HU210162B

HU210162B - Process for preparing 3',4'-o-substituted elsamicin a deriv.s and pharmaceutical compn.s contg. them

Info

Publication number: HU210162B
Application number: HU9201734A
Authority: HU
Inventors: Takayuki Naito; Soichiro Toda; Haruhiro Yamashita; Yuji Nishiyama
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1991-05-30
Filing date: 1992-05-25
Publication date: 1995-02-28
Also published as: EP0516155A1; CS158792A3; HUT61776A; HU9201734D0; AU1724092A; FI922441A0; OA09751A; FI922441A; JPH05163292A; CA2069715A1; IL101999A0; KR920021571A; IE921765A1; ZA923817B

Description

A találmány tárgya eljárás a tumorellenes hatású elsamicin A antibiotikum új, (IV) általános képletű, a 3', 4'-helyzetű hidroxilcsoportokon helyettesített származékainak - ebben a képletben Z jelentése 1-7 szénatomos alkilidén-, 3-8 szénatomos cikloalkilidén-, fenil(1-7 szénatomos alkilidén)- vagy 1-7 szénatomos alkoxi-(l-7 szénatomos alkilidén)-csoport - és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítményeknek az előállítására. Ezek az általában fokozott hatású, kisebb toxikusságú és/vagy jobb farmakokinetikai tulajdonságokat mutató új származékok a találmány értelmében olyan módon állíthatók elő, hogy a 2-helyzetű aminocsoporton védett vagy szabad elsamicin A vegyület a kívánt terméknek megfelelő dimetil-acetállal reagáltatjuk savas katalizátor jelenlétében, és az adott esetben jelenlévő N-védőcsoportot eltávolítjuk.

Az elsamicin A daganatellenes antibiotikum az aktinomicete J907-21 jelű, elsamicin A-t termelő törzsének (ATCC 39 417) és mutánsainak tenyésztésével állítható elő. Az elsamicin A baktériumölő hatású aerob Gram-pozitív és anaerob baktériumokkal szemben. Hatásos továbbá különböző daganatos sejtek ellen patkányfélékben, így a leukémia P388, a limfoid leukémia L1210 és a melanin-felszaporodás miatti bőrdaganat B16 típusai ellen in vitro és in vivő. (Konischi és mts.: A chartreusine-nel rokon, új daganatellenes antibiotikumok, az elsamicinek. I. Előállításuk, elkülönítésük, jellemzésük és daganatellenes hatásuk. J. Antibiotics, 39, 784-791 (1986); 4 518 589 sz. USA-beli szabadalmi leírás, Konishi és mts., megadva 1985. május 21én.)

Az elsamicin A az (I) szerkezeti képlettel jellemezhető, és kimutathatóan közeli rokonságban van a (Π) képletű chartreusin-nel. [Sugawaraés mts.: Achartreusin-nel rokon, új daganatellenes antibiotikumok, az elsamicinek. Π. Az elsamicin A és B szerkezete. J. Org. Chem. 52, 996-1001 (1987).]

Az elsamicin A és a chartreusin ugyanabból az ágiikon részből, a chartarinból, de eltérő diszacharid részből áll. [Leach és mts.: Új antibiotikum, a chartreusin, a Streptomyces chartreusis új fajának terméke. In: Progress in Medicina! Chemistry, szerk. G. P. Ellis és G. B. West, 19, 247-268, Elsevier Biomedical Press, Amsterdam, 1982; Simonitsch és mts.: A chartreusinek szerkezete. I. Helv. Chim. Acta 47, 1459-1475 (1964); Eisenhuth és mts.: A chartreusinek szerkezete. II. Helv. Chim. Acta 47, 1475-1484 (1964).] Akét vegyület egymásba való átalakulásáról nem jelent meg közlemény.

Az elsamicin A kémiai módosítása során azt tapasztaltuk, hogy alkilidén csoportok bevitele a 3' és 4' helyzetű OH-csoportokra vagy tetrahidro-piranil csoport a 4'-OH-ra növeli az elsamicin A daganatellenes hatását.

Konishi és mts.-nak 4 518 589 sz. USA-beli szabadalmi leírása az elsamicin A-nak nevezett, (I) szerkezeti képletű daganatellenes szer előállításával és elkülönítésével foglalkozik. A fent említett elsamicin A vegyület az elsamicin A-t termelő, J907-21 jelű aktinomiceta törzs (ATCC 39 417) erjesztésének fő komponense.

A találmány alapja az a felismerés, hogy az elsamicin A 3'- és 4'-helyzetű OH-csoportjának kémiai módosítása megnövelt daganatellenes hatású, új származékokhoz vezet.

A találmány szerint előállítható új elsamicin A származékok a (IV) általános képlettel jellemezhetők, ahol Z jelentése 1-7 szénatomos alkilidén-, 3-8 szénatomos cikloalkilidén-, fenil-(l—7 szénatomos alkilidén)- vagy 1-7 szénatomos alkoxi-1-7 szénatomos alkilidén-csoport.

A (IV) általános képletű 3',4'-ilidén-származékokat a találmány értelmében az elsamicin A vegyülettől (1. táblázat 1. vegyület) kiindulva állítjuk elő: az 1. vegyületet az eljárás első lépéseként a 2-helyzetű nitrogénatomon átmenetileg megvédjük alkalmas védőcsoport, előnyösen terc-butoxi-karbonil- vagy benzil-oxikarbonil-csoport alkalmazásával, majd a 2-N-védett elsamicin A vegyületet (3. illetőleg 4. vegyület) a kívánt 3',4'-O-ilidén-szubsztituensnek megfelelő aldehid vagy keton acetáljaival reagáltatjuk. Az így kapott, 2-N-védett 3',4'-O-ilidén-származékból (5. illetőleg 7. vegyületek) a 2-N-védőcsoport lehasítása útján kapjuk a kívánt 6a-6d végterméket. Egyes acetálok, különösen a 2,2-dimetoxi-propán és a benzaldehid-dimetilacetál a 2-N-védetlen elsamicin A-val is gyakorlatilag szelektíven a 3',4'-hidroxilcsoportokon reagálnak, így az ezekkel való reagáltatás, vagyis a 3',4'-O-benzilidén-származék előállítása esetén a kiindulási elsamicin A 2-N-megvédésétől el is lehet tekinteni.

A 3',4'-O-módosított elsamicin A származékok daganatellenes hatása

3',4'-O-módosított elsamicin A származékokat szintetizáltunk, és összehasonlító vizsgálatokat végeztünk az anyavegyülettel az in vitro és in vivő daganatellenes hatásuk tekintetében.

1. táblázat

A találmány szerinti vegyületek és intermedierek számozása

Vegyület száma	Neve
1	Elsamicin A
2	chartreusin
3	2-N-(terc.butoxi)-karbonil-elsamicin A
4	2'7N-(benzil-oxi)-karbonil-elsamicin A
5a	2-N-(terc.butoxi)-karbonil-3,4-0-izopropilidén-elsamicin A
5b	2-N-(terc.butoxi)-karbonil-3',4'-0-ciklohexilidén-elsamicin A
5c	3',4'-O-benzilidén-2-N-(terc.butoxi)karbonil-elsamicin A
6a	3',4'-0-izopropilidén-elsamicin A
6b	3',4'-0-ciklohexilidén-elsamicin A
6c	3',4'-O-benzilidén-elsamicin A
6d	3',4'-O-metoxi-metilidén-elsamicin A
7a	2-N-benziloxi-karbonil-3',4'-0-izopropilidén-elsamicin A
7d	2-N-benziloxi-karbonil-3',4'-O-metoximetilidén-elsamicin A

HU 210 162 Β

Az in vitro citotoxicitási kísérlethez B16-F10 patkány melanomasejteket tenyésztettünk, és Eagle-féle minimális esszenciális közegben (Nissui termék) tartottuk, amely 60 gg/cm³ kanamicint, 10% hővel inaktivált fötális borjúszérumot és 0,6% nem esszenciális aminosavakat tartalmaz. Az inkubálást 37 °C-on nedves levegőn, 5% CO2 jelenlétében végeztük. Az exponensiálisan szaporodó B16-F10 sejteket begyűjtöttük, megszámoltuk, majd a tenyészközegben szuszpendáltuk 2,0xl0⁴ sejt/cm³ koncentrációban. 180 mm³ sejtszuszpenziót telepítettünk a 96-üregű mikrotitráló lemez üregeibe, és 24 órát inkubáltuk. A kipróbálandó vegyületből 20 mm³-t adtunk be az üregekbe, és a lemezt 72 órát tovább inkubáltuk. A citotoxikus hatást kolorimetriásan határoztuk meg 540 nm-en, miután az életképes sejteket semleges vörös oldattal megfestettük. Az összes, 3'- és/vagy 4'-helyzetben O-módosított elsamicin A származékok igen erős citotoxikusságot mutattak a B16-F10 sejtekkel szemben, amennyiben IC50 értékékük 0,025 és 0,07 gg/cm³ közé esett (2. táblázat).

A fenti öt származék in vivő daganatellenes hatását a P388 limfocita leukémia és a B16 melanoma rendszerekben vizsgáltuk. Nőstény CDFj (P388) és hím BDFj (B16) egereket intraperitoneálisan beoltottunk ΙΟ⁶ P388 sejttel, illetve 0,5 cm³ 10%-os B16 tenyészettel egerenként (0. nap). A vizsgálandó vegyületeket naponta egyszer intraperitoneálisan adtuk be az 1., 2. és 3. napon (QlDx3) a P388 rendszerhez, és ugyancsak naponta egyszer az 1., 5. és 9. napon (Q4Dx3) a B16 rendszerhez, majd az állatokat 45 napig megfigyelés alatt tartottuk.

A közepes túlélési idő (MST) százalékos növekedését a kezeletlen állatokéhoz képest T/C%-ban mértük és adtuk meg. Azokat a vegyületeket, amelyeknek T/C%-uk 125 vagy nagyobb volt jelentősen daganatellenes hatásúaknak tekintettük. A 6a jelű 3',4'-O-izopropilidén-elsamicin A, a 6c jelű 3',4'-O-benzilidén-elsamicin A és a 6d jelű 3',4'-O-metoxi-metilidén-elsamicin A ugyanolyan aktív volt, mint az anyavegyület a MED tekintetében. A B16 rendszerben mind az öt származék jó daganatellenes választ mutatott (3. táblázat). A P388 rendszenei kapott eredményekhez hasonlóan a 8. vegyület jobb volt, mint az elsamicin A (1. vegyület) mind a MED, mind a T/C% szempontjából. Néhány túlélőt észleltünk az 50. napon abban a csoportban, amelyet e vegyület 3-20 gm/kg/nap adagjával vizsgáltunk. A 6d jelű vegyület is rendkívül hatásos volt gyógyászatilag, T/C%-a nagyobb volt, mint elsamicin A (1) esetében, 3 és 10 mg/kg/nap adagolásban.

A találmány tárgyát képezik továbbá olyan gyógyszerkészítmények előállítása is, amelyek hatásos daganatgátló mennyiségben (III) vagy (IV) képletű vegyületet tartalmaznak iners, gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyaggal vagy hígítószerrel együtt.

A találmány előnyös lehetőséget nyújt daganatkeltést elszenvedett gazdaállat, előnyösen emlős gyógykezelésére, amelynek során a (IV) képletű antibiotikum vegyület hatásos daganatgátló mennyiségét adjuk be az említett gazdaállatba.

Ilyen alkalmas készítmények például szilárd formák orális bevitelre, így tabletták, kapszulák, pirulák, porok és granulátumok; folyékony készítmények orális alkalmazásokra, így oldatok, szuszpenziók, szirupok, elixírek; parenterális készítmények, így steril oldatok, szuszpenziók vagy emulziók. Ezek előállíthatok steril szilárd készítmények, így steril oldatok, szuszpenziók vagy emulziók. Ezek előállíthatok steril szilárd készítmények alakjában is, amelyek közvetlenül a felhasználás előtt feloldhatók steril vízben, fiziológiás sóoldatban vagy más, steril, injekcióban alkalmazható közegben.

2. táblázat

Irt vitro citotoxikusság B16 melanoma ellen és in vivő daganatellenes hatás P388 leukémia ellen egerekben

Vegyület	Citotoxikusság IC₅₀(gg/cm³)	Átlagos túlélés (MST) T/C%-a
20*	10	3	1	0,3	0,1
6a	0,025			210	170	140	120
6b	0,04		165	175	140	120
6c	0,07	Tox	180	165	150	130	110
6d	0,05	Tox	224	167	167	137	124
Elsamicin A (1)	0,03	Tox	190	180	155	140	123

* Dózis mg/kg/nap-ban, QlDx3ip

3. táblázat

In vivő daganatellenes hatás B16 melanoma ellen egerekben

Vegyület	Átlagos túlélés (MST) T/C%-a
mg/kg/nap
10	3	1	0,3	0,1
6a	82	192	166	116	105
6b	200	175	132	111
6c	186	179	136	114	121
6d	J (3/4)*	283	167	137	120
1	J298 (2/12)	J216 (2/12)	179	139	116

*Túlélők/vizsgáltak száma az 50. napon.

Nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti elsamicin A származékok konkrét előnyös adagolása változik aszerint, hogy melyik vegyületet alkalmazzuk, hogyan visszük be, és milyen betegséget, milyen egyebet és testének melyik helyét kezeljük. A jártas szakemberek számos tényezőt vesznek figyelembe, amelyek módosítják a szer hatásosságát, pl. az életkort, a testsúlyt, a nemet, az étrendet, az alkalmazás idejét, a kiürülés sebességét, az alany állapotát, a gyógyszerkombinációkat, a reagálás érzékenységét és a betegség súlyosságát. A beadagolás folytatható folyamatosan, időszakosan, de mindig a maximálisan elviselhető adagoláson belül. A körülmények adott együttese esetén az optimális adagolás könnyen megállapítható a jártas szakemberek által ismert, szokásos dózismeghatározó próbákkal.

HU 210 162 Β

A találmányt az alábbi kiviteli példák szemléltetik, amelyek azonban semmilyen módon nem korlátozzák a találmány hatályát.

A 3-5c, 7a és 7d jelű köztitermékek speciális szintézis-példáit alább ismertetjük. Ezekből a köztitermékekből szintetizáljuk a találmány szerinti, 6a-6d jelű vegyületeket a fenti eljárás szerint.

1. példa

2-N-(terc-Butoxi-karbonil)-elsamÍcin A (3. jelű vegyület) szintézise

653 mg (1 mmól) elsamicin A-t, 348 mg (1,6 mmól) di(terc-butil)-dikarbonátot és 0,14 cm³(1 mmól) trietil-amint feloldunk 10 cm³ dioxánban, és szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. A reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, és a kapott félkristályos maradékot CH₂Cl₂/éter elegyből átkristályosítjuk, így 768 mg 3. jelű vegyületet kapunk (100%-os kitermelés) sárgás, kristályos por alakjában.

Olvadáspontja 183-184 °C. Infravörös maximumai (KBr-ban): 3410, 1700, 1505, 1370, 1255, 1120, 1065, 875, 780 citt¹. Ultraibolya maximumok MeOH-ban (ε): 236 (38 300), 266 (37 800), 333 (6180), 380 (8770), 400 (14 500), 423 (15 900) nm. Proton-NMR (CDCl₃-ban): 0,73 (9H, széles s); 1,31 (3H, d, J = =,0 Hz); 1,36 (3H, s); 1,39 (3H, d, J = 6 Hz); 2,68 (3H, s); 3,35 (3H, s); 5,37 (IH, d, J = 8,0 Hz); 4,66 (IH, d, J = 4 Hz); 8,18 (IH, dd, J = 8,0és 1,5 Hz); 11,59 (lH,s).

Elemanalízis C₃₈H₄₃NO_I5-H₂O-ra számítva: C 59,14; H 5,88; N 1,81.

Mért:: C 59,12; H 6,06; N 2,27.

2. példa

2-N-(Benziloxi-karbonil)-elsamicin A (4. jelű vegyület) szintézise

653 mg elsamicin A-t és 0,14 cm³ trietil-amint 10 cm³ dioxánban szuszpendálunk, majd keverés közben hozzáadunk 334 mg N-(benziloxi-karbonil-oxi)-5norbomén-2,3-dikarboximidet. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk CH₂Cl₂-ben, az oldatot egymást követően híg vizes NaHCO₃-tal, vízzel és telített vizes NaCl-dal mossuk, MgSO₄-on szárítjuk, végül csökkentett nyomáson töményítjük. A kapott sárga tömeget szilikagél oszlopon (Wakogel C200, 21x80 mm) 2% metanolt tartalmazó kloroformmal kromatografáljuk. így 772 mg (98%) címbeli vegyületet kapunk.

Olvadáspontja 166-167 °C. Infravörös maximumai (KBr-ban): 1730, 1695, 1510, 1380, 1260, 1240, 1150, 1070, 785 cm'¹. Ultraibolya maximumai metanolban (ε): 236 (38 900); 266 (38 500); 335 (6480); 381 (9190); 401 (15 300); 423 (16 600) nm. Proton-NMR (CDCl₃-ban): 1,32 (3H, d, J = 6 Hz); 1,38 (3H, s); 2,74 (3H, s); 3,36 (3H, s); 5,39 (IH, d, J = 8 Hz); 5,74 (IH, d, J = 4Hz); 8,08 (IH, dd,J = 8és 1,5 Hz); 11,41 (IH, s).

Elemanalízis: C₄₁H₄₁NO₁₅-l/2H₂O-ra számítva:

C 61,80; H 5,31; N 1,76

Mért: C 61,92; H 5,14; N 2,23.

3. példa

2-N-(terc.Butoxi-karbonil)-3',4'-O-izopropilidénelsamicin A (5a jelű vegyület) szintézise

200 mg 3. jelű vegyület és 1,2 cm³ 2,2-dimetoxipropánt feloldunk 4 cm³ száraz CH₂Cl₂-ben, hozzáadunk 5 mg p-toluol-szulfonsavat (TsOH), és az elegyet szobahőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk. Ezután hozzáadunk telített vizes NaHCO₃ oldatot, a szerves fázist elkülönítjük, MgSO₄-on megszárítjuk, és vákuumban bepároljuk. így 190 mg (90%) címbeli vegyületet kapunk sárga szilárdanyag formájában.

Olvadáspontja 168-169 °C. Infravörös maximumai (KBr-ban): 3420, 1740, 1690, 1505, 1375, 1250, 1065, 780 cm'¹. Ultraibolya maximumai metanolban (ε): 236 (40 6000; 266 (39 100); 266 (39 100); 333 (63 700); 380 (8850); 399 (14 200; 422 (15 500) nm. ProtonNMR (CDCl₃-ban): 1,34 (3H, d, J = 6 Hz); 1,37 (3H, d, J = 7 Hz); 1,37 (3H, s); 1,42 (3H, s); 1,68 (3H, s); 3,35 (3H, s); 5,23 (IH, d, J = 8 Hz); 5,8 (IH, s, J = 4Hz); 8,33 (IH, dd, J = 8 és 1,5 Hz); 11,63 (IH, széles).

Elemanalízis C₄|H₄₇NO₁₅ H₉O-ra számítva:

C 60,66; H 6,08; N 1,73

Mért: C 60,92; H 6,03 ;N 2,00.

4. példa

2-N-(Benziloxi-karbonil)-3',4'-O-izopropilidén-elsamicinA (7a jelű vegyület) szintézise

507 mg 4. jelű vegyületet és 2,9 cm³ 2,2-dimetoxipropánt feloldunk 10 cm³ vízmentes diklór-metánban. Az oldathoz hozzáadunk 10 mg p-toluol-szulfonsavat és az elegyet szobahőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk. Ezután hozzáadunk 10 cm³ telített, vizes NaHCO₃ oldatot, a szerves fázist elkülönítjük, MgSO₄on szárítjuk, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot CH₂Cl₂(éter)n-hexán eleggyel eldörzsöljük, és 540 mg címbeli vegyületet kapunk (100%-os kitermeléssel).

Olvadáspontja 160-162 °C. Infravörös maximumai (KBr-ban): 1730, 1690, 1500, 1375, 1250, 1140, 1065, 780 cm^-1. Ultraibolya maximumai metanolban (ε): 236 (39 100); 267 (37 600); 333 (6440); 380 (9020); 400 (14 4000; 422 (15 500) nm. Proton-NMR (CDC1₃)ban: 1,28 (3H, d, J = 6 Hz); 1,40 (3H, d, J = 7 Hz); 1,41 (3H, s); 1,47 (3H, s); 1,70 (3H, s). 2,88 (3H, s); 3,45 (3H, s); 5,28 (IH, d, J = 8 Hz); 5,66 (IH, d, J = 4 Hz); 8,32 (IH, dd, J = 8 és 2 Hz); 11,53 (IH, széles).

Elemanalízis C₄₄H₄₅NO₁₅-re számítva:

C 63,48; H 5,48; N 1,69

Mért: C 63,59; H 5,64; N 1,63.

5. példa

3',4'-O-Izopropilidén-elsamicin A (6a jelű vegyület) szintézise A módszer mg 7a jelű vegyületet feloldunk 2,5 cm³ 80%-os vizes tetrahidro-furánban, és 1,5 órát 30 mg 10%-os Pd-C jelenlétében hidrogénezzük. A reakcióelegyet ezután szűréssel megszabadítjuk a katalizátortól, és szárazra pároljuk. A maradékot oszlopkromatográfiával

HU 210 162 Β tisztítjuk 5% metanolt tartalmazó CHC1₃ eluenssel. így 47 mg (83%) címbeli vegyületet kapunk.

Olvadáspontja 189-191 °C (bomlik). Infravörös maximumai (KBr-ban): 1710, 1610, 1370, 1250, 1070, 780 cm^-1. Ultraibolya maximummal metanolban (ε): 2326 (34 500); 266 (29 700); 332 (4980); 399 (10 600); 420 (11 300) nm. Proton-NMR (CDCl₃+Cd₃OD): 1,18 (3H, d, J = 6 Hz); 1,29 (3H, d, J = 7 Hz); 1,39 (3H, s); 1,46 (3H, s); 1,67 (3H, s); 2,87 (3H, s); 3,52 (3H, s); 5,22 (IH, d, J-8 Hz); 6,02 (IH, széles).

Elemanalízis C₃₆G₃₉NO₁₃-3/2H₉O-ra számítva:

C 59,99; H 5,87; N 1,94

Mért: C 60,09; H 5,76; N 2,13.

Tömegspektrum (SIMS) M/Z 695 (M+M)³, 360, 334, 160.

B-módszer

238 mg 5a jelű vegyületet és 285 mg p-toluol-szufonsav-monohidrátot (TsOH) feloldunk 5 cm³ acetonban, és 2 órát szobahőmérsékleten keverjük. Vákuumban végzett betöményítés után a maradékot 40 cm³1:10 arányú metanol/kloroformban oldjuk, az oldatot egymást követően 10%-os vizes NaHCO₃ oldattal, vízzel, végül sóoldattal mossuk, MgSO₄-on szárítjuk, és vákuumban betöményítjük. A maradékot szilikagél oszlopkromatográfiával tisztítjuk. így 142 mg (68%) címbeli vegyületet kapunk. Olvadáspontja 189-191 ’C. Az így nyert, 6a jelű vegyület spektroszkópiás és kormatográfiás adatai teljesen azonosak az A-módszerrel kapott vegyületekével.

C-módszer

262 mg 1. jelű vegyületet 80 mg TsOH-t és 1 cm³2,2-dimetoxi-propánt feloldunk 5 cm³ vízmentes CH₂Cl₂-ben, majd szobahőmérsékleten 17 órát keverjük. A reakcióelegyhez ekkor telített vizes NaHCO₃oldatot adunk, a szerves fázist elkülönítjük, Na₂SO₄on szárítjuk, és bepároljuk. A sárga maradékot éterrel eldörzsölve, 280 mg (100%) 6a jelű vegyületet kapunk. Olvadáspontja 189-191 ’C. Az így nyert, 6a jelű vegyület spektroszkópiás és kromatográfiás adatai teljesen azonosak az A-módszerrel kapott vegyületével.

6. példa

2-N-(terc-Butoxi-karbonil)-3',4'-O-ciklohexilidénelsamicinA (5b jelű vegyület) szintézise

151 mg 3. jelű vegyületet, 1,2 cm³ 1,1-dimetoxiciklohexánt és 3 mg vízmentes p-toluol-szulfonsavat feloldunk 3 cm³ vízmentes CH₂Cl₂-ban, és szobahőmérsékleten 2 órát keverjük. A reakcióelegyet CH₂C1₂nal hígítjuk, telített vizes NaHCO₃ oldattal mossuk, MgSO₄-on szántjuk, és bepároljuk. A kapott kristályos maradékot éterrel mossuk, és 165 mg (100%) 5b jelű vegyületet nyerünk.

Olvadáspontja 173-175 °C. Infravörös maximumai (KBr-ban): 2910, 1730, 1710, 1680 (éles), 1500 cm-'. Ultraibolya maximumai metanolban (ε) 236 (35 300); 266 (34 200); 333 (4660); 379 (7820); 399 (12 500); 422 (13 700) nm. Proton-NMR CDCl₃-ban: 0,69 (9H,

s); 1,10-2,5 (19H, m); 2,90 (3H, s); 3,36 (3H, s); 5,22 (IH, d, J = 8 Hz); 5,38 (IH, d, J = 4 Hz); 11,69 (IH, s).

Elemanalízis C₄₄H₅₁NOi₅-re számítva:

C 63,38; H 6,16; N 1,68

Mért: C 64,38; H 6,63; N 1,60.

7. példa

3',4'-O-Ciklohexilidén-elsamicin A (6b jelű vegyület) szintézise

83,3 mg 5b jelű vegyületet és 95 mg TsOH-t feloldunk 1,6 cm³ ciklohexanonban, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át keveijük. Ekkor hozzáadunk cm³ 10%-os vizes NaHCO3 oldatot és 10 cm³CHCl3-ot. A szerves fázist elkülönítjük, 5 cm³ sóoldattal mossuk, MgSO₄-on szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A viszkózus maradékot izopropil-éterrel eldörzsöljük, és szűrés után 32 mg (44%) 6b jelű vegyületet kapunk.

Olvadáspontja 182-190 ’C (bomlik). Infravörös maximumai (KBr-ban): 3400, 1605, 1445, 1370, 1230, 1170, 1070 cm^-1. Ultraibolya maximumai metanolban (ε): 236 (33 000); 266 (28 900); 331 (5340); 399 (10 100); 420 (10 500) nm. Proton-NMR (CDC1₃+CD₃OD): 1,1-1,2 (19H, m); 2,87 (3H, s); 3,45 (3H, s); 5,23 (IH, d, J = 8 Hz); 5,94 (IH, d, J = 4 Hz).

Elemanalízis C₃₉H₄₃NOi₃ H₂O-ra számítva:

C 62,31; H 6,03; N 1,86 ’

Mért: C 62,23; H 5,92; N 1,83.

8. példa

3',4'-0-Benzilidén-2-N-(terc-butoxi-karbonil)-elsamicin A (5c jelű vegyület) szintézise mg 3. jelű vegyületet és 0,5 cm³ benzaldehid-dimetil-acetált feloldunk 2 cm³ CH2Cl2-ben, és hozzáadunk 5 mg TsOH-t. Az elegyet szobahőmérsékleten 2 napig állni hagyjuk. Ezután hozzáadunk kb. 10 cm³telített, vizes NaHCO3 oldatot, és az elegyet CHC1₃mal extraháljuk. A kivonatot vízzel mossuk, Na₂SO₄on szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. Az így kapott sárga, szilárd anyagot szilikagél oszlopkromatográfiával tisztítjuk, 1-3% metanolt tartalmazó CHCl₃-mal eluálva. így 70 mg (81%) címbeli vegyületet nyerünk.

Olvadáspontja: 168-170 °C. Infravörös maximumai (KBr-ban): 1753 (éles), 1695, 1505, 1375, 1255, 1235, 1145, 1070, 780 cm^-1. Ultraibolya maximumai metanolban (ε): 235 (40 600); 266 (39 300); 332 (6410); 379 (8690); 339 (13 900); 421 (15 000) nm. Proton-NMR CDCl₃-ban 0,71 (9H, s); 1,35 (3H, d, J =

Hz); 1,58 (3H, s); 2,91 (3H, s); 3,40 (3H, s); 5,32 (IH, d, J = 8 Hz); 5,69 (IH, d, J = 4 Hz); 5,98 (IH, s).

Elemanalízis C₄₅H₄₇NO₁₅ H₂O-ra számítva:

C 62,86; H 5,74; N 1,63

Mért: C 63,17; H 5,42; N 1,53.

9. példa

3',4'-O-Benzilidén-elsamicin A (6c jelű vegyület) szintézise A módszer mg 5c jelű vegyületet feloldunk 0,3 cm³ TFAban, és az elegyet azonnal vákuumban betöményítjük.

HU 210 162 Β

A maradékot telített, vizes NaHCO₃ és CHC1₃ elegyében oldjuk. A szerves fázist elkülönítjük, vízzel mossuk, és vákuumban bepároljuk. A sárga maradékot szilikagél oszlopon kromatografáljuk, így 24 mg (45%) 6c jelű vegyületet kapunk.

Olvadáspontja 183-189 °C. Infravörös maximumai (KBr-ban): 1710, 1610, 1510, 1375, 1250, 1235, 1070, 780 cm^-1. Ultraibolya maximumai metanolban (ε): 236 (40 700); 266 (34 400); 331 (5890); 379 (8180); 398 (12 200); 420 (13 000) nm. Proton-NMR (CDC1₃+CD,OD): 0,82 (1,5H, d, J = 6 Hz); 1,22 (3H, d, J = 6 Hz; 1,36 (1,5 , d, J = 6 Hz); 1,58 (1,5 H, s); 1,61 (1,5H, s); 2,92 (3H, s); 3,53 (3H, s); 5,29 (IH, d, J = 8 Hz); 5,95 (0,5H, s); 6,01 (0,5H, széles); 6,11 (0,5H, széles); 6,28 (0,5H, s).

Tömegspektrum (SIMS) M/Z: 742 (M+H)⁺, 408, 334, 160.

B-módszer mg elsamicin A-t, 185 mg benzaldehid-dimetilacetált és 25 mg TsOH-t feloldunk 5 cm³ CH2CI2-ban, és szobahőmérsékleten állni hagyjuk 2 órát. Ezután hozzáadunk kb. 10 cm³ telített, vizes NaHCO3 oldatot és 10 cm³ CH₂Cl₂-t. A szerves fázist elkülönítjük, csökkentett nyomáson bepároljuk, és sárga szilárd anyagot kapunk, amelyet szilikagél oszlopkromatográfiával tisztítunk MeOH/CHCl₃ eluenssel. így 45 mg (60%) 6c jelű vegyületet kapunk. Az így nyert, 6c jelű vegyület folyadékkromatográfiás és spektroszkópiás adatai megkülönböztethetetlenek az A-módszerrel készült termékétől.

10. példa

2-N-(Benziloxi-karbonil)-3',4'-O-( metoxi-metilidén)-elsamicinA (7d jelű vegyület) szintézise 62 mg 4. jelű vegyületet, 0,2 cm³ orto-hangyasavtrimetil-észtert és 5 mg p-toluol-szulfonsavat feloldunk 3 cm³ CH2Cl2-ban, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 órát keverjük, majd 10 cm³ CH2Cl₂-nal hígítjuk, telített, vizes NaHCO₃ oldattal mossuk, Na₂SO₄-on szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. így 65 mg (100%) 7d jelű vegyületet kapunk.

Olvadáspontja 139-141 °C. Infravörös maximumai (KBr-ban): 3400, 1725, 1510, 1375, 1255, 1240, 1070 cm^-1. Ultraibolya maximumai metanolban (ε) 236 (35 700); 267 (34 000); 333 (5800); 380 (8090); 399 (13 000); 422 (13 900) nm. Proton-NMR (CDC1₃+D,O): l,32(3H,d,J = 6Hz); 1,39 (3H, d, J = 6,5 Hz); 1,56 (3H,

s); 2,88 (3H, s); 3,92 (3H, s); 3,96 (3H, s); 6,25 (IH, d, J = 8 Hz); 5,65 (IH, d, J = 4 Hz); 5,93 (2H, s).

11. példa

3',4'-O-(Metoxi-metilidén)-elsamicin A(6d jelű vegyidet) szintézise mg 7d jelű vegyületet feloldunk 4 cm³ 75%-os vizes tetrahidro-furánban, és 30 mg 10%-os Pd-C jelenlétében 1,5 órát szobahőmérsékleten hidrogénezzük. A reakcióelegyet leszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot szilikagél oszlopkromatográfiával tisztítjuk. így 35,5 mg (73%) 6d jelű vegyületet kapunk.

Olvadáspontja 209-211 °C (bomlik. Infravörös maximumai (KBr-ban): 3400, 1720, 1680, 1375, 1255, 1205, 1120, 1075 cm’¹. Ultraibolya maximumai metanolban (ε): 236 (33 900); 266 (30 800); 331 (5200); 398 (10 800); 419 (11 200) nm. Proton-NMR (CDC1₃+CD₃OD): 1,0-1,4 (6H, m); 1,57 (3H, s); 2,62 (3H, s); 3,38 (3H, s); 3,50 (3H, s); 5,44 (IH, d, J = 8 Hz); 5,87 (2H, m).

Tömegspektruma (SIMS): M/Z 697 (M+2H)⁺, 363, 334, 202, 160.

Claims

1. Eljárás (IV) általános képletű elsamicin A származékok - ebben a képletben Z jelentése 1-7 szénatomos alkilidén-, 3-8 szénatomos cikloelkilidén-, fenil(1-7 szénatomos alkilidén) - vagy (1-7 szénatomos alkoxi)—(1—7 szénatomos alkilidénj-csoport - előállítására, azzal jellemezve, hogy a 2-helyzetű aminocsoporton védett, vagy - különösen 3',4'-O-izopropilidénvagy 3',4'-O-benzilidén-elsamicin A előállítása esetén - a 2-helyzetben szabad aminocsoportot tartalmazó elsamicin A vegyületet a kívánt terméknek megfelelő dimetil-acetállal reagáltatjuk savas katalizátor jelenlétében, és az adott esetben jelenlévő N-védőcsoportot eltávolítjuk.

2. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely az 1. igénypont szerint előállított (IV) általános képletű elsamicin. A származékot - ahol Z jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottal - gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal és/vagy gyógyszerészeti segédanyaggal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítunk.