CS233183B1 - Stanovení biologické aktivity heparinu - Google Patents

Abstract

Stanoveni biologické aktivity heparinu spočívá v tom, že se na roztok, suspenzi nebo gel obsahující heparin, působí vodným roztokem kationoidního barviva za vzniku metáchromatického produktu barviva a heparinu, jehož koncentrace, která je přímo úměrná biologické aktivitě heparinu, je přímo úměrná úbytku absorbance roztoku měřené v maximu monomerního absorpčního pásu použitého barviva. S výhodou lze použít Nilskou modř A a měření úbytku absorbance provádět v oblasti 636 nm.

Description

Heparin je mukopolysacharid, který se získává ze zvířecích plic nebo z hovězí střevní mukozy a v lékařství se používá jako antikoagulační látka. Jeho čistota je různá a kvalita preparátu se hodnotí hodnotou biologické aktivity. Je známo, že heparin zdržuje za přítomnosti thrombinu srážení citronanové plazmy a toto zdržení je úměrné účinnosti heparinu. Průběh srážecího orecesu se sleduje vizuálně nebo turbidimetricky. Tento postup stanovení je časově velmi náročný, nebol jeden pracovník je schopen za pracovní směnu provést stanovení biologické aktivity u 1 až 3 vzorků za pracovní směnu, přičemž stanovení provádějí paralelně dva pracovníci. Chyba stanovení dosahuje až 20 %.

Stanovení biologické aktivity heparinu podle vynálezu spočívá v tom, že na roztok, suspenzi nebo gel obsahující heparin se působí vodným roztokem kationoidního barviva za vzniku metachromatického produktu barviva a heparinu, jehož koncentrace je přímo úměrná biologické aktivitě heparinu. Koncentrace tohoto metachrematického produktu je přímo úměrná úbytku absorbance roz toku měřené v monomerním absorpčním maximu použitého barviva.

S výhodou se využívá reakce heparinu s Nilskou modří A a vzniklý metachromatický produkt se stanoví z úbytku absorbance v oblasti 636 nm.

Nová navrhovaná metoda stanovení biologické aktivity je vel mi jednoduchá a spočívá ve zhotovení kalibrační křivky z čs. heparinového standardu nebo z heparinu o známé biologické aktivitě Kalibrační křivka vyjadřuje pokles absorbance barviva v oblasti dlouhovlnného absorpčního pásu na zvyšující se biologické aktivitě heparinu. Biologickou aktivitu lze také vypočítat přímo z naměřené hodnoty absorbance při použití hodnot lineárních re2

233 183 gresních koeficientů. Přesnost stanovení novou metodou byla hodnocena G-kritériem /Cochranovo/ a bylo skfé'4fao, že metoda dává správné výsledky. Nová spektrofotometrická metoda stanovení biologické aktivity je velmi jednoduchá, stanovení provádí jeden pracovník, takže přináší Sasové úspory. Pro stanovení biologické aktivity novou metodou se používá přístroj, který dnes vlastní kontrolní laboratoře. Nová metoda umožňuje hodnocení více vzorků /za pracovní směnu 200 i více/, takže se hodí i pro rychlé hodnocení vyráběných produktů. Vlastní provedení stanovení biologické aktivity heparinu je zřejmé z následujícího příkladu.

Příklad

Do ódměrných nádobek na 25 ml je pipetováno 5,0 ml Nilské modře A o koncentraci 2,0.10“^ M a přibližně asi 1,0 až 5,0 ml _4

4,0.10 % roztok heparinu* Po doplnění ódměrných nádobek po značku destilovanou vodou je změřena absorbance při vlnové délce 636 nm v kyvetách s absorpční vrstvou 2,00 cm proti destilované vodě. Biologická aktivita vzorku je odečtena z grafu závislosti absorbance a biologické aktivity nebo je vypočtena s použitím hodnot lineárních regresních koeficientů pro heparinové preparáty.

Claims (2)

1. Stanovení biologické aktivity heparinu; vyznačující se tím, že na roztok, suspenzi nebo gel obsahující heparin se působí

Hodným roztokem kationoidního barviva za vzniku metachromatie kého produktu barviva a heparinu, jehož koncentrace, která je přímo úměrná biologické aktivitě heparinu, je přímo úměraá úbytku absorbance roztoku měřené y maximu monomerního absorpčního pásu použitého barviva.

2» Stanovení podle bodu 1, vyznačující se tím, že na roztok, suspenzi nebo gel obsahující heparin, se působí vodným roztokem Nilské modře A a úbytek absorbance se zjišluje v oblasti 636 nm.