CS199802B1

CS199802B1 - Manufacturing method of diagnostic serum for determination of hbs(down)ag/hepatitis b of superficial antigen/and production hbs(down)ab/antisubstance

Info

Publication number: CS199802B1
Application number: CS816177A
Authority: CS
Inventors: Jaroslav Korinek
Original assignee: Jaroslav Korinek
Priority date: 1977-12-07
Filing date: 1977-12-07
Publication date: 1980-08-29

Description

Vynález řa!1 způaob výroby diagnostického séra vhodného jak k průkazu HB_gAg 1aunopreclpltačnlal metodami /protisaérnou alaktroforézou,1munod1fuzi/,tak 1 k produkci protilátky proti HB_gAg,stanov! konkrétní výrobní poda1nky,nutné k vyloučen! nežádoucích launogenů z 1mun1začn1ho Materiálu a K dosažen! spadflty diagnostika.Vynález uvád! rovněž alternativní zjadnodulený výrobní postup pro případ výhradního použit! diagnostického séra jan k průkazu HB^Ag,nikoli k produkci HB_gAb.Invention R! 1 způaob producing a diagnostic serum suitable both for the detection _of Ag HB 1aunopreclpltačnlal methods / protisaérnou alaktroforézou, 1munod1fuzi / and 1 to produce antibodies against HB Ag _g, statutes! specific production conditions required to be excluded! undesirable launogens from 1-immunization material and K achieved! spadflty diagnostics. also an alternative simplified manufacturing process for exclusive use! diagnostic sera for the detection of HB ^ Ag, not for HB _g Ab production.

Malartlnová a Blumberg /Natura 210,str.1340,1966/ získal! Imunizaci králíků lidským H8_gAg pozitivním séraa králíci aérua,které po salsenl a normální HB_gAg negativní lidskou plasnou Milo vlastnost! diagnostika,vhodného k průkazu HB_gAg.Výhodou tohoto základního. postupu ja jednoduchost v provodní,nevýhodou ja nepoužitelnost sér nikterých Imunizovaných zvířat,Č1mž aa výroba prodražuje a ja obtlžni raprodukovatalnou.Lidské séru· totiž obsahuj· převážnou Část anohaa sllnijllch launogenů,než je HB_gAg a vzniklé silné nespecifické protilátky sa v mnoha případech nepodaří z diagnostika odstranit an! salsanla králičího séra a normální lidskou plasmou v objemovém poairu 1:1.Příčinou této závady jsou jednak Hpoprotalny,jednak niktaré kritické” launogany,t.j. takové,které jaou velmi cizorodé pro Imunizovaného zvířecího jedince,př!čemž jsou obsaženy jan v nízké až stopové koncentraci v noraáln! lidské plasaé.Vzniklé silné protilátky nalže pak z diagnostika odstranit pro nedostatek vytyčovacího materiálu,· to ani tahdy,ja-U lidskéMalartlnová and Blumberg / Natura 210, str. By immunizing rabbits with human H8 _g Ag positive Sera Rabbits Aero, which upon normal salsenl and HB _of Ag negative human Plasne Milo feature! diagnostics, suitable for the detection of HB _g Ag. simplicity in procedure I offers accompanying disadvantage I inapplicability some sera of immunized animals Č1mž aa manufacture expensive and I obtlžni raprodukovatalnou.Lidské serum containing namely · · largely anohaa sllnijllch launogenů than HB _of Ag and formed strong non-specific antibodies in many cases fail from diagnostics remove an! Rabbit serum salsanla and normal human plasma in a 1: 1 volume poair. The cause of this defect is both Hpoprotalny and not critical critical launogans, ie those which are very foreign to the Immunized animal, but are contained in low to trace concentrations. v noraáln! Human plasaé. The resulting strong antibodies are then removed from the diagnostics due to the lack of stakeout, not even tahdy, ja-U human

199 802199 802

199 802 plasu* přidána k diagnostiku v nadbytku.V současná dob* jaou proto k výrob· HB_gAg diagnostika používány složitá několikastupňová výrobní postupy,jejichž najdůlažltěj11 fázi ja purlflkace HB*Ag,sestávej1c1 z ultracantrlfugaee aára v hustotní· gradientu po dobu 24 hodin,najlel odstranit zajaána Upoprotalny.Nátladuj1 pak dallt purlflkačnl operace,zpravidla chronatograf1cká,poton<{nun1zaca produkčních zvířat Zaorčat,králíků, kon1,ovc1 a pod.Z.Iaunochaaleká čistota HB_#Ag bývá navzdory purlflkačnl· snahán spíže jen Ideálen,takže poslední· výrobní· stupnžn obvykle bývá vyaycant nespecifických protilátek HB_gAg negativní· lidský· sáran,nabo jeho frakcemi.Nevýhodou těchto moderních způsobů oproti postupu klaalckánu je složitost,nákladnost a onazaná výrobní kapacita, uváž1ne-l1 nutnost cantrlfugace ZultracantrlfugaZ po dobu 24 hodin.Vyrobená diagnostická sárún ae používá bud přlno v netodách průkazu HB_gAg,nebo slouží jako výchozí surovina k výrobě HB_gAb,t.j. protilátky proti HB_gAg.Tato protilátka ja zpravidla komerčně využívána v soupravách,vhodných k dtllvánu průkazu HB_gAg,vázána enzym·· * krvlnkanl, radioaktivní· jóden,fluorascalnlsocyanáten a pod.,v Metodách třetí generace”.Ve věech uvedených případech je základen výroby diagnostická aárun,přísně specificky reagující a HB_gAg.199 802 Plasma * added for diagnostics in excess. Complex multistage manufacturing processes are now used to produce HB _g Ag diagnostics, the most important of which is HB * Ag purification, consisting of ultracantrlfugaee ara in a density gradient over 24 hours In addition, the purlflkačnl operation, usually a chronographic, poton of production animals of the Zorchat, rabbits, kon1, sheep and the like, is followed. Also, the purity of HB _# Ag is, despite the purl · production stupnžn usually vyaycant nonspecific antibody HB Ag negative · _g · human Saran its use or frakcemi.Nevýhodou these modern methods klaalckánu over the process is the complexity, cost and production capacity onazaná, uváž1ne-L1 necessity cantrlfugace ZultracantrlfugaZ for 24 hodin.Vyrobená diagnostic sárún ae uses either the pass in the netodes pass in HB _g Ag, or serves as a starting material for the production of HB _g Ab, ie an antibody to HB _g Ag.This antibody is generally commercially used in kits suitable for the detection of HB _g Ag, bound by the enzyme blood, radioactive iodine , fluorascalnsocyanate and the like, in the Third Generation Methods. In all the above cases, the production base is a diagnostic aarun, strictly specifically reacting and HB _g Ag.

Podstatou vynálezu je srážecí účinek chlortatracykHnu v přítomnosti vápenatých lontů jednak na Upoprotálny a lipldická látky a afinitou k HB_gAg,jednak na kritická vysokonolekulárnl biIkoviny,migruj lei v oblasti startu v Inunoalektroforáze v roznazl alfa-2 až betaglobu línově frakce Udakáho aára,která jsou silně Inunogannl pro pokusná zvířata.Podstatou vynálezu je vhodná konblnaea znlněnáho srážecího postupu a ehronatograf11 na sloupci dextranováho nebo agarózováho gelu,umožňuj lei podstatná zúženi bílkovinného spektra ae současný· odstraněni· volného 1 na bílkoviny vázaného tetrecykUnu.F1 Itrát,obsahuj 1c1 IgG,IgA,IgN a některá dallt bílkoviny aa zahusti a 1nj1kuje aa produkčním zvířatům va třech postupných dávkách.Za získaných hyparlnunnlch sér se odstraní nespecifická protilátky b1Ikovinani,vyvločkovanýnl účinkem aubgel1f1kačn1ho přídavku glutaraldehydu a následujícím přldavka· síranu hllnltodraselnáho k lidská HB₍Ag negativní plaaně.Sorbent aa přidává k hyper1nunn1nu aáru va forně proaytých vloček.The present invention provides a coagulating effect chlortatracykHnu in the presence of calcium ions both on Upoprotálny and lipldická agent and affinity for HB _of Ag, and on the critical vysokonolekulárnl The proteins, migrate lei starting area in Inunoalektroforáze in roznazl alpha-2 to betaglobu Wireline fraction Udakáho Aarau which are The present invention is based on a suitable combination of the agglomerated clotting process and a dextran or agarose gel column, allowing a substantial narrowing of the protein spectrum while at the same time removing free 1 protein bound tetrecycin, IgG, IgN and some of the proteins aa thicken and inject aa production animals in three consecutive doses. Adjacent to human HB ₍ Ag negative plaan).

Po 24 hodinách atánl při >4 °c se vločky aorbantu * navázanými naspad flckýnl protilátkanl odstraní pouhý· proliti· suspenze silonový· altem.V případě,ža konečný výrob*k,t.j. diagnostická aárun ná býti využíváno výhradně jan k průkazu HB_gAg a nikoli k výrobě datáho inunoglobulinu,odstraňuj 1 aa nespecifické protilátky z diagnostik* pouhý· přldavka· tekutá lidská HB_gAg negativní plasny a následující· odstředěni· vzniklého 1nunoprac1pitátu po 24 hodinách stáni aněal při *4 °C.After 24 hours at> 4 ° C, the aorbant flakes * bound to the backbone of the antibody antibodies are removed only by shedding the nylon suspension. In the case that the final product, ie diagnostic aarine, is used solely for the detection of HB _g Ag and not to produce datáho inunoglobulinu, removed one AA nonspecific antibody diagnosis mere * · · přldavka liquid human HB _g Ag negative Plasne and subsequent centrifugation · · 1nunoprac1pitátu formed after 24 hours of standing at aněal * 4 ° C.

Vynález dosahuje nového * vylěiho účinku v to·,že odstraňuj* nutnost ultraeantrlfugaca HB_gAg séra v hustotní· gradientu po dobu 24 hod1n,př1čanž purlflkačnl úkony, zajlifujld plnou reprodukovatelnoat výrobního postupu a přísnou apacifitu výrobku jaou redukovány na rychle a snadno proveditelná operaca.Výrob* diagnostika podlá vynálazu záměrně ponechává některá sérová bílkoviny v inunlzačnlch dávkách,avěak jen taková,vůči n1nž vzniklá zvířecí protilátky jaou snadno odstranitelná z diagnostika přldavka· lidská plasny.Upoprotálny a kritická silně Inunogannl aárová proteiny jsou chlortetrecyklin··The invention achieves new * vylěiho effect in that · the removed * need ultraeantrlfugaca HB _g Ag serum density · gradient over 24 hod1n, př1čanž purlflkačnl acts zajlifujld fully reproducible production process and strict apacifitu product Jaouich reduced to quickly and easily feasible operation. The inventive diagnostics deliberately leave some serum proteins at ingestion doses, but only those against which the animal antibodies formed are readily removable from the diagnostics of the addition of human plasmas. The protoprotective and critical strongly Inunogannl aar proteins are chlortetrecycline ··

199 902 • chromatograf11 odstraněny,při čemž 1munochem1eká vlastnosti HB_#Ag jsou plni zachovány. Protože Imunogen ja oproitin od vitUny sirových bílkovin,lze jej aplikovat v zahuitěná koncentrováni formě a dosáhnout tak příznivou proti látkovou odpověď Imunizovaných zvířat na HB₍Ag.K adsorbcl nespecifických protilátek sa používá t.zv.sběrová plasma,což ja v podstat* odpadový Materiál,vzniklý slítla velkého počtu Individuálních lidských plassM, zbývajících po různých vylátřenlch.Sbir táto odpadni plasny je organizován v rámci výroby ganaglobullnu,takže tento Materiál je dosažitelný levni v objemech,plni pokrývajících potřebu.Protože plasMa ae k diagnostiku přidává v tániř nerozpustném stavu,je stupen kontaminace diagnostika lidskými bílkovinami zanedbáteIný.Je-11 viak konečný výrobek t.j. diagnostická sérum určeno výhradně jen k průkazu HB_#Ag a nikoli k výrob* čistého ImunoglobuUnu, je velmi výhodná přidat lidskou plasmu v tekutém stavu a vzniklý 1munopreclpltát odcentrlfugovat.Kontaminace diagnostika je v tomto přlpedi velmi značná, aviak k uvedenému účelu není na závadu a výrobní postup se jeiti více zjednoduil. Diagnostikům ,vyrobená podle vynálezu je plni vyhovující k průkazu HB₍Ag dvojitou 1munod1fuz1 a proti směrnou elektroforézou.Podle výsledků kontrol diagnostika,vyrobeného podle vynálezu,provedených specializovaným pracovištěm,dosahuje Identity linii v 1munodlfuznlch testech se vieml testovanými Šestnácti diagnostiky domácího 1 zahraničního původu/Behr1ng,Hyland,Imuno-W1en atd./ s dává naprosto správná výsledky s panelem známých,standartnlch HB_#Ag negativních a positivních sér.Souhrnně lze říci,že vynález slučuje viechny výhody dosavadních výrobních postupů/ t.j. jednoduchá a snadná provedednl, ekonomicky výhodná,velká,prakticky neomezená výrobní kapacíta,nezávadnost Imunogenu po stránce antlgennlho stimulu,uspokojívá parametry výrobku.Velkou výhodou je možnost kryti potřeb zdravotnického terénu,vynález umožňuje depistáž HB_sAg v masovém měřítku,což by při slož1t*jS1 technologii bylo stěží možně.Vynález je perspektivní,neboť z výsledného diagnostického séra lze snadno Izolovat 1munochem1cky čistý IgG,konjugovatelný s fluorescelnlsocyanátem,enzymem apod. a vyzkouSet jej v progresivnějších metodách průkazu HB_#Ag, než jsou metody 1munoprec1p1tačn1.199 902 • The chromatograph was removed, while the immunochemical properties of HB _# Ag were fully preserved. Because Immunogen is an oproitin from a sulfur protein vitamin, it can be applied in a concentrated concentration form to achieve a favorable anti-substance response of the immunized animals to HB ₍ Ag.K adsorption of non-specific antibodies is used as so-called plasma plasma, which is essentially waste material). Collecting this waste plasma is organized in the production of ganaglobullin, so that this material is available cheaply in volumes to meet the needs. Because plasMa adds insoluble state to the diagnosis, level of contamination human protein diagnostics negligible. However, the final product ie diagnostic serum intended exclusively for the detection of HB _# Ag and not for the production of pure Immunoglobulin, it is very advantageous to add human plasma in liquid form and centrifuge the resulting immunoprecipitate. and it is very significant in this case, but for this purpose is not a problem and the manufacturing process is still more simplified. Diagnoses produced according to the invention is fully satisfactory for detection of HB _(Ag 1munod1fuz1 double and opposite guideline elektroforézou.Podle inspection results diagnostics produced according to the invention, carried out by a specialized institute, the line reaches Identity 1munodlfuznlch tests vieml sixteen test diagnostics domestic foreign origin 1 / Behr1ng , Hyland, Immuno-W1en etc./s gives absolutely correct results with a panel of known, standard HB _# Ag negative and positive sera. In summary, the invention combines all the advantages of prior art processes (i.e. simple and easy to implement, economically advantageous, large The advantage is the possibility of covering the needs of medical terrain, the invention allows the screening of HB _with Ag on a mass scale, which would be difficult if the technology is complicated. This is promising as it is easy to isolate 1-immunochemically pure IgG, conjugatable with fluorescein cyanate, enzyme, and the like from the resulting diagnostic serum and test it in more progressive HB _# Ag detection methods than 1-immunoprecipitation methods.

Konkrétní přiklad výrobního postupuSpecific example of the production process

100 ml lidského HB_gAg pozitivního sára/směs nejméně 60 různých malých zbytků sér z různých vyietřenl/ ee smlsl se 40ml 1X vodného roztoku chlortetracykllnu při 20 °C, a po kapkách zs stálého mícháni se přidá 1 ml 1M chloridu vápenatého,při čemž vznikne sraženina.Směs se potě nechá stát při 20 °C 30 minut s po táto dob* se odstředí nebo af1 Itruje.Čirý,žlutě zbarvený filtrát se pak filtruje v trubici 60x 3 cm silnou vrstvou dextrsnováho nebo agarózováho gelu,suspendovaného v 0,1S N chloridu sodném,upraveným fosfátovým tlumlvým roztokem ne pH 6,8.Tekutina,proffItrovaná vrstvou gelu,se jímá v podílech 5 ml sž do tá doby,kdy z trubice počni vytékat Intenzivně žlutá kapalina, obsahující tetrscykHn,vázaný ne sérová bílkoviny.21 skoná podíly filtrátu se analyzuji protisměrnou elektroforézou na přítomnost HB_#Ag á podle výsledků analyzy se sloučí pouze ty frakce,která obsahuji HB_gAg.Získaná smět se zahusti na objem 10 ml tak,že se vloží do kolodlových aáčků/membránových filtrů/ a sáčky se zasunou do suspenze sodná soli karboxymetyleelulózy medová konzistence a ponechají stát při *4 °c v lednici100 ml of human HB _g Ag positive serum / a mixture of at least 60 different small serum residues from various rubbing / mixing with 40 ml of 1X aqueous chlortetracycline solution at 20 ° C, and 1 ml of 1M calcium chloride is added dropwise with stirring. The mixture is allowed to stand at 20 ° C for 30 minutes after which time it is centrifuged or filtered. The clear, yellow-colored filtrate is then filtered in a 60x 3 cm tube with a thick layer of dextrose or agarose gel suspended in 0.1S N Sodium chloride, treated with phosphate buffer solution not pH 6.8. The liquid, filtered through the gel layer, is collected in 5 ml portions until an intense yellow liquid containing tetrscykHn bound to serum proteins begins to flow.21. the filtrate is analyzed by counter electrophoresis for the presence of HB _# Ag and, according to the results of the analysis, only those fractions containing HB _g Ag are pooled. to 10 ml by placing them in collodion bags (membrane filters) and placing the bags in a suspension of sodium carboxymethyleellulose honey consistency and standing at * 4 ° c in the refrigerator

199 902 najnáni 24 hodin,rasp.tak dlouho,aby celkový obj·· kapaliny v sáčcích byl manil naž 10 nl. Množství auspanza karboxymatylcalulózy ja v lirokých «azích libovolná,podmínkou vlak ja, •by každý kolodlový sáček byl obklopen najnáná 2 ca silnou vrstvou auspanza.Hustota suapanza ná být co najvlt!1,avlak nasrnl bránit nanášíLnámu zasunuti kolodlováho šátku do prostředí.Výslednou zahuitlnou kapalinu pak upraví·· na obj·· 10 ·1 a 1nj1kujena ji produkční· zviřatůn/vapřůn/ Intranuakulárni.Imunizuj··· současní 10 vepřů,kaidánu zvířeti 1 Ml po nalých dávkách do nlkollka míst til·.Obj·· Injikovaná frakce s výhodou zvltluj··· přídavkem vhodného adjuvans,například adjuvana a hydroxydam hlinitý·.Za tři týdny 1nj1kac1 stejný· způsob·· opakuj··· s noví připravený· Imunoganam a za dalU tři týdny podá·· jaltl třetí launlzačnl dávku.Za 7 až 10 dnů zvířata vykrvácí··,odebraná krav sa ponechá ustát 24 hodin při *4 °C a vyloučená siru· od krvinek oddlll·· odstřadlnl·.199 902 for 24 hours, so long that the total volume of the liquid in the bags was manilla up to 10 AD. The amount of carboxymathylcellulose auspanza is arbitrary in a wide range, as long as each collodable bag is surrounded by a 2 c thick layer of auspanza. then adjust it to 10 · 1 and 1 in order to produce the animal / lamb / intranuacular. Immunize simultaneously 10 pigs, a 1-ml canaidan animal after pouring into a plurality of sites til injected fraction preferably. Add the appropriate adjuvant, such as adjuvant and aluminum hydroxide, for 3 weeks, repeat the same method with a new prepared Immunoganam and inject a third launzation dose for 3 weeks. The animals are exsanguinated, the cows collected are allowed to stand for 24 hours at 4 ° C and the excreted sulfur is separated from the blood cells.

Sáru· jednotlivých imunizovaných zvířat sa sloučí dohromady a zmlřl se celkový obj··. Nespecifická protilátky z diagnostika sa odstraní tímto způsobam:K souhlasnému objemu lidská plasmy ss za stálého mícháni přidá 0,012 objemu vodného 25Xn1ho roztoku glutaraldahydu při 20 °C a ka zhoustlé sm!s1 po 30 Minutách stáni se za stálého Mícháni přilije 0,24 objamu 10X roztoku síranu hl1n1todrasalnáho,př1čaRž smis vločkuj· v kyprých vločkách. Vzáplt1,jak smis vyvločkuja,př111ja sa za stálého Mícháni pitlnásobak objamu dost.vody a vločky se zachytl přelitím smási sít·· a otvory 0,3 až 0,5 •.Vločky,zachycaná síta· sa pak promyjí pltlnásobk·· objamu 0,15 H chloridu sodnáho,zachyt1 sa sítem a promytí sa jaltl jednou opakuje,tentokrát při *4 °C po dobu 24 hodin.Vločky sa pak zachytl alt·· a přidají sa k diagnostiku.Vytyčováni diagnostika probíhá 24 hodin při *4 °C.Ro táto dobl se vločky z diagnostika opit oddlll,produkt se filtruje bakteriologický· f1Itr··,konzervuje aa přídavkem azldu sodného v koncentraci 0,01X,rozpln1 sa do aRpulak/na př.v objenu po 1 ml/ a usul1 sa mrazovou sublimaci.Výsledný produkt ja vyhovující,ja-li kontrola Imunoalaktroforázou s použitím panelu známých,standartn1ch HB^Ag negativních a pozitivních sér va shodl a očekávanými výsledky.tj.diagnostiku· musí s HB₍Ag pozitivními séry v 1nuno•laktroforatlcká analýza reagovat za vzniku prac1p1tačn1 linky,zatímco žádná HB_#Ag séra negativní nasrnl v Imunoalaktroforáza pozitivní reagovat.Počat kontrol,uznávaný jako n1n1|uiM, ja 15 sér od obou skupin,doporučuje sa vlak vltU počat,najlépe,provádí-11 kontrolu specializovaná práčoviIti na klinickém a dárcovskám materiálu.V připadl,Za diagnostická sérum ja určeno výhradní jan k průkazu HB_aAg a není určeno k výrobl čistého Ig6 /proti látky/,zjsdnoduluja sa výrobní postup va fázi odstranlnl nespecifických protilátak: namísto vloček bílkovin,1nob1lisovaných srážecím postupem sa k diagnostiku přidá tentýž objem lidská plasmy tekutá,smis sa ponechá 24 hodin.stát při *4 °C s vzniklý 1munoprac1p1tát sa odcantrl fugtíje.Ostatní fáza výroby jaou shodná,včatná závlračná kontroly.The sera of the individual immunized animals are pooled together and the total volume is frozen. The nonspecific antibodies from the diagnostics are removed as follows: Add 0.012 volumes of aqueous 25Xnl glutaraldahyd solution at 20 ° C to an equal volume of human plasma ss with continuous agitation and 0.24 volumes of 10X solution are added to the thickened mixture after 30 min. Potassium sulphate sulfate, wherein the mixture flocculates in the plump flakes. The water and flakes were collected by pouring a mixture of mesh and apertures of 0.3 to 0.5. The flakes, trapped sieves were then washed pltl times the volume of 0, 15H sodium chloride, sieved and washed with yalt once again, this time at * 4 ° C for 24 hours. The flakes were then captured altogether and added to the diagnostics. After this, the flake was removed from the diagnostics, the product was filtered by bacteriological filtration, preserved and added with sodium azide at a concentration of 0.01X, filled into aPropules (at a volume of 1 ml each) and freeze-dried and freeze-dried. The resulting product is satisfactory if the immunoassay control was performed using a panel of known, standard HB-Ag negative and positive sera and agreed and expected results. I.e., the diagnosis must react with HB ₍ Ag-positive sera in 1nuno). In the working line, while no HB _# Ag sera negative observed in Immunoalactrophorase positive responses. The number of controls, recognized as n1n1 | µM, is 15 sera from both groups, it is recommended that the train is conceived, preferably, carried out by a specialist. In the case of diagnostic sera, the sole purpose is to detect HB _and Ag and is not intended to produce pure Ig6 (against the substance), the production process is eliminated in the phase of removing nonspecific antibodies: instead of protein flakes, the same volume of human plasma is added liquid, the mixture is left for 24 hours. The state at * 4 ° C with the resulting immunopropylate is drained. Other stages of production are identical, including irrigation control.

199 802199 802

PŘEDMĚT VYNÁLEZUSUBJECT OF THE INVENTION

Claims

SUBJECT OF THE INVENTION

1. A method of manufacture of a diagnostic for the detection of serum HBgAg / hepatitis B surface antigenuZ and the production of HB Ab _t / protilét> y / wherein tlm.že to human HB * Ag positive serum is obtained from 60 nsjméné positive individuals treated with a solution of chlortetracycline in the presence of Ca The precipitate formed is filtered off and the filtrate is filtered through a layer of dextran or agarose gel. The proportions containing HBt-Ag are thickened and injected into production animals such as pigs, horses, rabbits, guinea pigs, sheep and the serum of immunized animals are treated _with human HBs _with Ag. Negative serum or plasma in a liquid or flocculated state, wherein flocculation is achieved by the successive action of gluteraldehyde and potassium potassium sulphate on the HB _# Ag mixture with negative serum or plasma.

2. A process for the production of diagnostic serum according to claim 1, characterized in that 1 volume of HB-Ag positive serum is treated by adding 0.4 volumes of 1X aqueous chlorotetracycline solution at 20 ° C for 3 to 5 minutes. The 1M calcium chloride was allowed to stand for 30 minutes at 20 ° C, whereupon the protein precipitate was filtered off and the clear filtrate was worked up longer.

3. A method for producing a diagnostic serum under point 2.vyznačený tlm.že filtrate equivalent to 0.1 liters of starting-ο _# HB Ag positive serum is profiltruje layer 60x3 cm suspension dextran or agarose gelu.přičemž is collected aliquots into 5 ml of the doby.než Intensive yellow liquid containing lortetracycline bound to serum proteins.

4. A method for the production of diagnostic serum according to claim 3, characterized in that the individual portions of the filtrate are analyzed for HBgAg content. The positive portions are combined. Concentrate to a volume of 10 ml and inject the production animals.

5. A method for producing the diagnostic serum according to item 4, characterized in that 1 ml of concentrated HB _# Ag ee is injected intramuscularly into pigs in different places. Injection is repeated twice at three-week intervals, at the same time immunizing a group of at least ten animals.

6. The method of production of the diagnostic serum according to point 5. indicated by the buffer, i.e. within a week to 10 days after the last injection of HB _# Ag, the animals are bled and the blood is left to rest for several hours, after which serum is separated, serum is separated from the cells by centrifugation. The animals are combined and the resulting volume is measured.

7th pressurized feed vessels producing a diagnostic serum according to claim 6, characterized in that the diagnostic zvářeciho serum from the serum obtained by adding the volume of human HB consent _of Ag negative plasma or sérs.vyvločkovaných glutaraldehyde and sodium hlínitodraselným.

8. The method of claim 7, wherein the flocculation of human HBgAg negative plasma or ee is achieved by adding 0.012 volume of 25X gluteraldehyde solution at 20 DEG C. followed by 0.24 volume of 10X potassium potassium sulphate solution. washed with excess distilled water e 0.15 M sodium chloride for 24 to 48 hours at * 4 ° C, separated

1SS 802 sc altco from washing liquid and transferred to animal serum.

9. A method for producing a diagnostic serum according to claim 8, vyznalený tlo.la fell in the exclusive use of a diagnostic serum for the detection _of Ag and HB not producing HB Ab _g / prot1látky /, yielding diagnostic Aero zc animal serum přldavkao affirmative objaou human HB Ag _g of negative serum or plaque salt is allowed to stand for 24 hours and a week at * 4 ° C and the resulting monoacetate is removed by filtration or centrifugation.