CS239597B1 - Sposob přípravy melibiózy a D-fruktózy - Google Patents

Abstract

Vynález sa týká sposobu přípravy měli- · biózy a D-fruktózy. Podstato vynálezu spočívá v tom, že sa 40 až 70 % hmot. vodný roztok melibiózy a D-fruktózy v 35 až 55 % hmot. etanole ehromatograficky selektívne frakcionizuje na kolóne s iontomeničom s funkčnými sulfoskupinami vo vápenatej formě, z ktorej sa eluuje 35 až 55 °/o hmot. etanolom, zahustí a kryštalizuje. Vynález móže nájsť široké použitie pri štúdiu biochemických pochodov bioinžinierstve a medicíně.

Description

239597 3

Vynález sa týká sposobu přípravy meli-biózy a D-fruktózy.

Melibióza ako aj D-fruktóza patria medzivzácné sacharidy. Melibióza je redukujúci di-sacharid 6-O-a-D-galaktopyranozyl-D-gluko-pyranóza. V přírodě sa nachádza ojedinele.Najčastejšie sa připravuje kyslou alebo en-zymatickou hydrolýzou rafinózy [C. S. Hud-son, T. S. I-Iarding: J. Am. Chem. Soc. 37,2734(1915); T. S. Harding: Sugar 25,514 (1923);A. Wickstrom, J. E. Coutois, P. Le Dizet,A„ Archambault: Bull. Soc. Chim. France1410 (1958). Taktiež sa dá připravit parciál-nou hydrolýzou tetrasacharidu a pentasacha-ridu izolovaného z Lychnis dioica [F. J. Ba-tes: Polarimetry, Saccharimetry and Sugars,Waschington 473 (1942)]. H. S. Isbell připra-vil melibiózu z rafinózy fermentatívne po-mocou pekárenských kvasnic [H. S. Isbell:Preparation and Properties of the Sugarsand their Derivatives 473 (1966)]. F. Ren-doš a A. Ondrejkovič připravili melibiózufrakčnou kryštalizáciou po parciálnej hyd-rolýze rafinózy [Cs. AO 169453). D-fruktózasa připravovala hydrolýzou polysachariduinzulínu [J. Honeyman: Methods in Carbo-hydrates of Chemistry Vol. I, 116 (1962). U-vedené metody přípravy melibiózy a D-fruk-tózy sú komplikované a náročné na chemi-kálie a zariadenie. Ďalšou nevýhodou je, žemelibióza a D-fruktóza obsahovala rožne ko-loidné látky, ktoré bolo třeba prácne od-strániť.

Uvedené nevýhody v podstatnéj miere od-straňuje spósob přípravy melibiózy a D-fruk-tózy, ktorého podstata spočívá v tom, že sa40 až 70 % hmot. vodný roztok melibiózy aD-fruktózy v 35 až 55 % hmot. etanole chro-matograficky selektívne frakcionizuje na ko-loně s ionomeničom s funkčnými sulfosku-pinami voí vápenatej formě, z ktorej sa elu-uje 35 až 55 % hmot. etanolom, zahustí akrystalizuje. Výhodou navrhovaného sposobu přípravymelibiózy a D-fruktózy oproti doterajším po-stupom přípravy je, že předmětný spósobpřípravy je jednoduchší, účinnější a hospo-dárnější. Umožňuje připravit v jednomstupni obidva vzácné sacharidy melibiózu aD-fruktózu. Pri príprave nevznikajú žiadnevedlajšie produkty a vyrobené produkty súkrystalické látky o vysokej čistotě. Přikladl K roztoku 25 g rafinózy v 250 ml vody sapřidá 25 g ionomeniča s funkčnými sulfo-skupinami (Wofatit KPS 200 0,3 až 0,85 mm)a za miešania sa hydrolyzuje pri teplote60 °C po dobu 8 h. Hydrolyzát sa filtráciouoddělí od ionomeniča a zahustí na 21 g si-rupu. 2 g tohto sirupu sa rozpustí v 2 ml 35 pere. hmot. vodného roztoku etanolu a na-nesie na kolonu naplněná ionomeničom sfunkčnými sulfoskupinami ve vápenatej for-mě (Dowex 50 W X 8 0,07 až 0,13 mm) sdížkou kolony 100 cm a priemerom kolony 2.5 cenťjimetra. Ako eluačné činidlo sa po-užije 35 % hmotný vodný roztok etanolu.Pomocou zbberača frakcií pri prieto.ku 10mililitrov . h_1 sa jednotlivé frakcie slédujúzostupnou papierovou chromato^i’áfiou(Whatman No. 1) v sústave etýlacetáť : py-ridin : voda v objemovom pomere 8 : 2': 1 adeteguje aniliniumhydrogénftalátom, ako ajs kyselinou 3,5 dinitrosalicylovou spektro-fotometricky pri 575 nm. Frakcia 1 až 11bola negativna na cukry, frakcia 12 až 25obsahovala 1,16 g melibiózy, frakcia 26 až32 bola negativna na cukry, frakcia 33 až 46 obsahovala 0,56 g D-fruktózy. Frakcie, kto-ré obsahujú čisté cukry melibiózu a D-fruk-tózu sa jednotlivo zahustia na rotačněj od-parke, prečistia prídavkom 0,5 g aktívnehouhlia, prefiltrujú a vykryštalizujú v 5 ml e-tanolu. Melibióza mala optickú otáčavosf(a)D20 + 136° (c = 2 voda) teplotu ťopenia179 až 181 °C sa získala v 95,7 % výtažku.D-fruktóza mala optickú otáčavosf (a)D20— 92° (c — 2 voda), teplotu topenia 103 až105 °C sa získala v 92,5 % výtažku. Příklad 2

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým roz-dielom, že sa hydrolyzuje pri teplote 80 °Cpo dobu 6 h a ako eluačné činidlo sa použi-je 55 % hmot. etanol. Melibióza mala optic-kú otáčavosf (a)D20 -(-134° [c=5 voda), tep-lotu topenia 179 až 180 °C a získala sa v 93(2percenta výtažku, D- fruktóza mála optickúotáčavosf (a)n20 — 91° (c=2 voda), teplotutopenia 103 až 104 °C sa získala v 94,2 % vý-tažku. Příklad 3

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým roz-dielom, že sa použije ako eluačné činidlo 42.5 °/o hmot. etanol. Frakcia 1 až 15 bolanegativna na cukry, frakcia 16 až 30 obsaho-vala 1,17 g melibiózy, frakcia 31 až 35 bolanegativna na cukry a frakcia 36 až 52 obsa-hovala 0,55 g D-fruktózy. Melibióza mala op-tickú otáčavosf (a)D20 +135° (c=2 voda),teplotu topenia 180 až 181 °C a sa získala v 96.5 % výtažku. D- fruktóza mala optickú o-táčavosť (a)o20 — 92° (c=2 voda), teplotutopenia 103 až 104 °C a sa získala v 91,0 %výtažku.

Vynález móže nájsť široké použitie pri štu-diu biochemických pochodov v bioinžinier-stve a medicíně.

Claims (1)

1. 239597 FRED ΜE T Sposob přípravy melibiózy a D-fruktózyhydrolýzou rafinózy vo vodnom roztoku zakatalýzy ionomeniča s funkčnými sulfosku-pinami vyznačujúci sa tým, že sa 40 až 70 %hmot. vodným roztokom melihiózy a D-fruk-tózy v 35 až 55 % hmot. etanole chromato- VYNÁLEZ t. J grafický selektívne frakcionizuje na koloněs ionomeničom s funkčnými sulfoskupinamivo> vápenatej formě, z ktorej sa eluuje 35 až55 % hmot. etanolom, zahustí a krystalizu-je.