CS224226B1 - Způsob separace volného a vázaného ligandu v saturační analyse - Google Patents
Způsob separace volného a vázaného ligandu v saturační analyse Download PDFInfo
- Publication number
- CS224226B1 CS224226B1 CS408082A CS408082A CS224226B1 CS 224226 B1 CS224226 B1 CS 224226B1 CS 408082 A CS408082 A CS 408082A CS 408082 A CS408082 A CS 408082A CS 224226 B1 CS224226 B1 CS 224226B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- polymer
- groups
- mol
- ligate
- styrene
- Prior art date
Links
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 21
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 11
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 8
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 8
- RPQRDASANLAFCM-UHFFFAOYSA-N oxiran-2-ylmethyl prop-2-enoate Chemical compound C=CC(=O)OCC1CO1 RPQRDASANLAFCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N glycidyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCC1CO1 VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- -1 oxirane, aldehyde Chemical class 0.000 claims description 6
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 4
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 4
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 4
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 4
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 claims description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 9
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 9
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 9
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 9
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2,2'-azo-bis-isobutyronitrile Substances N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- RFFLAFLAYFXFSW-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1Cl RFFLAFLAYFXFSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 2
- JIGUQPWFLRLWPJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acrylate Chemical compound CCOC(=O)C=C JIGUQPWFLRLWPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 2
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXJZEGBVQCRLOD-UHFFFAOYSA-N 1-triethoxysilylpropan-2-amine Chemical compound CCO[Si](CC(C)N)(OCC)OCC HXJZEGBVQCRLOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011409 Transcobalamins Human genes 0.000 description 1
- 108010023603 Transcobalamins Proteins 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003106 anti-papain Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical group 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 102000036215 folic acid binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091011001 folic acid binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000003055 glycidyl group Chemical group C(C1CO1)* 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N iron oxide Inorganic materials [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013980 iron oxide Nutrition 0.000 description 1
- VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N iron(2+);oxygen(2-) Chemical class [O-2].[Fe+2] VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N isothiocyanate group Chemical group [N-]=C=S ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 125000005397 methacrylic acid ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 125000000466 oxiranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- PNJWIWWMYCMZRO-UHFFFAOYSA-N pent‐4‐en‐2‐one Natural products CC(=O)CC=C PNJWIWWMYCMZRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
(54)
Způsob separace volného a vázaného ligandu v saturační analyse
224 226
-4224 228
Vynález se týká způsobu separace volného a vázaného ligandu při saturační analyse.
Saturační analysa je analytický postup, který využívá principu specifické vazby různých látekjnapříklad hormonů, vitamínů, steroidů, enzymů, alkaloidů', pesticidů, mikroorganismů a antigenů na určitouj pro tyto látky specifickou bílkovinu. Stanovení je založeno na soutěžení ligandů, což je stanovovaná látka, přítomná ve vzorku a tatáž přidaná látka značená například radionuklidem nebo fluorescenčním činidlem, ve vazbě, na ligat, což je specifická látka, například bílkovina. Podle uspořádání analytického postupu mohou být ligandem nebo ligatem bílkoviny, peptidy, hormony, vitaminy, steroidy, alkaloidy, pesticidy, toxiny, mikroorganismy, ale i nízkomolekulární látky, například hapten.
Po separaci navázaného ligandu od nenavázaného se· dá změřením radioaktivity, fluorescence 'či jiné veličiny přímo určit koncentrace stanovované látky ve vzorku. tletoda saturační analysy je vysoce specifická a látky lzestanovit v koncentracích«řádů nmolů až fmolů.
K separaci volného a vázaného ligandu je používána celá řada metod, např. adsorpce volného ligandu na vhodný adsorbent /aktivní uhlí, silikagel aj./, vysrážení ligátu s navázaným ligandem organickými rozpouštědly, anorganickými solemi apod. Jelikož je vazba ligát - ligand reversibilní povahy je u těchto metod nebezpečí porušení rovnováhy volný - vázaný ligand.
Značného zjednodušení separace volného a vázaného ligandu je možno dosáhnout tím, že se ligát imobilisuje na nosič. Nej-2224 226 jednodušší formou imobilisace je adsorpce' na stěny reakční nádobky. Vazebná bílkovina se nejčastěji adsorbuje na polystyrénové zkumavky nebo na mikrotitrační destičky z téhož materiálu. Ádsorpč ní síly, které drží vazebnou bílkovinu na povrchu nosiče, jsou však poměrně slabé a imobilisace je proto mnohdy nedostatečná. Rovněž nízký titr vazebné bílkoviny může ještě dále zhoršit výsledný efekt. Z uvedených důvodů se vazebná bílkovina někdy zesítuje na povrchu nosiče různými bifunkčními činidly anebo ještě častěji se imobilisuje kovalentní vazbou přímo na aktivovaný nosič
K imobilisaci va-zebných bílkovin kovalentní vazbou byla použita řada materiálů^jako např. celulosa aktivovaná bromkyanem, sklo aktivované Z -aminopropyltriethoxysilanem nebo hydroxysukcinimidem, polymerů obsahujících aktivní isothiokyanátové skupiny, ' částic vytvořených polymeraci polystyrénového latexu s glycidylmethakrylátem a styrenem, částic vytvořených polymeraci celulosy, akroleinů a oxidů železa apod.
Způsob separace volného a vázaného ligandu podle vynálezu spočívá v tom, že se vhodný nosný materiál, s výhodou skleněná tyčinka, hliníková fólie, polyethylenová fólie, polystyrénová zkumavka apod. potáhne tenkou vrstvou polymeru, nebo kopolymeru obsahující vhodné reaktivní skupiny, s výhodou oxiranové skupiny, aldehydové skupiny, aminové skupiny, karboxylové skupiny, hydroxylové skupiny, sulfhydrové skupiny nebo epithioskupiny. Nosič se zasune do roztoku se stanovovanou látkou a po vytvoření reakční rovnováhy se vysune z roztoku. Jako polymer se s výhodou používá poly/2,3-epoxypropylmethakrylát/ nebo poly/2,3-epoxypropylakrylát/, resp. jejich kopolymery například se-styrenem nebo estery kyseliny methakrylové, resp. akrylové, kde alkoholová Část esteru tvoří methylová skupina, ethylová skupina, propylová skupina, isopropylová skupina, butylová skupina, terč. butylová skupina a cyklohexylová skupina. Potažení nosného'materiálu uvedenými polymery je dostatečně stálé, aby umožnilo buň přímou vazbu vazebné bílkoviny, případně aktivaci povrchu naneseného polymeru převedením epoxyskupin na aminové skupiny, sulfhydrové skupiny, karboxylové skupiny^i jiné skupiny vhodné k imobilisaci ligatu na nosič. S výhodou je možno hydrolyscvat epoxyskupiny
-3224 228 naneseného polymeru a získaný vicinální diol jodistanovou oxidací převést na aldehydové skupiny pro vlastní vazbu ligatu.
Oproti dosud používaným postupům imobilisace ligatu skýtá způsob podle vynálezu tyto výhody. Zjednodušuje separaci volný - vázaný ligand na prosté vyjmutí nosiče z inkubačního roztoku, Čímž se navíc vylučuje porušení rovnováhy volný - vázaný ligand, ke kterému může dojít při· použití jiných technik. Umožňuje pracovat i s vazebnou bílkovinou nízkého titru, kdy při imobilisací kovalentní vazbou je dosaženo jejího efektivnějšího navázání a využití. Vedle experimentálního zjednodušení imobilisace kovalent ní vazbou je při způsobu podle vynálezu odstraněna práce s výrazně toxickými látkami zvláště v případě přímé vazby ligatu na nanesený polymer.
Vynález je dokumentován příkladyt
Příklad 1
Poly/'2,2-epoxypropylmethakrylát/ připravený radikálově iniciovanou polymerací /iniciátor 2,2- azobisisobutyronitril/,
2,5-epoxypropylmethakrylátu v 1,4-dioxanu při teplotě 60°3, byl nanesen ve formě 5%ního roztoku na hliníkovou foZlii 10x4 mm. Po usušení při teplotě 20°c za tlaku 101 kPa byl nanesený polymer aktivován hydrolysou pomocí 0,1 N H2SO4 po dobu 3 h při 60°C a poté perjodátovou oxidací 0,5 M NalO^ po dobu 1 h při 20°G. Po promytí hliníkových destiček s aktivovaným polymerem bylo přidáno antiserum proti papainu. Po 18 h při,4°C byly destičky promyty 0,1 M fosfátovým pufrem pH 7,4 a použity ke stanovení papainu. Papain byl stanovitelný v rozmezí 20 až 2000 ng/100 ul.
Příklad 2
Na polyethylenovou folii 10x4 mm byl nanesen kopolymer 2,3-epoxypropylmethakrylátu /EPLÍ/ se styrenem s obsahem 50 %
EPM, připravený radikálově iniciovanou kopolymerací EPKI se styrenem /iniciátor 2,22azobisisobutyronitril/, shodným postupem jako v příkladu 1 ve formě lO^ního roztoku v o-dichlorbenzenu. Nanesený kopolymer byl aktivován zahříváním s ethylendiaminem při' 60°G po dobu 15 h a po promytí vodou reakcí s 5%ním roztokem
-4 224 226 glutaraldehydu po dobu 2 h při 37°G. K foliím s aktivovaným kopolymerem bylo přidáno antiserum proti papainu. Po 15 h při 4°0 byly folie dokonale promyty shodným pufrem a použity ke stanovení papainu. Papain byl stanovitelný v rozmezí 20 až 2000 ng/100 ul.
Příklad 3 ‘
Na skleněné tyčinky délky 10 mm a průměru 3 mm byl nanesen shodným způsobem jako v příkladu 1 poly/2,3-epoxypropylakrylát/ připravený radikálově iniciovanou polymerací 2,3-epoxypropylakrylátu. Po usušení polymeru při 60°0 a tlaku 101 kPa byla zvýšena adheše k nosiči včetně prosítování naneseného polymeru záhřevem na 180°0. K nosiči s naneseným polymerem bylo přidáno antiserum proti papainu. Po.l h zahřívání na 37°G a následujícím promytí 0,1 M fosfátovým pufrem pH 7,4 byla takto imobilizovaná protilátka použita ke stanovení papainu. Papain byl stanovitelný v rozmezí 20 až 2000 ng/100 ul.
Příklad 4
Póly/2,3-epoxypropylakrylát-co-styren/ připravený radikálově iniciovanou kopolymerací při 60°G 2,3-epoxypropylakrylátu se styrenem s obsahem 50% styrenu /iniciátor 2,2Íazobisisobutyronitril/ byl nanesen ve formě 2%ního roztoku v octanu ethylnatém na vnitřní plochu polystyrénových zkumavek. Nanesená vrstva kopolymerů byla usušena při 20°C za postupně se snižujícího tlaku s konečnou hodnotou 0,1 kPa. Bo zkumavek s nanesenou vrstvou kopolymerů bylo pipetováno 0,5 ml antisera. proti papainu. Po 18 h při 4°C byla zkumavka promyta důkladně střídavě 0,1 M fosfátovým pufrem pH 7,4 a 1 M NaCl v tomtéž pufru. Papain byl stanovitelný v rozmezí 20 až 2000 ng/100 ul.·
Příklad 5
Na polyethylenovou folii 10x4 mm byl nanesen kopolymér 2,3-epoxypropylmethakrylátu /SPLi/ s methylmethakrylátem s obsahem 70 % EPM, připravený radikálově iniciovanou kopolymerací EPM s methylmethakrylátem /iniciátor 2,2-azobisisobutyronitril/, shodným postupem jako v příkladu 1 ve formě 10%ního roztoku methylethylketonu. K fóliím s naneseným kopolymerem bylo přidáno antiserum proti tyroxinu. Po 18 h třepání při 4°0 a promytí 0,1 M
224 226
-£ fosfátovým pufrem pH 7,4 byl stanoven tyroxiň v rozmezí 20 až 240 pmolů/ml.
Příklad 6
Na polystyrénové destičky o rozměrech 10x4x1 mm byl nanesen kopolymer 2,3-epoxypropylakrylátu /EPA/ s ethylakrylátem /SA/ s obsahem 80 % EPA, připravený radikálově iniciovanou kopolymerací EPA s EA /iniciátor 2,2Íazobisisobutyronitril/ shodným způsobem jako v příkladu 4. Po přidání vazebných bílkovin pro kyselinu listovou a vitamin B 12 v 0,1 M lysinovém pufru pH 10, 1 h stání při 37°G a následujícím promytí shodným pufrem byl stanoven obsah kyseliny listové v rozmezí 0,5 až 20 ng/ml a vitamin 3 12 0,05 až 1,50 ng/ml.
Claims (8)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU224 2261. Způsob separace volného a vázaného ligandu v saturační analyse, při stanovení biologicky účinných látek soutěžením ligandů stanovované látky a téže značené látkyjnapříklad radionuklídem nebo fluorescenčním činidlem, ve vazbě na ligátjnapříklad specifickou vazebnou bílkovinu, vyznačující se tím, že ligát se kovalentní vazbou imobilisuje na nosič potažený vrstvou polymeru nebo kopolymerů obsahujícího chemicky modifikovatelné reaktivní skupiny, s výhodou oxiranové skupiny, aldehydové skupiny, aminoskupiny, karboxylové skupiny, hydroxylové skupiny, sulfhydroskupiny a epithioskupiny, který se zasune do roztoku se stanovovanou látkou a po vytvořeni reakční rovnováhy se vysune z roztoku.
- 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že jako polymer je použijí póly/2,3-epoxypropylakrylát/ s hodnotami molárních hmotností 5.1Ο4 až 1.106 g.mol1.
- 3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že jako polymer se použije kopolymer /2,3-epoxypropylakrylát/ se styrenem o obsahu styrenu 5 až 95 % mol. o molární hmotnosti 5.104 až 1.10^g.mol'”1.
- 4. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že jako polymer se použije póly/2,3-epoxypropylmethakrylát/ s hodnotami molárních hmotností 5.1Ο4 ^ž 1.10^ g.mol”1.
- 5. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že jako nanášený polymer se použije kopolymer /2,3-epoxypropylmethakrylát/ se styrenem o obsahu styrenu 5 až 95 % mol. a molární hmotnosti 5.104 až 1.10^ g.mol“1.
- 6. Způsob podle bodů 1 až 5, vyznačující se tím, že se polymery termicky zesiluji po nanesení na nosič například na skleněnou tyčinku, hliníkovou nebo polyethylenovou folii nebo polystyrénovou zkumavku.-Ί*
- 7. Spůsob podle bodů 1 až 6, vyznačující se tím, že se imobilisaco ligatu provede přímou reakcí s epoxydovými skupinami naneseného polymeru.
- 8. Způsob podle bodů 1 až 6, vyznačující se tím, že se imobilisace ligatu provede po předchozím převedení epoxyskupin naneseného polymeru na aminoskupiny, pQpřípadS aldehydové skupinyCena: 2,40 KCs
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS408082A CS224226B1 (cs) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | Způsob separace volného a vázaného ligandu v saturační analyse |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS408082A CS224226B1 (cs) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | Způsob separace volného a vázaného ligandu v saturační analyse |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS224226B1 true CS224226B1 (cs) | 1984-01-16 |
Family
ID=5382757
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS408082A CS224226B1 (cs) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | Způsob separace volného a vázaného ligandu v saturační analyse |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS224226B1 (cs) |
-
1982
- 1982-06-02 CS CS408082A patent/CS224226B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5302532A (en) | Chromatographic supports having an immobilized flocculating agent and their use in immunoassays | |
| US4061466A (en) | Biologically active composition and the use thereof | |
| JPS6159175B2 (cs) | ||
| JPS59192958A (ja) | 表面がグラフト化された粒子状支持体及びその製法並びに該支持体を含むアフイニテイクロマトグラフイ用吸着体及びその生物学的使用 | |
| EP0126772A1 (en) | Chromogenic support immunoassay | |
| EP0070527B1 (en) | Method of assaying biologically active substances and labelling agents therefor | |
| JPS5945943B2 (ja) | 抗体検出方法 | |
| CN103333299B (zh) | 甲基丙烯酸缩水甘油酯和聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯共聚物微球及其制备方法和应用 | |
| JP2001021563A (ja) | 特異的結合体 | |
| JP2642697B2 (ja) | 固相指示薬の赤血球およびその調製法 | |
| CS224226B1 (cs) | Způsob separace volného a vázaného ligandu v saturační analyse | |
| CN205449806U (zh) | 一种用于全血样品检测的磁微粒化学发光微流控芯片 | |
| JPH0763761A (ja) | 生理活性物質固定化磁性微粒子の製造法 | |
| US4792527A (en) | Method of assaying biologically active substances and labelling agents therefor | |
| JPS60190864A (ja) | 免疫化学的迅速試験を実施するための装置及び免疫化学反応の検出法 | |
| FI68653C (fi) | Metod foer bestaemning av tyroxin-bindningsindex i serum och testfoerpackning foer utfoerande av bestaemningen | |
| EP0228225A2 (en) | Immunoassay kit and method employing modified solid surface | |
| JPS6155415B2 (cs) | ||
| JPS60500548A (ja) | 発色性支持体免疫測定法 | |
| JPS60222774A (ja) | 活性化固相体およびその活性化方法ならびに免疫反応性固相体およびその製造方法と検定方法 | |
| JP3179673B2 (ja) | 多層乾式イムノアッセイ要素およびイムノアッセイの実施方法 | |
| JPS6298257A (ja) | 免疫学的測定法 | |
| JPH06265552A (ja) | 乾式イムノアッセイ分析要素 | |
| JP3681873B2 (ja) | 物質の測定方法 | |
| Singer | The use of polystyrene latexes in medicine |