CS199692B2 - Method of photometric determination of hydrogen peroxides - Google Patents
Method of photometric determination of hydrogen peroxides Download PDFInfo
- Publication number
- CS199692B2 CS199692B2 CS777646A CS764677A CS199692B2 CS 199692 B2 CS199692 B2 CS 199692B2 CS 777646 A CS777646 A CS 777646A CS 764677 A CS764677 A CS 764677A CS 199692 B2 CS199692 B2 CS 199692B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- determination
- cholesterol
- concentration
- protein
- sample
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 150000004680 hydrogen peroxides Chemical class 0.000 title 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 11
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 11
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 150000002432 hydroperoxides Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- ODWNBAWYDSWOAF-UHFFFAOYSA-N 2,4,4-trimethylpentan-2-yloxybenzene Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)OC1=CC=CC=C1 ODWNBAWYDSWOAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 30
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 description 11
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 11
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 description 11
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- WRTMQOHKMFDUKX-UHFFFAOYSA-N triiodide Chemical compound I[I-]I WRTMQOHKMFDUKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 description 4
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 4
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 4
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 4
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 4
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical compound C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M potassium fluoride Chemical compound [F-].[K+] NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 3
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 3
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 description 2
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 description 2
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000004312 hexamethylene tetramine Substances 0.000 description 2
- 235000010299 hexamethylene tetramine Nutrition 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N molybdate Chemical compound [O-][Mo]([O-])(=O)=O MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 239000011698 potassium fluoride Substances 0.000 description 2
- 235000003270 potassium fluoride Nutrition 0.000 description 2
- ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M potassium thiocyanate Chemical compound [K+].[S-]C#N ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940116357 potassium thiocyanate Drugs 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- CMZUMMUJMWNLFH-UHFFFAOYSA-N sodium metavanadate Chemical compound [Na+].[O-][V](=O)=O CMZUMMUJMWNLFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N sodium tungstate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][W]([O-])(=O)=O XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 2
- 229910000166 zirconium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- XZXYQEHISUMZAT-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-hydroxy-5-methylphenyl)methyl]-4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C(CC=2C(=CC=C(C)C=2)O)=C1 XZXYQEHISUMZAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229940107816 ammonium iodide Drugs 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- VLAPMBHFAWRUQP-UHFFFAOYSA-L molybdic acid Chemical class O[Mo](O)(=O)=O VLAPMBHFAWRUQP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBYZMCDFOULPGH-UHFFFAOYSA-N tungstate Chemical compound [O-][W]([O-])(=O)=O PBYZMCDFOULPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L tungstic acid Chemical class O[W](O)(=O)=O CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LSGOVYNHVSXFFJ-UHFFFAOYSA-N vanadate(3-) Chemical compound [O-][V]([O-])([O-])=O LSGOVYNHVSXFFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEVDHBJGNOKKO-UHFFFAOYSA-K vanadic acid Chemical class O[V](O)(O)=O WQEVDHBJGNOKKO-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/904—Oxidation - reduction indicators
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu fotometrického stanovení hydroperoxidů nebo látek, které reagují při uvolnění hydroperoxidů, v tekutinách obsahujících bílkovinu. Stanovení hydroperoxidů, zvláště peroxidu vodíku, hraje důležitou roli v klinické chemii. Mnohá enzymatická stanovení substrátu se provádějí axidázami, například cholesterol oxidázou cholesterolu, glukóza oxidázou glukózy, aminokyseliny oxidázou aminokyseliny, kyselina močová urikázou atd. Peroxid vodíku, vzniklý při těchto reakcích v ekvimolárních množstvích, se může stanovit známým způsobem elektrochemicky nebo fotometricky. Přitom jsou elektrochemické způsoby pro nutnost speciálních aparatur a jejich poruchovost nevýhodné. Výhodnější a rozšířenější jsou fotometrické metody.
Jedna z nejznámějších fotometrických metod stanovení spočívá v oxidaci určitého chromogenu peroxidem vodíku na barvivo za použití katalysátoru·. Ve spojitosti se stanovením glukózy jsou známé jako katalysátory peroxidáza a systémy jodid/molybdenan/DAS č. 1 284 124), jodid/vanadičnan (DOS č. 1598 828) a jodid/wolframan (DOS č. 2 163 421).
Z Anal. Chem. 34, 452 (1962) je dále známé stanovení glukózy, při kterém se vzniklý trijodid změří přímo fotometricky bez po2 užití chromogenu za přítomnosti katalysátorového systému jodld/molybdenan. Tato metoda má výhodu, že se může využít při spektrofotometrickém stanovení vysoký extinkční koeficient trijodidu (cca 20 cm2/uM), čímž se dosáhne vysoké přesnosti. Současně se potlačují poruchy vyvolané barevnou příměsí ve vzorku. Kromě toho je regenerační roztok velice stabilní a může se proto přechovávat při teplotě místnosti. Je možno se vyvarovat použití kancerogenních a kokancerogenních chromogenů.
Rozhodující nevýhoda těchto metod spočívá v tom, že se musí odstranit ze zkoušených vzorků tělesné tekutiny bílkovina, protože jinak není zabarvení trijodidu stálé. Odstranění bílkoviny, které zabírá mnoho času, ztěžuje však nejen metody stanovení, nýbrž zcela brání použití těchto příznivých metod v případech, kdy není možné odstranění bílkoviny, například při stanovení cholesterolu v tělesných tekutinách, protože cholesterol je vázaný na protein.
Úkolem vynálezu bylo proto zajistit způsob a prostředek k fotometrickému stanovení hydroperoxidů v tekutinách obsahujících bílkovinu na bázi stanovení trijodidu, s jehož pomocí by se bez předchozího odstranění bílkoviny získaly přesné analytické výsledky.
199892
Úkol byl vyřešen tím způsobem, že se použije katalyzátorový systém v koncentraci řádově nižší oproti známým koncentracím společně se stabilizátorem.
Předmětem vynálezu je způsob fotometrického stanovení hydroperoxidů nebo látek, které reagují při uvolnění hydroperoxidů, v tekutinách obsahujících bílkovinu pomocí jodidu rozpustného ve vodě, redox-katalyzátoru a stabilizátoru, který se provádí tak, že se redox-katalyzátor používá v koncentraci 5 až 500 μΜ společně s 5 až 100 mg/1 alespoň jednoho stabilizátoru.
К fotometrickému stanovení hydroperoxidů nebo látek reagujících při uvolnění hydroperoxidů v tekutinách obsahujících bílkovinu, se při způsobu podle vynálezu používá prostředku, který sestává z jodidu rozpustného ve vodě, 5 až 500 μΜ redox-katalyzátoru a 5 až 100 mg/1 alespoň jednoho stabilizátoru.
Neočekávaně se docílilo nízkou koncentrací katalysátoru a přídavkem alespoň jednoho stabilisátoru stálého zabarvení trijodidu v roztoku vzorku také v tělesných tekutinách, ze kterých nebyla odstraněna bílkovina. Tento efekt nastává tehdy, když se jak katalyzátor, tak také stabilizátor použijí v udaném koncentračním rozmezí.
Jako redox-katalyzátor se použijí podle vynálezu sodné, draselné nebo amonné soli molybdenové kyseliny, wolframové kyseliny nebo vanadičné kyseliny, s výhodou molybdenan amonný. Koncentrace se pohybuje v rozmezí 5 až 500 μΜ, přičemž molybdenan amonný se použije v koncentračním rozmezí 5 až 50 μΜ, obzvláště při koncentraci 10 μΜ. Výhodné rozmezí při použití wolframanu sodného je 50 až 200 μΜ a při použití vanadičnanu sodného je 50 až 500 μΜ. V případě výhodného molybdenanu amonného je například koncentrace oproti známému stavu techniky (1 až 10 mM) řádově nižší.
Vhodnými stabilisátory podle vynálezu jsou azid sodný, hexamethylentetramin, fluorid draselný, thiokyanatan draselný, ethylendiamintetraoctová kyselina a/nebo nitrilotrioctová kyselina, s výhodou azid sodný. Použije se buď jeden z uvedených stabilisátorů nebo také směs více stabilisátorů. Koncentrace leží v rozmezí 5 až 100 mg/1. Výhodná koncentrace je asi 10 mg/1.
Jako ve vodě rozpustný jodid se s výhodou použije jodid sodný, draselný nebo amonný. Obzvláště vhodný je jodid draselný, protože není hygroskopický.
Aby enzymatické reakce probíhaly v optimálním rozmezí pH, obsahuje prostředek také pufry, které mohou udržovat pH v rozmezí 6,0 až 7,5. Jako jsou pufry přicházejí v úvahu obvyklé, například fosforečnanové, citrátové, boritanové nebo tris/hydroxymethyl/aminomethanové pufry.
Způsob podle vynálezu je vhodný ke stanovení peroxidu vodíku, látek reagujících při uvolnění peroxidu vodíku a peroxidicky účinných látek v tekutinách obsahujících bílkovinu. Je obzvláště vhodný v případech, ve kterých není možné předchozí odstranění bílkoviny ze zkoušené tekutiny, protože dokazovaná látka je např. vázána na bílkovinu. Důležitým příkladem takové látky je cholesterol v krvi nebo séru.
Při enzymatickém stanovení cholesterolu se musí cholesterol a jeho ester uvolnit z lipopropteinů. To se například může provést pomocí proteázy nebo působením určitých detergentů, kyselinou žlučovou nebo detergentem společně s kyselinou žlučovou. Aby se uvolněný cholesterol a jeho ester uchovaly v roztoku, je zapotřebí rovněž detergentu. Pro stanovení cholesterolu způsobem podle vynálezu je zvláště výhodné použít к tomuto účelu kombinaci detergentů sestávající z polyethylenglykol-mono (1,1,3,3-tetramethylbuty 1) fenyletheru a alkyldimethylbenzylamoniumchloridu s 8 až 20 atomy uhlíku v alkylovém zbytku. Tato kombinace má výhodu v tom, že se ve srovnání s jinými v této souvislosti známými detergenty prakticky nezvýší reagenční nulová hodnota a že se může odstranit přídavek kyseliny žlučové brzdící oxidázu cholesterolu. Kromě toho nastává při použití alkyldimethylbenzylamoniumchloridu již při teplotě místnosti rozklad lipoproteinů, zatímco u známých detergentů je zapotřebí vyšší teploty.
V rámci výhodné kombinace reagencií sestává zvláště výhodný prostředek ke stanovení cholesterolu způsobem podle vynálezu z roztoku obsahujícího pufr a barevné činidlo a z roztoku enzymu:
Roztok pufru a barevného činidla:
až 30 g/1 jodidu draselného, až 50 μΜ molybdenanu amonného, až 15 mg/1 azidu sodného, g/1 polyethylenglykol-mono (1,1,3,3-tetramethylbutyl) fenyletheru,
0,1 g/1 alkyldimethylbenzylamoniumchloridu,
0,1 až 0,5 M pufru o pH 6,2.
Roztok enzymu:
0,2 až 0,6 U/ml esterázy cholesterolu 0,3 až 1,0 U/ml oxidázy cholesterolu.
Při provedení způsobu podle vynálezu se smíchá vzorek séra s roztokem pufru a barevného činidla a přidá se odměřená část enzymového roztoku. Po 15 až 45 minutové inkubační době při vhodné teplotě se změří extinkce vzorku oproti nulové hodnotě při 366 nm.
Enzymový roztok sestává v případě stanovení glukózy z oxidázy glukózy, v případě stanovení aminokyseliny z oxidázy aminoky
В 6 seliny, v případě stanovení kyseliny močové z urikázy atd.
Příklad 1
Stanovení peroxidu vodíku v roztoku obsahujícím bílkovinu
Roztok pufru a barevného činidla:
g/1 jodidu draselného,
2,0 g/1 polyethylenglykol-mono-( 1,1,3,3-tetramethylbutyljfenyletheru,
0,1 g/1 alkyldimethylbenzylamoniuchloridu, mg/1 azidu sodného,
0,2 pufru fosforečnanu draselného o pH 6,2.
ml roztoku pufru a barevného činidla se smíchá s 20 μΐ séra obsahujícího peroxid vodíku, 20 nebo 40 minut se inkubuje při 30 °C a potom se změří při 366 nm extinkce. Zjistí se 100 % použitého množství peroxidu vodíku.
Postup se opakuje s různými koncentracemi molybdenanu amonného a kombinacemi molybdenanu amonného a azidu sodného. Získané výsledky, vyjádřené jako opětovné zjištění použitého množství peroxidu vodíku, jsou uvedeny v tabulce:
μΜ molybdenanu amonného,
| Pokus | Molybdenan amonný (μΜ) | Azid sodný (mg/1) | Opětovné zjištění % | |
| po 20 min | po 40 min | |||
| 1 | 1000 | 1000 | 0 | 0 |
| 2 | —' | — | 83 | 86 |
| 3 | 1000 | — | 89 | 88 |
| 4 | 10 | — | 96 | 95 |
| 5 . | 10 | 10 | 100 | 100 |
Výše uvedené výsledky ukazují, že pouze kombinace podle vynálezu zaručuje za použitých podmínek dostatečně rychlou reakci a stálé zabarvení, a proto je vhodná pro kvantitativní stanovení.
Analogické výsledky se získají, když se použije místo 10 μΜ molybdenanu amonného například 100 μΜ wolframanu sodného nebo 200 μΜ vanadičnanu sodného a místo azidu sodného hexaměthylentetramin, fluorid draselný, thiokyanatan draselný, ethylendiamintetraoctová kyselina a/nebo nitriíotrioctová kyselina.
Příklad 2
Stanovení cholesterolu v séru
Roztok pufru a barevného činidla je stejný, jak popsáno v příkladu 1. Enzymový roztok sestává z 0,4 U/ml esterázy cholesterolu a 0,6 U/ml oxidázy cholesterolu.
ml roztoku pufru a barevného činidla se smíchá s 20 μΐ séra známé koncentrace cholesterolu. К 1 ml této směsi se odpipetuje 50 μΐ enzymového roztoku, smíchá se a 20 nebo 40 minut se inkubuje při 30 °C. Potom se změří při 366 nm extinkce vzorku oproti nulové hodnotě. Zjistí se 100 °/o použitého množství cholesterolu. Obsah cholesterolu séra se vypočítá ze vztahu:
Obsah cholesterolu [mg/100 ml] = Δ E.440
Kalibrační faktor se zjistí měřením s primárním standardem.
Analogicky, podle příkladu 1, se opakuje postup s různými koncentracemi molybdenanu amonného a směsmi s azidem sodným. Získané výsledky, vyjádřené jako opětovné zjištění použitého množství cholesterolu v procentech, jsou uvedeny v tabulce:
| Pokus | Molybdenan amonný (μΜ) | Azid sodný (mg/1) | Opětovné zjištění % | |
| po 20 min | po 40 min | |||
| 1 | 1000 | 1000 | 0 | 0 |
| 2 | — | — | 91 | 98 |
| 3 | 1000 | — | 92 | 90 |
| 4 | 10 | — | 93 | 91 |
| 5 | 10 | 10 | 100 * | 100 |
Uvedené výsledky ukazují, že pouze kombinace podle vynálezu zaručuje za použitých podmínek dostatečně rychlou reakci a stálé zabarvení, a proto je vhodná pro kvantitativní stanovení cholesterolu.
Analogické výsledky se získají při stanovení glukózy s oxidázou glukózy, stanovení aminokyseliny s dxidázou aminokyseliny a stanovení kyseliny močové s urikázou.
Příklad 3
Reakční roztok sestává analogicky podle příkladu 1 z roztoku pufru a barevného činidla s přídavkem 10 U/ml oxidázy glukózy. Vzorky se zředí 1 + 10 fysiologickým roztokem kuchyňské soli. К 1 ml reakčního roztoku se přidá 50 μΐ zředěného vzorku a inkubuje se při 25 °C. Po inkubaci se změří při 366 nm extinkce vzorku. Koncentrace se vypočítá srovnáním s primárním standardem glukózy (2,0 g/1):
Stanovení glukózy v roztoku obsahujícím bílkovinu x , 2,0 x extinkce vzorku
Koncentrace ve vzorku — ———---—τ— --extinkce standardu
Měřením po různých inkubačních dobách byla přezkoušena na základě více vzorků stálost zabarvení:
Inkubační
Nalezená koncentrace glukózy
| doba (min | ) vzorek 1 | vzorek 2 | (g/D vzorek 3 | vzorek 4 | vzorek 5 |
| 15 | 0,896 | 0,950 | 0,979 | 1,064 | 2,223 |
| 20 | 0,903 | 0,952 | 0,982 | 1,077 | 2,218 |
| 25 | 0,900 | 0,958 | 0,991 | 1,079 | 2,216 |
| 30 | 0,904 | 0,959 | 0,992 | 1,087 | 2,212 |
| Vzorky 2 a 3 byly dvěma kontrolními séry obvyklými v obchodě, u kterých byla stáno- | véna referenční metodou koncentrace glukózy 0,95 nebol 0,988 (g/1). |
PŘEDMĚT VYNALEZU
Claims (2)
1. Způsob fotometrického stanovení hydroperoxidů nebo látek reagujících při uvolnění hydroperoxidů v tekutinách obsahdjíích bílkovinu pomocí ve vodě rozpustného jodidu, redox-katalyzátoru a stabilizátoru, vyznačený tím, že se stanovení provádí s redoixkatalyzátorem použitým v koncentraci 5 až 500 μΜ společně s 5 až 100 mg/1 alespoň jednoho stabilizátoru.
2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se stanovení provádí za přítomnosti polyethylenglykol-mono (1,1,3,3-tetramethylbutyljfenyletheru a alkyldimethylbenzylamoniumchloridu s 8 až 20 atomy uhlíku v alkylovém zbytku.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2653537A DE2653537C3 (de) | 1976-11-25 | 1976-11-25 | Verfahren und Mittel zur Bestimmung von Hydroperoxiden |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199692B2 true CS199692B2 (en) | 1980-07-31 |
Family
ID=5993943
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS777646A CS199692B2 (en) | 1976-11-25 | 1977-11-21 | Method of photometric determination of hydrogen peroxides |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4143080A (cs) |
| JP (1) | JPS5387291A (cs) |
| BE (1) | BE861100A (cs) |
| CH (1) | CH632092A5 (cs) |
| CS (1) | CS199692B2 (cs) |
| DD (1) | DD133594A5 (cs) |
| DE (1) | DE2653537C3 (cs) |
| FR (1) | FR2372426B1 (cs) |
| GB (1) | GB1538682A (cs) |
| IL (1) | IL53438A (cs) |
| IT (1) | IT1090445B (cs) |
| NL (1) | NL7712960A (cs) |
| SE (1) | SE426624B (cs) |
| ZA (1) | ZA777023B (cs) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2839433A1 (de) * | 1978-09-11 | 1980-03-20 | Merck Patent Gmbh | Waessrige lipid-standardloesung und verfahren zu ihrer herstellung |
| DE3012314A1 (de) * | 1980-03-29 | 1981-10-15 | W. Schlafhorst & Co, 4050 Mönchengladbach | Offenend-spinnvorrichtung |
| ATE8912T1 (de) * | 1980-07-10 | 1984-08-15 | Ivan Endre Modrovich | Stabilisierte enzymatische loesungen und verfahren zum bestimmen von gesamtcholesterin im menschlichen serum. |
| US4409326A (en) * | 1980-07-10 | 1983-10-11 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized enzymatic solutions and method for determining total cholesterol in human serum |
| US5047327A (en) * | 1982-04-02 | 1991-09-10 | Ivan E. Modrovich | Time-stable liquid cholesterol assay compositions |
| EP0108526A3 (en) * | 1982-11-01 | 1984-07-11 | Beckman Instruments, Inc. | Method and reagent for the determination of peroxide and precursors thereof |
| US4615972A (en) * | 1983-11-04 | 1986-10-07 | Immuno Concepts, Inc. | Stabilization of indicators for detecting enzyme activity |
| EP0196743A3 (en) * | 1985-01-31 | 1988-10-19 | Savyon Diagnostics Ltd. | Stable chemical compositions containing chromogenic materials and peroxides, and method for obtaining them |
| CA1277599C (en) * | 1986-10-16 | 1990-12-11 | Barry I. Posner | Vanadium - peroxide compositions as insulin mimickers |
| DE3743224A1 (de) * | 1987-12-19 | 1989-06-29 | Merck Patent Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von persaeuren |
| US4960710A (en) * | 1988-06-06 | 1990-10-02 | Miles Inc. | Device and method of assaying for trace mounts of proteins |
| US5087575A (en) * | 1988-06-06 | 1992-02-11 | Miles Inc. | Composition for determining trace amount of protein |
| SE9003496D0 (sv) * | 1990-11-02 | 1990-11-02 | Eka Nobel Ab | Analysmetod |
| RU2231045C2 (ru) * | 2002-05-20 | 2004-06-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Еврохим-СпбТрейдинг" | Способ измерения концентрации гидропероксидов алкилароматических углеводородов в жидких промышленных потоках |
| CA2950418C (en) * | 2014-05-21 | 2020-04-14 | Spi Technology Ltd. | Apparatus and method for measuring hydrogen peroxide in water |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT630626A (cs) * | 1959-05-15 | |||
| BE627415A (cs) * | 1962-01-24 | |||
| FR1344835A (fr) * | 1962-01-24 | 1963-11-29 | Miles Lab | Composition perfectionnée pour doser et déceler le glucose dans les fluides biologiques |
| FR1394690A (fr) * | 1963-06-10 | 1965-04-02 | Miles Lab | Indicateur pour la détection du peroxyde d'hydrogène |
| US3335069A (en) * | 1964-12-14 | 1967-08-08 | Miles Lab | Composition and method for determining uric acid |
| US3404069A (en) * | 1965-03-10 | 1968-10-01 | Bioconsultants Inc | Method for measuring the glucose content of blood serum |
| CH522222A (de) * | 1967-03-10 | 1972-06-15 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur Bestimmung von Wasserstoffperoxid und Mittel zur Durchführung des Verfahrens |
| DE1598828A1 (de) * | 1967-03-10 | 1971-04-01 | Merck Anlagen Gmbh | Neues Mittel zur Glukosebestimmung |
| JPS5033795B1 (cs) * | 1970-11-25 | 1975-11-04 | ||
| US3654180A (en) * | 1971-03-01 | 1972-04-04 | Miles Lab | Indicator for detecting hydrogen peroxide and peroxidative compounds containing alpha naphthoflavone |
| DE2264847C2 (de) | 1972-05-17 | 1978-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Cholesterin |
| US4040908A (en) * | 1976-03-12 | 1977-08-09 | Children's Hospital Medical Center | Polarographic analysis of cholesterol and other macromolecular substances |
-
1976
- 1976-11-25 DE DE2653537A patent/DE2653537C3/de not_active Expired
-
1977
- 1977-11-11 US US05/850,523 patent/US4143080A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-11-21 CS CS777646A patent/CS199692B2/cs unknown
- 1977-11-22 IL IL53438A patent/IL53438A/xx unknown
- 1977-11-23 DD DD7700202216A patent/DD133594A5/xx unknown
- 1977-11-23 BE BE182851A patent/BE861100A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-11-23 IT IT51916/77A patent/IT1090445B/it active
- 1977-11-23 FR FR7735162A patent/FR2372426B1/fr not_active Expired
- 1977-11-24 CH CH1441177A patent/CH632092A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-11-24 SE SE7713306A patent/SE426624B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-11-24 JP JP14146877A patent/JPS5387291A/ja active Pending
- 1977-11-24 NL NL7712960A patent/NL7712960A/xx not_active Application Discontinuation
- 1977-11-25 GB GB49248/77A patent/GB1538682A/en not_active Expired
- 1977-11-25 ZA ZA00777023A patent/ZA777023B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2653537A1 (de) | 1978-06-01 |
| FR2372426A1 (cs) | 1978-06-23 |
| US4143080A (en) | 1979-03-06 |
| DD133594A5 (de) | 1979-01-10 |
| GB1538682A (en) | 1979-01-24 |
| NL7712960A (nl) | 1978-05-29 |
| CH632092A5 (de) | 1982-09-15 |
| FR2372426B1 (cs) | 1984-02-03 |
| JPS5387291A (en) | 1978-08-01 |
| SE7713306L (sv) | 1978-05-26 |
| IT1090445B (it) | 1985-06-26 |
| IL53438A0 (en) | 1978-01-31 |
| ZA777023B (en) | 1978-09-27 |
| IL53438A (en) | 1980-11-30 |
| DE2653537B2 (de) | 1978-12-21 |
| SE426624B (sv) | 1983-01-31 |
| DE2653537C3 (de) | 1979-08-23 |
| BE861100A (fr) | 1978-05-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2052819C1 (ru) | Способ определения электрононасыщенного ароматического амина, являющегося маркером содержания аналита в биологической жидкости, и средство для его осуществления | |
| US4517287A (en) | Method and reagent for the enzymatic determination of enzyme substrates | |
| CS199692B2 (en) | Method of photometric determination of hydrogen peroxides | |
| JPS61146196A (ja) | Ｈ↓２ｏ↓２の測色的測定を改善するための方法び試薬 | |
| Noma et al. | Polarographic method for rapid microdetermination of cholesterol with cholesterol esterase and cholesterol oxidase. | |
| EP0575515B1 (en) | Stabilization of enzyme containing reagent composition for determination of an analyte | |
| JPS6324900A (ja) | グルコ−ス定量用安定化液体酵素組成物、それを用いる試薬キット及び定量方法 | |
| JP6817135B2 (ja) | 糖化タンパク質の分析方法、分析試薬、分析キットおよび分析用試験片 | |
| KR100682082B1 (ko) | 생체시료성분의 측정방법 | |
| EP1288306B1 (en) | Method of analyzing components in biological samples | |
| EP0463755A1 (en) | Stable aqueous NADH reagent and kit | |
| EP0100217B1 (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| EP2108703B1 (en) | Method for bilirubin determination and analytical instrument used for bilirubin determination | |
| Kayamori et al. | Enzymatic method for assaying calcium in serum and urine with porcine pancreatic alpha-amylase | |
| EP0657545B1 (en) | Assay method for biological components | |
| US6114134A (en) | Method for assaying biological specimens for substances contained in the components thereof and reagent to be used in this method | |
| JP2955443B2 (ja) | 分析要素及び分析物の検出方法 | |
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| EP0586397B1 (en) | Improved method and reagent for determination of an analyte | |
| JP2619222B2 (ja) | 血液試料または血液由来の試料中のフルクトサミン含量を測定するための試薬と方法 | |
| JP2002508519A (ja) | リポ蛋白質に含有されるトリグリセリドの測定のための手続および診断用製品 | |
| EP0811844B1 (en) | Reagent composition, testing piece and assay kit | |
| EP3239709B1 (en) | Method of analyzing glycated protein; use of analysis reagent, analysis kit, and test piece for analysis | |
| JP6891368B2 (ja) | アミラーゼ活性測定試薬及びアミラーゼ活性測定方法 | |
| JPH0635966B2 (ja) | チオール化合物を検出するのに有用な分析試薬、及びそれを用いた検出方法 |