CS225197B1 - Spóscb přípravy imunosorbentov - Google Patents

Spóscb přípravy imunosorbentov Download PDF

Info

Publication number
CS225197B1
CS225197B1 CS322082A CS322082A CS225197B1 CS 225197 B1 CS225197 B1 CS 225197B1 CS 322082 A CS322082 A CS 322082A CS 322082 A CS322082 A CS 322082A CS 225197 B1 CS225197 B1 CS 225197B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
polysaccharide
yeast
microorganisms
weight
isolated
Prior art date
Application number
CS322082A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Inventor
Ludovit Ing Csc Kuniak
Jozef Rndr Csc Sandula
Original Assignee
Kuniak Ludovit
Sandula Jozef
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kuniak Ludovit, Sandula Jozef filed Critical Kuniak Ludovit
Priority to CS322082A priority Critical patent/CS225197B1/cs
Publication of CS225197B1 publication Critical patent/CS225197B1/cs

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

ČESKOSLOVENSKA SOCIALISTICKÁ REPUBLIKA (19) POPIS VYNÁLEZU K AUTORSKÉMU OSVEDČEHIU 225197 (11) (Bl) (22) Přihlášené 05 05 82(21) (PV 3220-82) (51) Int. Cl.3 C 12 N 11/16 i ·£.·--v tów teá (40) Zverejnsné 27 05 83 OftAD PRO VYNÁLEZY A OBÍEVY (45) Vydané 15 04 86 (75)
Autor vynálezu KUNIAK EUDOVÍT ing. CSc., SANDULA JOZEF RNDr. CSc., BRATISLAVA (54} SpSscb přípravy imunosorbentov 1
Vynález sa týká sposobu přípravy zakot-vených imunosorbentov z polysacharidovizolovaných z kvasiniek.
Hlavnou imunologicky aktívnou zložkoukvasiniek a kvasinkových mikroorganizmovsú manány, alebo manózu obsahujúce hete-ropolysacharidy, ako galaktomanány, glu-komanány, glykurónoxylomanány, ktoré sanachádzajú na povrchu buniek týchto mikro-organizmov. Manány patogénnych druhovrodu Candida sú vysokovetvené polysacha-ridy, ktoré majú v hlavnou reťazci a (1 -> 6),v bočných reťazcoch a (1 -> 2), připadneα (1 3) glykozidické vazby. Imunodomi- nantnou skupinou týchto antigénov sú bočnéreťazce skladajúce sa z 5 až 6 manánevýchjednotiek viazaných a (1 -> 2) glykozidický-mi vazbami [S. Suzuki a H. Sunayama, Jap.J. Microbiol. 13, 95 (1969)].
Tieto imunologicky aktivně polysacharidymikroorganizmov sa móžu izolovat zo živ-ného média niekotkonásobným zrážanímetanolom, z biomasy kvasiniek extrakcious hydroxidom draselným o koncentrácii 2 %hmot. [P. A. J. Gorin a J. F. T. Spencer: Adv.Appl. Microbiol. 13, 15, (1970)] alebo s 0,2mól chloriďom sodným [O. Sikl a spol.: Coll.Czechoslov. Chem. Commun. 35, 2969, (1970)] pri zvýšenej teplote. Čisté manánysa získavajú následným niekotkonásobným 225197 2 zrážaním rozpustných polysacharidov Feh-lingovým roztokom. Výtažky imunologickyaktívnych manánov sú však vel'mi nízké avzhtadom na povodnú biomasu nepresahujú5 % hmot.
Keďže manány kvasinkových mikroorga-nizmov sú vo vodě dobré rozpustné, nedajúsa preto priamo použit na přípravu pevnýchsorbentov. Aby sa získali vhodné nerozpust-né imunosorbenty, je potřebné polysacharidyz kvasinkovitých mikroorganizmov vhodnémodifikovat sletováním [E. Kuniak, R. H.Marchessault, Starch 24, 110, (1972)], a totak, aby imunodominantné skupiny polysa-charidu ostali po sletovaní zachované preimunosorbciu specifických protilátok z krv-ného séra. Molekulová hmotnost manánovpolysacharidov kvasinkovitých mikroorga-nizmov je relativné nízká a pohybuje samedzi 15 000 až 30 000 daltonov. Na jednejmolekule polysacharidu sa nachádza nie-kol'ko determlnantných skupin, avšak lenčást z nich sa zúčastňuje špecifickej imuno-logické j reakcie antigén — protilátka. (J.Šandula a M. Vojková, Folia Microbiologica,19, 94, 1974). Zosieťovaním manánu dochá-dza ešte k hustejšiemu rozloženiu determi-nantných skupin v makromolekule manánu,takže část aktvínych centier imunosorbentasa nezúčastňuje interakcie antigén — proti-látka z priestorových dOvodov. 3 4 225197
Imunologicky aktivně manány sa vysky-tujú v buňkových stěnách kvasiniek v kom-plexe s bielkovinami a imunologicky neak-tívnym glukanom (C. E. Ballau, Adv. Micro-biol. Phys. 14, 93, 1976). Úplné odstránenietýchto sprievodných biopolymérov narážana tažkosti a vyžaduje zložitý purifikačnýproces. Zistili sme, že pre přípravu účinnéhoimunosorbentu nie je potřebné manán úpl-né purifikovať, malé množstvo bielkoviny aglukánu nie je na závadu. Purififikačnýmistupňami jednak klesá výťažok polysacha-ridu, klesá jeho molekulová hmotnost, čosťažuje účinné zosieťovanie polysacharidua nie zanedbatelnou mierou klesá počet imu-nodominantných skupin schopných viazaťhomológne protilátky, preto je výhodnejšiepoužit polysacharid len člastočne purifiko-vaný s vyššou molekulovou hmotnosťou.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že poly-sacharid izolovaný z kvasinkovitých mikro-organizmov, s výhodou Candida albicans ale-bo Candida tropicalis sa v prvom stupni zo-sieťuje s l-chlór-2,3-epoxipropanom v množ-stve 15 až 30 % hmot. na hmotnost polysa-charidu v alkalickom prostředí a v druhomstupni sa zosieťovaný polysacharidový gélpodrobí vodnej dispergácii vo vysokoobrát-kovom mixéri za súčasnej neutralizácie al-kálií a v treťom stupni sa premyté neroz-pustné polysacharidové částice odvodnia nafiltri alkoholom. a vysušia pri teplote do 60°Celsia.
Takto připravený nerozpustný polysacha-rid s velkosťou častíc 80 až 250 mikrónov jevhodným imunosorbentom pre izoláciu pro-tilátok proti roznym hubovitým ochoreniam.
Najčastejším póvodcom mykotických ocho-rení u l'udí je Candida albicans, na ktorépřipadá výše 80 % patologických mikrobio-logických nálezov. Zbytok tvoria mikroor-ganizmy ako Candida tropicalis, C. stella-toidea, C. guilliermůndii, C. parapsilosis, C.fanata a iné. Mnohé druhy Candida majútotožné alebo podobné antigénne zloženieako C. albicans, sérologicky sú ťažko rozli-šitelné a na mikroorganizmy tejto sérolo-gickej skupiny připadá až 90 % všetkýchkandidóz. Vzhladom na to, že mnohé kmeneCandida albicans sú silno patogénne, tak ichkultivácia za účelom přípravy imunologickyaktívnych polysacharidov sa musí robit zapřísné sterilných podmienok, čo zvyšujenáklady na přípravy bioimasy.
Je preto výhodné pre tieto účely použitkmen Candida tropicalis, ktorého sa prie-myslovo využívá na výrobu krmného drož-dia, je patogénny alebo len málo patogénnya naviac dobré sa kultivuje na roznych od-padných lignocelulózových materiáloch. Ma-nán z C. tropicalis použitý ako imunosorbentzachytí protilátky séra homológneho druhuako aj špecifické látky vytvořené mikroor-ganizmami voči manánom uvedenej sérosku-piny.
Zakotvenie imunoaktívneho polysachariduje výhodné prevádzať tak, že imunoaktívny polysacharid sa rozpúšťa v hydroxide sod-nom o koncentrácii 5 až 8 % hmot., tak, abykoncentrácia polysacharidu bola 15 až 30percent hmot. a takýto roztok sa zmiešas potřebným množstvom mikrokryštalickejcelulózy s velkosťou častíc 50 až 250 μΐη.Roztok sa nechá asi Ví hod. dobré nasiak-nuť do celulózy a až potom sa přidá sieťo-vací reagent. Sieťovanie sa prevádza najprvpri teplote 20 až 30 °C, potom pri 50 °C, priktorej teplote sa reakcia ukončí. Před de-fibráciou zosieteného gélu je výhodné při-dat kyselinu octovú na neutralizáciu vol-ných alkálií. Bez neutralizácie by sa získaligélové částice velmi malých rozmerov, kto-ré by neboli vhodné pre prácu v koloně.
Hlavnou výhodou nového postupu je sku-točnosť, že sa získá imunoaktívny sorbents 2- až 3násobne vyšším Specifickým povr-chom, t. j. zvýši sa počet aktívnych imuno-dominantných skupin schopných reakcie an-tigén-protilátka. Táto skutočnosť je význam-ná vzhladom na to, že izolácia i nepurifiko-vaného imunoaktívneho polysacharidu anákladnejšia ako zakotvenie polysachariduna relativné lacnorn nosiči. Ďalšou výhodoutohto postupu je to, že zakotvený imunoak-tívny gél na celulózovom nosiči má lepšiereologické vlastnosti pri práci v kolóne. Ďalšie přednosti a detaily nového postu-pu sú zřejmé z príkladovej časti postupu,ktorá nie je vyčerpávajúca, ale len informa-tívna na demonštráciu podstatných znakovnového postupu přípravy zakotveného imu-nosorbenta vhodného na izolovanie proti-látok proti mykotickým ochoreniam spóso-beným kvasinkovitými mikroorganizmamirodu Candida. Přikladl 10 g surového, suchého polysacharidu izo-lovaného z buniek kvasinkovitých mikroor-ganizmov Candida tropicalis sa zvlhčí s 20ml destilovanej vody a nechá sa 5 až 10min. napučiavať. Potom sa přidá 4 ml hyd-roxidu sodného o koncentrácii 40 % hmot.,dobré sa zamieša a nechá rozpúšťať, až jeroztok homogénny bez zjavných nerozpust-ných častíc, čo obyčajne netrvá viac ako 10až 15 min. Do alkalického roztoku polysa-charidu sa naraz přidá 10 g mikrokryšta-lickej celulózy o velkosti častíc 50 až 250,um a dobré sa zamieša tak, aby roztok po-lysacharidu sa rovnoměrně nasal do mikro-kryštalickej celulózy, čo tvoří asi 20 až 30min. Potom sa přidá 2 ml l-chlór-2,3-epoxi-propánu (epichlórhydrín) a dobré sa za-mieša tak, aby sieťovací reagent bol homo-genně distribuovaný v celom objeme reakč-nej zmesi. Reakčnú banku uzatvoríme a ne-cháme reagovat pri laboratórnej teplote 1až 2 hod., potom zvýšíme teplotu postupnéaž na 50 °C a pri tejto teplote nechámereakčnú zmes reagovat 1 hod., načo zosiete-ný polysacharidový gél mixujeme vo vodě

Claims (1)

  1. 225 5 (do ktorej sa přidá kyselina octová na neut-ralizáciu volných alkálií] asi 30 až 60 sv rýchloobrátkovom mixéri. Nerozpustný za-kotvený polysacharidový gél sa niekolkoná-sobne dekantuje od najjemnejších podie-lov, ktoré by vel'ml zvyšovali odpor pri prá-ci na kolóne. Dekantované a dokonalé pre-myté gélové částice sa na filtri postupné od-vodnia alkoholom, resp. acetónom a vysušiapri teplote do 60 °C. Napúčací objem připra-veného zakotveného imunosorbenta je okolo6 až 7 ml/g a je vhodný pre imunosorbciuprotilátok z biologických tekutin. Příklad 2 Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielom,že na sieťovanie použijeme 4 ml epichlor-hydrínu a rozpustný polysacharid zakotví-me na 30 g mikrokryštalickej celulózy.Vlastnosti získaného zakotveného imunolo- 9 7 6 gicky aktívneho polysacharidového gélu súpodobné ako u příkladu 1. Příklad 3 Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielom,že ako imunologicky aktívny polysacharidsa použije polysacharid izolovaný z mikro-organizmu Candida albicans. Zosietený, za-kotvený polysacharid má obdobné vlastnostiako zosietený polysacharid izolovaný z Can-dida tropicalis. Popísaná metoda přípravy imunosorben-tov z mikrobiálnych polysacharidov je uni-verzálně, m6že byť použitá nielen pre kan-didy, ale pre lubovolné imunologicky aktiv-ně polysacharidy. Vynález má použitie v zdravotníctve pridokáže, izolácii a purifikácii účinných pro-tilátok z biologického materiálu pri myko-tických ochoreniach ako i v alergológii. PREDMET SpĎsob přípravy imunosorbentov z poly-sacharidov izolovaných z kvasiniek vyznače-ný tým, že polysacharid izolovaný z kvasin-kovitých .mikroorganizmov, s výhodou dru-hu Candida albicans alebo Candida tropica-lis sa v prvom stupni zosieťuje s l-chlór-2,3--epoxipropánom v množstve 15 až 30 %hmot. na hmotnost polysacharidu v alka- YNÁLEZU lickom prostředí a v druhom stupni sa zo-sietený polysacharidový gél podrobí vodnejdispergácii vo vysokoobrátkovom mixéri zasúčasnej neutralizácie volných alkálií a vtreťom stupni sa premyté nerozpustné poly-sacharidové částice odvodnia na filtri alko-holom a vysušia pri teplote do 60 °C.
CS322082A 1982-05-05 1982-05-05 Spóscb přípravy imunosorbentov CS225197B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS322082A CS225197B1 (cs) 1982-05-05 1982-05-05 Spóscb přípravy imunosorbentov

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS322082A CS225197B1 (cs) 1982-05-05 1982-05-05 Spóscb přípravy imunosorbentov

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS225197B1 true CS225197B1 (cs) 1984-02-13

Family

ID=5371655

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS322082A CS225197B1 (cs) 1982-05-05 1982-05-05 Spóscb přípravy imunosorbentov

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS225197B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Myklestad et al. Production of carbohydrates by the marine diatom Chaetoceros affinis var. willei (Gran) Hustedt. II. Preliminary investigation of the extracellular polysaccharide
EP0023989B1 (de) Enzym-Immuntest zum Nachweis von Erreger-spezifischen Antikörpern und Testsatz für die Durchführung dieses Tests
DE2808539A1 (de) Reaktionsfaehige derivate von hs-gruppen enthaltenden polymeren
Kumar et al. Cashew gum a versatile hydrophyllic polymer: a review
CH619003A5 (cs)
DE2552510C3 (de) Biologisch aktive Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung
WO2004039854A2 (de) Makroporöses kunststoffperlenmaterial
EP0235526A2 (de) Aktivierte Polymerfestkörper und Verfahren zu ihrer Herstellung
WO2008062574A1 (fr) Dérivé de sucre et ses utilisations
EP0071704A2 (de) Oberflächenreiche Systeme zur Fixierung von nucleophile Gruppen enthaltenden Substraten
CH682373A5 (de) Verfahren zur Herstellung von Trägersystemen für biologisch aktive Materialien.
CN108976440A (zh) 一种甘蔗渣半纤维素制备水凝胶的方法
Mage et al. The combining regions of the type III pneumococcus polysaccharide and homologous antibody
Hoffmann et al. Isolation of a β-1, 3-glucan (laricinan) from compression wood of Larix laricina
DE69836496T2 (de) Verfahren zur herstellung von beta-(1,3)-d-glukan aus pilzen
Haskell et al. The purification and characterization of a new active immunizing polysaccharide prepared from Staphylococcus aureus
CS225197B1 (cs) Spóscb přípravy imunosorbentov
JPS60147420A (ja) デキストランの陰イオン性部分置換体とビニ−ル化合物との共重合体
MacLennan et al. Pasteurella septica: the occurrence of type-specific polysaccharides containing aldoheptose sugars
CH677363A5 (cs)
Yamaguchi et al. Macromolecular structure and morphology of native glycogen particles isolated from Candida albicans
CS221747B1 (cs) Spósob přípravy imunosorbentov z polysacharidov izolovaných z kvasiníek
EP0444514A2 (de) Immobilisierung von Proteinen an Trägern
CH680668A5 (cs)
CH653348A5 (de) Sorbentien fuer saccharide und saccharide enthaltende polymerisate und verfahren zur herstellung derselben.