CS199095B1

CS199095B1 - Antiviral agent

Info

Publication number: CS199095B1
Application number: CS786066A
Authority: CS
Inventors: Antonin Holy; Erik Declercq
Original assignee: Antonin Holy; Erik Declercq
Priority date: 1977-10-20
Filing date: 1978-09-20
Publication date: 1980-07-31
Also published as: JPS5480427A; CS199093B1; JPS6140206B2; CH642543A5; DE2845762C2; DE2845762A1

Description

Vynález se týká léčebného prostředku s antivirálním účinkem.

Některé nukleosldové deriváty, tj. cukerné deriváty heterocyklických sloučenin vykazují antivirální účinek. Tak např. ' 9-( (1 -D-arabinofuranosyl) adenin· (v daléím araA) má výraznou ^účinnost ^proti DNK-virům nebo rlbavirin (l-⁽ /З-D-ribffuaanosyl )-1,2,4-triazol-3-karboxamid) má'širokou antivirální účinnost na' některé RNK- i DNK-viry (Science 177 , 705 /1972/; Chemotherapy 21, 505 (1975)). Náklady na výrobu těchto léčiv vzhledem ke složitosti přípravy jsou značné a jejich použití je značné omezeno úzkým rozsahem koncentrací, v nichž ’ mohou být aplikovány vzhledem k jejich toxicitě a odbourávání v organismu.

^Tyto nevý^ho^dy ods^tranuje l^éče^bný prostfefck ' podle wná^.ezu, jeho^{ž p}ods^tatou je, že obsahuje jako aktivní složku směs (S)- nebo (RS)-9-(2,3-dihydroxypropyl)adenin vzorce I

199 095 (I)

199 095 β 9-( . -D-erabinofuгanoeyi) adeninem vzorce II

(II) a to v poměru 1 : 1 . až 1000 : 1- sloučeniny vzorce I ku sloučenině vzorce II.

^Účinné netoxⁱckě koncentrace ak^vní s^žky jsou ^0,1 mg do ¹⁰⁰⁰ mg/kg žiy^é hmotnosti při Jedné dávce, přičemž ' obsah aktivní složky vzhledem k farmaucetickému nosiči může být v rozsahu 0,1 až 100 % hmotnostních.

Postup přípravy (S)-enantiomeru i racemické (RS) - formy látky vzorce I (v dalěím . S-DHPA nebo RS-DHPA) Je znám.

Obě sloučeniny mohou být připraveny reakcí l~0-p~tolueneulfonyl-2,3-0-isopropyliden-D-(nebo -DL-)-glyčeřinu vzorce III p-CH₃ C₆H₄SO₂ 0 CH v

/ \ HjC · CH₃ (III) se sodnou solí adentau v dime^thyl^formam^idu ^při 100 °C a varem vzn^iklého mez^rodu^u s £056 kyselinou octovou (Collection . Czech. Chem. Commun. 40, 187 /1975/). Ták např. se 11,4 - g (40 mmol) látky vzorce III a 7,8 sodné soli adeninu (50 mmol) zahřívá v dimethy1^formamidu ⁽1°°- ml^{) 8} h na 100 °C , odpa^ se ve va^kuu . a zby^k: kr^ys^taluje z . meWanolu. Získaný produkt ' se vaří lha 8(56 kyselinou octovou, odpaří ve vakuu, odparek odpaří třikrát s- 50 ml ethanolu a zbytek ee krystaluje z methanolu. Získá se 50 až 60 56 (S)n^eb^o CRS)-9-(2^,3-dlhydr^oxypr^opyl)adenin^u^. (S)-Forma: b.t. 202 až 203 -35^,4° (c = 1, voda). ⁽RS)-Forma: ^b.t. ^{- 2}°7 a^{ž 208} °C. UV-JSp^to.um ⁽p^H 7)^{: AmnY} = ^{260 nn}^>

' ¹⁴⁰⁰⁰’ ^Arni^{n 3 228 nm}·

Podle.čs. autorského osvědčení 191 656 při kterém se (RS)-forma látky I (RS-DHPA) získá zahříváním adeninu s ^-cykllckým - karbonátem glycerinu vzorce IV

CH^-CH-OLOH· l . J \/ (IV) c

II o

a hydroxidem nebo uhličitanem sodným nebo draselným v dírnethyltfcriDaiBidu nebo dioxanu při 80 až 140 °C. Tak např. směs adentau (1,35 ^g, 10 mmoU, glycerta-l^-cy^cMho tartonátu (IV) (2,0 g), uhličitanu sodného (0,3 g) a dimethylformamidu (25 ml) se zahřívá 1 h ve varu, odpaří ve vakuu a zbytek v 50 ml vroucí vody se odbarví aktivním uhlím. Po odpaření ve vakuu se zbytek krystaluje z methanolu; získá se 60 až 70 % (RS)-formy látky I (RS-DHPA), b.t. 205 až 206 °C, UV-s^pektrum (voda): « 2⁶° nrn, = = 14000. Biologickou účinnost.vykazuje·výhradně D-glycero- t.j. (S)-forma.látky vzorce I, kdežto L-glycero-. tj. (R)-forma je zcela neúčinná. Vzhledem k tomu, že racemický (RS)derivát obsahuje 50 % účinné (S)-formy, . je řádově stejně účinný jako (S.)-tnaehiomer.

(S)-DHPA · vzorce I se vyznačuje vysokou antivirální účinností proti,RNK- i DNK-virům a velmi nízkou vlastní toxicitou. Tento účinek je zcela neočekávaný, tím spíše, že další obdobn^é sloučeniny^, bu³ deriváty edentu s jinou a^aUckou s^^ou, např. ⁽RS)-²-hydroxy^pro^py^{i, 2}-^hydroxye^hhy^{i, 2}-amieoe^thУ^i, fit -^DL-αⁱanУⁱ-. (S^)-3,4~^dihy^droxy^bu^hУ^{i, (}RS)-3,4-dihydroxybuhyl, (RS^^-dihydrcxybutyl, (RS)-threo-2.3.4-trlhVdroxvbuh.yi. (RS)-3,5-^dihydroχyptetyi, 3-hydroxypropyl,a 1,3-dihydroxy-2-propyi nebo 2,3-dihydraxypropylderlváty jiných · heterocyklických basí, např. hypoxanthinu, uráčila, cytoainu a thyminu žádnou významnou antivlrál^ až do koncentrace 100^ug/ml nevykazují. Z ostatních příbuzných sloučenin má araA uvedený účinek omezený na DNK-viry a vysoce cytotoxický ribavirin.

(^S)-D^HPA je si^lný inhibitor a^deeosⁱe-deaπú.eae^yr, enz^ymu ve^i rozštten^o v ^bunkách, tkáních a tělních tekutinách. Přitom není (S)-DHPA,ani (RS)-DHPA substrátem adenoein-deaminasy bakteriálních buněk (Seche^eh^ · coli, Salmonella typhimurium), ani buněk králičích ledvin. Adteosiд-dtaeinaaa deamleujt, např. zmíněný araA na neúčinný derivát hypoxanthinový (Ann. N. Ϊ. Acad· Sel. 284. 60/1977), omezuje tak jeho použití jako virottahlka. Látka S-DHPA a RS-DHPA tento proces inhibuje a·působí proto v synergismu s araA antivirálním účinkem výrazně .zvýšeným ve srovnání · 8 oběma účinnými látkami samotým^ ^t.j. obdobně Jako např. ⁰0-virⁱdаrа^bin ((R⁾-^3-(²-deoxy- ^{fi -}D-trУ^thro-pen^ho^furαeosyl)-3,6,7,t-hehrahy^droimi^dazo~(4,5d)-(l,³-diazθpin-8-ol): · viz Ann. N. Y. Acad. Sci. 284. 9 (1977) a 284. 60 (1977) - viz dále Tabulka 1.

Výhodou předmětného léčiva je snížení obsahu účinné látky araA při dosažení stejného antivirového · účinku, a to v důeledku · synergického působení (S)- nebo (RS)-DHPA a tím i snížení toxicity . preparátu vyvolané araA.

/ ?

Další výhodou je poměrně jednoduchá příprava a nízké výrobní náklady látky . vzorce I, která je v kombinaci obou aktivních složek užita v nadbytku.

Farmaceutické preparáty s obsahem' (S)-DHPA nebo (RS)-DHPA a araA jako aktivní složky mohou mít formu pudrů, suspenzí, roztoků, · sprayů, emulsí, mastí a·krémů a mohou být použity pro parenterá^í (iehravteosní, ietrαderπáleí, iehramuekuiární, int^athekální ap.) aplikace nebo pro orální, rektální, iehravαgieáieí a inhrαnatáleí podání nebo lokální · aplikace (lese kožní, slizniční, oční ap.). Tyto preparáty je možno připravit smíšením nebo rozpuštěním účinné látky nebo účinných látek a farmaceuticky potížitenými nosiči k takovým účelům používanými, např. vodnými nebo nevodnými rozpouštědly, stabbli zátory, emu.gátory, dispergátory, látkami stabilisujícími suspense, smáčedly ap.,.vhodnými aditivy (např. polyethylenglykoly).a v případě potřeby i s barvivý nebo aromaaisujícímb látkami. Preparáty mohou obsahovat různou koncentraci aktivní složky podle povahy podání a podle povahy onemocnnrní, nejméně však 0,1 a nejvýše 100 % hmoonooSních.

V dalším je biologická účinnost (S)-DHPA nebo (KS)-DHPA s araA osvětlena v příkladech, aniž se tm . jakkoliv ommeuje.

Příklad 1 AaCOvLtIIcí účinek komt>bnace (S)-DHPA a . araA.

Souuvslé jedno^stevné primo kultury bbnnk z Ikállčích leddin. ( PPK-buukk) v Petriho miskách byly ' očookávyv lvenmlVcinit ( 1Л log₁₀ ^cc0D₅q/0,5 dQ/mmeka) po dobu 1 h při 37 °C a poté vyvVsveieylsoSone ( l)-DHPH, aarA 1сПь Ikominacc ( obo l 11o(, i lo v koncentracích 1 až 000 /ig/mil . Kultuyi УуУ( tnkbOvvtyy při. 37 ⁰C a titr vvru stanoven v různých časových intervalech plakovou technikou na PKK-b tukách jako · uvedeno pro virus vesikuiární 80^o/^CÍO.^čV a L-929 /Ví fibroblc80y jak uvedeno v příkladu 1. Výsledky uvedené v Tabulce 1. že . komjb^i^ace (S)-DHPA (ЗО^д/Ш) a araA (3 mg/ml) působí větší pokles tHru viru než kterákoliv z účinných látek samotná (je zhruba o 3 řády účtCjší).

Příklad 2

Inhibiční . účinek (S)hDHPA . na dominaci araA cdeno8ic-dna/itcsot střevní slizince.

Byla pouHta metoda podle . Biochem. J. 152. 681 (1975) spočívající ve apektrofoto mmtrickém měření poklesu a^o^ance araA při ²⁶⁵ . nm. Pro 50 nmol araA ^265 = pro . 100 nmol. araA ~ °>1⁶· ^Výβln^day jsou uvedeny na . obr. 3 a 4^, toeré ^ds^aшmn^cutí^, že . inhibice štěpení araA vlivem (S-hDHPA je úměrná . ^πο^ηθοί (S)DDHPA.

Hále v Tabulce 1 je. uveden .synergismus . antivirllnmo účinku (S)-9-(2,3-dilydh*oxypropyl) . adenifu a 9-( /?)-D-arcbitsfurctoayl)cdenicu na primokultury buněk králičích ledvin itfakovatýeh virem vakcinie.

Na obr. 1 je znázorněn graf vyjadřující .^ib^ní účinek (S-DDhPA .na nárůst viru yesiktllгtí . atomaitidy v lidských kožních fibroblastech; na ose y je znázorněn titr viru (log10. PFU/iQ), kde PFU . je jednotka tvorby plaků; na ose x je znázorněna doba ..po infekci v hodinách; -·- kontrola, -o- po aplikaci (S)-DHPA:, na obr. 2 je znázorněn graf vyjadřující antivirání účinek . (S)-DHPA na mVích itfakovaných ictrcccsllcё virem vestknU™!. 8tomaitidy; . na ose x je znázorněn počet dní . po infekci; na ose y Je vynesena celková úimtnost. v %; ·-·- -o- (S)-DHPA; na obr. 3 je znázorněna graficky závislost štěpení araA cdetosit-deamincsot. v pří^-^c^m^c^sSi (S)-DHPA; na ose . x Je znázorněna koncentrace (S)dDHPA v ^ig/mi, na ose y polk.es absorbance při A = 265 nm; -·- 50 nmol .

199 095 araA, -o- 100 nmol araA; na obr. 4 Dixonův diagram závislosti Štěpení araA adenosin-deaminasou v přítomnosti (S)-DHPA; na ose x je znázorněna koncentrace (S)-DHPA v^ug/m., na ose y převrácená hodnota počáteční rychlosti štěpení (1/V); = inhibiční konstanta;

-·- 50 nmol araA, -o- nmol araA.

Tabulka 1

Synergismus antivirálnhio účinku (S)-9-(23³-dihydroxyp*opyl)-adenlnu a 9-( β-D-arabinofuranotyl)adeninu na primokuUtury buněk králičích ledvin infikovaných virem vakcinie

Léčebný prostředek	Titr viru (log-Lo m/m.)
doba po infekci (dny)
1	2	3
1. Kootrola (neinkubováno s účinnou látkou)	3,6	5,0	5,3
2. (S)-DHPA (OOjig/ml)	3,6	4,9	5,4
3. araA (3 jig/ml)	2,1	4,0	5,0
4. (S)-DHPA (30^/rnl) + + araA (3 ^íg/ml)	2,0	1,8	2,1

б

188085

Claims

Р 8 Е D Μ É Т VYNALEZU

Léčebný prostředek e antlvirální účinkem, vyznačený tím, že obsahuje jako aktivní složku směs (S)- nebo (RS)-<M2,3-dihydroxypropyl)adeninu vzorce I (I) а 9-( Д -D-arabinofuranoeyl)adeninem vzorce II (II) a to v poměru 1 í 1 až 1000 : 1 sloučeniny vzorce I ku sloučenině vzorce II·

4 výkresy

199 095

----1----Г—I----1----1----1----!-----1-----1

Obr. 1