CS208555B1 - Způsob odstraněni antikomplementární aktivity z roztoku krevního gama globulinu - Google Patents

Description

Vynález se týká způsobu purifikace krevniho gama g lobulinu,určeného pro terapeutické intravenosnl podáni.

Až dosud se příprava krevniho gama globulinu pro terapeutické účely posuzovala podle kriterii pro intramusku lárn1 ap likaci.Současný technologický zájem je už zaměřen na přípravu gama g lobu l i nu,vhodného pro intravenosnl aplikaci.

e

V celosvětovém měřítku největšího rozšířeni dosáhlá metoda izolace gama globulinu pomoci etanolu /Cohn E.J.,Gurd F .N.R.,Surgener D.M.,Barnes B.A.,Brown R.K.,Derouaux G., Gillespie J.M.,Kahnt F.W.,Lever W.F.,Liu G.H.,Mitte Iman D.,Mouton R.F.,Schmid K,,Uroma E.: J.Am.Chem.Soc. 72,465,1950;Deutsch H.F.,Gestling G.L.,Alberty R.A.,Williams J.W.tJ.Biol. Chem. 164,109,1946; Oncley J.L.,Molin M.,Rickert D.A.,Cameron J.W.,Gross P.M.:J.Amer.Chem. Soc. 71,541,1 949; Nitschmann H.S.,Kistler P.,Lergier W.:He lv.Chim.Acta 37,866,1 954;Kist ler P.,Nitschmann H.S.zVox Sang. 7,414,1962;Taytor H.L.,Bloom F.C.,Mc Call K.B.,Hyndman L.A., Anderson H.D.: J.Amer.Chem.Soc. 78,1356,1956/,která na jedné straně sice odděleuje gama globulin od směsi jiných krevních bílkovin,ale na druhé straně zanáší do gama globulinového roztoku n1zkomo leku lárn1 anorganické nebo organické s loučeniny,které v podminkách technologického postupu mohou nežádoucimi interakcemi část stopových příměsi s fyziologickou aktivitou vytvářet anebo koncentračně obohacovat,vzh ledem k jejich koncentraci ve výchozí surovině,z které byl gama globulin izolován.

208 555

208 555

Přítomnost těchto stopových látek s fysio log ickou aktivitou vytváří předpoklady pro vznik dalších nežádoucích interakci těchto látek s molekulami bílkovin a to zejména při lyofilizaci nebo při skladováni v injekčním roztoku,což snižuje kvalitu preparátu a omezuje rozsah jeho indikace v terapii. ⁷

Tuto nevýhodu těchto postupů se snaží odstranit výrobní postup podle předloženého vynálezu,kterým je možno odstranit v technologickém měřítku převážně nlzkomolekulárni sloučeniny s fysiologickou aktivitou ve stopových koncentracích z gama g lobu linováho roztoku pomoci chemisorpce na aktivním uhlí.

Podstata vynálezu je odstraněni balastnich negamag lobu l lnových příměsi nlzkomolekulárni povahy převážně s fysiologickou aktivitou pomoci chemisorpčni vazby na suspenzi aktivního uhli,která se odstraní z bílkovinného roztoku.

Chemisorpčni vlastnosti aktivního uhli byly už použity na odstraňováni nizkomolekuLárnich látek z krve při extrakorporálnim oběhu jednak v pokusech na psech /Muirhead E., Reid A.:U.Lab.C lin.Med. 33,841,1 948/ a po získáni pozitivních výsledků se přikročilo k širokému zavedeni kolonek z aktivního uhlí pro přímou perfuzi krve při extrakorporálnim oběhu v klinické praxi v humánní medicíně za účelem eliminace nizkomolekulárnich látek toxická povahy z krevního oběhu /Schechter D.C.,Nealon T.F.,Gibbon J.H.:Surgery 44,892, 1958;Yatzidis H.: Nephron 1,310,1964; Dunea G.,Kolff U.J.:Trans.Amer.Soc.Artif.Inter.

Organs 11,178,1965; Hagstam K.E.,Larsen L.E.,Thysell H.zActa Med.Scand. 180,593,1963; Andrade J.D.,Kunimoto K.,Lin D.,Kolff U.J.:Fed.Proc. 30,705,1971; Andrade J.D.,Kunimoto K., Van Uageden R.,Kastigir B.,Gough D.,Kolff W.J.: Amer.Trans.Soc.Art1f.Inter.Organs 17,222, 1971;Chang T.M,zCanad.J.Physiol.Pharmacol. 47,1043,1 969; Chang T.M.:Proč.Europ.Dia l.Transplant.Ass. 9,568,1972; Chang T.M.,Malave NAmer.Trans.Soc.Artif.Inter.Organs 16,141,1970; Chang T.M.,MigcheIson M.:Amer.Trans.Soc.Artif.Inter.Organs 1 9,314,1973/.

Nedostatkem dosud užívané technologie je skutečnost,že lyofilizovaná preparáty gama globulinu mají vysokou antikomplementárn1 akt ivitu,která byla zjištěna na základě úbytku aktivity komplementu po přidáni rozpuštěného lyofi 11zovanáho preparátu gama globulinu podle metody Kabat-Mayera /Kabat E.A.,piayer M.M.:Experimenté lni imunochemle ČSAV Praha 1965,str.180/.

U nově navrhovaná technologie se tyto potíže nevyskytovaly v tak výrazná intenzitě, což lze dokumentovati tím,že z 10 připravených experimentálních šarži podle předloženého vynálezu bylo dosaženo sníženi antikompLementárn1 akti.vity u Lyofi lizovanáho preparátu o 70 až 95% ve srovnáni s týmž mater iá lem,který byl lyofilizován bez předcházející separace nizkomolekulárnich sloučenin z gama globulinu pomoci chemisorpce na aktivním uhli.

Vynález je dále objasněn na příkladech, j imi ž jeho rozsah není ani onrezen,ani vyčerpán.

Přiklad 1

Výchozí surovinou je pasta frakce II,izolovaná metodou podle CohnazBiIkovinný materiál se rozpouští v takovém množství destilovaná apyrogenni vody o teplotě 0 °C až -*-4 °C, aby koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 2 X až 15 X,s optimem 8 X* 2 X.Rozpouštěni se urychluje mícháním.Po rozpuštěni se gama globulinový roztok vyčeři,napřiklad filtrací.

208 558

V technologických poměrech jsou výše uvedené podmínky zpravidla zachovány tehdy, když rozpouštíme 1 kg gama globulinové pasty ve 2 000 ml destilované apyrogenni vody o teplotě 0 °C až *4 °C.Hodnota pH takto vzniklého gama globullnového roztoku bývá zpravidla mezi pH 5_Z8 až 6,2 a koncentrace bílkovin v rozmezí 8 % _+ 2 %.Takto připravený roztok gama globulinu se vyčeři,napřiklad filtraci a převážně nizkomolekulárni slouěeniny se z gama globulinového roztoku odstraní chemisorpci na aktivním uhli.

Po úpravě hodnoty pH gama globulinového roztoku na 7,0 až 7,8 napřiklad 0,5 M hydroxydem sodným nebo s 0,5 M kyselinou octovou v destilované apyrogenni vodě se přidává destilovanou vodou promytá a oddekantovaná suspenze aktivního uhli v takovém množství při teplotě -2 °C až +2 °C,aby na 1 000 ml gama globulinového roztoku byl obsah suchého aktivního uhli asi 40 gr.

Suspenze aktivního uhli,s výhodou 40 gr vztaženo na suché aktivní uhli,se smíchá s 1 000 ml gama globulinového roztoku při teplotě -2 °C až +2 °C 120 až 240 minut s výhodou při pH 7,0 až 7,8.Po uplynuti této doby se chemisorpčně vázaná forma nizkomolekulárnich sloučenin s fysio log ickou aktivitou na suspenzi aktivního uhli odstraní z gama globulinového roztoku napřiklad centrifugaci nebo fi Itrači.Takto purifikovaný roztok gama globulinu se podrobí steri lizaci,napřiklad filtraci a potom dalšímu zpracováni, a napřiklad lyofilizaci nebo zakoncentrováni pomoci membrán nebo vakuové destilace.

Přiklad 2

Výchozí surovinou může být pasta gama globulinu nebo roztok gama g lobu linu,izo lovaný pomoci síranu amonného a hydroxydu hlinitého /Schultze H.E.,Matheke H.D.:Behringwerke Hitt. 28,9,1954; Schultze H.E.,SchBnenberger M.,M«,theke H.0.:Behringwerke Hitt. 26,21,1952/, rivanolu /HOřejši J.,Smetana R.:Acta Med.Scand. 155,65,1956/, síranu sodného /Amiraian K., Leikhim E.J.:J.Imunol. 87,301,1961/, chloridu hlinitého / Lewin J.zTherapie 9,523,1954/,

ĎEAE celulózy /Sober H.A.,Peterson E. A. z Fed.Pro.e. 1 7,1 1 16,1 958; Peterson E,A.,SoberH.A.z J.Amer.Chem.Soc. 78,756,1 956/,kyšeliny kaprylové /Steinbuch M.,Audran R.z Rev.Franc.0'etud. Clin.Biol. ¹ 4,1054,1 969/„i ontú Zn ^{+ +} a Al ^{+ + +} / Rejnek J.,Škvařil F.zCol l.Czechoslov.Chem. Commun. 22,1 489,1 957; Rejnek J.,Škvařil F. : Co 11.Czechos lov.Chem.Commun. 23,773,1 958/, polymetafosfátu /Nitschman H.S.,Rickli R.,Kistler P.zVox Sang. 5,232,1960/ anebo éteru /Pennel R.B. v Putnám F.W./ed/ The Plasma Proteine,vol.I Academie Press-New York 1 960,str.9/

Bilkovinný materiál se zpracovává v dalším postupu jako v příkladě 1 s tím rozdílem, že suspenze aktivního uhli,s výhodou 30 až 50 gr,vztaženo na suché uhli,se michá s 1 000 ml gama globulinového roztoku při teplotě -2 °C až +2 °C 120 až 240 minut při hodnotě pH 5,0 až 9,0.Po uplynuti této doby se chemisorpčně vázaná forma nizkomo leku lárn1ch sloučenin s fysiologickou aktivitou na suspenzi aktivního uhlí odstraní z gama globulinového roztoku napřiklad centrifugaci nebo filtrací.

Claims (3)

1. Předmět vynálezu

   1. Způsob odstraněni antikomplementárnl aktivity z roztoku krevního gama globu 11nu pro intravenosni aplikaci,vyznačující se tim,že ku gama globullnovému roztoku o koncentraci bílkovin 2 % až 15 X při teplotě -2 °C až +2 °C při pH 5,0 až 9,0 se přldévé vodní suspenze aktivního uhli v množství 2 g až 80 g suchého aktivního uhli na 1 000 ml gama globullnového roztoku,směs se míchá 120 až 240 minut,potom se suspenze aktivního uhli s chemisorpčně navázanými balastnimi sloučeninami nizkomolekulárnl povahy odstraní z roztoku gama globulinu s výhodou centrifugacl nebo filtraci a získaný gama globulinový roztok se sterilizuje,popřípadě déle zpracovává.
2. 2. Způsob odstraněni antikomplementárnl aktivity z roztoku krevního gama globulinu pro intravenosni aplikaci podle bodu 1,vyznačuj 1ci se tim,že koncentrace bílkovin v gama globulinovám roztoku je 6 Z až 8 Z,pH roztoku je 7,0 až 7,8 a přidává se k němu destilovanou vodou promytá a oddekantovaná suspenze aktivniho uhli,obsahuj ic1 30 až 50 g suchého aktivního uhli na 1 000 ml gama g lobulinového roztoku.
3. 3. Způsob odstraněni antikomp lementárni aktivity z roztoku krevního gama globulinu pro intravenosni použiti podle bodu 1 a 2,vyznačuj 1ci se t1m,že po sterilizaci se roztok gama globulinu dále zpracuje lyofilizaci nebo zahuštěním pomoci membrán anebo vakuovou dešti láci.