CS251533B1 - Kmen mikroorganizmu Aspergillus tamarii CCM F-780 - Google Patents

Abstract

Riešenie sa 'týká nového 'kmeňa Aspergillus tamarii CCM F-780, ktorý produkuje kyselinu ikójovú vo zvýšenom výťažku. Podstata šlachtenia a získania nového 'kmeňa spočívá v tom, že na suspenziu spor Aspergillus tamarii o koncentrácii 106/ml v dimetyisulfoxide sa působí χ-lúčmi pri laboratorně) teplote po dobu 25 až 35 minut, pričom sa izolujú získané muitanty štandardnými selekčnými metódami.

Description

2 S 1 5 3 3

Vynález sa týká nového kmeňa Aspergil-lus tamarii mutant III, ktorý produkuje ky-selinu kójovú να zivýšeňbm výtažku.

Kmeň Aspergillus tamarii sa 'popisuje akoproducent kyseliny kójovej už dávnejšie,avšak bez udania množstva produkovanejkyseliny [Korzybski, T., Kotwszyk — Gindi-fer, Z. Kurylojwicz, W.: Antíbíotics, PWN —— Polish Scieníific Publishers, Warszawa,(1967)].

Podía literárnej rešerše kmeň Aspergil-lus tamarii :sa na priemysiovú výrobu kyse-liny kójovej nepoužívá. Katalogy kultur húb(Cataloque of Cultures, Univerzita Karlova,Praha 1976, č. 664 Aspergillus tamarii Kita;ATCC Cataloque of Fungi) Yeasts, 16-thedition, 1984 čísla 1 005, 10 836, 12 699,16 865, 20 054, 26 950, 26 951 Aspergillus ta-marii Kita) uvádzajú druh Aspergillus ta-marii bez vlastnosti produkovat kyselinukójovú. U inás nie sú k dispozícii vysoko-iprodukčné kmene húb, ktoré sú schopnévytvárať kyselinu kójo-vú.

Uvedené nedostatky doteraz známýchkmeňov odstraňuje vynález, ktorý je novýkmeň mikroorganizmu Aspergillus tamariimutant III uložený v Československejzbierke milkroorganizmov Univerzity J. E.Purkyně v Brňe, Třída Obránců míru 10,pod označením CCM F-780. Nový kmeň sazískal tak, že na suspenziu spor Aspergillustamarii o koncentrácii 106/ml v 10 %-nomdlmetylsulf oxide sa .působilo χ-lúčmi po do-bu 25 až 35 minút, suspeinzia spor sa roz-liala na sladinkový agar a nechala vysporu-lovat pri teplote 25 až 30 °C, z vysporulo-vanej kultúry sa připravila suspenzia spor,ktorá sa riedila 1: 1 000, rozliala na sladin-kový agar, kde vyrástli kolonie kultúrymikroorganizmu, ktoré sa hodnotili fermen-tačnými skúškami z hladislka produkcie ky-seliny kójovej a z nich bol vybraný kimeňAspergillus tamarii mutant III.

Hlavnou výhodou nového 'kmeňa je zvý-šená produktivita, ktorá dosahuje hodnoty33 kg kyseliny kójovej na 100 kg cukru.Povodný kmeň Aspergillus tamarii mal ma-ximálnu produkciu kyseliny kójovej 15 až18 Ikg na 100 kg cukru. Teinto kmeň na Sa-bouraudovej pode za 3 dni vytvára kolonie opriemere 2,6 cm, vrchná strana je biela sosilnou sporuláciou v střede kolonie. Spodnástrana je slabo oranžová. Slpóry sú tmavo-hnedej farby 7 až 8 pm v priemere, veziku-lum výrazné gulafé v priemere 44 až 48 ,um.

Nový kmeň Aspergillus tamarii nťutantIII dobré rastie na Sabouraudovej agaro-vej pode. Za 3 dinl vytvára kolonie o prie-mere 3 cm, Vrchná strana je biela iv středeslabo sporuluje. Spodná strana je oranžo-vohnedá a hladká. Na sladinkovom agarevytvára za 3 dni kolonie o priemere 4 cmbez sporulácie, vrchná strana je biela, spod-ná strana je radiálně zvrásnená a oranžo-věj farby. Sporuilácia na sladikovom agare sa objavuje po 5 dňoch kultivácie. Spory sútmavohnedej farby, 7 až 8 μπι v priemere,vezikulum výrazné gutaté p priemere 46 až50 μΐη. Životnost spor je díhodobá pri skla-dovaní v suspemzii s aktívnym uhlím, v pa-rafínovom oleji, alebo v lyofilizovanom sta-ve aj ni e kolik o rok αν. Příklad 1'

Na suspenziu spor Aspergillus tamarii okoncentrácii 106/ml v 10 %-nom dimetylsul-íoxide sa působí χ-lúčmi zo zdroja 60CO podobu 25 až 35 minút. Suspenzia spor sa po-tom rozleje na sladinkový agar a nechá vy-sporulovat v termostate pri teplote 25 až30 °C. Z vysporulovanej kultúry sa připravísuslpenzia spor v 0,9 %-nom chloride sod-nom, ktorá sa riedi 1 : 1 000 a rozleje nasladinkový agar, kde za 3 až 4 dni vyrastúkolonie kultúry mikroorganizmu, ktoré sahodinotia fermentaěnými skúškami na pro-dulkciu kyseliny kójovej a z nich sa vybralkmeň AspergilHus tamarii mutant III. Příklad 2 Připraví sa kultivačně médium, na 1 litersa použije 100 g glukózy, 0,16 g dihydro-fosforečnanu draselného, 0,07 g chloridusodného, 0,02 g tetrahydrátu síranu man-ganatého, 1 g močoviny, 1 g chloridu amon-ného, 0,01 g heptahydrátu síranu zinočnaté-ho a 0,01 g heptahyídrátu síranu železnaté-ho. Sterilně kultivačně médium o pH 5,0 až6,5 v 5 1 řermentačnom tanku sa zaočkujes 10 % obj. 48 hodinového vegetatívnehoinolkula Aspergillus tamarii mutant III akultivuje pri teplote 30 °C, pri obvodovejrychlosti 3,1 ms_1 a vzdušnění 3 VVM podobu 7 až 8 dní. V priebehu fermentácie savytvára v médiu 33 g/l kyseliny kójovej. P r i k 1 a d 3

Izolovaný kmeň má tú vlastnost, že jehomycélium po oddělení od fermentačnej te-kutiny je možné použít niekotkokrát za se-bou na fermentačnú přípravu kyseliny kó-jovej. Připraví sa roztok 130 g glukózy v1 1 0,1 M fosfátového tlmivého roztoku opH 6,0. Sterilný roztok v 5 1 řermentačnomtanku sa zmiešal s mycéliom, ktoré sa zís-kalo separováním od fermentačného médiapo skončenej fermentácii popísanej v pří-klade 2. Podmienky fermentácie sú takéisté ako v příklade 2. Po 5 až 6 dňoch kul-tivácie sa v médiu vytvára 19 až 21 g/l ky-seliny kójovej.

Kmeň Aspergillus tamarii mutant IIImůže sa využit pri fermentačnej výrobě ky-seliny kójovej, ktorá slúži ako surovina prechemický, potravinářsky a farmaceutickýpriemysel.

Claims (1)

1. 251533 ; R E D Μ E T VYNALEZU Kraeň mikroorganizmu Aspergillus tamarii CCM F-780 íprodukujúci kyselinu ikójovú