octové a lyofilizován. Surový produkt měl vyhovující aminokyselinovou analýzu a na analytické HPLC vykazoval 5 % nečistot /na základě integrace plochy píků při 210 nm/.
Výtěžek: 720 mg Pro-Leu-Gly-Nř^
Poznámka:
Peptidy získané v uvedených příkladech provedení byly syntetizovány způsobem podle vynálezu a to tak, že po každém syntetickém cyklu /tedy vždy po připojení další chráněné aminokyseliny/ byl změněn směr průtoku mobilní fáze a tím nedošlo k zanešení frity úlomky pryskyřice a reakční komponenty se velmi šetrně a přitom dokonale promíchaly. Syntéza peptidů probíhala kontinuelně.
Vysvětlivky ke zkratkám použitým v textu:
Boc t-butyloxykarbonyl
TFA kyselina trifluoroctová
DCM dichlormetan
TEA trietylamin
HOBt N-hydroxymenztriazol
DMF dimetylformamid
Bzl benzyl
TFMSA kyselina trifluormetansulfonová
HF fluorovodík
HPLC vysokoúčinná kapalinová chromatografie
Gly glycin
Thr treonin
Ser serin
Pro prolin
Phe fenylalanin
Leu leucin

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Způsob výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi vyznačující se tím, že se postupná výstavba peptidického řetězce provádí na polymerním nosiči umístěném v koloně a směr průtoku mobilní fáze se vždy mění po připojení další aminokyseliny.
CS864961A 1986-07-01 1986-07-01 Způsob výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi CS255089B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS864961A CS255089B1 (cs) 1986-07-01 1986-07-01 Způsob výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS864961A CS255089B1 (cs) 1986-07-01 1986-07-01 Způsob výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS496186A1 CS496186A1 (en) 1987-06-11
CS255089B1 true CS255089B1 (cs) 1988-02-15

Family

ID=5393530

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS864961A CS255089B1 (cs) 1986-07-01 1986-07-01 Způsob výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS255089B1 (cs)

Also Published As

Publication number Publication date
CS496186A1 (en) 1987-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108359006B (zh) 一种索玛鲁肽的制备方法
Grieco et al. Preparation of ‘side‐chain‐to‐side‐chain’cyclic peptides by Allyl and Alloc strategy: potential for library synthesis
US6008058A (en) Cyclic peptide mixtures via side chain or backbone attachment and solid phase synthesis
JP2812709B2 (ja) チモシンα▲下1▼を合成する固相法
CN110835365B (zh) 一种普卡那肽的制备方法
US5288464A (en) Solid-phase synthesizer
CN107501408B (zh) 一种特立帕肽的制备方法
CN113444150B (zh) 一种普卡那肽的固相制备方法
US4855407A (en) Solid phase process for synthesizing peptides
CN110903352A (zh) 一种西曲瑞克的制备方法
FOREST et al. BOP reagent for the coupling of pGlu and Boc‐His (Tos) in solid phase peptide synthesis
KISO et al. Efficient solid phase peptide synthesis: Use of methanesulfonic acid α‐amino deprotecting procedure and new coupling reagent, 2‐(benzotriazol‐1‐yl) oxy‐1, 3‐dimethylimidazolidinium hexafluorophosphate (BOI)
CN111057129B (zh) 一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法及其试剂盒,以及普利卡那肽的制备方法
JP7061606B2 (ja) ペプチドの製造方法
CS255089B1 (cs) Způsob výroby peptidů kontinuální průtokovou metodou v pevné fázi
CN112321699B (zh) 一种司美格鲁肽的合成方法
ITMI990777A1 (it) Polipeptidi ad attivita' antiangiogenica
KR20190001969A (ko) 트립토렐린의 제조방법
Albericio et al. Use of polystyrene-1% divinylbenzene and Kel-Fg-styrene for the simultaneous synthesis of peptides
Gatos et al. Comparison of the stepwise and convergent approaches in the solid-phase synthesis of rat Tyr o-atriopeptin II
CN114805480A (zh) 一种奥曲肽的制备方法
Nozaki Solid-phase synthesis of steroidogenesis-activator polypeptide under continuous flow conditions
CN112538103B (zh) 制备生长激素释放抑制素的方法
CN117903232B (zh) 一种双芳基桥连环肽的合成方法
CN112010945B (zh) 一种卡贝缩宫素杂质Gly9-OH的制备方法