CS158792A3 - Chemical modification of 3' and/or 4'-oh group elsamycin a - Google Patents

Description

7-92 j > o o 2 e·ro 2 Xh Ní Ní m > ‘o o <ř-

CD Ní

Chemické modifikace 3 a/nebo 4 OH skupin elsamycinu A

Oblast vynálezu

Vynález se týká novýcn derivátů elsamycinu, které majízvýšený protinádorový účinek, jejich výroby, prostředků, kte-ré je obsahují jako účinnou složku a therapeutických metod,využívajících tyto prostředky. úosavadní stav techniky

Slsamycin a je antibiotikum s protinádorovým účinkem,produkované kultivací kmene aktinomycet, produkujícího elsa-mycin λ, označeného jako kmen J907-21 /ATCC 39417/, nebo je-ho mutanty. Slsamycin A projevuje antibakteriální účinek vů-či aerobním gram-pozitivním bakteriím a anaerobním bakteriím.Rovněž vykazuje in vitro a in vivo účinek proti různým buňkámtumoru u myší, zahrnující leukémii P38S, lymfoidní leukémiiL1210 a melanotický melanom B16. Konishi, et al, Elsamicins,new antitumor antibiotics related to cnartreusin. I. Produc-tion, isolation, characterization and antitumor activity, <J.Antibiotics, 39: 784-791, /1986/; US patent č. 4 518 589,Konishi, et al, zvěř. 21.května 1985.

Struktura elsamycinu A /vzorec I uvedený dále/ bylastanovena a ukázala se být v úzkém vztahu k chartreusinu/vzorec II uvedený dále/. Sugawara, et al, Elsamicins A andB, new antitumor antibiotics related to chartreusin. II.Structures of elsamicins A and B. J. Org. Chem., 52: 996-1001, /1987/.

II

Jak elsamycin A tak chartreusin mají týž aglykon, char-tarin, ale obě antibiotika se liší disacharidovým zbytkem.Leach, et al, Chartreusin, a new antibiotic produced by Strep-tomyces chartreusis, a new species, J. Am. Cnem. Soc., 75:4011-4012, /1953/; Beisler, J.A., Chartreusin, a glycosidicantitumor antibiotic for Streptomyces, In progress in Medicí-na! Chemistry, Ed. , G.P. Ellis and G.3.“West 1 9: str. 247-268,Elsevier Biomedical Press ximsterdam, /1982/; Simonitsch, et al,Uber die Struktur des Cnartreusins I, Helv. Chim. Acta, 47:

II 1459-1475, /1964/5 Eisennuth, et al, Uber die Struktur desCnartreusins II, Helv. Chim. hcta, 47: 1475-1484, /1964/.Vzájemná konverze obou sloučenin chemickou cestou nebyla do-sud popsána. Během chemické modifikace elsamycinu A jsme zjistili,že zavedení alkylidenové skupiny na 3- a 4-OH skupiny, nebotetrahydropyranylové skupiny na 4-OH skupinu vedlo u elsamyci-nu A ke zvýšení protinádorového účinku.

Podstata vynálezu Předložený vynález poskytuje nové deriváty elsamycinu A,které vykazují zvýšený protinádorový účinek. Zvláště popisujepředložený vynález chemickou modifikaci 3- a/nebo 4-OH skupinelsamycinu A.

Vynález dále poskytuje protinádorový prostředek, obsahu-jící jako účinnou složku alespoň jeden derivát, vybraný zeskupiny zahrnující deriváty elsamycinu A podle vynálezu. Dále vynález poskytuje způsob léčení rakoviny s použi-tím shorauvedeného protinádorového prostředku. Dále je poskytnut způsob výroby shorauvedeného derivátuelsamycinu A. 4 US patent č. 4 518 5θ9, Konishi et al, popisuje produk-ci a isolaci protinádorového činidla,označeného elsamycin A/vzorec I uvedený shora/. Shorauvedená sloučenina, elsamycin A,je hlavní komponentou fermentace kmene aktinomycet-, produkují-cího elsamycin A, označeného jako kmen J907-21 /aTCC 39 417/.

Nyní bylo podle předloženého vynálezu nalezeno, že che-mickou modifikací na 3- a/nebo 4-OH skupinách elsamycinu Avznikají nové deriváty,mající zvýšený protinádorový účinek.

Deriváty elsamycinu A podle vynálezu mají obecný vzo-rec III a IV uvedený dále

kde Z je alkylidenová, cykloalkylidenová, arylalkylidenová nebo alkoxyalkylidenová skupina. 5

Jak je znázorněno ve schématu 1, prováděla se 3'4-0-alkylidenace elsamycinu A /]_/ reakcí 2 '-N-chráněného elsamyci-nu Á /3 nebo 4/ s dimetnylacetaly příslušného ketonu neboaldehydu, v přítomnosti kyselého katalyzátoru, za vzniku mezi-produktů 5. a 7,s následným odštěpením chránící skupiny, která poskytla 3 ,4 -O-alkylidenové deriváty /6a - 6d/. Deri-vát isopropylidenový /6a/ a benzylidenový /6c/ se rovněž při-pravily z elsamycinu A, ale bez odstranění N-chránící skupi-ny. Jak je znázorněno ve schématu 2, reakce sloučeniny J_ sdihydropyranem,v přítomnosti kyselého katalyzátoru, poskytujesměs per-tetrahydropyrany1/THP/derivátů, které se nechajíreagovat s kyselinou p-toluensulfonovou /TsOH/ v methanolu,za vzniku mono-O-THP derivátu /8/.

Na základě hmotového spektra byla stanovena struktura sloučeniny 8 jako 4 '-O-THP derivát. 6 V tabulce 1 jsou uvedeny sloučeniny podle vynálezu ajejich číselné označení. TABULKA 1

Sloučeniny podle vynálezu a jejich číselné označení

Sloučenina č. název _i_ j2 3 4 5a 5h 5c 6a 6b 6c 6d 7a

Elsamycin A

Cnartreusin

2'*-N-t-butoxykarbonylelsamycin A Z z

2 -N-benzyloxykarbonylelsamycin A Z Z z z

2 -N-t-butoxykarbony1-3 ,4 -O-isopropyl-idenelsamycin A

2''-N-t-butoxykarbony1-3',4 *-0-cyklohexy-lidenelsamycin A

3 *,4z-0-benzyliden-2 *z-N-t-butoxykarbonylelsamycin A Z z

3 ,4 -O-isopropylidenelsamycin A z z

3 ,4 -O-cyklohexylidenelsamycin A Z z 3 ,4 -O-benzylidenelsamycin a Z z

3 ,4 -O-metnoxymethylidenelsamycin A z z z t

2 -N-oenzyloxykarbonyl-3 ,4 -O-isopro-pylidenelsamycin A 7 γ<3 2 *z-N-benzyloxykarbony1-3 ,4 -O-methoxy- methylidenelsamycin a

8 4 '-O-tetrahydropyranylelsamycin A

Schéma 1

Postup synthesy j',4'-O-alkylidenových derivátů elsamycinu A

8

Schéma 1 /'pokračování/ 1} Ct-BOCDsO/NEtg

•43 TsOH oř TFA

5) H2/Pd-C z: ω "·χ O) CX c^O-X Cd3 CHs°CHx

Schéma 2

Příprava 4 '-O-tetrahydropyranylelsamyčinu A

8 - 9 -

Protinádorový účinek 3 - a/nebo 4 -O-modifikovaných derivátůelsamycinu A Pět 3 - a/nebo 4 -O-modifikovaných derivátů elsamycinu Abylo syntetizováno a následně testováno ve srovnání s původní/materskou/ sloučeninou na protinádorové účinky in vitro ain vivo.

Pro zkoušku cytotoxicity in vitro se vypěstovaly buňkymyšího melanomu B16-F10 a udržovaly se v minimálním esenciál-ním mediu podle Eaglea /Nissui/, které obsahuje 60 yug/mlkanamycinu, doplněné tepelně inaktivovaným fetálním telecímsérem /10 %/ a neesenciálními aminokyselinami /0,6 %/ při37 °C ve zvlhčené atmosféře v 5 % CO2 inkubátoru. Exponenciál-ně rostoucí buňky 316-F10 se shromáždily, spočítaly a suspen-dovaly v kultivačním mediu v koncentraci 2,0 x 10^ buněk/ml.Buněčná suspenze /180 yul/' se pěstovala v jamkách 96 jamkovémikrotitrační destičky a inkubovala se 24 hodin. Testovanésloučeniny /20 yul/ se přidaly do jamek a destičky se dáleinkubovaly 72 hodin. Cytotoxický účinek se stanovil kolorimet-ricky při 540 nm po obarvení životaschopných buněk neutrálnímčerveným roztokem. Všechny testované 3*- a/nebo 4*-0-modifiko-vané deriváty elsamycinu A vykázaly velmi silnou cytotoxicituvůči buňkám B16-F1 0 s hodnotami ΙΟ^θ 0,025 - 0,07 /Ug/ml/tabulka 2/.

Protinádorový účinek in vivo pěti shorauvedených derivá-tů se testoval v systémech lymfocytární leukemie P 388 a mela-nomu B16. Samice myší CDF1 /pro P 388/ a samci myší BDF1 /proB16/ se naočkovali ip injekcí 10^ buněk P 388 a 0,5 ml 10 %B16 suspenze na myš /den 0/. Testované sloučeniny se podávalymyším intraperitoneálně jedenkrát denně první až třetí den/Q1D x 3/ u systému P 388 nebo jedenkrát denně ve dnech 1, 5a 9 /Q4D x 3/u systému 316 a zvířata byla pozorována 45 dní. fc-v. _ 1 ( - 10 -

Percentuální vzrůst střední doby přežití /MST/ ošetře-ných zvířat ve srovnání s neošetřenou kontrolou byla stanove-na a označena Jako T/C %. Sloučeniny vykazující hodnoty T/C % 1 25 nebo vyšší jsou hodnoceny jako sloučeniny s výrazným pro- tinádorovým. účinkem. Jak je ukázáno v tabulce 2, byl ze shorauvedených pěti derivátů nejzajímavější sloučeninou v systému P 388 4 -O-tetranydropyranylelsamyein A /8/. Vykazujetrojnásobně účinnější minimální účinnou dávku /MED/ než elsa-mycin A a vysoká hodnoty T/C %. 3 ,4 -O-Isopropylidenelsamy- cin a /6a/, 3 ,4 -O-benzylidenelsamycin A /6 c/ a 3 ,4 -O-met-hoxymethylidenelsamycin A /6<1/ byly stejně účinné jako mateř-ské sloučeniny v údajích MSB. V systému 816 vykázalo všech pět testovaných derivátů dobrou reakci na tumor /tabulka 3/.Podobně jako u výsledků v systému P 38* ,uyla sloučenina 8 lep-ší než elsamycin A /\_/ v údajích MED a T/C %fhodnotéch« Veskupinách, kde se testovala tato sloučenina v dávce 3~20 mg/kg/den, byla pozorována 50. den některá, přežívající zvířata. Rovněž sloučenina 6d poskytlaneobyčejně silný therapeutický účinek s hodnotami T/C % pr-idávce 3 a 10 mg/kg/den vyššími než elsamycin A /1/. TABULKA 2

In vitro cytotoxieita proti melanomu B1 6 a in vivo protinádorový účinek proti leukémii P 388 u myší. rí!>J*r/T-Mv..;, -.i.:—. ;·,·· tat^uu—aáca*jv , / i . -11- slouč 6a V“3 /CH3 cyto toxicita '50 7/ 0.025

T/C % MST

+T IC50 //Ug/ml/ 20+£ϊ 10 3 1 0,3 0,1 210 170 140 120 6b

0.04 165 175 140 120 6c C6H5 0.07 Tox 180 165 150 130 110 6d OCHg 0.05 Tox 224 167 167 137 124 0.04 Tox 225 190 168 145 130

Elsamicin A (i) 0.03 Tox 190 180 155 140 123 +1 střední doba přežití ve dnech+2 dávka v mg/kg/den, Q1D x 3 ip

6 1 2 Ί’/ C /č τ 1 slouč. s o + 2 ií. v 0 1 0,3 k/' , i 5a S2 ' 0 7* ✓ 1 56 1 1 6 1 05 ó_b -m ,λ λ C. J !v • ‘i’ s; ‘ i S ! -i £. 1 1 1 6c i 86 179 1 35 1 1 4 1 21 6d 333 283 1 57 137 1 20 /3/4/+3 ε 370 330 ά c 1 248 1 133 /3/4/ /2/4/ /1/4/ 1 1 298 21 5 179 Λ · Ά í ' 'M 1 1 6 /2/1 2/ /2/ i 2/ i-1. střední doba přežití ve dnech+ 2 dávka v mg/kg/den, Q4D x 3 ip+3 počet přeživších/testovaných 5O.den Předložený vynález zahrnuje ve svém rozsanu způsoo vý-Oby derivátů elsamycinu A podle vynálezu.

Dalším aspektem vynálezu jsou farmaceutické kompozice, které obsahují účinné, tumor innibující množství sloučeniny vzorce III nebo IV v kombinaci s inertním, farmaceuticky přijatelným nosičem něco ředidlem.

Pcdle calsísic aspektu vynálezu je nalezen, způsob léčeníživočicnů, zejména savci, zasažených tumorem, který sccčíváv podávaní účinné, tumor innibující dávky antibiotika, slouče-niny vzorce 111 necc IV, postiženému pacientovi. -rnx_auy vnoonycn Kompozic zanrnu;rslní aplikaci, jako jsou tablety, ‘ori itsy, mraze ky a granule, kapalná prostředky pro orální apiik: jsou roztoky, suspenze, sirupy a elixíry a enteralm apiixaci, jako jsou steriřco emulze, říčnou být rovněž zpracov;pevných kompozic, která se mohou ro:fyziologickém roztoku neoo některém jiném sterilním mediuvhodném pro injekce těsně před použitím. 'avky pro ni roztcmy, suspenze ne— • -» r ' ny co zormy steriimcn pus 111 ve s terilní vodě,

Je samozřejmé, že aktuální preferov;vatu ezsanycmu a pouze vynálezu se mze ςs_ouoemny, poule soužíte zorný prostreu.-r •ne usvxovani uen-:ěnit oodle ooužité

ZpUSOOU 'Sp. a poule komretm situace, druhu hostitele a choroby, která se léčí. Je třeba, aoy odoornix v oooru ora^. -fixují působení léčiva, například věk,hlaví, stravu, dobu podávání, .vanu mnone

Která moai- ;eiesnou nmctnos' •ycnlost vyzucovam,pacienta, kombinace léků, senzitivní reakci a obtížnost one-mocnění. Podávání se může provádět plynule neoo periodickyv mezích maximálně tolerované dávky. Jptimální aplikační dáv-ky pro daný soubor podmínek mo/ioubýt odborníkem v oboru ur-čeny okamžitě,na základě konvenčního testu pro určení dávky. Předložený vynález je ilustrován následujícími příklady,které však nemají limitující cnarakter pro rozsah tohoto vy-nálezu. ze jsou objasněny příklady specifickým syntnez mezi- 14 produktů 3 - 5c, 7a a 7d, z kterýchžto meziproduktů se synthe-tizují výše uvedenými postupy sloučeniny podle vynálezu 6a -6d a 8. Příklady provedení vynálezu Příklad 1

Synthesa 2''-N-t-butoxykarbonylelsamycinu A /3/

Směs 653 mg /1 mmol/ elsamycinu 348 mg /1,6 mmol/'di-t-butyldikarbonátu a 0,14 ml /1 mmol/ triethylaminu v 10ml dioxanu se míchala při teplotě místnosti přes noc. Reakčnísměs se odpařila ve vakuu, čímž se získal polokrystalický zby-tek, který se rekrystaloval ze směsi dichlormethanu a etheruza vzniku 768 mg /100 %/ sloučeniny 3 ve formě nažloutléhokrystalického prášku. £t.183 - 184 °C. IR . /KBr/ ca'1 3410, 1700, 1505, 1370, 1255, 1120, 1065,875, 780. UV Λ /MeOH nm /£/ 236 /38300/, 266 /37800/, 333 /6180/, 380 /8770/, 400 /14500/, 423 /15900/. 1H NMR /CDG13/ 0,73 /9H, široké s/, 1,31 /3H, d, J= 7,0 Hz/, 1,36 /3H, s/, 1,39 /3H, d, J= 6 Hz/, 2,68/3H, s/, 3,35 /3H, s/, 5,37 /1H, d, J= 8,0 Hz/,4,66 /1H, d, J= 4 Hz/, 8,18 /1H, dd, J= 8,0a 1,5 Hz/, 11,59 /1H, s/.

Analýza vypočteno pro C^gK^NO,^ x H^O C 59,14 H 5,68 N 1,81nalezeno C 59,12 H 6,06 N 2,27 15 Příklad 2 Z z

Synthesa 2 -N-benzyloxykaroonyleisainycinu A /4/ K míchané suspenzi 653 mg elsamycinu A a 0,14 ml tri-ethylaminu v 10 ml dioxanu se přidalo 334 mg N-benzyloxykarbo-nyloxy-5-norbornen-2,3-dikarboxamidu. Heakční směs se mícha-la přes noc při teplotě místnosti a odpařila se ve vakuu.

Zbytek se rozpustil v dichlormethanu a roztok se promyl zře-děným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a na-syceným vodným roztokem chloridu sodného postupně v uvedenémpořadí, vysušil se pomocí síranu horečnatého a zahustil zasníženého tlaku, čímž se získala žlutá látka. Zbytek se chro-matograřoval na silikagelovém sloupci /Wakogel C-20Q, 21 x 80mm/ s použitím směsi 2 % MeOH/CHCl^ jako elučního Činidla.Získalo se 772 mg /98 %/ titulní sloučeniny. T.t. 166 - 167 °C. IR >>max /KBr/ cm"1 1730, 1695, 1510, 1380, 1260, 1240, 1150,1070, 785. UV ^max /Me0H 11111 236 /38900/, 266 /38500/, 335 /6480/, 381 /9190/, 401 /15300/, 423 /16600/. 1H NMR /CDCl3/cfl,32 /3H, d, J= 6 Hz/, 1,38 /3H, s/, 2,74 /3H,s/, 3,36 /3H, s/, 5,39 /ΊΗ, d, J= 8 Hz/, 5,74/1H, d, J= 4 Hz/, 8,08 /1H, dd, J= 8 a 1,5 Hz/,11,41 /1H, s/.

Analýza vypočteno pro C^H^NO^ x 1/2 H2O: C 61,80, H 5,31, N 1,76nalezeno: C 61,92, H 5,14, N 2,23 Příklad 3

Synthesa 2'*-N-t-butoxykarbonyl-3',4*-0-isopropylidenelsamy-cinu a /5a/' 16 K roztoku 200 mg sloučeniny 3. a 1,2 ml 2,2-dimethoxy-propanu ve 4 ml suchého dichlormethanu se přidalo 5 mg TsOHa směs se udržovala přes noc při teplotě místnosti. K reakčnísměsi se přidal nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sod-ného a organická vrstva odebrala, vysušila pomocí síranu ho-řečnatého a odpařila se ve vakuu, čímž se získalo 190 mg /90 %/titulní sloučeniny ve formě žluté pevné látky. T.t. 168 - 169 °C. IR ^max /K3r/ cm_1 3420> 1740> 169O> 1505’ ’i375’ 1250’ 1 065>780. UV λ /MeOH nm /e / 236 /40600/, 266 /391 00/, 333 /6370/, 380 /8850/, 399 /14200/, 422 /15500/. 1H NMR /CDCl-j/ &amp; 1 ,34 /3H, d, d= 6 Hz/, 1 ,37 /3H, d, J= 7 Hz/, I, 37 /3H, s/, .1,42 /3H, s/, 1,68 /3H, s/, 3,35 /3H, s/, 5,23 /1H, d, J= 8 Hz/, 5,8 /1H,d, J= 4 Hz/, 8,33 /1H, dd, J= 8 a 1,5 Hz/, II, 63 /1H, široké r/.

Analýza vypočteno pro x H2O: C 60,66, H 6,08, N 1,73 nalezeno: C 60,92, H 6,03, N 2,00 Příklad 4

Synthesa 2 ' /-N-'oenzyloxykarbonyl-3 *,4 '-O-isopropylidenelsa-mycinu A /7a/ místnosti. K reakční směsi seho roztoku nyarogenuhličitanu K roztoku 507 mg sloučeniny 4 a 2,2-dimethoxypropanu/2,9 ml/ v 1 0 ml suchého dichlormethanu se přidalo 10 mg kyse-liny p-toluensulfonové a směs se přes noc udržovala na teplotěpřidalo sodného oddělila, vysušila nad síranem hořečnatým a odpařila za sníže- neno tlaku, noytek se rozetřel se směsí dichlormethanu, etne- 0 ml nasyceného vodné-i organická vrstva se 17 - ru a n-hexanu. Získalo se 540 mg /100 %/ titulní sloučeniny. T.t. 1 60 - 162 °C. IR UQax /KBr/ cm"1 '73°> l690> 1500> 1375, 1250, 1l40> 1065>780. UV^max /MeOH nm /£/ 236 /39100/, 267 /37600/, 333 /6440/,380 /9020/, 400 /14400/, 422 /15500/. HHR /CDClj/&amp;1 ,28 /3H, d, J= 6 Hz/, 1 ,40 /3H, d, <J= 7 Hz/'1,41 /3H, s/, 1,47 /3H, s/, 1,70 /'3H, s/, 2,66 /3H, s/, 3,45 /3H, s/, 5,28 /1H, d, J= 6 Hz/, 5,66 /1H, d, J= 4 Hz/, 3,32 /1H, dd, J= 8 a 2 Hz/, 11,53 /1H, br/.

Analýza vypočteno pro C^H^-NO^: C 63,84, H 5,48, N 1,69 nalezeno: C 63,59, H 5,64, N 1,63 Příklad 5

Synthesa 3 ,4 -O-isopropylidenelsamycinu A /6a/

Metoda A

Roztok 67 mg sloučeniny 7a ve 2,5 ml 80 %ního vod-néno roztoku tetrahydrofuranu se hydrogenoval v přítomnosti30 mg 10 %. Pd-C po dobu 1,5 nodiny. Katalyzátor se zreakční směsi odfiltroval a reakční směs se zahustila dosu-cha. Zbytek se přečistil sloupcovou chromatografií s použitím5 % MeOH v CHCl^ jako elučního činidla. Získalo se 47 mg/83 %/ titulní sloučeniny. T.t. 189-191 °C /rozkl./ IR J /KBr/ cm"1 1710, 1610, 1370, 1250, 1070, 780.

EIQX ϋV λ /MeOH nm /<£/ 236 /34500/, 266 /29700/, 332 /4980/,max ’ 399 /10600/, 420 /11300/. NMH /CDC1-, + CD^OD/<5" 1 ,1 8 /3H, d, J= 6 Hz/, 1,29 /3H, d, J= 7 Hz/, 1,39 /3H, s/, 1,46 /3H, s/, 1,67 /3H, s/, 2,87 /3H, s/, 3,52 /3H,s/, 5,22 /1H, d, J= 8 Hz/, 6,02 /1H, br/.

Analýzavypočtenonalezeno: MS /SIMS/ pro

C36H39NO M/Z 695 /Μ + K/’

3/2 H2O: CC 360, 334, 59,99, H 5,87, N 1,9460,09, H 5,76, N 2,13 >0.

Metoda 3

Roztok 238 mg sloučeniny 5a a 285 mg mononydrátu kyse-liny p-toluensulfonové /TsOH/ v 5 ml acetonu se míchal přiteplotě místnosti 2 hodiny a potom se zahustil ve vakuu. Zby-tek se rozpustil ve směsi methanolu a chloroformu /1 : 10, 40 ml/. Roztok se promyl postupně 10 %ním vodným roztokemhydrogenuhličitanu sodného, vodou a solankou, načež se vysu-šil nad síranem horečnatým a zahustil ve vakuu. Zbytek sepřečistil sloupcovou chromátografií na silikagelu. Získalo se142 mg /68 %/ titulní sloučeniny. T.t. 189 - 191 °C. Spektrál-ní a HPLC data sloučeniny 6a, získané touto metodou, bylaidentická s daty získanými v metodě A.

Metoda C

Směs 262 mg sloučeniny J_, 80 mg TsOH a 1 ml 2,2-dimetho-xypropanu v 5 ml suchého dicnlormethanu se mícnala při teplo-tě místnosti 17 hodin. K reakční směsi se přidal nasycenývodný roztok nydrogenunličitanu sodného a organická vrstva v se oddělila, vysušila nač síranem sodným a odpařila. Žlutý zbytek se rczetřel s etherem, získalo se z Ί 00 ,</ slou- - 19 - ceniny 6a. T.t. ,89 - 191 °C. Spektrální a HPLC data taktozískané sloučeniny 6a byly identické s daty získanými v me-todě A · Příklad 6 z z

Syntnesa 2 -K-t-outoxykarbony1-3 Z z ,4 -C-cyklohexylide elsa- myčinu A /5b/

Hoztok 151 mg sloučeniny 3.> 1,2 ml 1,1-dimethoxycyklo-hexanu a 3 mg bezvodé kyseliny p-toluensulfonové ve 3 ml su-chého dichlormetnanu se míchal při teplotě místnosti 2 hodi-ny. Reakční směs se zředila dichlormethanem, promyla nasyce-ným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysušila nadsíranem hořečnatým a odpařila. Získal se krystalický zbytek,který se promyl etherem. Získalo se tak 165 mg /100 %/ slou-čeniny 5b. T.t. 173 - 175 °C. IR i/ /KBr/ cín"1 291 0, 1 730, 1710, 1680 /sh/, 1 500.msx υνλ /MeOH nm /<£/ 236 /35300/, 266 /34 200/, 333 /4660/,max ’ ' 379 /7820/, 399 /12500/, 422 /13700/.NMR /CDCl^/cf0,69 /9H, s/, 1,10 - 2,5 /19H, m/, 2,90 /3H, s/, 3,36 /3H, s/, 5,22 /1H, d, J= 8 Hz/, 5,83/1H, d, J= 4 Hz/, 11,69 /1H, s/.

Analýza vypočteno pro C^H^NO^: C 63,38, H 6,16, N 1,68 nalezeno: C 64,38, H 6,63, N 1,60 Příklad 7

Syntnesa 3',4'-O-cyklonexylidenelsamycinu A /6b/ 20

Roztok 83,3 mg sloučeniny 5b a 95 mg TsOH v 1,6 ml cyklohexanonu se míchal při teplotě místnosti přes noc. K reakčnísměsi se přidalo 5 ml vodného 10 % NaHCO^ a 10 ml CHCl^ a or-ganická vrstva se vyjmula, promyla 5 ml solanky, vysušila nadsíranem hořečnatým a odpařila ve vakuu. Viskózní zbytek serozetřel s isopropyletherem a odfiltroval, získalo se 32 mg/44 %/ sloučeniny 6b. T.t. 182 - 190 °0 /rozkl./ IRv>max /KBr/ caa”1 3400> *605’ 1445’ 1370’ 1 230’ 1170’ 1 070·UVÍ„ v /MeOH nm /€/ 236 /33000/, 266 /28900/, 331 /3340/, ničí λ 399 /10100/, 420 /10500/. 1H NMR /CDC13 + CD3OD/<Í1,T - 1,2 /19H, m/, 2,87 /3-H, s/, 3,45 /3H, s/, 5,23 /1H, d, J= 8 Hz/,5,94 /1H, d, J= 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro C^H^NO^ x H20: C 62,31, H 6,03, N 1,86nalezeno: C 62,23, H 5,92, N 1,83 Příklad 8 .

Synthesa 3 4 -0-benzyliden-2 '-N-t-butoxykarbonylelsamycinu A/5.c/' K roztoku 77 mg sloučeniny 3. a 0,5 ml benzaldehyddimet-hylacetalu ve 2 ml dichlormethanu se přidalo 5 mg TsOH a směsse udržovala 2 dny při teplotě místnosti. K reakční směsi sepřidalo ca 10 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenunličita-nu sodného a směs se extrahovala pomocí OHCl^. Extrakt se pro-myl vodou, vysušil nad síranem sodným a odpařil ve vakuu, čímžse získala pevná žlutá látka, která se přečistila sloupcovouchromatografií na silikagelu s použitím MeOH v CHCl^ /1 - 3 %/jako elučního činidla. Získalo se 70 mg /81 // titulní slouče-niny . 21 T.t. 168 - 170 °C. IRlJmax /K3r/ cm~1 1735 sh’ '635’ 15°5’ ’375’ 1255’ ’235’ 1145>1070, 780. UV^max /Me0H nm /ťí/ 235 /4060% 266 /39300/, 332 /641 0/, 379 /8690/, 399 /13900/, 421 /15000/. KHH /CDCl^/50,71 /'9H, s/, 1,35 /3H, a, J= 6 Hz/, 1,58 /3H,s/, 2,91 /3H, s/, 3,40 /3H, s/, 5,32 /1H, d, J= 8 Hz/, 5,69 /1H, d, J= 4 Hz/, 5,98 /1H, s/.

Analýza vypočteno pro C^H^HO-j x H^G.nalezeno: C 62,86, H 5,74, H 1,63C 63,17, H 5,42, N 1,53 Příklad 9

Synthesa 3 ,4 -C-benzylidenelsamyčinu A /6c/

Metoda a 60 mg Sloučeniny 5c se rozpustilo v 0,3 ml TFA a směsse ihned zahustila ve vakuu. Zbytek se rozpustil ve směsinasyceného vodného roztoku nydrogenuhličitanu sodného a CHCl^.Organická vrstva se oddělila, promyla vodou a odpařila vevakuu. Žlutý zbytek se chromatografoval na silikagelu. Získa-lo se 24 mg /45 %/ sloučeniny 6c. T.t. 183 - 189 °C. IR ^max /KBr/ cra_1 1710’ 1610’ 1510’ 1375’ 1250’ 1 235’ 1070’780. UV^max /Me0H nm / £36 /40700/, 266 /34400/, 331 /5890/, 379 /8180/, 398 /12200/, 420 /13000/, 1H NMH /CDC13 + CD^OD/cí 0,82 /1,5H, d, J= 6 Hz/, 1,22 /3H, d,J= 6 Hz/, 1,36 /1,5H, d, J= 6 Hz/, 1,58 /1,5H, s/, 1,61 /1,5H, s/, 2,92/3H, s/, 3,53 /3H, s/, 5,29 /1H, d, J= 8 Hz/, 5,95 /0,5H, s/, 6,01 /0,5K,br/, 6,11 /0,5H, br/, 6,28 /0,5H, s/. 22 MS /SIMS/ M/Z 742 /M + H/+, 408, 334, 160

Metoda S

Směs 66 mg elsamycinu A, 185 mg benzaldehyddimethylace-talu a 25 mg TsOH v 5 ml dichlormethanu se udržovala při te-plotě místnosti 2 hodiny. K reakční směsi se přidalo ca 10 mlnasyceného vodného roztoku nydrogenunličitanu sodného a 10 mldichlormethanu. Organická vrstva se oddělila a odpařila zasníženého tlaku, čímž poskytla pevnou žlutou látku, která sepřečistila sloupcovou chromatografií na silikagelu s použitímMeOH v CHCI3 jako elučního činidla. Získalo se 45 mg /60 %/sloučeniny 6c. HPLC a spektrální data takto získané sloučeni-ny 6c jsou identická s daty získanými v metodě A. Příklad 10

Synthesa 2 ' x-N-benzyloxykarbonyl-3 ,*4 *-0-methoxymethylidenel-samycinu A /7d/

Roztok 62 mg sloučeniny 4, 0,2 ml trimethylesteru kyse-liny orthomravenčí a 5 mg kyseliny p-toluensulfonové ve 3 mldichlormethanu se míchal při teplotě místnosti 2 hodiny areakční směs se zředila 10 ml dichlormethanu, promyla nasyce-ným vodným roztokem hydrogenuhlióitanu sodného, vysušila nadsíranem sodným a odpařila ve vakuu, čímž se získalo 65 mg/100 %/ sloučeniny 7d. T.t. 139 - 141 °C. IRu> v ZKBr/ cm"1 3400, 1725, 1 51 0, 1375, 1 255, 1 240, 1 070.Π13Χ υνλ /MeOH nm /<£/ 236 /35700/, 267 /34000/, 333 /5800/,380 /8090/, 399 /13000/, 422 /13900/. 1H NMH /CDC13 + D2O/<Í1,32 /3H, d, J= 6 Hz/, 1,39 /3H, d, J= 6,5 Hz/, 1,56 /3K, s/, 2,88 /3H, s/, 23 3,96 /3H, s/, 6,25 /1H, d, J= 8 Hz/,5,65 /1H, d, J= 4 Hz/, 5,93 /2H, s/. Příklad 1 1

Synthesa 3*,4*-0-methoxymethylidenelsamycinu a /6d/

Roztok 57 mg sloučeniny 7d ve 4 ml 75 %ního vodného roz-toku tetrahydrofuranu se hydrogenoval v přítomnosti 30 mg 10 %Fd-C po dobu 1,5 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs seodfiltrovala a filtrát se zahustil dosucha. Zbytek se přečistilsloupcovou chromatografií na silikagelu, čímž se získalo 35,5mg /73 %/ sloučeniny 6d. T.t. 209 - 211 °C /rozkl./. IRp> v /K3r/ cm-1 3400, 1720, 1680, 1375, 1255, 1205, 1120,nisx 1 075. UV λ /MeOH nm /6/ 236 /33900/, 266 /30800/, 331 /5200/,

D13X 398 /10800/, 419 /11200/. ‘h NMR /CDCI-j + CD3OD/<fl,0 - 1,4 /6H, m/, 1,57 /3H, s/, 2,62/3H, s/, 3,38 /3H, s/, 3,50 /3H, s/,5,44 /1H, d, J= 8 Hz/, 5,87 /2H, m/'. MS /SIMS/ M/Z 697 /M + 2H/ + , 363, 334, 202, 160. Příklad 12

Syntnesa 4Z-O-tetrahydropyranylelsanyčinu A /8/

Roztok 110 mg elsamycinu A a 0,5 ml dihydropyranu v 5 mldimethylformamidu se okyselil malým přebytkem molárního ekvi-valentu TsOH a přes noc se udržoval na teplotě místnosti. Kreakční směsi se přidal nasycený vodný roztok hydrogenuhliči-tanu sodného /20 ml/ a směs se nasadila na sloupec Diaion 24 HP-20 /ca 100 ml/. Sloupec se promyl vodou a eluoval vodnýmroztokem CH^CN. Nažloutlé frakce eluátu se spojily a odpařilyve vakuu, čímž se získala žlutá amorfní látka, která se roz-pustila v 5 ml 0,05N TsOH v MeOH. Po jedné hodině se k reak-ční směsi přidal hydrogenuhličitan sodný a směs se zfiltrova-la. Filtrát se zahustil a zbytek se přečistil preparativníchromatografií na tenké vrstvě /TLC/ a získalo se 16 mg /13 %/titulní sloučeniny. T.t. 202 - 205 °C. IRL/max /KBr/ cm_1 ‘695, 1610, 1375, 1 255, 1 075, 780. UV^max /Me0H 1131 236 /34000/, 266 /29500/, 333 /5250/, 379 /6850/, 399 /10500/, 421 /11300/, 1H NMH /CDC13 + CD3OD/<Tl,44 /3H, s/, 2,73 /3H, s/, 3,48 /2H, s/, 5,62 /1H, d, J= 8 Hz/, 5,93 /1H,d, J= 4 Hz/. MS /SIMS/; M/Z 738 /M + H/+, 404, 334, 160, 85.

Claims (6)

1. - 25 - PATE N T O V E Způsob přípravy sloučeniny vzorce

   kde Z znamená alkylidenovou, cykloalkylidenovou, arylalkyli-denovou nebo alkoxyalkylidenovou skupinu, Z z vyznačující se t í m, že nechá reagovat 2 -N- chráněný elsamycin A s dimethylacetaly v přítomnosti kyseléhokatalyzátoru a chránící skupiny se odštěpí.
2. 2. Způsob přípravy sloučenin vzorce - 26 -

   vyznačující se t í m, že se nechá reagovat,elsamycin A s dimethylácetály v přítomnosti kyselého kata-lyzátoru .
3. 3. Způsob přípravy sloučeniny vzorce O OH

   27 - vyznačující se tím, že se elsamycin A necháreagovat s dihydropyranem v přítomnosti kyselého katalyzáto-ru a následně s kyselinou p-toluensulfonovou v methanolu.
4. 4. Sloučenina připravená podle způsobů nárokovanýchv kterémkoliv z‘nároků 1 nebo 2, kterou je
5. 5. Způsob přípravy farmaceutického přípravku, vyznačující se tím, že se smísí sloučeninapodle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 s jedním nebo více farma-ceuticky přijatelnými nosiči nebo ředidly.
6. 6. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4pro použití jako protinádorový prostředek.