CS208867B1

CS208867B1 - Method removed! n1 of the fluidized compounds from the blood immunoglobulin solution of G.A.M.

Info

Publication number: CS208867B1
Application number: CS305879A
Authority: CS
Inventors: Ivan Stepanek; Julius Uhrik
Original assignee: Ivan Stepanek; Julius Uhrik
Priority date: 1979-05-04
Filing date: 1979-05-04
Publication date: 1981-10-30

Abstract

Způsob odstraňováni nízkomolekulárních sloučenin z roztoku krevnich imunoglobulinů skupiny G.A.M se týká diagnostické a terapeutické imunolog ie,N1 zkomoleku lárni látky se dostávají do roztoku imunoglobulinů skupiny G.A.M v rámci technologického procesu.dále zásluhou mikrobiálního růstu a nastává koncentrační obohacení sloučenin s fysiologickobiochemíckou aktivitou jako důsledek purifikace vzhledem k výchozímu materiálu.Jejich přítomnost vytváří předpoklady pro vznik nežádoucích interakcí s molekulami imunoglobulinů skupiny G.A.M, což omezuje kvalitu a rozsah indikace preparátu v praxi.Purifikováné imunoglobuliny skupiny G.A.M se rozpouští v apyrogenní vodě na koncentraci bílkovin 1 až 15% s optimem 8+,2% a separace nízkomolekulárních látek z roztoku imunoglobulinů skupiny G.A.MThe method of removing low-molecular compounds from a solution of blood immunoglobulins of the G.A.M group concerns diagnostic and therapeutic immunology. N1 of the complex substances enter the solution of immunoglobulins of the G.A.M group within the technological process. Further, due to microbial growth, a concentration enrichment of compounds with physiological and biochemical activity occurs as a result of purification relative to the starting material. Their presence creates the prerequisites for the occurrence of undesirable interactions with immunoglobulin molecules of the G.A.M group, which limits the quality and scope of indication of the preparation in practice. Purified immunoglobulins of the G.A.M group are dissolved in pyrogen-free water to a protein concentration of 1 to 15% with an optimum of 8+.2% and separation of low-molecular substances from the solution of immunoglobulins of the G.A.M group

Description

Způsob odstraňován! n1 zkomotekutárn1ch sloučenin z roztoku krevnich imunoglobulinů skupiny G.A.MRemoving method! n1 of the compromised compounds from the blood group G.A.M blood immunoglobulin solution

Způsob odstraňováni nízkomolekulárních sloučenin z roztoku krevnich imunoglobulinů skupiny G.A.M se týká diagnostické a terapeutické imunolog ie,N1 zkomoleku lárni látky se dostávají do roztoku imunoglobulinů skupiny G.A.M v rámci technologického procesu.dále zásluhou mikrobiálního růstu a nastává koncentrační obohacení sloučenin s fysiologickobiochemíckou aktivitou jako důsledek purifikace vzhledem k výchozímu materiálu.Jejich přítomnost vytváří předpoklady pro vznik nežádoucích interakcí s molekulami imunoglobulinů skupiny G.A.M, což omezuje kvalitu a rozsah indikace preparátu v praxi.Purifikováné imunoglobuliny skupiny G.A.M se rozpouští v apyrogenní vodě na koncentraci bílkovin 1 až 15% s optimem 8+,2% a separace nízkomolekulárních látek z roztoku imunoglobulinů skupiny G.A.MA method for removing low molecular weight compounds from a GAM blood immunoglobulin solution relates to diagnostic and therapeutic immunology, N1 molecules of the compound are introduced into the GAM immunoglobulin solution as part of a technological process. Further due to microbial growth and concentration enrichment of compounds with physiological-biochemical activity due to purification Their presence creates a prerequisite for the development of undesirable interactions with GAM immunoglobulin molecules, which limits the quality and range of indication of the preparation in practice.Purified GAM immunoglobulins dissolve in pyrogen-free water to a protein concentration of 1 to 15% with an optimum of 8 +, 2 % and separation of low molecular weight compounds from the GAM immunoglobulin solution

208 8Ó7 se provádí průtokovou dialyzou proti 0,1 až208 δ7 is performed by flow dialysis against 0.1 to 1.5

3>0 X roztoku Chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě o teplotě 0 °C až + 6 °C s hodnotou pH v rozmezí 4,0 až 7,0 při průtoku 300 ml až 2 000 ml za min.po dobu 24 až 72 hodin při objemovém množství proteklého roztoku,které musi býti minimálně 200 násobkem objemu bílkovinného roztoku,který byl umístěn do celofánového potrubí.Po ukončeni dialyzy se provádí sterilizace imunoglobuli nového roztoku skupiny G,A,M a jeho dalžizpracováni.3> 0X sodium chloride solution in distilled pyrogen-free water at 0 ° C to + 6 ° C with a pH of 4.0 to 7.0 at a flow rate of 300 ml to 2000 ml per minute for 24 to 72 hours When the dialysis is complete, sterilization of the immunoglobulin of the group G, A, M solution and its further processing is carried out.

Vynález se týká odstraňováni n1 zkomoleku lárnich sloučenin z roztoku krevních imunoglobulinů skupiny G,A,M.The invention relates to the removal of n1 molecules of linear compounds from a solution of blood immunoglobulins of groups G, A, M.

V posledním desetileti se řada výrobců,kteři izoluji z Lidské nebo zviřeci krve preparáty s proti látkovou aktivitou,zaměři la na přípravu terapeutického preparátu gama g lobuli nu,který obsahuje imunoglobuliny skupiny A nebo skupiny H,popřípadě směs imunoglobulínů A a M.In the past decade, many manufacturers that have isolated anti-substance preparations from Human or Animal Blood have focused on the preparation of a therapeutic preparation of gamma gobulin containing immunoglobulins of group A or group H, or a mixture of immunoglobulins A and M.

Na precipitaci balastnlch bílkovin ze směsi imunog lobu linů skupiny G,A,H byl použit síran amonný a ri vanoL/Schwick H.G.,Fischer J.,Geiger H.:Progr.Imunobio l.Stand. 4,86,1 970; Schwich H.G.:Vox Sang. 23,82,1 972/,kyseli na bór itá/Pejaudier L.,Audran R.,Steinbuch M.;Ammonium sulphate and water / Schwick H. G., Fischer J., Geiger H., Progr. Immobio I. Stand were used to precipitate ballast proteins from a mixture of immunoglobulins of G, A, H group. 4,86,1 970; Schwich, H.G.:Vox Sang. 23,82,1 972], boric acid (Pejaudier L., Audran R., Steinbuch M .;

Vox Sang. 23,1 65,1 972/ a kyselina kapry loyá/B latrix G.,Israťt J.,Reinert PhGrisce 11 i G., Steinbuch H.: La Nouvelle Presse Medicale 5,1193,1976/.Vox Sang. 23.1, 65.1, 972 (and Loya acid (B latrix G., Isratt J., Reinert Phrisris 11 and G., Steinbuch H .: La Nouvelle Presse Medicale 5,1193, 1976)).

Současná technologická praxe však na jedné straně sice odděluje gama globulin s imunoglobuliny skupiny A a M od směsi jiných krevních bílkovin,ale na druhé straně zanáši do roztokuimunog lobu linů skupiny G,A,M nízkomolekulární anorganické nebo organické sloučeniny.However, current technology practice, on the one hand, separates gamma globulin with group A and M immunoglobulins from a mixture of other blood proteins, but on the other hand, low-molecular inorganic or organic compounds are injected into the G, A, M immunoglobulin.

Technologický postup může taktéž část některých nizkomo leku lárnich sloučenin s biochemicko-fyzi o log ickou aktivitou v roztoku imunoglobulinů G,A,M koncentrovat,t.j. obohacovat vzhledem k jejich koncentraci ve výchozi surovině,ze které byly imunog lobu l iny skupiny G,A,M izolovány.The technological process can also concentrate some of the low molecular weight compounds with biochemical physiological activity in the G, A, M immunoglobulin solution, i. enriched because of their concentration in the starting material from which the G, A, M immunoglobulins were isolated.

Přítomnost netěkavých anorganických soli,jakož i přítomnost ni zkomo leku lárn1ch organických molekul v roztoku imunoglobulinů skupiny G, A, M vytváří předpoklady pro vznik nežádoucích interakci těchto látek s molekulami imunoglobulinů skupiny G,A,M, a to zejména při lyofilizaci nebo při skladování v injekčním roztoku,což může snižovat kvalitu preparátu,popři pádě omezovat rozsah jeho aplikace v terapii.The presence of non-volatile inorganic salts as well as the presence of low molecular weight organic molecules in the G, A, M immunoglobulin solution creates the potential for undesirable interactions of these substances with G, A, M immunoglobulin molecules, especially during lyophilization or storage in solution, which may reduce the quality of the preparation or, in the event of a fall, reduce the extent of its application in therapy.

Nedostatkem dosud uživané technologie je skutečnost,že takto připravené lyofi lizované preparáty máji vysokou antikomp lementárni akti v itu,která byla zjištěna na základě úbytku aktivity komplementu po přidáni rozpuštěného lyofilizovaného preparátu metodou podle KabatMayera/Kabat E,A.,Mayer M.M.: Experimentá Ini imunochemie ČSAV,Praha 1 965,str. 180/.A disadvantage of the technology used so far is that the lyophilized preparations thus prepared have a high anticomponent activity, which was found by the loss of complement activity after the addition of the dissolved lyophilized preparation by the method of KabatMayer / Kabat E, A., Mayer MM: Ini Immunochemistry Experiments CSAV, Prague 1 965, p. 180 /.

U nověnavrhované technologie se tyto potíže nevyskytovaly v tak výrazné intenzitě,což lze dokumentovat údajem,že z 10 připravených experimentálních šarži podle předloženého vyná lezu,bylo dosaženo sníženi antikomp lementárni aktivity u lyofi lizovaného preparátu O 70% až 90% ve srovnáni s tímtéž mateřiá lem,který byl lyofi lizován bez předcházejici separace ni zkomo leku lárn1ch sloučenin.With the newly proposed technology, these problems did not occur at such a high intensity, as evidenced by the indication that out of the 10 experimental batches of the present invention, a 70% to 90% reduction in anticomponent activity in the lyophilized formulation was achieved compared to the same parent. which was lyophilized without prior separation of low molecular weight compounds.

Podstata odstraňováni ni zkomo leku l árnich anorganických nebo organických sloučenin spočívá podle předloženého vynálezu v tom,že bílkovinný materiál,obsahuj 1ci imunog lobu liny skupiny G,A,M se suspenduje za aseptických podmínek v takovém množství apyrogenni destilované vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 1% až 15%,s optimem 8%+ý%,roztok imunog lobu l inú se vyčeři filtraci a separace nizkomolekulárnich sloučenin se provádí z roztoku imunoglobuli nu průtokovou dialyzou,napřik lad pomoci eluce s 0,1% až 3% roztokem chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě,s optimem 0,45% až 0,9% chloridu sodného,o tepLotě 0 °C až +6 °C s hodnotou pH v rozmezí 4,0 až 7,0 při průtoku 300 ml až 2 000 ml za minutu,po dobu 24 až 72 hodin.According to the present invention, the principle of the removal of non-molecular inorganic or organic compounds is that the proteinaceous material containing the immunoglobulin G, A, M is suspended under aseptic conditions in such an amount of pyrogen-free distilled water at a temperature of 0 ° C to + 6 ° C to have a protein concentration ranging from 1% to 15%, with an optimum of 8% + 6%, the immunoglobulin solution is clarified by filtration and the separation of the low molecular weight compounds is performed from the immunoglobulin solution by flow dialysis, e.g. by elution with 0.1% to 3% sodium chloride solution in distilled pyrogen-free water, with an optimum of 0.45% to 0.9% sodium chloride, at a temperature of 0 ° C to +6 ° C with a pH value in the range of 4.0 up to 7.0 at a flow rate of 300 ml to 2000 ml per minute, for 24 to 72 hours.

Po ukončeni dialyzy se z dialyzačního celofánového potrubi vyteklý roztok imunoglobulinů skupiny G,A,H podrobí sterilní filtraci nebo radiační steri lizaci,rozplnuje se a v případě potřeby se lyofilizuje.Upon completion of dialysis, the leaked G, A, H immunoglobulin solution from the dialysis cellophane tubing is subjected to sterile filtration or radiation sterilization, filled and, if necessary, lyophilized.

Vynález je dále objasněn na příkladech provedeni,jimiž jeho rozsah neni omezen ani vyčerpán.The invention is further elucidated by means of examples, the scope of which is not limited or exhaustive.

Přiklad 1.Example 1.

Výchozí surovinou je bílkovinná pasta precipitátu imunoglobu linů skupiny A, G, M, z 1 skaná způsobem podle Pejaudiera a spo l./Pejaudier L.,Audran R.,Steinbuch H.:Vox Sang.23,1 65,1 972/ Bílkovinný materiál vyprecipiti váných imunog lobu linů se rozpouští v takovém množství destilované apyrogenni vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 1% až 15%,s optimem 8%+2%.Rozpouštěn1 se urychluje mícháním.The starting material is a protein paste of a Group A, G, M, z, immunoglobulin precipitate folded according to the method of Pejaudier et al. / Pejaudier L., Audran R., Steinbuch H.: Ox Sang. the material of the purified immunoglobulin is dissolved in an amount of distilled pyrogen-free water at a temperature of 0 ° C to + 6 ° C such that the protein concentration is between 1% and 15%, with an optimum of 8% + 2%. stirring.

Po rozpouštěni se roztok imunog lobu linů skupiny G,A,M vyčeři,napřiklad filtraci.After dissolution, the immunoglobulin group G, A, M lineage solution becomes clear, for example by filtration.

V technologických poměrech jsou výše uvedené podmínky zpravidla zachovány tehdy,když rozpouštíme 1 kg bílkovinné pasty imunoglobu l inů skupiny G,A,M ve 2 000 ml destilované vody testované na apyrogenitu,o teplotě 0 °C až +6 °C.Hodnota pH takto vzniklého imunoglobuli nového roztoku skupiny G,A,H bývá zpravidla mezi 4,0 až 7,0 a koncentrace bilkovin v rozmezí 8 2 %.Takto připravený roztok se vyčeři například filtraci a nízkomolekulární sloučeniny se z roztoku odstraní dia l yzou,např1k l ad přes dialyzačni celofánové potrubi/ pod komerčním označením 0i alysierschlauch,Viscora nebo na jiných celofánových materiálech/.In technological conditions, the above conditions are generally maintained when dissolving 1 kg of G, A, M immunoglobulin protein paste in 2 000 ml of pyrogen-free distilled water at 0 ° C to + 6 ° C. pH value as follows The resulting immunoglobulin group G, A, H is usually between 4.0 and 7.0 and the protein concentration is in the range of 8-2%. This solution is clarified, for example, by filtration, and the low molecular weight compounds are removed from the solution by lysis, e.g. via dialysis cellophane tubing (under the commercial designation 0i alysierschlauch, Viscora or other cellophane materials).

Namočené celofánové potrubi v apyrogenni vodě se naplní ayprogenni vodou za účelem stanoveni ce l istvosti.Průměr celofánového potrubi by se měl pohybovat od 2 cm do 10 cm s optimem 5 cm.Spodní část celofánového potrubi se uzavře uzlem.Roztok imunog lobu l inů skupiny G,A,H se nalije do celofánového pot rub i,uzavřeného ve spodní části uzlem a uzavře se ve vrchní části uzlem se smyčkou,za kterou se zavěsi na vrchní víko dialyzačni průtokové kolony.The soaked cellophane tube in pyrogen-free water is filled with ayprogenic water to determine the purity. The diameter of the cellophane tube should be between 2 cm and 10 cm with an optimum of 5 cm.The bottom of the cellophane tube is closed with a knot. A, H is poured into a cellophane wrapper closed at the bottom by a knot and closed at the top by a knot with a loop behind which it is hung on the top lid of the dialysis flow column.

Za optimální rozměry technologických dialyzačně průtokových kolon se považuji takové, kde průměr kruhové,nebo úhlopříčka čtvercové nebo obdélníkové základní plochy k výšce kolony se pohybuje v poměru 1:5 až 1:10.Množstv i roztoku imunoglobulinů,naneseného do celofánového pot rub 1,um istěného v dialyzačně průtokové koloně nemá překročit 25% až 30% objemu prázdné kolony.The optimum dimensions of technological dialysis flow columns are those where the diameter of the circular or diagonal of the square or rectangular base to the height of the column is in the ratio of 1: 5 to 1: 10. The quantity and the immunoglobulin solution applied to cellophane purified in the dialysis flow column should not exceed 25% to 30% of the volume of the empty column.

Po naneseni zvoleného objemu imunog lobuli nového roztoku se zahájí nucený průtok s 0,1% až 3,0% roztokem chloridu sodného v destilované apyrogennl vodě s optlmem 0,45% až 0,9% o teplotě 0 °C až +6 °C,o pH 4,0 až 7,0,při průtoku 300 ml až 2 000 ml za minutu s výhodou při průtoku 1 000 ml/min. po dobu 48 hod in.Množstv 1 celkově proteklého roztoku chloridu sodného musí býti minimálně 200 násobkem objemu bilkbvinněho roztoku,který byl umístěn do celotánového potrubí.After applying the selected volume of the immunoglobulin solution, a forced flow is started with 0.1% to 3.0% sodium chloride solution in distilled pyrogen-free water with an optimum of 0.45% to 0.9% at 0 ° C to + 6 ° C. pH 4.0 to 7.0, at a flow rate of 300 ml to 2000 ml per minute, preferably at a flow rate of 1000 ml / min. The amount 1 of the total flow of sodium chloride solution must be at least 200 times the volume of the white blood solution which has been placed in the all-tube piping.

Po skončeni dialysy se roztok imunog lobu linů skupiny G,A,M,umistěný v celofánovém potrubi,sejme ze závěsného háčku na vrchním vlku dialyzačně průtokové ko lony,opatrně se vyjme z kolony a po rozstřihnuti se imunog lobu li nový roztok z dialyzačně celofánového potrubí podrobí sterilizaci,napřik lad filtraci nebo radiační sterilizaci a potom dalšímu zpracování,napřik lad lyofilizaci nebo zakoncentrováni pomoci vakuové desti 1 ace,popř1 pádě pomoci membrán.When dialysis is complete, the G, A, M group immunoglobin solution, placed in the cellophane tube, is removed from the hanging hook on the top wound of the dialysis flow column, carefully removed from the column and, after shearing the immunoglob, the new solution from the dialysis cellophane tube subjected to sterilization, for example ice filtration or radiation sterilization, and then further processing, for example ice lyophilization or concentration by vacuum distillation or by means of membranes.

Numerické hodnoty,uváděné jako optima,jsou vhodné pro technologické provedeni.The numerical values, referred to as optimum, are suitable for technological implementation.

Přiklad 2.Example 2.

Výchozí surovinou může být bílkovinná pasta imunoglobulinů skupiny G,A,M,i z olováná i pomoci jiných metod.Bi Ikovinná pasta se zpracovává v dalším postupu jako v příkladě 1The starting material can be a protein paste of immunoglobulins of the G, A, M, i group, also leaded by other methods.Bi The protein paste is processed in the following procedure as in Example 1

Claims

SUBJECT OF THE INVENTION

A method of removing polyolecular compounds from a blood group G, A, M blood immunoglobulin solution, characterized in that the proteinaceous material containing the G, A, M immunoglobulin is suspended under aseptic conditions in such an amount of pyrogen-distilled water at a temperature of 0 ° C to + 6 ° C, so that the protein concentration is in the range of 1% to 15%, the immunoglobulin solution becomes clear, eg by filtration and the separation of low molecular weight compounds is carried out from the immunoglobulin solution 1 group G, A, M by flow dialysis against a 0.1% to 3.0% solution of sodium chloride in distilled and pyrogen-free water at a temperature of 0 ° C to Ί6 ° C, with a pH value of 4.0 to 7.0 at flow rate of 300 ml to 2,000 ml per minute for 24 to 72 hours at a volume flow rate of the total sodium chloride flow rate, which must be at least 200 times the volume of the protein solution that was placed in the cellophane film as a pipeline at wherein the distilled solution of the G, A, M immunoglobulins is subjected to sterilization, for example filtration or radiation sterilization, and then further processing, e.g.