CS254288B1

CS254288B1 - Způsob přípravy konjugátů kardiotonických glykosidů s L-tyrosinem

Info

Publication number: CS254288B1
Application number: CS851734A
Authority: CS
Inventors: Vladimir Pouzar; Ivan Cerny; Pavel Drasar; Miroslav Havel
Original assignee: Vladimir Pouzar; Ivan Cerny; Pavel Drasar; Miroslav Havel
Priority date: 1985-03-12
Filing date: 1985-03-12
Publication date: 1988-01-15
Also published as: CS173485A1

Abstract

Řešení se týká způsobu přípravy konjugátů kardiotonických glykosidů s L- -tyrosinem obecného vzorce I, .* kde R je H nebo^H. Připraví se tak, že se nechá reagovat hemisukcinát kardiotonických glykosidů jako např. digitoxinu nebo digoxinu v organickém rozpouštědle s L-tyrosinmetylesterem a s N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinem, reakční směs se zředí tfichlormethanem, promyje vodným roztokem organické kyseliny, vysuší, odpaří a vzniklý produkt se přečistí. Látky tohoto typu slouží po označení radionuklidem 125i k přípravě komponent analytických a diagnostických RIA souprav.

Description

(54) Způsob přípravy konjugátů kardiotonických glykosidů s L-tyrosinem

Řešení se týká způsobu přípravy konjugátů kardiotonických glykosidů s L-tyrosinem obecného vzorce I,

.* kde R je H nebo^H. Připraví se tak, že se nechá reagovat hemisukcinát kardiotonických glykosidů jako např. digitoxinu nebo digoxinu v organickém rozpouštědle s L-tyrosinmetylesterem a s N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinem, reakční směs se zředí tfichlormethanem, promyje vodným roztokem organické kyseliny, vysuší, odpaří a vzniklý produkt se přečistí. Látky tohoto typu slouží po označení radionuklidem 125i k přípravě komponent analytických a diagnostických RIA souprav.

Vynález se týká způsobu přípravy konjugátů kardiotonických glykosidů s L-tyrosinem.

125

Tyto konjugáty slouží k přípravě komponent /označených radionuklidem jodu 1/ analytických a diagnostických RIA souprav /radioimuno assay/ /viz např. Polyevaya 0. Yu. a kol.,

Chim. Farm. Ž. 17, /5/ 533 /1983/ nebo Calbiochem-Hoechst 1983 Biochemical and Immunochemioal Catalog. str. 5 a 114/, Tyto soupravy se používají v klinické praxi pro stanovení obsahu kardiotonických glykosidů, hlavně digitoxinu a digoxinu, v krevním séru a moči.

Derivátů digoxinu vhodných pro označeni radionuklidem jodu není mnoho. První prací v této oblasti je publikace G. C. Olivera a spol. /J. Clin. Invest. 47, /1968/ spočívající v reakci anhydridu kyselinJD jantarové s digoxigeninem v pyridinu a’ve využití' takto získaného 3-hemisukcinátu k přípravě amidu s tyrpsinmetylesterem. Tento postup 'je však vypracován jén na steroidní aglykon.

«

Patentovaný je postup R. N. Piasio a J. E. Woiszwilly ./DE P 2505267/ spočívající v oxidaci cukerné části digoxinu jodistanem a v nálsedné kondenzaci vzniklého dialdehydu s tyrosinmetylesterem. Obměnou tohoto postupu je práce N. D. Blazeyho/Clin. Chim. Asta 80, 403 /1977// používající hintaminu místo tyrosinmetylesteru a natriumborohydridu k redukci aldiminu. Vznikající meziprodukty v uvedené publikaci nejsou chemicky charakterizovány.

Dialdehyd vzniklý oxidací cukerné části digoxinové molekuly je výchozí sloučeninou dalšího patentovaného postupu K. C. Toveye a J. W, Findlaye /DE P 252 6984.5/. Dialdehyd je však kondenzován s kyselinou aminoxyoctovou a vzniklý derivát reakcí s tyraminem nebo histaminem poskytne žádaný substrát pro jodaci.

US patent 3 963 697 vychází z reakce digoxin nebo digitoxin 4 -hemisukcinátu s tyrosinmetylesterhydrochloridem za přítomnosti Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimidu v pyridinu. Tento způsob přípravy však nezaručuje čistotou produktu, který je charakterizován jen UV spektrem. Právě čistota má však značný vliv na specífitu stanovení při použití jako radiligandu v analytických RIA soupravách.

Poslední časopisecká publikace E. W. Weilera a Μ. H. Ženka /Clinical Chem. 25, No 1, /1979/ obsahuje popis jiného postupu: digoxin je nejdříve aktivován bromkyanem za vzniku cyklického imidokarbonátu na C^ a C', který reakci s tyraminem nebo p-hydroxyfenylpropionylputresoinem poskytuje substrát vhodný pro jodaci. Práce s bromkyanem je však nepříjemná a nebezpečná.

Nevýhody těchto postupů odstraňuje způsob přípravy konjugátů kardiotonických glykosidů s L-tyrosinem podle vynálezu.

Podstatou vynálezu je způsob přípravy konjugátů kadriotoniokých glykosidů s L-tyrosinem obecného vzorce I,

kde R je H nebo OH. Uvedené sloučeniny se připraví tak, ze se nechá reagovat hemisukcinát kardiotonického glykosidu jako například digitoxinu nebo obecného vzorce II,

kde R je H nebo OH v organickém rozpouštědle, nejlépe v tetrahydrofuranu nebo dimethoxymetanu za teploty 0 až +40 °C s L~tyrosinmetylesterem a s N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinem po dobu 10 až 70 hodin, reakční směs se zředí dichlormetanem, promyje vodným roztokem organické kyeliny s výhodou kyseliny citrónové, vinné nebo jablečné, vysuší bezvodým síranem sodným či hořečnatým a odpaří, vzniklý produkt se přečistí.

Přečištění lze provést nejlépe chromatograficky na koloně silikagélu v soustavě dichlormetan-metanol. Jako nejúčinnější se jeví rakce 4 -hemisukcinátu kardiotqnického glykosidu s L-tyrosinem v 3 až 6 molárním přebytku a s N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinem v 3 až 6 molárním přebytku.

Dále jsou uvedeny příklady způsobu přípravy dle vynálezu.

Příklad 1

Do roztoku digitoxin 4 -hemisukcinátu /1.58 g, 1.82 mmol/ v tetrahydrofuranu /35 ml/ byl přidán L-tyrosinmetylester /1.54 g, 7.88 mmol/ a N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolin /1.95 g, 7.87 mmol/. Po 70 hodinách míchání za teploty místnosti byla reakční směs zředěná dichlormetanem /400 ml/ a promyta 5% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a vysušena bezvodým síranem sodným. Odparek byl chromatografován na koloně silikagélu /200 g/ v soustavě dichlormetan-metanol /98:2/. Bylo získáno 310 mg /16 %/ amorfního konjugátu digitoxinu s L-tyrosinem. IČ spektrum /chloroform, cm /:3 600 /OH/, 3 425, 1 668, 1 521 /CONH/, 1 745 /Lakton + ester/. Pro C^^H^^NO^g /1 042.2/ vypočteno: 63,38 % C, 7,64 % H,

1,34 % N; nalezeno: 63,25 % C, 7,55 % H, 1,45 % N.

Příklad 2

Do roztoku digoxin 4 -hemisukcinátu /200 mg, 0.23 mmol/ v tetrahydrofuranu /5 ml/ byl přidán L-tyrosinmetylester /195 mg, 1 mmol/ a N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolin /247 mg, 1 mmol/. Po 35 hodinách míchání za teploty místnosti byla reakční směs zředěna dichlormetanem /60 ml/, promyta 5% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou, vysušena bezvodným síranem sodným a odpařena. Odparek byl chromatografován na koloně silikagélu /30 g/ v soustavě dichlormetan-metanol /95:5/. Bylo získáno 58 mg /24 %/ amorfního konjugátu digoxinu s L-tyrosinem. IČ spektrum /chloroform, cm ^/: 3 605 /OH/, 3 440, 1 671, 1 510 /COHN/, 1745 /ester + lakton/.

Pro ^55^Η79^Νθΐ9 /1 059.2/ vypočteno: 62,43 % C, 7,52 % H, 1,32 % N; nalezeno: 32,57 % C, 7,77 % H, 1,12 % N.

Příklad 3

Příprava byla provedena stejně jako v příkladu 1 s tím rozdílem, že reakce byla prováděna při teplotě +40 °C po dobu 10 hodin. Bylo získáno 305 mg (16 %) amorfního konjugátu digosinu s L-tyrosinem. Při analýze bylo nalezeno 63,19 % C, 7,47 % H, 1,27 i K.

Přiklad 4

Do roztoku digitoxin-4 -hemisukcinátu (1,58 g, 1,82 mmol) v 1,2-dimethoxyetanu (35 ml) byl přidán L-tyrosinmetylester (1,54 g, 7,88 mmol) a N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolin (1,95 g, 7,87 mmol). Po 70 hodinách míchání za teploty místnosti byla reakční směs zředěna dichlormetanem (400 ml) a promyta 5% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a vysušena bezvodým síranem hořečnatým. Odparek byl chromatografován na koloně silikagelu (200 g) v soustavě dichlormetan-metanol (98:2). Bylo získáno 300 mg (15,8 %) amorfního konjugátu digitoxinu s L-tyrosinem. IČ spektrum (chloroform, cm ^): 3 600 (OH), 3 425, 1 668,

521 (CONH), 1 745 lakton + ester). Pro 0₅₅Η_?9Ν0_1θ (1 042.2) vypočteno: 63.,38 % C, 7,64 % H, 1,34 % N; nalezeno 63,20 % C, 7,45 % H, 1,50 % N.

Příklad5

Příprava byla provedena jako v příkladu 3 s tím rozdílem, že k promývání byl použit 5% vodný roztok kyseliny vinné. Bylo získáno 55 mg (23 %) amorfního konjugátu digoxinu s L-tyrosinem. Při analýze bylo nalezeno: 62,64 % C, 7,75 % H, 1,54 % N.

Příklad 6

Příprava byla provedena stejně jako v příkladu 1 s tím rozdílem, že digitoxin 4 -hemisukcinát se nechal reagovat s 6molárním přebytkem L-tyrosinmetylesteru a N-ethoxykarbony1 -2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinu při 0 °C po dobu 70 hodin. Bylo získáno 305 mg (15,9 %) amorfní ho konjugátu digoxinu s L-tyrosinem. Při analýze bylo nalezeno: 63,18 % C, 7,46 0 H, 1,25 % N.

Claims

PŘEDMĚT VYNALEZU

1. Způsob přípravy konjugátů kardiotinických glykosidů s L-tyrosinem obecného vzorce I, kde R je H nebo OH, vyznačený tím, že se nechá reagovat 4 '-hemisukcinát digoxinu nebo digitoxinu obecného vzorce II, kde R je H nebo OH v organickém rozpouštědle s L-tyrosinmetylesterem a s N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinem, reakční směs se zředí dichlormetanem, promyje vodným roztokem organické kyseliny, vysuší a odpaří a vzniklý produkt se přečistí.

2. Způsob podle bodu furan nebo dimetoxymetan. 1 vyznačený tím 3. Způsob podle bodu nová, vinná nebo jablečná. 1 vyznačený tím 4. Způsob podle bodu horečnatý. 1 vyznačený tím 5. Způsob podle bodu dobu 10 až 70 hodin. 1 vyznačený tím

že jako organické rozpouštědlo se užívá tetrahydro· že jako organická kyselina se užívá kyselina citro že jako sušidlo se užívá bezvodý síran sodný nebo že reakce se provádí za teploty 0 až +40 °C po
6. Způsob podle bodu 1 vyznačený tím, že 4‘'-hemisukcinát kardiotonického glykosidů se nechá reagovat s L-tyrosinmetylesterem v 3 až 6molárním přebytku a N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolinem v 3 až 6molárním přebytku.
7. Způsob podle bodu 1 vyznačený tím, že vzniklý produkt se přečistí chromatograficky na koloně silikagelu v soustavě dichlormetan-metanol.