231 145
Vynález sa týká sposobu výroby účinnéj subcelulárnejperenterálhej látky proti neonatálnej kolienteritíde a koli-hnačke prasiat, podávanej prašným prasniciam 6 týždňov přeďporodom injekčme do svalu, alebo pedkožia·
Kolienteritida a kolihnačka novoroděných prasiat jevážným problémem velkoehovov ©šípaných» Jej zdolánie božnýmiterapeutickými přípravkami je velmi náročné, zdíhavé á lenzriedka úspěšné;· Doteraz najúčinnejším sposobom jej likvi~dácie je imunizácia novoroděných pr asiat autechtonnou pero-rálnou vakcínou, ebsahujúcou umrtvené baktérie Escherichiacoli, obsahujúce pllusový amtigéw K 88, připadne entero-toxín» Inýra sposobom je imunizácia matiek před pórodompařenierálnau cestou eelulámau, aleb® subcelulámou vakcí-nou„ ebsahujúcou budí celé umrtvené enteropatogénne baktérieEscherichia coli, alebo izolovaný pllusový antigénK 88, čikombináciou oboch· Perorálna vakcína má viacero nevýhod·Vyžaduje neustále zaradovaníe nových a nových kmeňov dovýroby a denné manuálně podávánie vakcíny ciciakom, ktorýchje niekolk® tisíc a tak značme sVažuje prácu vo výkrme·Parenterálne, celulárne, alebo subceluláme vakcíny imunizu-jú matku a ciciak po marodění sa s mledzlvam dostává proti»látky proti am&igénu K 88· Doteraz vyrábané parenterálne - 2 231 143 vakciny boli připravované velmi náročnými a drahými spósobmi,vyžadujucimi niekolkostupňové izolácie kyselinou octovou, alebosíranem amonným a nákladné zariadenáa, ako> uXtracen&riíúgy,chromát ograf i cké kolony a pod*
Uvedené nedostatky v podstatnéj miere odstraňuje sposobvýroby subcelulámej parenterálnej látky proti neonatálnejkolienteritíde a kolihnačke prasiat padla vynálezu, ktoréhopodstata spočívá v tom, že sa pilusový antigén K 88 z povrchutěla enteropatagénnych baktérií Escherichia coli separujehomogenizáciou a izoluje izoelektrickou autofokusáciou do takej,koncentrácie, že vykazuje jasnu přecipitačmu líniu pri difúziiv agare voči aatiséru antik 88 až do riedenia 1 : 128* Výhodou vynálezu su nízké výrobně náklady, jednoduchámanipulácia pri imunizácii zvierat, ktorá je jednorázová avyžaduje iba imunizáciu matky* Vlastný sposob izolácie anti-genu je jednoduchý, vylučuje trvalá obsluhu aparatury a potřebyakýchkolvek chemikálií, pretože separácia prebieha jedine vapyrogénnej sterilnej destilovanej vodě* Příklad
Enteropatogénne baktérie Escherichia coli £ 88+, nesúcepilusový antigén £ 88 sa po bežnej kultivácii, zaručujucejprodukci» uvedeného antigénu odstředí a a bakteriu bez super*netaní» sa resuspenduje v 4 °C chladnej sterilnej destllovanejvodě pomocou homogenizéra 5 až 10 min pri 3 000 1/min a teplo-to 4 °C. Tak nastane odseparavanie pilusav obsahujácich antigén£ 88. Potom sa homogenát odstředí pri 70 000 m*s~2 po dobu20 min a pri teploto 4 °C*. Supernatant, ktorého vodivost sa 231 143 — 3 — upraví na hodnoty do 800 ^uS přidáním sterilněj destilovanéjvody» alebo dalším přidáním antigénu K 88, sa aplikuje dohorizontálněj izoelektrofokusacnej velkakapacitnej aparatúrys mechanicky stabilizovaným deleným roztokám* Do aparatúrysa aplikuje jednosměrný elektrický prúd maximálně 3 VÁ aroztok fokusuje pri teplota i °C kým prúd neklesne pod 3 mApři napatí 1 000 V· Po fokusacii sa ssmeria vo všetkých prie-hrádkách aparatúry pH. Pilusový antigén K 88 fokusuje k pBL4,2 až 5,0 automaticky· Z priehradok s pHv tomto: rozmedzísa zhromažďuje fimbriálny pilusový antigén K 88· Jeho pH saupraví na 7 až 7,5 a koncentrácia sa upraví tak, aby vykazo-vali pri sledovaní precipitácie v agare jasnú precipitacnúlíniti voči antiséru anti £ 88 až. do riedenia 1 : 128· Podosiahnutí tejto koncentrácie sa k roztoku antigénu přidávhodné adjuvans» napr* olejové a podává sa parenterálneinjekčne v dávko 2 až 3 ml podkožně alebo int rámu skul ámeprašným prasniciam asi 6 týždnov před porodom· Táto dávkaa doba postačujú k tomu» aby sa u matiek vytvořili proti-látky voči £ 88 antigénu a po napití mleďziva sa prenieslido čriev novorodencov· Tieto protilátky zabraňujú entero-patogénnym baktériám Escherichia coli £ 88* adherovať sana črevnn stenu a tým sposobovať kolienteritídu a koli-hnačku·
Vynález može nájsť široké praktické využitie vživočišnéj výrobě vo velkochovech ©šípaných, kde podstatnéprispieva k znižovaniu úhynu novorodencov z titulu koli-enteritíd a kolihnačiek·