CS218148B1 - Přípravek ke zvýšení odolnosti mláďat hospodářských zvířat - Google Patents

Abstract

Jedná se o instantní, rychle použitelný přípravek s kontrolovatelnými složkami, umožňující při podání per os rychlé vytvoření zásob imunoglobulinů — a tím obranyschopnosti mláďat hospodářských zvířat proti infekčním onemocněním. V přípravku je použito levného gammaglobulinu směsného o nízké elektroforetické čistotě, získaného· z jateční krve. Enzymatická aktivita mláďat je inhibována trypsinovým inhibitorem průmyslové kvality, získaným při výrobě přípravků léčebných a diagnostických. Obdobně v průmyslové kvalitě je použit emnlgátor C. Přípravku může být alternativně použito při chovu hospodářských zvířat proti infekčními onemocněním mláďat. Může být rovněž použit jako preventivní prostředek proti infekčním onemocněním mláďat některých savců.

Description

Vynález se týká instantního přípravku ke zvýšení odolnosti mláďat hospodářských zvířat.

Ke snížení ztrát způsobených úhynem mláďat hospodářských zvířat je mimo zlepšení hygienických a dalších podmínek chovu, vitaminové a komplexní výživy, způsobem přechodu na rostlinnou výživu apod., velmi důležitým činitelem zvýšení odolnosti mláďat proti infekčním onemocněním.

Narozená hospodářská zvířata začínají poměrně pozdě vytvářet obranné látky proti antigenům patogenních mikrobů působícím vážná infekční onemocnění. Například telata začínají vytvářet vlastní imunoglobulin až po čtyřech týdnech po narození a úplnou jejich hladinu lze zjistit v krevním séru až po osmi týdnech po narození.

V krátkém časovém období po narození mají mláďata schopnost přijímat gastrointestinálním traktem imuncglobuliny (telata, kůzlata a jehňata do 24 hodin, selata do 36 hodin po narození).

Vzhledem ke kvantitativně a kvalitativně odlišnému obsahu imunologlohulinů v kolostru jednotlivých samic, je významným činitelem ke včasnému posílení nedostatečné nebo neúplně vyvinuté imunologické reakce mláďat — podání imunoglobulinů zažívacím traktem.

Intenzívní výzkum přenosu pasivní imunity z matky na mládě prováděný již více než 70 let přinesl jednoznačné závěry. Například T. Smith a R. B. Little v roce 1922 redukovali úhyn telat, kterým nebylo dáno kolostrum, podáním krevního^ séra dospělých zvířat způsobem per os nebo intravenosním („Cow sérum as a substitute for colostrum in new born calves“ Younnal exper. Médie. 36, 453—468).

Průchod imunoglobulinů z krevního séra dospělých zvířat do krevního oběhu telat jejich gastrointestiálním traktem byl později dokázán např. C. P. Millsteinem a A. Feinsteinem („Structural differences and similiraties between two bovin imunoglobulins Ig — G 1 a IG — G 2“, A. R. C. Institute of Animal Physiology, Babraham, Cambridge, Report for 1966 — 1967, p. 41).

Jednoznačně byla rovněž zjištěna doba přenosu, pasivní imunity gastrointestinálním traktem mláděte. Např. T. W. Brambell stanoví tuto dobu u hovězího dobytka 24 hodin po narození, u prasete 86 hodin, u ovcí, koz a koní 24 hodin, u psů a koček 1 až 2 dny „Transmission of passive immunity from mother to young, „North Holland Publishing Company, Amsterodam, London 1970).

Pokud jde o tvorbu vlastních protilátek mláděte zjistili např. R. G. Hansen a P. H. Phillips v letech 1947 až 1949, že jednotlivé frakce sérových proteinů telat, která nebyla napájena kolostrem dosáhly normální výše až po 8 týdnech po narození a že do 4 týdnů po narození neprodukují telata vlastní protilátky vůbec. („Studies on proteins from bovine colostrum“, Yournal biol. Chem. 179, 523 až 5217 j.

Důležitý je též poznatek zjištěný v roce 1961 výzkumem J. T. Hubera, N. L. Jakobsona, R. S. Allena, P. A. Hartmana, že aktivita trávicích enzymů narozených telat (pankreatlcká amyláza, lipáza a proteáza) je nejnižší během prvých dnů po narození, vzrůstá během týdne a později se mění již jen nepatrně („Digestive enzyme activitis in the young Calf“, Yournal Dairy Sci, 44, 1491 až 1531 j.

Na základě výzkumných poznatků je ve světě i v tuzemsku vyráběna řada přípravků, které mají sloužit k transmisi imunoglobulinu gastrointestinálním traktem narozených mláďat hospodářských zvířat.

Podstata vynálezu spočívá ve vhodném složení přípravku, v jednoduché použitelnosti, kontrolovatelnosti jednotlivých složek přípravku a v jeho způsobu výroby.

Složení přípravku zabraňuje jak při výrobě, tak použití možnost denaturace imunoglobulinů. Jako účinná složka je použit sérový gamaglobulin vyrobený z krevního séra běžných jatečních zvířat. Instantní forma zajišťuje snadnou rozpustnost přípravku v nezávadné vodě nebo fysiologickém roztoku a tím i snadné a rychlé použití v kteroukoliv hodinu v provozních zemědělských podmínkách bez odborného veterinárního dozoru. ·

Složení instantní směsi pro· různé alternativní použití respektuje nutnost zamezení štěpení imunoglobulinů v gastrointestinálním traktu mláďat a tím umožňuje jejich průchodnost do krevního oběhu.

Svým charakterem jde o přípravek umožňující uplatnění gnotobiologických a jiných poznatků, neboť instantní směs má jednotlivé složky kontrolovatelné. Instatnost přípravku pak umožňuje jeho snadné a rychlé (v omezeném časovém termínu) podání přípravku.

V přípravku je používáno mimo globullnů směsných vyrobených levně z jateční krve též v některých případech specifických globulinů imunisovaných zvířat. Lze použít gamaglohulinů o menší elektroforetické čistotě a o nižších titrech účinných protilátek (bez koncentrace), nevadí příměs albuminu a jiných frakcí obsažených v krevním séru.

Přípravek se skládá z mikrobiologicky nezávadného odstředěného šetrně sušeného mléka, jednoduchých poteinů, monosacharidu a podmíněně též z některých dalších přísad, umožňujících velmi rychlou smáčivctet a rozpustnost sušeného přípravku ve vlažné nezávadné vodě.

Základní médium je doplňováno· různými druhy jednoduchých proteinů (imunoglobuliny směsnými nebo specifickými, a to gammaglobuliny (bovinními, ovčími, kozími nebo prasečími).

íObdobně jako globuliny prostupuje zažívacími traktem monosacharid (D glukóza), a to bez nutného štěpení, jako je tomu u laktózy, sacharózy nebo maltózy.

Monosacharid je přidáván proto, aby byl udržen zvýšený poměr globulinů v krevní plazmě. Jde o to, aby u mláděte v případě delšího trávení (hladovění) neklesal obsah globulinů v krevní plazmě (při zvyšování obsahu albuminu).

Pří výrobě, skladování a použití výrobku je zabráněno denaturaei imunoglobulinů. Vysoká teplota, kyseliny, zásady nebo soli těžkých kovů nevratným procesem· denaturace působí ztrátu biologických vlastností proteinů, přípravky obsahující enzymy nebo jejích zbytky proteiny štěpí.

,V různých alternativách přípravků je proto zajišťováno inhibování trypsinu.

Podle potřeby použití vznikají různé druhy výrobků, a to· podle druhů globulinů (bovinní, ovčí, kozí, prasečí) a podle titru účinných protilátek (imuloglobulinů) směsné nebo specifické přípravky.

Svým charakterem jde o přípravek umožňující rychlé doplnění zásob imunoglobulinů jako vhodné přídavné krmivo použité v několikahodinových intervalech krátce po narození mláděte. Nejde tedy o přípravek léčebný nebo preventivně léčebný s přesně vyznačenými litry účinných protilátek.

Přípravek na zvýšení odolnosti mláďat hospodářských zvířat v sušeném· stavu (podíle alternativ použití) obsahuje odstředěné mléko v množství 703,8 až 860,2 hmotných dílů

D-glukózu v množství 32,5 až 48,75 hmotných dílů škrobový sirup v množství do 2,5 hmotných dílů emulgátor C v množství 0,675 až 0,825 hmotných dílů gatomaglcbulin směsný v množství 4,5 až 9 hmotných dílů hydrofosforečnan sodný v množství 0,133 až 1,47 hmotných dílů případně další přísady (vitaminy, aminokyseliny atd.) vyznačující se tím, že obsahuje (bovinní) gámimaglobulin směsný z jateční krve o nízké elektroforetické čistotě (90 až 95 % ] v množství 4,5 až 9 hmotných dílů, trypsinový inhibitor ze sójových bohů, nebo bovínných plic případně jiný inhibitor průmyslové kvality 140 UI BAEE 1 mg v množství 0,060 až 0,24 hmotných dílů, nebo lyofilizované prasečí kolostrum a emulgátor C v množství 0,675 až 0,825 hmotných dílů.

přípravek podle bodu 1 vyznačuje se tím, že obsahuje navíc lycfilisované (bovinní). kolófctruiití v objemu .20 až 30· hmotných dílů. Vyznačuje se dále tím, že jde o konečnou formu alternativně pro různé použití vyrobeného přípravku se všemi na nezávadnost kontrolovatelnými složkami, jehož instantní schopnost zároveň umožňuje okamžité a opakovatelné rychlé podání přípravku narozeným hospodářským zvířatům v běžných provozních zemědělských podmínkách.

Způsob výroby směsi např. pro narozená telata je proveden běžným provozním způsobem, a to tak, že se mléko po zkoušce bakteriologické nezávadnosti s přidáním D-glukózy, emulgátoru C a hydrofosforečnanu sodného zahušťuje na odparkách na 50 % (+ 5 % sušiny, k zahuštěné směsi se přidá vmícháním škrobový strup a suší se šetrně na rozprašovací sušárně. Po vychladnutí, instantizaci a zkouškách nezávadnosti provedených obvyklým způsobem vyznačuje se další postup tím, že druhá fáze přípravy výrobku se provádí tak, aby byla zachována expirační lhůta konečného výrobku, základní sušené médium se dokonale mísí s lyofilizovaným gammaglobulinem, inhibitorem' trypsinu, lyofilizovaným kolostrem a případně dalšími přísadami při maximálním zahřátí směsi do 30· °C.

/Přípravek použitelný k doplnění imunoglobulinů mláďatům zažívacím traktem má několik alternativ odvislých od způsobu použití, zejména zde slouží k doplnění imunoglobulinů obsažených v kolostru, nebo zda je k dispozici nezávadné lyofilizované kolostrum nebo zda má přípravek nahradit kolostrum úplně při ozdravných chovech, nebo zda je. přípravek určen k rychlému po·dání mláděti v noci.

Základní varianty a jejich obměny je možno použít při laboratorní nebo průmyslové výrobě přípravku pro jednotlivé druhy zvířat: telata (s bovinním sériovým gammaglobulinem směsným nebo specifickým, jehňata (s gammaglobulinem z ovčího séra), kůzlata (s gammaglobulinem z kozího séra), selata (s gammaglobulinem prasečím), hříbata (s gammaglobulinem· koňským), psi (s gammaglobulinem ze psího krevního séra) apod.

Příklad běžného, nákladově nenáročného přípravku pro telata vyrobeného laboratorním· a průmyslovým způsobem.

Složení přípravku:

a) laboratorní, výroba 10 dávek

7820 g odstředěného· mléka (ošetřeného a získaného předepsaným způsobe mi)

325 g D glukóza 25 g škrobový sirup

7,5 g emulgátor C g bovinní gammaglobuhn směsný lyofillzovaný

0,7 g trypsinový inhibitor (140 UI — — BAEE/1 mg)

b) průmyslová, výroba 1Ό 000 dávek

7,82.10⁶ g odstěděného mléka (ošetřeného a získaného předepsaným způsobem)

32,5 .104 g glukóza . ΙΟ³ g emulgátor C . 1Ό⁴ g bovinní gammaglobulin směsný . 10² g trypsinový inhibitor (140 UI

BAEE]

1. Mléko (ošetřené a připravené předepsaným způsobem) po zkoušce bakteriologické nezávadnosti s přídavkem D glukózy a emulgátoru se zahušťuje na odparkách na 50 % (+5 % sušiny).

,2. K zahuštěné směsi se přidá škrobový sirup vmícháním a suší se šetrně na rozprašovací sušárně.

3. Po· vychladnutí a instantizaci je provedena zkouška kvality a bakteriologické nezávadnosti (podle norem humánního sušeného přípravku).

4. Pokud možno· v , kratší době před vyskladňováním se polotovar dokonale mísí s lyofilizovaným bovinním gatomaglobullnem. Požadavky na výrobek (sušené médium):

aj výrobek musí mít čistý neporušený obal uzavřený a označený se zřetelným označením data výroby, bj barva žlutá až světlehnědá, •cj konzistence sypká, různá velikost smíšených částic, bez cizích příměsí, dj největší obsahy prvků na 1000 g sušiny:

měď 2 mg, cín 2 mg, olovo 1,5 mg, e) mikrobiologické požadavky:

celkový počet mikroorganismů v 1 g sušiny nejvýše 100 000 počet koliforních mikrobů v 1 g sušiny nejvýše 20 výrobek nesmí obsahovat patogenní a toxinogenní organismy, f j smáčivost dle Mohra při 40 °C ... 60 s

g) ve 100 g sušiny je přibližně 22 g bílkovin, 35 g mléčného cukru, 32 g glukózy, 1 g tuku, 4 g vody a 6 g minerálních a jiných látek,

h] fyzikálně chemické rozbory se provádějí podle ČSN 570 105, mikrobiologické rozbory podle metodiky ČSN 57 0101, rovněž vzorkování, počet a druh podle vyšetření sušených výrobků průmyslově vyráběných podle ČSN 570 101.

Míchání konečného výrobku

Při míšení je dbáno, aby nedošlo k zahřátí výrobku na více než 30 °C. Při dobrém smísení v mísicím zařízení se směs rozplní do hygienických obalů. Základní médium (polotovar) se dokonale mísí s lyofilizovaným gammaglobulinem, případně dalšími přísadami, jako· trypsinovým inhibitorem, lyofilizovaným kolostrem, vitaminy, aminokyselininami atd. Nelze použít látky obsahující nebo tvořící zásady, kyseliny nebo vzniklé enzymatickým štěpením.

Vlastnosti jednotlivých surovin:

Mléko

a) pro· laboratorní přípravu výrobku (v menším množství) je vhodné použít mléko od krav zdravých, vitamínově dobře krmených (pokud možno od krav dojených bezprostředně po odstavení telat) dojení je provedeno tak, aby byla zajištěna hygienická nezávadnost mléka, před přípravou (pro jednotí’vá použití smíšením v předepsaném poměru s gammaglobulinem a D-glukózou, je nutné uchovat v teplotě od 0° do -j- 3° v uzavřených sterilních nádobách kyselost miléka nesmí překročit 8,0 °SH nesmí být použito konservačních prostředků (ani H2O2 peroxid vodíku), je možné v nutných případech použít lyofilizace.

je provedena zkouška bakteriologické nezávadnosti přípravku

b) Pro průmyslové zpracování je nutné použít mléko od krav zdravých dobře vitaminově krmených (pro výrobu 10 000 kusů přípravku se jedná o potřebu mléka nadojeného 1 den cd přibližně 800 krav), zvířata musí být hygienicky ošetřována, dojení musí být provedeno do dobře vymytých nádob mléko musí být urychleně dodáno ke zpracování v ddbře vymytých nádobách a chlazeno tak, aby jeho teplota nebyla vyšší než 3 °C kyselost mléka nesmí překročit 8,0 °SH, jako konservačního prostředku je možno použít jen H2O2 peroxid vodíku mléko je odstředěno na obsah tuku 0,5 % pasterizace je provedena těsně před sušením nebo lyofilizací

Glukóza (hexózaj

K výrobě přípravku je použita D-glukóza krystalická nebo· rekrystalizovaná (nelze použít jen glukózu vyráběnou enzymaticky), a to těchto vlastností:

sušina nejméně popel v sušině nejvýše titrační kyselost ml N/10 louhu na 5 g sušiny nejvíce průzračnost nejvyšší obsah mědi (Cu) nejvýše mg/kg koliformní mikroorganismy v 1 g nejvýše při kultivaci v masopeptonovém agaru (30 °C) sporující nebo jiné nepatogenní mikroby v 1 g nejvýše %

0,0í8 %

0,30 80 % při výrobě musí být použito technologicky nezávadné vody (bez nadprůměrných obsahů sodíku (Na), draslíku (K) a hořčíku (Mg)

Škrobový sirup

Jde o součást přípravku, kterou je možné sušina nejméně popel v sušině nejvíce titrační kyselost ml 0,1 N NaOH na 100 g sušiny nejvíce pH (zředění vodou 1:3) měď v mg 1000 g maximálně (Cu) rtuť (Hg), Zinek (Zn), Olovo (Pb), ve 20 g kysličník siřičitý (SO2) v mg/1000 g nejvýše v případě nedostatečné kvality sirupu vynechat bez náhrady jinou surovinou vyráběný hydrolýzou bramborového (kukuřičného nebo pšeničného) škrobu za přítomnosti kyselin šťavelové nebo sírové. Hydrolysát dokonale neutralizovaný plavenou křídou se rafinuje, zahušťuje a suší, %

0,4 %

4,7 až 5,4

Hydrofosforečňan sodný (NazHPO.lž HzO)

Lze použít i jiných neškodných stabilizátorů avšak s přihlédnutím k tomu, že kyseliny a zásady nejsou vhodné.

V kvalitě pro potravinářské účely s označením „čistý“ při výrobě přípravku průmyslovým způsobem (při vmíchání se provádí ochrana pokožky oděvem a rukavicemi, oči protichemickými brýlemi a plíce protiprašným ventilátorem. Na pracovišti nelze jíst, pít a kouřit a je nutno dodržovat pravidla osobní hygieny) při výrobě přípravku se vzhledem k lehké rozpustnosti rozpustí nejdříve stabilizátor v odstředěném mléce v předepsaném poměru. Po rozpuštění se přidá k ostatním, složkám média připraveným k zahuštění a sušení. Emulgátor C je použit v běžné tržní kvalitě dodávané pro potravinářské účely. Musí vyhovovat těmto požadavkům:

obsah monoglyceridů 30 % obsah vody maximálně 1 % číslo kyselosti maximální 10 bod tání minimální 40° obsah mýdla 0

Bovinní gammaglobulin (směsný) fe možno použít běžný komerční výrobek o nízké elektroforetické čistotě s příměsí ostatních frakcí bovlnního séra.

nejlépe alkohol frakcionací 90 až 95’ % bovinní sérum kyselina aminooctová mg 140 UI BAEE A = 253 η M purifikace elektroforetická čistota zdroj stabilizátor tripsinový inhibitor (u sójových bohů nebo bovinních

Plic)

Obal výrobku konečný výrobek se plní do NTS lahví, nebo v případech, kdy nejde o další skladování, do sterilních papírových skládacích krabic s vnitřními svarovým sáčkem, do zavřených sáčků z papírové fólie s nátěrem termoplastu nebo do jiných funkčně vyhovujících obalů. Na obalu musí být označena hmotnost, způsob ředění a přípravy, způsob Skladování a způsob použití přípravku.

Skladování lyofilizovaných částí přípravků (gammaglobulinu, kol ostrá], je dobře zajistit při teplotě —18 °C po dobu 3 let, sušeného média v temnu a suchu při teplotě 2 °C až 5 °C po dobu 1 hoku. Exspirační doba konečného výrobku při skladovací teplotě do 5 °C je šestiměsíční. V provozních podmínkách bez uchování v chladničce se doporučuje použít přípravek do 14 dnů. Postup při podávání přípravku

Při podávání přípravku narozeným! telatům je nutno dbát všech hygienických pravidel a při zahřívání směsi dbát, aby nedošlo k překročení teploty a tím i denaturaci miailých proteinů a ke ztrátě jejich biologických vlastností.

Přípravek je možno podle podmínek provozu podávat různým způsobem':

1. způsob (podávání přípravku s čerstvým nebo lyofilízovaným kolostrem) dávka přípravku se vmíchá do 1 litru kolostra (mleziva) při míchání je nádoba s kolostrem ponořena ve vodní lázni přibližně 40 °C teplé tak, aby teplota kolostra při vmíchávání přípravku se udržela mezi 35° až ,37 °C a neklesla pod 30 °C při podávání telatům. Je nutno dbát, aby nebyla překročena uvedená teplota.

K napájení telat je použito lahví s gumovým strukem s otvorem přibližně o průměru 7 mm. Lahve i gumové struky musí být čistě vymyté horkou vodou s přísadou čistících prostředů a opět dokonale vypláchnuté nezávadnou vodou.

2. způsob ru s nezávadnou vodou určené teploty je podáván odstaveným telatům nebo v době přerušení napájení vlastní matkou.

Sušený přípravek je smíchán s nezávadnou teplou vedou na maximální teplotou 40° v poměru 1 dávka přípravku a 400 g nezávadné vody nebo fysiologlckého roztoku.

(Podávání přípravku telatům, jako při 1. způsobu v lahvích.

3. způsob v případech, kdy nelze zajistit zahřáté kolostrum nebo nezávadnou vodu na předepsanou teplotu ného v jiných případech lze přípravek podat po několika částech v želatinovém nebo oplatkovém obalu (bez obsahu sacharózy) přitlačením ke kořeni jazyka zvířete.

Doba podávání jednotlivých dávek narozeným telatům:

(podávaných obvykle 3 X po sobě)

1. 2 dávky (výjimečně 1 dávka v noci] do 2 hodin po porodu

2. 2 dávky do 7 hodin po porodu

3. 1 dávka do 12 hodin po porodu to jest celkem až 5 dávek do 12 hodin po porodu.

Zpoždění tohoto cyklu podávání dávek je možné maximálně o 3 hodiny. Mimo první dávku, kde není zpoždění možné vůbec.

Přípravek pro· další druhy hospodářských zvířat

Základní médium přípravku je stejné jako bovinní médium. Přípravky pro různé druhy mláďat se liší

a) druhem směsného nebo specifického gammaglobulinu. Např. gammaglobulin ovčí, kozí, prasečí, koňský, psí, kočičí

b) váhovým množstvím podávaného přípravku, a to na 1 kg váhy ml mláděte 2 (+ 5 °/o) g sušeného přpravku

c) časovým obdobím podávání přípravku (např. u selat je 2 hodiny po narození, dále po 8, 14, 2I6i, 32 hodinách při maximálním zpoždění o 4 hodiny.

přípravek smíšený v předepsaném pomě-

Claims (2)

1. PŘEDMĚT

   1. Přípravek na zvýšení odolnosti mláďat hospodářských zvířat v sušeném stavu, obsahující mléko v množství 703,8 až 860,02 hmotných dílů,

   D-glukózu v množství 32,5 až 48,75 hmotných dílů, emulgátor C v množství 0,675 až 0,825 hmotných dílů, stabilizátor s výhodou hydrofosforečňan sodný v množství 0,133 až 1,47 hmotných dílů, případně škrobový sirup v množství do 2,5 hmotných dílů a případně další příVYNÁLEZU sady, zejména vitaminy a aminokyseliny, vyznačující se tím, že obsahuje bovinní gammaglobulin směsný nebo specifický o elektroforetické čistotě 90 až 95 % v množství 4,5 až 9 hmotných dílů, trypsinový inhibitor ze sójových bohů nebo z bovinnfch plic, případně jiný inhibitor průmyslové kvality v množství 0,060 až 0,24 hmotných dílů.
2. 2. Přípravek podle bodu 1 vyznačující se tím, že obsahuje navíc lyofilizované kolostrum v množství 20 až 30 hmotných dílů.