CS202890B1 - Způsob přípravy aktivovaného karboxylového nosiče pro immobilízaci enzymů - Google Patents
Způsob přípravy aktivovaného karboxylového nosiče pro immobilízaci enzymů Download PDFInfo
- Publication number
- CS202890B1 CS202890B1 CS23979A CS23979A CS202890B1 CS 202890 B1 CS202890 B1 CS 202890B1 CS 23979 A CS23979 A CS 23979A CS 23979 A CS23979 A CS 23979A CS 202890 B1 CS202890 B1 CS 202890B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- enzymes
- carrier
- immobilisation
- cooc
- carboxyl
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 8
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical group CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 claims description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910001513 alkali metal bromide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 claims description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 claims description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000002346 iodo group Chemical group I* 0.000 claims description 2
- 229920003145 methacrylic acid copolymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 claims description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- REXUYBKPWIPONM-UHFFFAOYSA-N 2-bromoacetonitrile Chemical compound BrCC#N REXUYBKPWIPONM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZGCEKJOLUNIFY-UHFFFAOYSA-N 4-Chloronitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CZGCEKJOLUNIFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- VYZAHLCBVHPDDF-UHFFFAOYSA-N Dinitrochlorobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)C([N+]([O-])=O)=C1 VYZAHLCBVHPDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical group 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- -1 e.g. Polymers 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- VEUUMBGHMNQHGO-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroacetate Chemical compound CCOC(=O)CCl VEUUMBGHMNQHGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
Vynález se týká přípravy aktivovaného karboxylo,vého nosiče pro immobilizaci enzymů kovalentni vazbou.
Dosud ae pro přípravu těchto aktivovaných karboxylových nosičů vychází z polysacharidových karboxylových polymerů, např. derivátů agarózy, jejichž karboxylové skupiny se převádějí přes estery a hydrazidy až na azidy, které jsou teprve aktivní pro kovalentní vazbu a enzymy.
V některých případech lze použít reakce karboxylových skupin polymerů s karbodiimidy rozpustnými ve vodě. Je znám i způsob přípravy aktivovaného karboxylového nosiče spočívající na syntéze reaktivních esterů kyseliny akrylové a jejich následující polymerací. Všechny tyto dosud známé způsoby jsou příliš pracné, zdlouhavé a v neposlední řadě nákladné.
Práce s karbodiimidy je navíc velmi nebezpečná a vyžaduje přísná bezpečnostní opatření pro jejich vysokou toxicitu. Cestou esterifikace monomeru kyseliny akrylové se získají polymery s aktivními esterovými skupinami orientovanými do nitra polymeru, což nezajištuje požadovanou reaktivitu nosiče.
Uvedené nedostatky odstraňuje způsob přípravy aktivovaného karboxylového nosiče pro immobilizaci enzymů podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se na 100 g karboxylového polymerního katexu založeného na bázi polyakrylátů, polymetakrylátu, polykarboxystyrénu, případně na bázi derivátů polysacharidů, suspendovaného v aprotickém organickém rozpouštědle, působí při teplotě 20 až 120 °C 0,02 až 1,0 mol organického halogenídu vyjádřeného obecným vzorcem I nebo II
*2 kde X je chlor, brom nebo jód a alespoň jeden ze substituentů , R2» -CN, -O-CH2COOC2H5, -CO-CH3, přičemž ostatní mohou být -H, $
po dobu 2 až 24 hod. v přítomnosti ekvimolekulárního množství terciárního alkylaminu, alkanolaminu, případně pyridinu a 0,01 až 1,0 g bromidu alkalického kovu.
Způsob podle vynálezu umožňuje jednoatupňovou přípravu aktivovaného karboxylového nosiče což vede ke zrychlení a zjednodušení výrobního postupu a zároveň eliminuje nutnost pracovat s vysoce toxickými látkami. Využitím polymerních katexů dochází k podstatnému snížení nákladů na aktivaci. Vyrobené aktivované nosiěe jsou v suchém stavu skladovatelné po neomezeně dlouhou dobu.
Přiklad l
250 g slabě kyselého karboxylového katexu na bázi kopolyméru kyseliny metakrylové a diví nylbenzenu - OSTION KM - se vnese do 500 ml dimetylformamidu. K suspenzi se přidá 0,1 mol trietanolaminu a 0,1 mol etylchloracetátu. Jako katalyzátoru se použije 0,1 g bromidu sodného Suspenze se udržuje 2 hodiny při teplotě 120 °C. Poté se vzniklý reaktivní ester polymetakrylátu odfiltruje, promyje dimetylformamidem a vodou a vysuší se.
Příklad2
250 g Ostionu KM se suspenduje v 500 ml acetonu a k suspenzi se přidá 0,1 mol trietylami nu, 0,1 p-nitrochlorbenzenu a 0,1 g bromidu sodného. Suspenze se zahřeje k varu a udržuje se při teplotě 6 hodin. Dále se postupuje obdobně, jak uvedeno v příkladu 1.
Příklad 3
250 g polyakrylového katexu - Amberlit CG 50 se suspenduje v 500 ml dimetylsulfoxidu a k suspenzi se přidá 0,1 mol pyridinu, 0,1 mol 2,4-dinitrochlorbenzenu a 0,1 g bromidu sodného. Suspenze se zahřívá k varu 6 hodin. Dále se postupuje obdobně jako v příkladu 1.
Přikládá
100 g karboxymetylcelulÓzy se suspenduje v 500 ml dioxanu a k suspenzi se přidá 0,1 molu trietylaminu, 0,1 mol bromacetonitrilu a 0,1 g bromidu draselného. Suspenze se zahřeje k varu a udržuje se při této teplotě 4 hodiny. Dále se postupuje, jak uvedeno v příkladu I.
Příklad 5
Použití aktivovaného nosiče.
250 g nosiěe připraveného postupem uvedeným v příkladech 1 - 4 se suspenduje v 800 ml pufru pH 7,5 s obsahem 40 mg/ml arayloglukosidázy. Suspenze se míchá při 30 °C 12 hodin.
Poté se enzym vázaný kovalentní vazbou na nosič odfiltruje a promyje vodou. Aktivita vázaného enzymu činidla 60 EU/g a obsah bílkovin byl 30 mg/g.
PŘEDMĚT VYNALEZU
Claims (3)
- PŘEDMĚT VYNALEZU1. Způsob přípravy aktivovaného karboxylového nosiče pro immobilizaci enzymů, vyznačený tím, že se na 100 g karboxylového polymerního katexu založeného na bázi polyakrylátu, polymetakrylátu, polykarboxystyrénu, případně na bázi derivátů póly s achari-dů, suspendovaného v aprotickém organickém rozpouštědle působí při teplotě 20 až 120 C 0,02 až 1,0 mol organického halogenidů vyjádřeného obecným vzorcem I nebo 11 »1DRj-CH—XII i*2 kde X je chlor, brom nebo jód a alespoň jeden ze substituentů R2, R3 je -N02, -COOC2H,., -CN, -O-CHj-COOC^Hj ,-CO-CHj, přičemž ostatní mohou být po dobu 2 až 24 hod. v přítomnosti ekvimolekulárního množství terciárnílio alkylaminu, alkanolaminu, případně pyridinu a 0,01 až 1,0 g bromidu alkalického kovu.
- 2. Způsob přípravy podle bodu 1, vyznačený tím, že karboxylovým polymerním katexem je kopolymér kyseliny metakrylové a divinylbenzenu.
- 3- Způsob přípravy podle bodů 1 a 2, vyznačený tím, že aprotickým organickým rozpouštědlem je aceton, dimetylsulfoxid, dimetylformamid nebo jejich kombinace.Severografia. n. p.. závod 7. Moar
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS23979A CS202890B1 (cs) | 1979-01-10 | 1979-01-10 | Způsob přípravy aktivovaného karboxylového nosiče pro immobilízaci enzymů |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS23979A CS202890B1 (cs) | 1979-01-10 | 1979-01-10 | Způsob přípravy aktivovaného karboxylového nosiče pro immobilízaci enzymů |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS202890B1 true CS202890B1 (cs) | 1981-02-27 |
Family
ID=5334166
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS23979A CS202890B1 (cs) | 1979-01-10 | 1979-01-10 | Způsob přípravy aktivovaného karboxylového nosiče pro immobilízaci enzymů |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS202890B1 (cs) |
-
1979
- 1979-01-10 CS CS23979A patent/CS202890B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0012751B1 (en) | Preparation of trichloro-s-triazine activated supports | |
| JP2548112B2 (ja) | 担体およびオリゴヌクレオチドの合成 | |
| US4757141A (en) | Amino-derivatized phosphite and phosphate linking agents, phosphoramidite precursors, and useful conjugates thereof | |
| US6291216B1 (en) | Affinity supports containing ligands bound to oxirane groups | |
| US4248786A (en) | Hydroxy-succinimide ester compounds | |
| JPH05137570A (ja) | サツカライド変性された水溶性の蛋白質−複合体 | |
| CN119463265B (zh) | 一种用于dna合成的聚合物固定相载体及其制备方法与应用 | |
| US5258538A (en) | 2,3-disubstituted-1,3,2-oxazaphosphacycloalkanes as nucleic acid linking agents | |
| US5200462A (en) | Succinimide containing polymers and lattices prepared from same | |
| CS202890B1 (cs) | Způsob přípravy aktivovaného karboxylového nosiče pro immobilízaci enzymů | |
| JPS6239997B2 (cs) | ||
| JP2000513394A (ja) | ポリアミドの重合性誘導体 | |
| KR100624452B1 (ko) | 고정화된 히드로겔 또는 ｐｅｇ－히드로겔 공중합체를이용한 핵산의 분리 및 정제 방법 | |
| SU1572418A3 (ru) | Способ получени иммобилизованной холинэстеразы | |
| JP4167296B2 (ja) | 電気泳動用ポリアクリルアミドゲル、それを用いたポリアクリルアミドゲル電気泳動方法、その製造方法、およびアクリルアミド化合物 | |
| KR920005710B1 (ko) | 생물학적 활성물질을 고정시키기 위한 재생성 지지 매트릭스 | |
| George et al. | Flow rate dependent kinetics of urease immobilized onto diverse matrices | |
| JP2002503537A (ja) | 親和性リガンドとしての複素芳香族オリゴアミド | |
| JP4403020B2 (ja) | 電気泳動用ポリアクリルアミドゲル、それを用いたポリアクリルアミドゲル電気泳動方法、その製造方法、およびアクリルアミド化合物 | |
| SU1479511A1 (ru) | Способ получени афинного сорбента | |
| Saudek et al. | Immobilization of DNA on poly (glycidyl methacrylate-co-ethylene dimethacrylate), bead cellulose and sepharose | |
| SU1675304A1 (ru) | Способ получени полимерного реагента дл ковалентной иммобилизации биологически активных соединений | |
| JPS6274904A (ja) | アフイニテイ−クロマトグラフイ−用担体の製造方法 | |
| JPS5946596B2 (ja) | 不溶性酵素の製造方法 | |
| SU586182A1 (ru) | Способ получени иммобилизованной амилазы |