CS202182B1 - Způsob odstraňováni nizkomolekulárnlch sloučenin z roztoku krevních imunog lobu línů skupiny G,A,M. - Google Patents
Způsob odstraňováni nizkomolekulárnlch sloučenin z roztoku krevních imunog lobu línů skupiny G,A,M. Download PDFInfo
- Publication number
- CS202182B1 CS202182B1 CS754077A CS754077A CS202182B1 CS 202182 B1 CS202182 B1 CS 202182B1 CS 754077 A CS754077 A CS 754077A CS 754077 A CS754077 A CS 754077A CS 202182 B1 CS202182 B1 CS 202182B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- solution
- low molecular
- molecular weight
- immunoglobulin
- column
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title description 2
- 241000947840 Alteromonadales Species 0.000 title 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 27
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 27
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 description 3
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- WFWLQNSHRPWKFK-UHFFFAOYSA-N Tegafur Chemical compound O=C1NC(=O)C(F)=CN1C1OCCC1 WFWLQNSHRPWKFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Poznáni skutečnosti,že imunoglobulíny skupiny G,A,M jsou zodpovědné za proti látkovou aktivitu způsobilo zaměřeni pozornosti na přípravu terapeutického preparátu gama globulinu, který obsahuje imunoglobulíny skupiny A nebo skupiny M,případně směs imunog lobulinů A a M.
Základní podmínkou pro klinickou efektivnost účinku imunologického preparátu je co nejnižši hodnota antikomplementární aktivity,která souvisí s obsahem nizkomolekulárnlch anorganických nebo organických sloučenin,které se do roztoku imunog lobullnů skupiny G,A,M dostávají v souvislosti s jejich technologickou formou separace.Vynález řeěi způsob odstraňováni těchto nizkomolekulárnlch sloučenin z roztoku imunoglobilinů skupiny G,A,M,který může být použit jak pro intramusku lárn1,tak i pro intravenóznl aplikaci.
Na precipitaci balastnich bílkovin ze směsi imunoglobulinů skupiny G,A,M byl použit siran amonný a rivanol/Schwick H.G.,Fischer J.,Geiger H.:Progr.Imunobiol.Stand.4,86,1970; Schwick H.G.;Vox Sang. 23,82,1 972/,kyše li na bóritá/pejaudier L.,Audran R.,Steinbuch N.:
Vox Sang. 23,165,1 972/ a kyselina kaprylová/Blatrix C.,Israěl J.,Reinert Ph.,Grisce l li C., Steinbuch H,:La Nouvelle Presse Nedicale 5,1193,1976/.
Současná technologická praxe však na jedné straně sice odděluje gama globulin a imunoglobullny skupiny A a M od směsi jiných krevních bílkovin,ale na druhé straně zanáší do roztoku imunog lobulinů skupiny G,A,N nizkomolekulárni anorganické nebo organické sloučeniny.
Technologický postup může taktéž část některých nizkomolekulárnlch sloučenin s bio202 182
202 182 chemicko-fysiologickou aktivitou v roztoku imunog lobulinů skupiny G,A,M koncentrovat,tj. obohacovat vzhledem k jejich koncentraci ve výchozí surovině,z které byly imunoglobu líny skupiny G,A,M izolovány.
Přitomnost netěkavých anorganických soli,jakož i přítomnost nlzkomolekulárnich organických sloučenin v roztoku imunog lobulinů skupiny G,A,M vytváří předpoklady pro vznik nežádoucích interakci těchto látek s molekulami imunoglobu línů skupiny G,A,H, a to zejména při lyofilizaci nebo při skladováni v injekčním roztokuzcož může snižovat kvalitu preparátu a popřípadě omezovat rozsah jeho aplikace v terapii.
Nedostatkem dosud užívané technologie je skutečnost,že takto připravené lyofi lizované preparáty máji vysokou antikomplementární aktivitu,která byla zjištěna na základě úbytku aktivity komplementu po přidáni rozpuštěného lyofi lizovaného preparátu metodou podle KabatMayera ZKbat E.A.,Nayer M.M.:Experimentálni imunochemie ČSAV,Praha 1 965,str.1 80/.
U nově navrhované technologie se tyto potíže nevyskytovaly v tak výrazné intenzitě, což lze dokumentovat údajem,že z 10 připravených experimentálních šarži podle předloženého vynálezu bylo dosaženo sníženi antikomplementární aktivity u lyofilizovaného preparátu o 70 X až 90 X ve srovnáni se stejným materiálem,který byl lyofilizován bez předcházející % separace nlzkomolekulárnich sloučenin.
Podstata odstraňováni nlzkomolekulárnich anorganických nebo organických sloučenin spočívá podle předloženého vynálezu v tom,že bílkovinný materiál,obsahuj1ci imunoglobuliny skupiny G,A,M se suspenduje za aseptických podmínek v takovém množství apyrogenni destilované vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 1 X až 15 X,s optimem 8 X +, 2 X,roztok imunoglobulinů se vyčeři filtraci a separace nizkomolekulárnich sloučenin se provede z roztoku imunog lobu l inů elučni chromatograf11 s vylučovací mezi ge lu,vyjádřenou molekulovou hmotnosti nlzkomolekulárnich sloučenin do 10 000, pomoci eluce s 0,1Xnim až 3,0 Xnim roztokem chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě,s optimem 0,45 X ai 0,9 X chloridu sodného,o teplotě 0 °C až +6 °C s hodnotou pH p v rozmezí 4,0 až 7,0 při průtoku 0,01 ml až 3,0 ml za minutu na cm výtokové plochy gelové části kolony.Za optimální průtok je možno považovat objem v rozmezí od 0,05 ml do 1,0 ml za minutu na cm^,kdy vzniká naředění na čele a konci výtoku bílkoviny z kolony,při čemž cca 80 X naloženého objemu roztoku bílkovin vytéká z kolony prakticky v té koncentraci, v jaké byl roztok bílkovin na kolonu nasazen.Průtoky kolem 5 ml za minutu na cm2/Friedli
H.,Kistler> P.:Chimia 26,25,1972/ způsobuji naředění roztoku na vice než dvojnásobný objem.
Z ge lově-chromatografické kolony vyteklý roztok imunog lobu l inů skupiny G,A,M se podrobí sterilní filtraci nebo radiační steri lizaci,rozplňuje se a v případě potřeby se lyofi lizuje.
Vynález je dále objasněn na příkladech provedeni,j1 miž jeho rozsah není ani omezen, ani vyčerpán.
Přiklad 1
Výchozí surovinou je bílkovinná pasta precipitátů imunoglobuHnů skupiny G,Α,Μ,ζΙskaná způsobem podle Pejaudiera a spol./Pejaudier L.,Audran R.,Steinbuch N.:Vox Sang. 23,165,1972/
Bílkovinný materiál vyprecipitovaných imunog lobu linů se rozpouští v takovém množství dafeti3 lované apyrogenni vody o teplotě 0° C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 1 X až 15 X s optimem 8 X t 2 %.Rozpouštěn i se urychluje mícháním.Po rozpuštěni se roztok imunoglobulinů skupiny G,A,M vyčeři,například filtraci.
V technologických poměrech jsou výše uvedeně podmínky zpravidla zachovány tehdy,když rozpouštíme 1 kg bílkovinné pasty imunoglobulinů skupiny G,A,M ve 2 000 ml deštilované vody,testované na apyrogenitu, o teplotě 0 °C až *6 °c.Hodnota pH takto vzniklého imunoglobulinového roztoku skupiny G,A,M bývá zpravidla mezi 4,0 až 7,0 a koncentrace bílkovin v rozmezí 8 X t 2 X.
Takto připravený roztok se vyčeři například filtraci a nízkomolekulární sloučeniny se z roztoku odstraní eluěni gelovou chromatografii například na dextranových gelech,pod komerčním označením Sephadex G-25;G-50,na polyakrylamidových gelech,pod komerčním označením Biogel P-2;P-4;P-6,na metakrytátových gelech pod komerčním označením Spheron P-40 nebo na jiných materiálech,jako jsou například domácí vývojové materiály na bázi řetězeného škrobu s epich lorhydrinem nebo na bázi perlové celulózy,s vylučovací mezi gelu,vyjádřenou molekulovou hmotnosti nízkomolekulárních sloučenin do 10 000,přičemž uvedené materiály je nutno používat v optimálním zrněni,zaručujicim průtok pro technologické podmínky.
Nabobtnalý gel,promytý apyrogennim 0,45Xnim až 0,9Xnim roztokem chloridu sodného v destilované vodě o teplotě 0 °C až +6 °C se plni do chromatografické kolony.Za optimálni rozměry technologické gelově chromatografické kolony se považuji takové,kde průměr kruhové nebo úhlopříčka čtvercové nebo obdélníkové základní plochy se pohybuje v poměru 1:5 až 1:10.
Do kolony necháme nasávat imunoglobulinový roztok takovou rychlosti,aby průtok spodní plochou kolony še pohyboval mezi 0,01 ml až 3,0 ml,s optimem 0,05 až 1,0 ml za minutu na cm?.Množství imunoglobuLinového roztoku,naneseného na kolonu,nemá překročit 25 X až 30 % objemu gelové části chromatografické kolony.
Po nasazení celého objemu imunoglobulinového roztoku se chromatografické kolona promývá 0,1Xnim až 3,0Xnim roztokem chloridu sodného v apyrogenni vodě,s optimem 0,45 X až 0,9 X chloridu sodného o teplotě 0 °C až +6 °C při zachováni stejné průtokové rychlosti.
Po výtoku imunog lobu linového roztoku,zbaveného nízkomolekulárních sloučenin se gelově chromatografické kolona promývá rychlosti 0,3 ml až 0,6 ml za minutu na cm? minimálně 10ti násobkem objemu své gelové části s 1 M roztokem chloridu sodného v apyrogenni destilované vodě.Potom se chromatografické kolona promyje minimálně 15ti násobkem objemu gelové části s apyrogenni vodou o teplotě 0 °C až +6 °C,přičemž lze oddělováni nízkomolekulárních sloučenin z roztoku imunoglobulinů skupiny G,A,M na gelově-chromatografické koloně po ekvi librizaci s 10ti násobkem objemu gelové části s 0,1 Xnim až 3,0Xnim roztokem chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě,s optimem 0,45X až 0,9 X opakovat.
Roztok imunoglobulinů skupiny G,A,M po eluci z gelově chromatografické kolony se zpravidla sterilizuje filtraci nebo radiační sterilizaci,rozplni se a podrobí se dalšímu zpracováni,například lyofi lizad.
Numerické hodnoty,uváděné jako optima,jsou vhodné pro technologické provedeni,které bylo úspěšně odzkoušeno.
202 182
Přiklad 2
Výchozí surovinou může býti bílkovinná pasta imunoglobu línů skupiny G,A,M,izolovaná i pomoci síranu amonného a ri vano lu,anebo pomoci kyseliny kaprylové.B1Ikovinná pasta se zpracovává v dalším postupu jako v příkladě 1.
Claims (3)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob odstraňováni nízkomolekulárních sloučenin z roztoku krevních imunog lobulinů skupiny G,A,M,vyznačuj 1c 1 se t1m,že bílkovinný mater iá l,obsahuj1c1 imunoglobulíny skupiny G,A,M se suspenduje za aseptických podmínek v takovém množství ayprogennl destilované vody o teplotě 0 °C až +o °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 1 X až 15 X, roztok imunogLobulinů se vyčeřl filtraci a seaprace nízkomolekulárních sloučenin se provádí z roztoku imunog lobulinů eluční chromatografií s vylučovací mezi ge lu,vyjádřenou molekulovou hmotnosti nizkomolekulárnich sloučenin do 10 000,pomoci eluce s 0,1Xnim až 3,0Xn1m roztokem chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě o teplotě 0 °C až +6 °C s hodnotouO pH v rozmezí 4,0 až 7,0 při průtoků 0,01 ml až 3,0 ml za minutu na cm výtokové plochy gelové části kolony,při čemž z ge lově-chromatografickě kolony vyteklý roztok imunoglobulinů skupiny G,A,M sé sterilizuje filtraci nebo radiační ster i lizac1,rozp lni se a podrobí se dalšímu zpracováni,například Lyofilizaci.
- 2. Způsob podle bodu 1,vyznačuj 1c1 se t1m,že výchozí bílkovinný materiál se suspenduje na hodnotu Koncentrace bílkovin v rozsahu 6 až 10 X.
- 3. Způsob podle bodu 1,vyznačuj 1c1 se tim,že gelově chromatografická eluce se provádí s 0,45 až 0,9Xnim roztokem chloridu sodného při průtoku 0,05 až 1,0 ml za minutu na cm výtokové plochy gelové části kolony.Vytiskly Moravské tiskařské závody, provoz 12, Leninova 21, OlomoucCena: 2,40 Kčs
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS754077A CS202182B1 (cs) | 1977-11-16 | 1977-11-16 | Způsob odstraňováni nizkomolekulárnlch sloučenin z roztoku krevních imunog lobu línů skupiny G,A,M. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS754077A CS202182B1 (cs) | 1977-11-16 | 1977-11-16 | Způsob odstraňováni nizkomolekulárnlch sloučenin z roztoku krevních imunog lobu línů skupiny G,A,M. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS202182B1 true CS202182B1 (cs) | 1980-12-31 |
Family
ID=5424732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS754077A CS202182B1 (cs) | 1977-11-16 | 1977-11-16 | Způsob odstraňováni nizkomolekulárnlch sloučenin z roztoku krevních imunog lobu línů skupiny G,A,M. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS202182B1 (cs) |
-
1977
- 1977-11-16 CS CS754077A patent/CS202182B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE68903558T2 (de) | Verfahren zur inaktivierung von viren. | |
| US5011695A (en) | Sterilization of blood and its derivatives with vitamins | |
| US3903262A (en) | Pharmaceutical compositions comprising intravenously injectable modified serum globulin, its production and use | |
| Mee et al. | Predominance of core histones in formation of DNA--protein crosslinks in gamma-irradiated chromatin. | |
| US4216205A (en) | Process of preparing a serum protein composition for intravenous application | |
| US5164487A (en) | Manufacturing intravenous tolerable immunoglobulin-g preparation | |
| US5410025A (en) | Unmodified intravenously administered immunoglobulin preparations containing immunoglobulin M and/or A | |
| KR910002467A (ko) | lgM을 함유하는 정맥내 투여용 폴리클로날 면역글로블린 제제 및 이의 제조방법 | |
| KR890000165B1 (ko) | 혈장분획을 열처리하는 방법 | |
| Evans et al. | Zinc transport by transferrin in rat portal blood plasma | |
| DE3061547D1 (en) | Process of preparation of an intravenous immunoglobulin solution, containing concentrated igm | |
| EP0428758A1 (en) | Albumin preparation and method of producing the same | |
| McCue et al. | Three generations of immunoglobulin G preparations for clinical use | |
| US3608071A (en) | Manufacturing adsorbed vaccines | |
| KR890006251A (ko) | 고-순도의, 바이러스로부터 보호된 생물학적 활성 트랜스페린 제제의 제조방법 | |
| FI106468B (fi) | Menetelmä virusturvallisen, erittäin puhtaan tekijä VIII:n valmistamiseksi | |
| AT391808B (de) | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf)-haeltigen fraktion | |
| PL165402B1 (pl) | Sposób wydzielania oczyszczonego roztworu albuminy PL | |
| RU2191032C2 (ru) | Способ получения препарата на основе иммуноглобулина м для внутривенного применения | |
| CS202182B1 (cs) | Způsob odstraňováni nizkomolekulárnlch sloučenin z roztoku krevních imunog lobu línů skupiny G,A,M. | |
| DeLuca et al. | Early events in herpes simplex virus type 1 infection: photosensitivity of fluorescein isothiocyanate-treated virions. | |
| DE3016548C2 (de) | Herabsetzung der thermischen Stabilität von mikrobiellem Mucor-Rennin und dessen Verwendung zur Käsebereitung | |
| DE69736115T2 (de) | Verfahren zur herstellung von gereinigtem transferrin | |
| CS208867B1 (cs) | Způsob odstraňován! n1 zkomotekutárn1ch sloučenin z roztoku krevnich imunoglobulinů skupiny G.A.M | |
| GB2231331A (en) | Stabilisation of peptides and proteins |