CS208868B1

CS208868B1 - Způsob odstraňováni ni zkomoleku lárnich sloučenin z roztoku krevního gamag lobu li nu

Info

Publication number: CS208868B1
Application number: CS305979A
Authority: CS
Inventors: Ivan Stepanek; Julius Uhrik
Original assignee: Ivan Stepanek; Julius Uhrik
Priority date: 1979-05-04
Filing date: 1979-05-04
Publication date: 1981-10-30

Abstract

Způsob odstraňováni n 1 zkomo leku lárních sloučenin z roztoku krevního gamag l obu l i nu se týká diagnostické a terapeutické imunologie .N i z komo le ku lá rn i látky se dostávají do roztoku gamag lobu I i nu v rámci technologického procesu,dále zásluhou mikrobiálního růstu a nastává koncentrační obohaceni sloučenin s fysio log ickobiochemickou aktivitou jako důsledek purifikace vzhledem k výchozímu materiálu.Jejich přítomnost vytváři předpoklady pro vznik nežádoucích interakcí s molekulami gamag lobu l i nu,což omezuje kvalitu a rozsah indikace preparátu v terapii.Purifikováný gamaglobulin se rozpouští v apyrogenni vodě na končentraci bílkovin v rozmezí 2 až 15% s optimem 8 + 2% a separace ni zkomoleku lárnich látek z gamag lobu li nového roztoku se provádí průtokovou dialyzou proti 0,1 až 37. roztoku chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě o teplotě 0 °C až +6 °C a hodnotou pH v rozmezi 4,0 až 7,0 při průtoku 300 ml až 2 000 ml za minutu po dobu 24 až 72 hodin při objemovém množství proteklého roztoku, které musi býti minimálně 200 násobkem objemu bílkovinného roztoku,který byl umístěn do celofánového potrubí.Po skončeni dialyzy se provádí sterilizace gamaglobulinového roztoku a jeho dalši zpracováni.

Description

chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě o teplotě 0 °C až +6 °C a hodnotou pH v rozmezi 4,0 až 7,0 při průtoku 300 ml až

000 ml za minutu po dobu 24 až 72 hodin při objemovém množství proteklého roztoku, které musi býti minimálně 200 násobkem objemu bílkovinného roztoku,který byl umístěn do celofánového potrubí.Po skončeni dialyzy se provádí sterilizace gamaglobulinového roztoku a jeho dalši zpracováni.

Vynález se týká způsobu odstraňováni nizkomoleku lárních sLoučenin z roztoku krevního gama globulinu.V posledním desetiletí se řada výrobců,kteři izolují z lidské nebo zvířecí krve gama globu lin,zaměříla na co nejefekti vnějši využití gama globulinu.Až dosud se při výrobě gama globulinu kladl důraz na jeho výtěžnost a na e lektrotoretickou čistotu.

Na precipitaci gama globulinu ze směsi p lasrnatických nebo sérových krevnich bílkovin byl použit siran amonný a hydroxyd h li nitý/Schu Itze H.E.,Hatheka H. DBehringwerke Mitt. 28,9,1954; Schultze Η.E.,SchBnenberger M.,Netheka H.D.:Behringwerke Mitt.26,21,19527, rivanol/Hořejši J.,Smetana R.: Acta Med.Scandinavica 155,65,1956/,síran sodný/Amiraian K., Leikhim E . J . : J . Imuno l. 87,301,1 961 /,chLor id hlinitý /Lewin J.Therapie 9,523,1954/,OEAE celulosa/Sober H . A. , Pe t e r son E.A.:Fed,Proc,17,1Ί 1 6,1 958; Peterson E. A.; Sotíeř,’H; A. : J.Am.

Chem.Soc. 78,756,1 956;Fahey J.L.,Herbett A.P.:J.Bi o l.Chem. 234,2645,1959;Stanworth D.H.:

Nátuře 188,1 56,1960/,kyše ti na kapry lová/Ste1nbuch M.Audran R.:Re v.Franc.0 etud.C lin.Bio l.

4,1 054,1 969/ ipnty Zn ^{+ +} a Al ^{+ + +}/Rejnek J.Škvařil F.:Co 11.Czechos lov.Commun. 22,1 489,1 957; Rejnek J.,Škvařil F.:Co 11.Czechos lov.Chem.Commun. 23, 773,1 958;Krauze R.,Naimski K.,

Zakrewski K.:Acta Biochim.Pol. 8, 209,1 961 /,pólymetafosfát/Nitschman H.S„,Rickli R.,Kistler P.: Vox Sang. 5,232,1960/,etér/Pennel R.B.,Putnám F.W./ed/ The Plasma Proteins vol.I Academie Press-New York 1960,str.9/ a etanol/Cohn E.J.,Gurd F ,N.R.,Surgenor D.M.,Barnes B.A.,

Broun R. K., Derouaux G.,Gillespie J.M.,Kahnt F.W.,Lever W.F.,Liu C.H.,MitteIman D.,Mouton R.F,,Schmid K.,Uroma E.:J.Am.Chem.Soc. 72,465,1 950;Deutsch H.F.,Gost ling G.L.,Alberty R.A., Williams J.W.:J.Bi o l.Chem.1 64,1 09,1 946;Onc1ey J.L.,Melin M.,Rickert 0.A.,Cameron J.W.,

Gross P.M.:J.Am.Chem.Soc. 71,541,1 949; N i t schman H.S.,Kistler P.,Lergíer W.:Helv.Chim.Acta 37, 866, 1 95 4; K i s t le r, N i t sc hman H.S.:Vox Sang.7, 41 4,1 962;Tay lor H.L.,Bloom F.C.,Mc Call K.B., Hyndman L.A.,Anděrson H . 0 J . Am . Chem.Soc. 78,1356,1956/.

Současné technologická praxe všek na jedné straně sice odděluje gama globulin od směsi jiných krevnich bilkpvin,ale na druhé straně zanáší do gama globulinového roztoku nizkomolekulárni anorganické nebo organické s loučeniny.Technolog ický postup může také část některých nizkomolekulárnich sloučenin s biochemicko-fysio log ickou aktivitou v roztoku gama globulinu koncentrovat,tj.oboha covat vzhledem k jejich koncentraci ve výchozí surovině,ze které byl gama globulin izolován.

Přítomnost netěkavých anorganických soli v roztoku gama globulinu,jako i při tomnost netěkavých nízkomolekulárních organických molekul v roztoku gama globulinu vytváří předpoklady pro vznik nežádoucích interakci těchto látek s molekulami gama globulinu a to zejména při lyofi lizaci nebo při skladováni v injekčním roztoku,což může snižovat kvalitu preparátu a popřípadě omezovat rozsah jeho indikace v terapii.

Nedostatkem dosud užívané technologie je skutečnost,že takto připravené lyofi l i z ováné preparáty máji vysokou antikomp lementárni aktivitu,která byla zjištěna na základě úbytku aktivity komplementu po přidáni rozpuštěného lyofi l i z o vaného preparátu metodou podle Kbat-Mayera/Kabat E.A.,Mayer Μ.M.:Experimentá In 1 imunochemie ČSAV Praha,1 96 5,str . 180/,

U nově navrhované technologie se tyto potíže nevyskytovaly v tak výrazné intensitě, což lze dokumentovat! údajem,že z 10 připravených experimentálních šarži podle předloženého vynálezu bylo dosaženo sníženi antikomplementární aktivity u lyofi lizovaného preparátu o 70 až 90% ve srovnáni s tímtéž materiá lem,který byl lyofilizován bez předcházející separace nízkomolekulárních sloučenin.

Podstata odstraňováni nízkomolekulárních anorganických nebo organických sloučenin z roztoku gama globulinu spočívá podle předloženého vynálezu v tom,že bílkovinný materiál, obsahující purifikovaný gama globulin se suspenduje za aseptických podmínek v takovém množství apyrogenni destilované vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 2% až 15%,s optimem 8%22%,gama globulinový roztok se vyčeři například filtraci a separace ni zkomo leku lárnich sloučenin z gama g l obu l i nového roztoku se provádi průtokovou dialyzou proti 0,1% až 3,0% roztoku chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě, s optimem 0,45% až 0,9% chloridu sodného,o teplotě 0 °C až +6 °C s hodnotou pH v rozmezí 4,0 až 7,0 při průtoku 300 až 2 000 ml za minutu po dobu 24 až 72 hodin.Množstvi celkově proteklého roztoku chloridu sodného musí býti minimálně 200 násobkem objemu bi lkovinného roztoku,který byl umístěn do celofánového potrubi.

Po ukončeni dialyzy se gama globulinový roztok · podrob 1 sterilizaci například filtrací nebo radiačni sterilizaci a potom dalšímu zpracování například lyofilizaci nebo zakoncentro váni pomoci vakuové destilace popřípadě pomocí membrán.

Vynález je dále objasněn na přikladu proveden 1,ji miž jeho rozsah neni omezen ani vyčerpán.

PŘÍKLADY PROVEDENÍ

Přiklad 1 .

Výchozí surovinou ja pasta frakce II,izolovaná metodou podle Cohna.Βi lkovinný gama globulinový materiál se rozpouští v takovém množství destilované apyrogenni vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 2% až 15%, s optimem 8%£21(.Rozpouštěni se urychluje michánim.Po rozpuštění se gama globulinový roztok vyčeří,napřiklad filtrací.

V technologických poměrech jsou výše uvedené podmínky zpravidla zachovány tehdy, když rozpouštíme 1 kg gama globulinové pasty ve 2 000 ml destilované apyrogenni vody o teplotě 0 °C až +6 °C.Hodnota pH takto vzniklého gama globu li nového roztoku bývá 2pravidla mezi pH 4,0 až 7,0 a koncentrace bílkovin v rozmezí 8% + 2%.Takto připravený roztok purifikováného gama globulinu se vyčeří například filtrací a nízkomolekulární sLoučeniny se z gama globulinového roztoku odstraní dialyzou_znapřiklad přes díalyzační celofánové potrubí/pod komerčním označením Di alysiersch l auch anebo Viskora nebo na jiných celofánových materiálech z celofánu.

Namočené celofánové potrubí v apyrogenní vodě se naplní apyrogenní vodou o teplotě 0 °C až +6 ,°C za účelem stanovení celistvosti.Pruměr celofánového potrubí by se měl pohybovat od 2 cm do 10 cm s optimem 5 cm.

Spodní část celofánového potrubí se uzavře uzlem.Gama globulinový roztok se nalije do' ce tofánového potrubí,uzavřeného ve spodní části uzlem, a uzavře se ve vrchní části Uzlem se smyčkou,za kterou se zavěsí na háček ve vrchním víku dialyzační průtokové kolony.

Za optimální rozměry technologickédialyzačni průtokové kolony se považujítakové,kde průměr kruhové nebo úhlopříčka čtvercové nebo obdélníkově základní plochy k výšce kolony se pohybují v poměru 1:5 až 1:10.Množství gama globulinového roztoku,naneseného na dialyzační průtokovou kolonu namá překročit 25% až 30% objemu prázdné kolony.

Po nanesení zvoleného objemu do vnitřku celofánového potrubí se gama globulinový roztok,um 1stěný v pot rubí,z avěs1 na vrchní víko a zahájí se průtok 0,1% až 3,0% roztoku chloridu sodného v destilované apyrogenní vodě,s optimem 0,45% až 0,9%,o teplotě 0 °C až +6 °C a hodnotě pH mezi 4,0 až 7,0 v množství 300 ml až 2 000 ml za minutu po dobu 24 až 72 hodin,s výhodou při průtoku 1 000 ml/min. po dobu 48 hodín,Ce lkové množství proteklého roztoku chloridu sodného musí býti minimálně 200 násobkem objemu bílkovinného roztoku, který byl umístěn do celofánového potrubí.

Gama globulinový roztok se po skončeni dialyzy sejme ze závěsného háčku na viku dialyzační průtokové kolony,opatrně se vyjme z kolony a po rozstřihnutí celofánového potrubí se gama globulinový roztok přete je do sběrné nádoby.Potom se gama globulinový roztok podrobí steri l i z aci,napřík l ad filtrací nebo radiační sterilizaci a dalšímu zpracováni, například lyofilizaci neou z akoncentrován i pomocí vakuové desti l ace,popřipádě pomoci membrán.

Numerické hodnoty,uváděné jako optima jsou vhodné pro technologické provedení.

Příklad 2.

Výchzí surovinou muže býti bílkovinná pasta gama g lobuli nu,iso l ováná i pomocí jiných metod,jejichž seznam je uveden v literárním přeh ledu.Βi l kovinná pasta se zpracovává v dalžim postupu jako v přiklade 1.

Claims

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

Způsob odstraňováni ni zkomoleku lárn1ch sloučenin z roztoku krevního gama globulinu, vyznačující se tim,že bílkovinný materiá l,obsahujic1 purifikovaný gama globulin se suspenduje za aseptických podmínek v takovém množství apyrogenni destilované vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v roznjezi 22 až 152,gama globulinový roztok se vyčeři například filtraci a separace ni zkomolekulárn1ch sloučenin z gama globulinového roztoku se provádí průtokovou dialyzou proti 0,12 až 3,02 roztoku chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě o teplotě 0 °C až +6 °C s hodnotou pH v rozmezí 4,0 až 7,0 při průtoku 300 ml až 2 000 ml za minutu po dobu 24 až 72 hodin při objemovém množství celkově proteklého roztoku chloridu sodného,ketré musí býti minimálně 200 násobkem objemu bílkovinného roztoku,který byl umístěn do celofánové fólie ve formě potrubí,při čemž oddi a lyzováný gama globulinový roztok se podrobi sterilizaci,např1klad filtraci nebo radiační sterilizaci a potom dalšímu zpracqván1,napřik lad lyofilizaci nebo zakoncentrováni pomocí vakuové desti l ace,popři pádě pomoci membrán.