CS208239B1 - Spdsob produkcie enzýmov Stiepiacich celulózu - Google Patents

Description

208 239 i

Vynález se týká spfisobu produkcie enzýmov Stiepiacich celulózu pomocou niektorých húbrodu Trichoderma.

Ako producenti celulázy aa využívajú v rámci rodu Trichoderma 3 druhy, a to okremTrichoderma viride aj Trichoderma koningii a Trichoderma lignorum (US patent 6. 3398055}Brigitte Norkvans Physiol. Plantarum 16 (1963) 1; T. Iwasaki, K. Hayaahi, M. Funatsu (1964), J. Biochem. (Tokio) 2%, 209-12} Lonanok A. G., Shklyar· B. Kh. (1970) Veetei Akad. Nauk,Belarus SSR, Ser· Biyal. Navuk £, 58-61)· Aj ke3 u niektorých izolátov predováetkým Tri-choderma viride je Specifická aktivita produkcie celulázy poměrně vysoká (až 0,4 U/mg) ne-výhodou je poměrně dlhá lag fáza predchádzajúca vlastnil tvorbu celulázy, široká variabili-'ta vlastnosti a strata produkSných schopností poSas uchovávania produkSných kmenov.

Uvedené nedostatky odstraňuje postup podTa vynálezu, ktorého podstata spoSíva v tom,že kmene rodu Trichoderma:

Trichoderma harzianum CCM F - 340 H longi brachi atum CCM F - 342 M harzianum CCM F - 470 M sp. CCM F - 521 M sp. CCM F - 522 M hamatum CCM F - 541 M sp. CCM F - 556 H aureoviride CCM F - 559 M longibrečhiátům CCM F - 560 saturnisporum CCM F - 561 M sp. CCM F - 571 H piluliferum CCM F - 573 W polysporum CCM F - 542 N polysporum CCM F - 572 N sp. CCM F - 591 W sp. CCM F - 592 w sp. CCM F - 593 N pseudokoningii CCM F - 563 sa jednotlivo alebo v zmesi predkultivujú ns minerálněj živnej p6de obsahujúcej β(1—»4)glukán ako induktor enzýmu pri teplota 30 °C, po dobu 24 hodin pri pH 5 a následovněpreoSkujú na produkSnú pSdu s celulózou, dusíkom vo formě amonných solí a fosfátom pH 4,2až 6,5, priSom celuláza se produkuje po dobu 120 hodin pri teplote 20 až 40 °C a izolujeodpařením rastovej pfidy, připadne zrážaním sírenom amonným alebo organickým rozpúšťadloms výhodou etanolom·

Uvedené kmene rodu Trichoderma použité na produkciu celulázy sú uložené v čs. zbier-ke mikroorganizmov, Univerzita J. B. Purkyne, Brno, Obránců míru 10. Výhodou uvedeného apSsobu produkcie celulázy je vysoká Specifická aktivita produkova-ného celulázového enzýmového systému v eúhrne až 0,74 U/mg a stabilita zmesnej kultúry po-

Claims (1)

1. 208 239 2 6a· uchováváni· v lyofylizovanom stave· Praktická využiti· uvedeného postupu spočívá v tom, že celulázový systém produkovanýdo kultiva6ného média je jednoduchou metodou izolovatelný. Z makromolekulárneho substrátuvznikajú oligosacharidy celobiozového typu. Snzýmy celulázového typu sú v izolovaném stavevyužitelné v procese sacharifikácie celulózy a k štúdiu protoplastov baktérií a raetlín.fialšia možnost využitia tejto vlastnosti uvedených kmeňov rodu Trichoderma je v hydroly-tickom rozklade dřevného odpadu za vzniku enzymatického hydrolyzátu utilizovatelného v 3al-šom stupni pri nahromadění nutričně hodnotnej bielkoviny kultiváciou kvasiniek, resp. kva-sinkovitýeh mikroorganizmov. Příklad 1 Z vypratého gélu zo sieťovanej hydroxyetylcelulozy podl*a autorského osved6enia č. 183 169 sa vyrežú trojuholníkové profily o straně 4 cm, vložia sa do Petriho misky a žale»jú sa roztokom kultivačného média Czapek - Dox; pH « 5 (s gélom hydroxyetylcelulozy akojediným zdrojom uhlíka) bez agaru a sacharózy tak, aby pol hrůbky gélu vySnievalo nad hla-dinu kultivačného média. Po sterilizácii pri 100 °C sa očkuje na povrchu gélu kultúry Tri-choderma harzianum CCM F - 340 a kultivuje sa pri 30 °C. Celulózový gél stekutený v prie-behu 24 hodin, spolu e pomnoženým vyšlechtěným kmeňom Trichoderma harzianum CCM F - 340(0,24 g) sa použil ako inokulum na produkčnú pčdu (2 1) z odpadu hydroxyetylcelulózovejvaty (150 g) so 4 g síranu amonného a 2 g dihydrofosforečnanu draselného (pH = 4,5). Kul-tivácia prebiehala po dobu 120 hodin pri 20 °C. Po ukončení kultivácie sa biomasa odfil-trovala a filtrát sa zahustil na odparka. Získal sa surový enzýmový preparát s celulázoyouaktivitou 37 U a Specifickou aktivitou 0,62 U/mg. Příklad 2 -Postupovalo sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa použil kmen Trichoderma poly-sporum CCM F - 542, použitá pfida podlá příkladu 1 bola nastavená na pH 6,0 a kultiváciaprebiehala pri 30 °C po dobu 120 hodin. Enzýmový preparát mal aktivitu 42 U a špecifickúaktivitu 0,29 U/mg. Příklad 3 Postupovalo sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že namiesto uvedených kmenov sa po-užila zmesná kultúra kmeňov Trichoderma karzanium CCM F - 470, Trichoderma hamatumCCM F - 541 a Trichoderma piluliferum CCM F - 573. Použitá p6da podlá příkladu’1 bola na-stavená na pH 6,5 a kultivácia prebiehala pri 40 °C po dobu 120 hodin. Enzýmový preparátmal aktivitu 42 U a špecifickú aktivitu 0,74 U/mg. PRBDMST VYNÁLEZU Spfisob produkcie enzýmov štiepiacich celulózu, vyznačujúci sa tým, že kmene roduTrichoderma: 208 239 3 Trichoderma harzianum CCM F - 340 M longibrachiatum CCM F - 342 M harzianum CCM F - 470 M ep. CCU F - 521 M sp. CCU F - 522 M hamatum CCM F - 541 H sp. CCM F - 556 M aureoviride CCM F - 559 N longibrachiatum CCM F - 560 M saturnisporum CCM F - 561 M sp. CCU F - 571 N pipuliferum CCM F - 573 M polysporum CCM F - 542 M polysporum CCM F - 572 M sp. CCM F - 591 M sp. CCM F - 592 M sp. CCM F - 593 M peeudokoningii CCM F - 563 sa jednotlivá alebo v zmesi predkultivujú na minerálnej živnej pflde obaahujúcej /J(l—*-4)glukán ako induktor enzýmu při teplota 30 °C po dobu 24 hodin, při pH 5»0 a následovněpreoSkujú na produkSnú pOdu a celulózou, dušíkom vo formě amonných solí a fosfátom, pH 4,2až 6,5, pričom celuláza sa produkuje po dobu 120 hodin pri teplote 20 až 40 °C a izolujeodpařením rastovej p6dy, připadne zrážanim síranom amonným alebo organickým rozpúáťadloms výhodou etanolom. Vytiskly Jihočeské tiskárny, n. p., České Budějoviceprovoz 11 Český Krumlov Cena: 2,40 Kčs