CS208867B1

CS208867B1 - Způsob odstraňován! n1 zkomotekutárn1ch sloučenin z roztoku krevnich imunoglobulinů skupiny G.A.M

Info

Publication number: CS208867B1
Application number: CS305879A
Authority: CS
Inventors: Ivan Stepanek; Julius Uhrik
Original assignee: Ivan Stepanek; Julius Uhrik
Priority date: 1979-05-04
Filing date: 1979-05-04
Publication date: 1981-10-30

Abstract

Způsob odstraňováni nízkomolekulárních sloučenin z roztoku krevnich imunoglobulinů skupiny G.A.M se týká diagnostické a terapeutické imunolog ie,N1 zkomoleku lárni látky se dostávají do roztoku imunoglobulinů skupiny G.A.M v rámci technologického procesu.dále zásluhou mikrobiálního růstu a nastává koncentrační obohacení sloučenin s fysiologickobiochemíckou aktivitou jako důsledek purifikace vzhledem k výchozímu materiálu.Jejich přítomnost vytváří předpoklady pro vznik nežádoucích interakcí s molekulami imunoglobulinů skupiny G.A.M, což omezuje kvalitu a rozsah indikace preparátu v praxi.Purifikováné imunoglobuliny skupiny G.A.M se rozpouští v apyrogenní vodě na koncentraci bílkovin 1 až 15% s optimem 8+,2% a separace nízkomolekulárních látek z roztoku imunoglobulinů skupiny G.A.M

Description

Způsob odstraňován! n1 zkomotekutárn1ch sloučenin z roztoku krevnich imunoglobulinů skupiny G.A.M

208 8Ó7 se provádí průtokovou dialyzou proti 0,1 až

3>0 X roztoku Chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě o teplotě 0 °C až + 6 °C s hodnotou pH v rozmezí 4,0 až 7,0 při průtoku 300 ml až 2 000 ml za min.po dobu 24 až 72 hodin při objemovém množství proteklého roztoku,které musi býti minimálně 200 násobkem objemu bílkovinného roztoku,který byl umístěn do celofánového potrubí.Po ukončeni dialyzy se provádí sterilizace imunoglobuli nového roztoku skupiny G,A,M a jeho dalžizpracováni.

Vynález se týká odstraňováni n1 zkomoleku lárnich sloučenin z roztoku krevních imunoglobulinů skupiny G,A,M.

V posledním desetileti se řada výrobců,kteři izoluji z Lidské nebo zviřeci krve preparáty s proti látkovou aktivitou,zaměři la na přípravu terapeutického preparátu gama g lobuli nu,který obsahuje imunoglobuliny skupiny A nebo skupiny H,popřípadě směs imunoglobulínů A a M.

Na precipitaci balastnlch bílkovin ze směsi imunog lobu linů skupiny G,A,H byl použit síran amonný a ri vanoL/Schwick H.G.,Fischer J.,Geiger H.:Progr.Imunobio l.Stand. 4,86,1 970; Schwich H.G.:Vox Sang. 23,82,1 972/,kyseli na bór itá/Pejaudier L.,Audran R.,Steinbuch M.;

Vox Sang. 23,1 65,1 972/ a kyselina kapry loyá/B latrix G.,Israťt J.,Reinert PhGrisce 11 i G., Steinbuch H.: La Nouvelle Presse Medicale 5,1193,1976/.

Současná technologická praxe však na jedné straně sice odděluje gama globulin s imunoglobuliny skupiny A a M od směsi jiných krevních bílkovin,ale na druhé straně zanáši do roztokuimunog lobu linů skupiny G,A,M nízkomolekulární anorganické nebo organické sloučeniny.

Technologický postup může taktéž část některých nizkomo leku lárnich sloučenin s biochemicko-fyzi o log ickou aktivitou v roztoku imunoglobulinů G,A,M koncentrovat,t.j. obohacovat vzhledem k jejich koncentraci ve výchozi surovině,ze které byly imunog lobu l iny skupiny G,A,M izolovány.

Přítomnost netěkavých anorganických soli,jakož i přítomnost ni zkomo leku lárn1ch organických molekul v roztoku imunoglobulinů skupiny G, A, M vytváří předpoklady pro vznik nežádoucích interakci těchto látek s molekulami imunoglobulinů skupiny G,A,M, a to zejména při lyofilizaci nebo při skladování v injekčním roztoku,což může snižovat kvalitu preparátu,popři pádě omezovat rozsah jeho aplikace v terapii.

Nedostatkem dosud uživané technologie je skutečnost,že takto připravené lyofi lizované preparáty máji vysokou antikomp lementárni akti v itu,která byla zjištěna na základě úbytku aktivity komplementu po přidáni rozpuštěného lyofilizovaného preparátu metodou podle KabatMayera/Kabat E,A.,Mayer M.M.: Experimentá Ini imunochemie ČSAV,Praha 1 965,str. 180/.

U nověnavrhované technologie se tyto potíže nevyskytovaly v tak výrazné intenzitě,což lze dokumentovat údajem,že z 10 připravených experimentálních šarži podle předloženého vyná lezu,bylo dosaženo sníženi antikomp lementárni aktivity u lyofi lizovaného preparátu O 70% až 90% ve srovnáni s tímtéž mateřiá lem,který byl lyofi lizován bez předcházejici separace ni zkomo leku lárn1ch sloučenin.

Podstata odstraňováni ni zkomo leku l árnich anorganických nebo organických sloučenin spočívá podle předloženého vynálezu v tom,že bílkovinný materiál,obsahuj 1ci imunog lobu liny skupiny G,A,M se suspenduje za aseptických podmínek v takovém množství apyrogenni destilované vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 1% až 15%,s optimem 8%+ý%,roztok imunog lobu l inú se vyčeři filtraci a separace nizkomolekulárnich sloučenin se provádí z roztoku imunoglobuli nu průtokovou dialyzou,napřik lad pomoci eluce s 0,1% až 3% roztokem chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě,s optimem 0,45% až 0,9% chloridu sodného,o tepLotě 0 °C až +6 °C s hodnotou pH v rozmezí 4,0 až 7,0 při průtoku 300 ml až 2 000 ml za minutu,po dobu 24 až 72 hodin.

Po ukončeni dialyzy se z dialyzačního celofánového potrubi vyteklý roztok imunoglobulinů skupiny G,A,H podrobí sterilní filtraci nebo radiační steri lizaci,rozplnuje se a v případě potřeby se lyofilizuje.

Vynález je dále objasněn na příkladech provedeni,jimiž jeho rozsah neni omezen ani vyčerpán.

Přiklad 1.

Výchozí surovinou je bílkovinná pasta precipitátu imunoglobu linů skupiny A, G, M, z 1 skaná způsobem podle Pejaudiera a spo l./Pejaudier L.,Audran R.,Steinbuch H.:Vox Sang.23,1 65,1 972/ Bílkovinný materiál vyprecipiti váných imunog lobu linů se rozpouští v takovém množství destilované apyrogenni vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 1% až 15%,s optimem 8%+2%.Rozpouštěn1 se urychluje mícháním.

Po rozpouštěni se roztok imunog lobu linů skupiny G,A,M vyčeři,napřiklad filtraci.

V technologických poměrech jsou výše uvedené podmínky zpravidla zachovány tehdy,když rozpouštíme 1 kg bílkovinné pasty imunoglobu l inů skupiny G,A,M ve 2 000 ml destilované vody testované na apyrogenitu,o teplotě 0 °C až +6 °C.Hodnota pH takto vzniklého imunoglobuli nového roztoku skupiny G,A,H bývá zpravidla mezi 4,0 až 7,0 a koncentrace bilkovin v rozmezí 8 2 %.Takto připravený roztok se vyčeři například filtraci a nízkomolekulární sloučeniny se z roztoku odstraní dia l yzou,např1k l ad přes dialyzačni celofánové potrubi/ pod komerčním označením 0i alysierschlauch,Viscora nebo na jiných celofánových materiálech/.

Namočené celofánové potrubi v apyrogenni vodě se naplní ayprogenni vodou za účelem stanoveni ce l istvosti.Průměr celofánového potrubi by se měl pohybovat od 2 cm do 10 cm s optimem 5 cm.Spodní část celofánového potrubi se uzavře uzlem.Roztok imunog lobu l inů skupiny G,A,H se nalije do celofánového pot rub i,uzavřeného ve spodní části uzlem a uzavře se ve vrchní části uzlem se smyčkou,za kterou se zavěsi na vrchní víko dialyzačni průtokové kolony.

Za optimální rozměry technologických dialyzačně průtokových kolon se považuji takové, kde průměr kruhové,nebo úhlopříčka čtvercové nebo obdélníkové základní plochy k výšce kolony se pohybuje v poměru 1:5 až 1:10.Množstv i roztoku imunoglobulinů,naneseného do celofánového pot rub 1,um istěného v dialyzačně průtokové koloně nemá překročit 25% až 30% objemu prázdné kolony.

Po naneseni zvoleného objemu imunog lobuli nového roztoku se zahájí nucený průtok s 0,1% až 3,0% roztokem chloridu sodného v destilované apyrogennl vodě s optlmem 0,45% až 0,9% o teplotě 0 °C až +6 °C,o pH 4,0 až 7,0,při průtoku 300 ml až 2 000 ml za minutu s výhodou při průtoku 1 000 ml/min. po dobu 48 hod in.Množstv 1 celkově proteklého roztoku chloridu sodného musí býti minimálně 200 násobkem objemu bilkbvinněho roztoku,který byl umístěn do celotánového potrubí.

Po skončeni dialysy se roztok imunog lobu linů skupiny G,A,M,umistěný v celofánovém potrubi,sejme ze závěsného háčku na vrchním vlku dialyzačně průtokové ko lony,opatrně se vyjme z kolony a po rozstřihnuti se imunog lobu li nový roztok z dialyzačně celofánového potrubí podrobí sterilizaci,napřik lad filtraci nebo radiační sterilizaci a potom dalšímu zpracování,napřik lad lyofilizaci nebo zakoncentrováni pomoci vakuové desti 1 ace,popř1 pádě pomoci membrán.

Numerické hodnoty,uváděné jako optima,jsou vhodné pro technologické provedeni.

Přiklad 2.

Výchozí surovinou může být bílkovinná pasta imunoglobulinů skupiny G,A,M,i z olováná i pomoci jiných metod.Bi Ikovinná pasta se zpracovává v dalším postupu jako v příkladě 1

Claims

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

Způsob odstraňováni ni zkomolekulárnich sloučenin z roztoku krevních imunog lobu l inů skupiny G,A,M,vyznačuj ici se tím,že bílkovinný nateriá l,obsahujici imunog lobu l iny skupiny G,A,M se suspenduje za aseptických podmínek v takovém množství apyrogennl destilované vody o teplotě 0 °C až +6 °c,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 1 % až 15 %,roztok imunoglobulinů se vyčeři,napřik l ad filtrací a separace ni zkomo leku l árnich sloučenin se provádí z roztoku imunog lobu 1 inů skupiny G,A,M průtokovou dialyzou proti 0,1% až 3,0% roztoku chloridu sodného v destilované vodě apyrogennl o teplotě 0 °C až Ί6 °C,s hodnotou pH v rozmezí 4,0 až 7,0,při průtoku 300 ml až 2 000 ml za minutu pc dobu 24 až 72 hodin při objemovém množstvi celkově proteklého roztoku chlpridu sodněho,které musí býti minimálně 200 násobkem objemu bílkovinného roztoku,který byl umístěn do celofánové fólie ve formě potrubí,při čemž oddialyzovaný roztok imunoglobulinů skupiny G,A,M se podrobí sterilizaci,například filtraci nebo radiačni sterilizaci a potom dalšímu zpracováni,naprik lad lyofilizaci nebo zakoncentrováni pomoci vakupvé desti lace,popři pádě pomoci membrán.