CS199802B1 - Způsob výroby diagnostického séra k průkazu HB# Ag /hepatitis B povrchového antigenu/ a k produkci HBgAb /protilátky/ - Google Patents
Způsob výroby diagnostického séra k průkazu HB# Ag /hepatitis B povrchového antigenu/ a k produkci HBgAb /protilátky/ Download PDFInfo
- Publication number
- CS199802B1 CS199802B1 CS816177A CS816177A CS199802B1 CS 199802 B1 CS199802 B1 CS 199802B1 CS 816177 A CS816177 A CS 816177A CS 816177 A CS816177 A CS 816177A CS 199802 B1 CS199802 B1 CS 199802B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- serum
- diagnostic
- production
- human
- volume
- Prior art date
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 30
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 title 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 title 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 4
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N chlorotetracycline Natural products C1=CC(Cl)=C2C(O)(C)C3CC4C(N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N chlortetracycline Chemical compound C1=CC(Cl)=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000004099 Chlortetracycline Substances 0.000 claims description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229960004475 chlortetracycline Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 claims 2
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 claims 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims 2
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 claims 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 9
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 235000009430 Thespesia populnea Nutrition 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M cyanate Chemical compound [O-]C#N XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- UBBSASFKEJHWOE-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogen sulfate sulfuric acid Chemical compound [K+].OS(O)(=O)=O.OS([O-])(=O)=O UBBSASFKEJHWOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Vynález řa!1 způaob výroby diagnostického séra vhodného jak k průkazu HBgAg 1aunopreclpltačnlal metodami /protisaérnou alaktroforézou,1munod1fuzi/,tak 1 k produkci protilátky proti HBgAg,stanov! konkrétní výrobní poda1nky,nutné k vyloučen! nežádoucích launogenů z 1mun1začn1ho Materiálu a K dosažen! spadflty diagnostika.Vynález uvád! rovněž alternativní zjadnodulený výrobní postup pro případ výhradního použit! diagnostického séra jan k průkazu HB^Ag,nikoli k produkci HBgAb.
Malartlnová a Blumberg /Natura 210,str.1340,1966/ získal! Imunizaci králíků lidským H8gAg pozitivním séraa králíci aérua,které po salsenl a normální HBgAg negativní lidskou plasnou Milo vlastnost! diagnostika,vhodného k průkazu HBgAg.Výhodou tohoto základního. postupu ja jednoduchost v provodní,nevýhodou ja nepoužitelnost sér nikterých Imunizovaných zvířat,Č1mž aa výroba prodražuje a ja obtlžni raprodukovatalnou.Lidské séru· totiž obsahuj· převážnou Část anohaa sllnijllch launogenů,než je HBgAg a vzniklé silné nespecifické protilátky sa v mnoha případech nepodaří z diagnostika odstranit an! salsanla králičího séra a normální lidskou plasmou v objemovém poairu 1:1.Příčinou této závady jsou jednak Hpoprotalny,jednak niktaré kritické” launogany,t.j. takové,které jaou velmi cizorodé pro Imunizovaného zvířecího jedince,př!čemž jsou obsaženy jan v nízké až stopové koncentraci v noraáln! lidské plasaé.Vzniklé silné protilátky nalže pak z diagnostika odstranit pro nedostatek vytyčovacího materiálu,· to ani tahdy,ja-U lidské
199 802
199 802 plasu* přidána k diagnostiku v nadbytku.V současná dob* jaou proto k výrob· HBgAg diagnostika používány složitá několikastupňová výrobní postupy,jejichž najdůlažltěj11 fázi ja purlflkace HB*Ag,sestávej1c1 z ultracantrlfugaee aára v hustotní· gradientu po dobu 24 hodin,najlel odstranit zajaána Upoprotalny.Nátladuj1 pak dallt purlflkačnl operace,zpravidla chronatograf1cká,poton<{nun1zaca produkčních zvířat Zaorčat,králíků, kon1,ovc1 a pod.Z.Iaunochaaleká čistota HB#Ag bývá navzdory purlflkačnl· snahán spíže jen Ideálen,takže poslední· výrobní· stupnžn obvykle bývá vyaycant nespecifických protilátek HBgAg negativní· lidský· sáran,nabo jeho frakcemi.Nevýhodou těchto moderních způsobů oproti postupu klaalckánu je složitost,nákladnost a onazaná výrobní kapacita, uváž1ne-l1 nutnost cantrlfugace ZultracantrlfugaZ po dobu 24 hodin.Vyrobená diagnostická sárún ae používá bud přlno v netodách průkazu HBgAg,nebo slouží jako výchozí surovina k výrobě HBgAb,t.j. protilátky proti HBgAg.Tato protilátka ja zpravidla komerčně využívána v soupravách,vhodných k dtllvánu průkazu HBgAg,vázána enzym·· * krvlnkanl, radioaktivní· jóden,fluorascalnlsocyanáten a pod.,v Metodách třetí generace”.Ve věech uvedených případech je základen výroby diagnostická aárun,přísně specificky reagující a HBgAg.
Podstatou vynálezu je srážecí účinek chlortatracykHnu v přítomnosti vápenatých lontů jednak na Upoprotálny a lipldická látky a afinitou k HBgAg,jednak na kritická vysokonolekulárnl biIkoviny,migruj lei v oblasti startu v Inunoalektroforáze v roznazl alfa-2 až betaglobu línově frakce Udakáho aára,která jsou silně Inunogannl pro pokusná zvířata.Podstatou vynálezu je vhodná konblnaea znlněnáho srážecího postupu a ehronatograf11 na sloupci dextranováho nebo agarózováho gelu,umožňuj lei podstatná zúženi bílkovinného spektra ae současný· odstraněni· volného 1 na bílkoviny vázaného tetrecykUnu.F1 Itrát,obsahuj 1c1 IgG,IgA,IgN a některá dallt bílkoviny aa zahusti a 1nj1kuje aa produkčním zvířatům va třech postupných dávkách.Za získaných hyparlnunnlch sér se odstraní nespecifická protilátky b1Ikovinani,vyvločkovanýnl účinkem aubgel1f1kačn1ho přídavku glutaraldehydu a následujícím přldavka· síranu hllnltodraselnáho k lidská HB(Ag negativní plaaně.Sorbent aa přidává k hyper1nunn1nu aáru va forně proaytých vloček.
Po 24 hodinách atánl při >4 °c se vločky aorbantu * navázanými naspad flckýnl protilátkanl odstraní pouhý· proliti· suspenze silonový· altem.V případě,ža konečný výrob*k,t.j. diagnostická aárun ná býti využíváno výhradně jan k průkazu HBgAg a nikoli k výrobě datáho inunoglobulinu,odstraňuj 1 aa nespecifické protilátky z diagnostik* pouhý· přldavka· tekutá lidská HBgAg negativní plasny a následující· odstředěni· vzniklého 1nunoprac1pitátu po 24 hodinách stáni aněal při *4 °C.
Vynález dosahuje nového * vylěiho účinku v to·,že odstraňuj* nutnost ultraeantrlfugaca HBgAg séra v hustotní· gradientu po dobu 24 hod1n,př1čanž purlflkačnl úkony, zajlifujld plnou reprodukovatelnoat výrobního postupu a přísnou apacifitu výrobku jaou redukovány na rychle a snadno proveditelná operaca.Výrob* diagnostika podlá vynálazu záměrně ponechává některá sérová bílkoviny v inunlzačnlch dávkách,avěak jen taková,vůči n1nž vzniklá zvířecí protilátky jaou snadno odstranitelná z diagnostika přldavka· lidská plasny.Upoprotálny a kritická silně Inunogannl aárová proteiny jsou chlortetrecyklin··
199 902 • chromatograf11 odstraněny,při čemž 1munochem1eká vlastnosti HB#Ag jsou plni zachovány. Protože Imunogen ja oproitin od vitUny sirových bílkovin,lze jej aplikovat v zahuitěná koncentrováni formě a dosáhnout tak příznivou proti látkovou odpověď Imunizovaných zvířat na HB(Ag.K adsorbcl nespecifických protilátek sa používá t.zv.sběrová plasma,což ja v podstat* odpadový Materiál,vzniklý slítla velkého počtu Individuálních lidských plassM, zbývajících po různých vylátřenlch.Sbir táto odpadni plasny je organizován v rámci výroby ganaglobullnu,takže tento Materiál je dosažitelný levni v objemech,plni pokrývajících potřebu.Protože plasMa ae k diagnostiku přidává v tániř nerozpustném stavu,je stupen kontaminace diagnostika lidskými bílkovinami zanedbáteIný.Je-11 viak konečný výrobek t.j. diagnostická sérum určeno výhradně jen k průkazu HB#Ag a nikoli k výrob* čistého ImunoglobuUnu, je velmi výhodná přidat lidskou plasmu v tekutém stavu a vzniklý 1munopreclpltát odcentrlfugovat.Kontaminace diagnostika je v tomto přlpedi velmi značná, aviak k uvedenému účelu není na závadu a výrobní postup se jeiti více zjednoduil. Diagnostikům ,vyrobená podle vynálezu je plni vyhovující k průkazu HB(Ag dvojitou 1munod1fuz1 a proti směrnou elektroforézou.Podle výsledků kontrol diagnostika,vyrobeného podle vynálezu,provedených specializovaným pracovištěm,dosahuje Identity linii v 1munodlfuznlch testech se vieml testovanými Šestnácti diagnostiky domácího 1 zahraničního původu/Behr1ng,Hyland,Imuno-W1en atd./ s dává naprosto správná výsledky s panelem známých,standartnlch HB#Ag negativních a positivních sér.Souhrnně lze říci,že vynález slučuje viechny výhody dosavadních výrobních postupů/ t.j. jednoduchá a snadná provedednl, ekonomicky výhodná,velká,prakticky neomezená výrobní kapacíta,nezávadnost Imunogenu po stránce antlgennlho stimulu,uspokojívá parametry výrobku.Velkou výhodou je možnost kryti potřeb zdravotnického terénu,vynález umožňuje depistáž HBsAg v masovém měřítku,což by při slož1t*jS1 technologii bylo stěží možně.Vynález je perspektivní,neboť z výsledného diagnostického séra lze snadno Izolovat 1munochem1cky čistý IgG,konjugovatelný s fluorescelnlsocyanátem,enzymem apod. a vyzkouSet jej v progresivnějších metodách průkazu HB#Ag, než jsou metody 1munoprec1p1tačn1.
Konkrétní přiklad výrobního postupu
100 ml lidského HBgAg pozitivního sára/směs nejméně 60 různých malých zbytků sér z různých vyietřenl/ ee smlsl se 40ml 1X vodného roztoku chlortetracykllnu při 20 °C, a po kapkách zs stálého mícháni se přidá 1 ml 1M chloridu vápenatého,při čemž vznikne sraženina.Směs se potě nechá stát při 20 °C 30 minut s po táto dob* se odstředí nebo af1 Itruje.Čirý,žlutě zbarvený filtrát se pak filtruje v trubici 60x 3 cm silnou vrstvou dextrsnováho nebo agarózováho gelu,suspendovaného v 0,1S N chloridu sodném,upraveným fosfátovým tlumlvým roztokem ne pH 6,8.Tekutina,proffItrovaná vrstvou gelu,se jímá v podílech 5 ml sž do tá doby,kdy z trubice počni vytékat Intenzivně žlutá kapalina, obsahující tetrscykHn,vázaný ne sérová bílkoviny.21 skoná podíly filtrátu se analyzuji protisměrnou elektroforézou na přítomnost HB#Ag á podle výsledků analyzy se sloučí pouze ty frakce,která obsahuji HBgAg.Získaná smět se zahusti na objem 10 ml tak,že se vloží do kolodlových aáčků/membránových filtrů/ a sáčky se zasunou do suspenze sodná soli karboxymetyleelulózy medová konzistence a ponechají stát při *4 °c v lednici
199 902 najnáni 24 hodin,rasp.tak dlouho,aby celkový obj·· kapaliny v sáčcích byl manil naž 10 nl. Množství auspanza karboxymatylcalulózy ja v lirokých «azích libovolná,podmínkou vlak ja, •by každý kolodlový sáček byl obklopen najnáná 2 ca silnou vrstvou auspanza.Hustota suapanza ná být co najvlt!1,avlak nasrnl bránit nanášíLnámu zasunuti kolodlováho šátku do prostředí.Výslednou zahuitlnou kapalinu pak upraví·· na obj·· 10 ·1 a 1nj1kujena ji produkční· zviřatůn/vapřůn/ Intranuakulárni.Imunizuj··· současní 10 vepřů,kaidánu zvířeti 1 Ml po nalých dávkách do nlkollka míst til·.Obj·· Injikovaná frakce s výhodou zvltluj··· přídavkem vhodného adjuvans,například adjuvana a hydroxydam hlinitý·.Za tři týdny 1nj1kac1 stejný· způsob·· opakuj··· s noví připravený· Imunoganam a za dalU tři týdny podá·· jaltl třetí launlzačnl dávku.Za 7 až 10 dnů zvířata vykrvácí··,odebraná krav sa ponechá ustát 24 hodin při *4 °C a vyloučená siru· od krvinek oddlll·· odstřadlnl·.
Sáru· jednotlivých imunizovaných zvířat sa sloučí dohromady a zmlřl se celkový obj··. Nespecifická protilátky z diagnostika sa odstraní tímto způsobam:K souhlasnému objemu lidská plasmy ss za stálého mícháni přidá 0,012 objemu vodného 25Xn1ho roztoku glutaraldahydu při 20 °C a ka zhoustlé sm!s1 po 30 Minutách stáni se za stálého Mícháni přilije 0,24 objamu 10X roztoku síranu hl1n1todrasalnáho,př1čaRž smis vločkuj· v kyprých vločkách. Vzáplt1,jak smis vyvločkuja,př111ja sa za stálého Mícháni pitlnásobak objamu dost.vody a vločky se zachytl přelitím smási sít·· a otvory 0,3 až 0,5 •.Vločky,zachycaná síta· sa pak promyjí pltlnásobk·· objamu 0,15 H chloridu sodnáho,zachyt1 sa sítem a promytí sa jaltl jednou opakuje,tentokrát při *4 °C po dobu 24 hodin.Vločky sa pak zachytl alt·· a přidají sa k diagnostiku.Vytyčováni diagnostika probíhá 24 hodin při *4 °C.Ro táto dobl se vločky z diagnostika opit oddlll,produkt se filtruje bakteriologický· f1Itr··,konzervuje aa přídavkem azldu sodného v koncentraci 0,01X,rozpln1 sa do aRpulak/na př.v objenu po 1 ml/ a usul1 sa mrazovou sublimaci.Výsledný produkt ja vyhovující,ja-li kontrola Imunoalaktroforázou s použitím panelu známých,standartn1ch HB^Ag negativních a pozitivních sér va shodl a očekávanými výsledky.tj.diagnostiku· musí s HB(Ag pozitivními séry v 1nuno•laktroforatlcká analýza reagovat za vzniku prac1p1tačn1 linky,zatímco žádná HB#Ag séra negativní nasrnl v Imunoalaktroforáza pozitivní reagovat.Počat kontrol,uznávaný jako n1n1|uiM, ja 15 sér od obou skupin,doporučuje sa vlak vltU počat,najlépe,provádí-11 kontrolu specializovaná práčoviIti na klinickém a dárcovskám materiálu.V připadl,Za diagnostická sérum ja určeno výhradní jan k průkazu HBaAg a není určeno k výrobl čistého Ig6 /proti látky/,zjsdnoduluja sa výrobní postup va fázi odstranlnl nespecifických protilátak: namísto vloček bílkovin,1nob1lisovaných srážecím postupem sa k diagnostiku přidá tentýž objem lidská plasmy tekutá,smis sa ponechá 24 hodin.stát při *4 °C s vzniklý 1munoprac1p1tát sa odcantrl fugtíje.Ostatní fáza výroby jaou shodná,včatná závlračná kontroly.
199 802
PŘEDMĚT VYNÁLEZU
Claims (9)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob výroby diagnostického séra k průkazu HBgAg/hepatitis B povrchového antigenuZ a k produkci HBtAb/protilét>y/,vyznačený tlm.že se na lidské HB*Ag pozitivní sérum, získané nsjméné od 60 pozitivních jedinců působí roztokem chlortetracyklinu v přítomnosti vápenatých iontů.vzniklé sraženina se odfiltruje a filtrát se profiltruje vrstvou dextranového nebo agarózového gelu.podíly fiItrétu.obsahujici HB^Ag se zahusti a injikuji produkčním zvířatům například vepřům,konim,krá11kům.morčetům, ovcim a sérum imunizovaných zvířat se upraví přídavkem lidského HBsAg negativního séra nebo plasmy v tekutém nebo vločkovaném stavu.přičemž vločkováni se dosáhne postupným působením gluteraldehydu a síranu hUnitodraselného na smlieni HB#Ag negativní sérum nebo plasmu.
- 2. Způsob výroby diagnostického séra podle bodu 1.vyznačený tim.že na 1 objemový dil HB^Ag pozitivního séra se působí přídavkem 0.4 objemu IXniho vodného roztoku chlortetracyklinu při 20 °C po dobu 3 až 5 minut.po kapkách se přidá 0.01 objemu roztoku 1M chloridu vápenatého.směs se ponechá 30 minut stát v klidu při 20 °C,načež se sraženina bílkovin odfiltruje a čirý filtrát se déle zpracuje.
- 3. Způsob výroby diagnostického séra podle bodu 2.vyznačený tlm.že filtrát ekvivalentní 0.1 litru výchozih-ο HB#Ag pozitivního séra se profiltruje vrstvou 60x3 cm suspenze dextranového nebo agarózového gelu.přičemž se jimaji podíly po 5 ml do té doby.než z vrstvy počne vytékat Intenzivnč žluté kapalina.obsahující ch lortetracyklin,vázaný na sérové bílkoviny.
- 4. Způsob výroby diagnostického séra podle bodu 3.vyznačený tim.že jednotlivé podíly filtrátu se analyzuji na obsah HBgAg.pozitivni podíly se sloučí.zahusti se na objem 10 ml a injikuji se produkčním zviřatům.napřiklad vepřům.
- 5. Způsob výroby diagnostického séra podle bodu 4.vyznačený tim.že 1 ml zahuštěného HB#Ag ee injikuje vepři intremuskulérnč do různých mist tile.injikace se jeltl dvakrát opakuje v intervalu tři týdnů.při čemž se současné imunizuje skupina nejméně deseti zvířat.
- 6. Způeob výroby diagnostického séra podle bodu 5.vyznačený tlm.že za týden až 10 dnů po poslední injekci HB#Ag se zvířata vykrvácej 1.krev se ponechá ustát několik hodin,sž se vyloučí sérum,sérum se od krvinek oddělí odstředěním,sére věech zvířat ee sliji dohromady a změří se výsledný objem.
- 7. Způeob výroby diagnostického séra podle bodu 6,vyznačený tim,že diagnostické sérum se ze zvářeciho séra ziské přídavkem souhlasného objemu lidské HBgAg negativní plasmy nebo sérs.vyvločkovaných glutaraldshydem a síranem hlínitodraselným.
- 8. Způsob výroby diagnostického aéra podle bodu 7,vyznačený tim,že vyvločkovéni lidské HBgAg negativní plasmy nebo eéra ee dosahuje přídavkem 0,012 objemového dilu 25Xniho roztoku gluteraldehydu při 20 °C s následujícím přídavkem 0,24 objemového dilu lOXniho roztoku síranu hUnitodraselného,vzniklé vločky se promyji nadbytkem destilované vody e 0,15 M chloridem sodným po dobu 24 až 48 hodin při *4 °c,oddělí1SS 802 sc altco od prooývacl kapaliny a přenesou ·· do zvířecího séra.
- 9. Způsob výroby diagnostického séra podle bodu 8,vyznalený tlo.la v připadl výhradního využiti diagnostického séra k průkazu HBgAg a nikoli k produkci HBgAb/prot1látky/, získá sa diagnostické aéruo zc zvířecího séra přldavkao souhlasného objaou lidského HBgAg negativního séra nebo plaaoy.sole sa ponechá 24 hodin al týden při *4 °C ustát a vzniklý 1ounoprac1p1tét sa odstraní filtraci nebo odctřcdlnlo.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS816177A CS199802B1 (cs) | 1977-12-07 | 1977-12-07 | Způsob výroby diagnostického séra k průkazu HB# Ag /hepatitis B povrchového antigenu/ a k produkci HBgAb /protilátky/ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS816177A CS199802B1 (cs) | 1977-12-07 | 1977-12-07 | Způsob výroby diagnostického séra k průkazu HB# Ag /hepatitis B povrchového antigenu/ a k produkci HBgAb /protilátky/ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199802B1 true CS199802B1 (cs) | 1980-08-29 |
Family
ID=5431816
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS816177A CS199802B1 (cs) | 1977-12-07 | 1977-12-07 | Způsob výroby diagnostického séra k průkazu HB# Ag /hepatitis B povrchového antigenu/ a k produkci HBgAb /protilátky/ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS199802B1 (cs) |
-
1977
- 1977-12-07 CS CS816177A patent/CS199802B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Unanue et al. | Experimental glomerulonephritis: V. Studies on the interaction of nephrotoxic antibodies with tissues of the rat | |
| Vroon et al. | The separation of nine components and two inactivators of components of component in human serum | |
| US7691645B2 (en) | Immunosubtraction method | |
| DE69028513T2 (de) | Träger zur bindung von antiphospholipid-antikörpern, diese antikörper verwendender immunotest und kit dafür | |
| JPH0543719B2 (cs) | ||
| US4123427A (en) | Method for the purification of mycobacterial protein antigens and resulting product | |
| JPH0835967A (ja) | トラコーマクラミジアの種特異性抗原およびクラミジア感染の存在を分析する方法 | |
| CH658317A5 (de) | Verfahren zur feststellung von krebs beim menschen. | |
| EP0292810B1 (de) | Einschritt-Immuntest zur Bestimmung von antigen-spezifischen Antikörpern aus einer der Immunglobulin-Klassen A, M, D oder E und dazu geeignetes Mittel | |
| US3912805A (en) | Reagent and assay for human fibrinogen degradation products | |
| EP0124896B1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von Viren bzw. Virusantigenen und deren Anwendung in Diagnose und Therapie (Impfstoff) | |
| KR100280239B1 (ko) | 호염기구에 결합하는 모노클론성 항체, 호염기구의 분리방법, 호염기구로부터의 케미칼 메디에이터의 유리방법, 및 호염기구 유래 케미칼 메디에이터의 유리시험법 | |
| CH620299A5 (cs) | ||
| DE69733957T2 (de) | Verfahren zur bestimmung der gegenwart des gehirnspezifischen proteins s-100 beta | |
| JP2003183299A (ja) | 抗体および免疫学的測定方法 | |
| IE44824B1 (en) | Process for the isolation of a placenta-specific glycoprotein | |
| CS199802B1 (cs) | Způsob výroby diagnostického séra k průkazu HB# Ag /hepatitis B povrchového antigenu/ a k produkci HBgAb /protilátky/ | |
| WO1989008261A1 (en) | Composition for simple detection and/or quantification of antigenic substances in body liquids | |
| JP3291525B2 (ja) | ヒトプラスミン−α▲下２▼−プラスミンインヒビター複合体の免疫学的測定方法 | |
| JPS63500797A (ja) | 崩壊加速因子に対するモノクロ−ン抗体、その生成方法および使用 | |
| DE69033944T2 (de) | Mittel zur direkten chemischen Bindung des D-Dimers aus einer biologischen Probe zwecks Diagnostik und Überwachung von thrombolytischen und hyperkoagulablen Zuständen | |
| MOORE et al. | The immunological integrity of matrix substance A and its possible detection and quantitation in urine | |
| Schumacher et al. | Primary interaction between antibody and components of Alternaria: I. Immunological and chemical characteristics of labeled antigens | |
| JPS6231301B2 (cs) | ||
| EP0308242A2 (en) | Agglutination assay |