CS149090A2 - Method of peptidoglycan's monomer's n-acyl derivatives preparation - Google Patents
Method of peptidoglycan's monomer's n-acyl derivatives preparation Download PDFInfo
- Publication number
- CS149090A2 CS149090A2 CS901490A CS149090A CS149090A2 CS 149090 A2 CS149090 A2 CS 149090A2 CS 901490 A CS901490 A CS 901490A CS 149090 A CS149090 A CS 149090A CS 149090 A2 CS149090 A2 CS 149090A2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- pgm
- formula
- acid
- derivatives
- acyl
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 8
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 7
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 title description 7
- 239000000178 monomer Substances 0.000 title description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- -1 alkyl carboxylic acid Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 15
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 12
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 12
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 7
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 5
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 4
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 101100382386 Arabidopsis thaliana PPC3 gene Proteins 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 101100382400 Solanum tuberosum PPC1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100112137 Zea mays PEP1 gene Proteins 0.000 description 3
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 3
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 3
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 3
- 125000002801 octanoyl group Chemical group C(CCCCCCC)(=O)* 0.000 description 3
- 229920000379 polypropylene carbonate Polymers 0.000 description 3
- 101150023641 ppc gene Proteins 0.000 description 3
- 238000002300 pressure perturbation calorimetry Methods 0.000 description 3
- YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropan-1-one Chemical group CC(C)(C)[C]=O YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XOGXLUAMJUQURP-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-2h-1,3-benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)CSC2=C1 XOGXLUAMJUQURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- IARVPDWLYVZCIN-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2,2-dimethylpropanoate Chemical compound CC(C)(C)C(=O)ON1C(=O)CCC1=O IARVPDWLYVZCIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVUOEDOMUOJKOY-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BVUOEDOMUOJKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MRFGGHFXDUXEAG-UHFFFAOYSA-N 2-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(C(O)=O)N1C(=O)CCC1=O MRFGGHFXDUXEAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011749 CBA mouse Methods 0.000 description 1
- 101000583553 Homo sapiens Phosphoglucomutase-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 102100030999 Phosphoglucomutase-1 Human genes 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N diazepam Chemical compound N=1CC(=O)N(C)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000212 effect on lymphocytes Effects 0.000 description 1
- WHQLQYRFIHPMNA-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;oxolane Chemical compound C1CCOC1.CCOC(C)=O WHQLQYRFIHPMNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 125000002566 glucosaminyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001031 immunopharmacological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- 125000002811 oleoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- KIDBBTHHMJOMAU-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CCCO KIDBBTHHMJOMAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
- C07K9/005—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure containing within the molecule the substructure with m, n > 0 and m+n > 0, A, B, D, E being heteroatoms; X being a bond or a chain, e.g. muramylpeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
/(ítfo-qo
Tento vynález se týká způsobu přípravy nových. N-acyl-derivátů monomeru peptidoglykanu (PGM) a jeho farmaceutickypřijatelných solí, které jsou použitelné zvláště jako imuno-stimulátory a imunoadjuvanty.
Je známo, že monomer peptidoglykanu obecného vzorce II
CHO I 2
CHI CHX CHX
I 2 P I
CORRCHCOKHCHCONHGHCGOH
CHO l 2 (II.)
CHO I 2 H-HN-CH-C0NH2 ÍCarbohydr. Res. 110, 320 až 325 (1982).] vykazuje imunomo-dulační Iz, Immun. Forsch. 155« 512 až 328 (1979)·] a takéantimetastasovou účinnost lEur. J. Cancer O col. 19, 681 až686 (1983), Cancer Immunol. Immunother. 15, 84- až 86 (1983)»Cancer Immunol. Immunother. 18, 49 až 53 (1984).]. Je tolátka netokická a apyrogenní. Je dobře rozpustná ve vodě, ale není rozpustná v organických rozpouštědlech. Její vysocehydrofilní a lipofobní charakter jí neumožňuje pronikat li~pofilními membránami v organismu. Rozsah lipofilního a hy-drofobního charakteru takových sloučenin by mohl významněovlivňovat jejich aktivitu.
Předmětem tohoto vynálezu je příprava nových N-acyl-derivátů monomeru peptidoglykanu obecného vzorce I
CHO I ά
CHO I 2
CONHCHCONHCHCOKHCHCCOH CH, I 3 CH, I 3
CHO I 2 CH2 CH'· I 2 R-NE-CH—COHH,alkyly (I). v němž R znamená acylovou skupinu karboxylové kyseliny přímým řetězcem se 2 až 18 atomy uhlíku, alkylkarboxylové kyseliny s rozvětveným řetězcem s 5 ež 18 atomy uhlíku, nenasycené alkenylkarboxylové kyseliny se 12 až 18 atomy u-hlíku nebo aromatické karboxylové kyseliny se 7 až 12 atomyuhlíku, a jejich farmaceuticky přijatelných solí, Příklady skupiny R v obecném vzorci I, pokud znamenáacylovou skupinu alkylkarboxylové kyseliny s přímým řetězcemse 2 až 18 atomy uhlíku, jsou acetylová, kapryloylová, kapřinoylová, lauroylová, palmii?ylová a stearoylová skupina. Výhodným příkladem skupiny R v obecném vzorci I, pokudznamená acylovou skupinu alkylkarboxylové kyseliny s roz-větveným řetězcem s 5 až 13 atomy uhlíku, je pivaloylováskupina. Výhodným příkladem skupiny R v obecném vzorci I, pokudznamená acylovou skupinu nenasycené alkenylkarboxylové kyse-liny se 12 až 18 atomy uhlíku, je ole°ylová skupina. Výhodným příkladem skupiny R v obecném vzorci I, pokudznamená acylovou skupinu aromatické karboxylové kyseliny se7 až 12 atomy uhlíku, je benzoylová skupina.
Mezi farmaceuticky přijatelné soli nových R-acýl-deri-vátů monomeru peptidoglykanu (PGM) patří také soli těchtoderivátů s an^oganickými nebo organickými bázemi, jako jsounapříklad soli alkalických kovů (například sodné soli, dra- selné soli), soli kovů. alkalických zemin (například vápenatésoli), amonné soli, soli organických bází (například solis ethanolaminem a soli s triethanolaminem) a jiné fysiolo-gicky tolerovatelné soli.
Při přípravě nových N-acyl-derivátů PGM obecného vzorceI byly použity známé způsoby acylace pGM obecného vzorce IIreakcí s odpovídající kyselinou obecného vzorce III R - COOH (III), v němž R znamená jak shora uvedeno v obecném vzorci I,při čemž kyselina existuje v aktivované formě, napříkladjako anhydrid, zvláště jako aktivní ester, jako napříkladester, který se vytvoří reakcí kyseliny s H-hydroxysukcin-imidem, N-hydroxybenzotriazolem, N-hydroxyftalimidem a po-dobnými alkoholy. Příprava aktivních esterů se provádí zapřítomnosti dehydratačních činidel, jakými jsou napříkladdicyklohexylkarbodiimid (DCC) nebo jiné konvenční karbodi-imidy popsané v literatuře, Ν,Ν-karbonyldiimidazol, p-to-luensulfonát a jiné známé sulfonáty. Reakční podmínky propoužití takových činidel jsou ]$osány v literatuře. Výhodnéjsou reakce s karbodiimidy. Reakce se provádějí při teplotě20 až 25 °C a dávají vysoké výtěžky. Acylace PGM, napříkladanhydridem kyseliny octové, se provádí za přítomnosti bází,jako je například hydrogenuhličitan sodný, acylace odpoví-dajícím aktivním esterem kyseliny se provádí v inertním rozpouštědle, jako je například dimethylformamid (DME), zapřítomnosti organické báze jako katalyzátoru. PGM a aktivníester se používají v poměru 1 i 1,3 až 1 : 2 (mol/mol), po-měr PGM k rozpouštědlu se pohybuje v rozmezí od 1 : 3θ ho1 : 100 (hmotnostní díly k objemovým dílům). Organická bázeje ve formě aminu, jako je například triethylemin (TEA).
Tato báze se přidává k PGM v poměru od 1 : 2 do 1 s 5 (molna mol). Reakce se provádí 24 hodin při teplotě 20 až 25 °C.Průběh reakce se sleduje chromatografií na tenké vrstvě(TLC) silikagelu, jako adsorbentu, a v takovém rozpouštědlovémsystému, který je vhodný pro dělení produktů reakce od vý-chozích reakčních činidel, jako je například rozpouštědlovýsystém propanol - voda v poměru 7 í 3 (objemové díly kobjemovým dílům) (systém A). Přidáním organického rozpouštědla, v němž se produktnerozpouští, jako je například ethylacetát (EtOAc), se získáprodukt. Produkt se pak vyčistí konvenčními způsoby, jako jenapříklad chromátografie na koloně na různých adsorbentech,např. na silikagelu, eluce shora uvedeným rozpouštědlovýmsystémem A, nebo na Sephadexu, eluce vodou.
Dalším předmětem tohoto vynálezu je získání způsobu pří- pravy farmaceutických prostředků obsahujících učinnou a ještě fysiologicky tolerovatelnou dávku nového N-acylderivátu monomeru peptidoglykanu obecného vzorce· I nebo jeho farmaceuticky přijatelných solí, které se označují jako imunomodulačnínebo imunoadjuvantní léčivé prostředky. Účinné sloučeniny semohou formulovat v kombinaci s farmaceuticky přijatelnýmnosičem. Tyto farmaceutické prostředky se s výhodou podávajíparenterálně.
Biologická účinnost sloučenin, které jsou uvedeny vbodech předmětu vynálezu, byla testována na myších samcíchCBA, starých 2 až 2,5 měsíce. Zvířata byla adaptována na laboratorní podmínky přizpůsobováním alespoň jeden týden předkaždým testováním. Účinnost N-acyl-derivátu PGM byla srovná-vána s výsledky získanými s kontrolní skupinou myší, jimžbyl podáván fysiologický roztok (negativní kontrola) a ori-ginální PGM (positivní kontrola). Všechny testované slouče-niny byly podáveny do organismu intravenosní (iv.) cestou vv jediné dávce 200 ^ug/myš, resp. 10 mg/kg. Prii testováníimunofarmakologické účinnosti byly zjištovány následujícíúčinky: hmotnost sleziny, počet- lymfocytů a počet PFC (pla-ky tvořících buněk) způsobem. podle Jerneho I”Cell Boundántibodies”, Whister Institute Press, Philadelphia, str. 109 (1965).J. Hmotnost sleziny byla vyjadřována v mg. Po-čet lymfocytů sleziny byl vyjadřován jako absolutní číslov 1 ml, zatímco počet PPC byl vyjadřován jako celkové číslo r a jako účinnost v 10° lymfocytech sleziny. Testované skupiny a odpovídající kontrolní skupiny obsahovaly po 5 až 7 myších.Účinnost každého N-acyl-derivátu PGM byla zjišťována alespoňtřikrát v různých obdobích. Statistická analysa byla prove-dena s parametry Studentova t-testu podle původního programupro počítač Stát Works. Významnost rozdílů byla zjišťovánaoboustranným testem při hladině přijatelnosti rovné nebo men-ší než 5 %· Souhrnné výsledky jsou uvedeny v tabulce 1. -8 - 'á o
Pq fi
PU \
P o
Pq P4 Q< \
P 2? H q P H φ N >O Φ O H a, ω O* i—I *33
0>O O-H ·% »\ ·*
OJO HO do COQ d- CM dO co oo ι-l co OO CM A rlO čod OO AH i—1 r-1 AO “H **H “H •Ή *i-1 •*r—I “H A : d CM : A co 0- ' d · H d d- ' A A - cO. c- H. H. H. +1 H +1 Ή +1 +1 +1 o r-1 CM : A A ' A : H ·* ·* ·» •s M ·* A a 0^ co co co CM : O H 1—1 A : o σ\ CO 1—1 CM - CM : i—1 CM : H CM '
AACM O ·» ·»
CM O
COQ CO CM ‘ O-co H CO HO “CM ' “CM *>H CMH HH O O H co · Η H +1 +1 +1 H H CM : ·* «« ·* OJ · co d OJ : A A H Η H
OO H CM A CO ΙΛΟ AA AQ A CO CM O Η A AA dO o-h ACM : AO AA d O dA AO AA 0ΑΙΑ “H •Ή “H “H “H “H “H “H •Ή •Ή 4 - H CA. CD CM · CM · co O CM LfA tl ti +1 A, +1 ti ‘Si tr +1 ti r<\ · A d A CM ·· A o- c- co A r» ·» ·» ·. M ·* *. «4 4* - CM : A co CO A A LfA oo - co O- CO A A A CO A A co CO H CM CO A0-0 o o ·* ·» M <»
CM O CM O
Tabulka 1
Imunologická účinnost N-acyl-dorivátů PGM í=4
P -P r"3
ra aO -Ha nip oO H I”
coo CO NA O o AO O CJA AO “H Λ “H +1 ¥i +1 o- H o ·* Ο- Ο- ΚΑ ΚΑ O-UAA O *» ·. CMO
&8 CO CMCO O K\K\<0 H **H H **H O ' O O H, i—1 H, +1 +1 +1 H o- ω ·* ·* 4¾ co 1—1 κ\ o H OJ : H H H O- O* 00 - H H H
COO H O AQ HO Q CJA d-O “H Λ “H A, - co. A. +1 +1 +1 o- O CM : 4¾ 4% ·« CO A A A
AQ d d-O AO OO HO a?H d H •t •*H H σ\ H +1 +1 +1 A LP\ oo ·» ·» ·* K\ : l>- ' A O o A · H H H H 00 H H H o
OQ AO CM tMA AO HO ACM ' **H •*H •»H AH Η H σ\ · co H +1 +1 Φ. +1 H CO +1 H »» CM : ·. & 00 D- CO A d- ‘ d-H AO ·. ·. AO Ít : CO íj- : AO CM A COO CM H 00 O C-H AO “H “H *>H **H CM : 0- H CM · CM : H H H +! +1 +1 +1 d- - CM : c- d- · M A O CO O H CM : A CM : H H H H A ' CO o- 00 H H H H
A H CM O O H H CQ ω Ή co Ή CO >y H O >O H O A O Pí CD H iH o 1—1 cO P i—1 C H q P O o · Λ5 o Ή Ph >oí£. Ή 14 Vi. >Sh >H ft o
H co ca Ή ca H O >y H A o d- O d- ' M cO ró H A P i—1 C0 P 1—1 q H q S o · 14 o o • 14 til >o 'H 14^. PM >o £8. *\ ·* OJ o
LfA GAI-1 ·* *
H O
CO OJ : CD coo O-co na ca °s NA CO NA LÍA H O -OJ : -NA ' oo ir\H —Lf\ —H Ol H Η H •*rH *>H Ol H O O ua rd CA v na : CO, H H, ω : O- 1—1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 H H ca · <0 : 4 OJ : ·* ·* 0* OJ : co CA · 0 Ol : UA co ω : CA ‘ H Η H 1—1 H oj CA OJ4-0 ·» OJO 0 O 40 O-H NAO 4 LfA O Η H O CA OJO NAH -O -O- CO Q COH 40 •*H C*- r™4 CAH 4 Η —H •*rd · 00 OJ : O- - LfA co · % t.· -ÍI +1: CA CA. + 00 +| CA - H LfA UA +1 4 : 00 ·* — ·* ·« O ·* UA O- OJ : CO : 4 4 0 O H LfA CD : CA H rH H 1—1 H OJ : H OJ : OJ :
LÍA LÍANAO ·* OJ o O CA A- 0 CO CA LíAOJ : O CA 0 CO O OJ NA OJ Q O u> 04 CAO A-NA 4- CO O O 4- H LfAO O co O O CD O CO H LT\ rH Lf\ rH CO H LfAH —H —H OH Η H 4 H NAH CO H [A- H CO H ·» ·* ·* ·» [A- 00 »« — 0 OJ · CA co - CA- 00 NA 0 LfA LfA CA r~| -4- Ί-Ι +1 +1 +1 +1 4 · +1: íl íl v +1: % 0- 00 co LfA ·« ·» H 0 co oo Γ—í cO r-j ·» ·» Λ ·« (A- LÍA ** ·* ·* ·» ·» λ LfA 00 rH [Α- O OJ · CA- co 0- LfA tA- O- UA co co ΙΑ- - 1—1 H 4" ‘ LfA LíA CA CO 00 Ολ ·
H OJ · O UA
0-0 HO e« ««
OJ O OJ O as
»» <R
OJ O o OJ LfACA ' 4-0 A- CA CAO OJ OJ LfAO 4-0 00 CO O CS Η H LfAH —H —H CA ' LfA Λ *1 O H ·* oo. CA, - 1—i OJ : co - 00. +1 +1 +1 +1 +1 +1 CO OJ · H H LfA OJ : ·* ·* ·» — ·* 00 OJ (A- CA LfA NA Ll -4 4· ' LíA 4* ' 4- ' 0 0 NA 0 OJ CA 00 O 4 NA: O LfAH OJ H NAO CAO OJO C0 CA cO H 4- ' 00 H Η H —H —H O CA <* O O CO, 00, CA, H, 1—i CA A- +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 co 00 · CA H oj - co NA : ·* ** *» ·* co NA LfA CA 1—Ϊ co OJ : NA 4- ' NA NA 4- · NA 4· '
OJ HLfAO ·* ·*
NAO
NAO CM IT\ 4- NA · O O A- O OJ 00 O LfAO NAO 00 O CO H —H **rH —H -H —H —H A- 1—1 CO CO : H OJ · H r-Í H H 1—1 01. : +1 +1 +1 +1 +1 +1 ca ? •4 · NA LfA LfA rH r-i »* 4*0 co 0 4 NAO UA4- : HO 00 NA O H OJO CAO CAO HO [>-O CD O 4- OJ —H —H —H **H —H —H -H 4- NA O NA CO O 4- ‘ H OJ. OJ. : H rH 1—1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 CA rcs 0 4- 4· co 0-
H 4š > o >o co Λ o eu 1—i
COΛ41—13X)coH 0 00 4- ’ H CA LÍA 00 · 4 CA NA co rH H Ol : NA OJ : OJ : OJ : NA - OJ · NA : H OJ - 0 rH NA H H H H H H H H H H H rH H CO : O- O- LÍA CO co H NA · 00 00 00 00 · [>- H H H H H H OJ : OJ · Ol : OJ : H r—1 H 4* : LÍA cO A- O O O O H H H H ω ω M co H co H co Ή co Π H co >O 1—1 CO 'O 1—1 [>- >O 1—1 1—1 00 ;O 1—1 LfA 0 4- 0 Ή O 0 H O CO Ti C0 TJ F-i O Gí G 0 Čo H G CO CO -P 1—1 •Ό P 1-1 CO P p 1—1 1—i H £ r-j G H G xZ H G Ξ-.3 Λ4 O 0 • Λη O 0 • Λί O 0 O • ^4 O • P4 SS. Η PhSK. XJ& Η Λ3Ϊ& >0 Η Λ4 >O Gx. >ř-l >G On Pn 10
0 0 ca O Ol • co 030 ωσ\ m-rH ΓΌΟ m-o Lf\ i~H CAH ιΌ CAH 4" H LAH Ολι~4 ·* •te ·* ·* ·* ΓΌ OJ : rH 0 0 <\J : +1 ' +1 +Ϊ $1 ΐι CTc ' CO : o- H í * oo Λ ·» O < ΙΌ : CCJ : co - rH ΓΌ ' A- ' CO O ΓΌ : 4· - CO : r4 1—1 OJ : 1—1 rH H O O rH O 1Ό HO mo O-H ojo O O CO H LOH r4 rH m-H Ol H ·* ·> γό 00 K\ ΓΌ Ol · +1 +1: +1 +1: Ol, :+1 r4 ca CO OJ ; CO 9* ·» ·* CO cr\ CA ' OJ : 00 CO m- 4· co m-
0 ΓΌ • CO O Ol ' 4· cao CA CA · 0-0 0 CA ΓΌΗ co CO 4-H CAH O] : 00 co v* CA co o «* 0 Λ +1 Tl ΐι íl Ϊ! Ti 00 CA CA CA m- · CA ' r* •t •s ·« w ·* ΓΌ 0 i—1 cr\ CO 01 · 4· · 4· 4· ’ 4· · 4· !
I i t
CAO CO CO co co 40 4- 4- 4- A- 4-0 ΓΌΟ OO A-O 1ΌΟ 4-0 •Ή *Ή **H *Ή "H •Ή Ol : O OJ : 00 4- CA · H H 1—1, H 1—1 rd +1 +! +1 +1 +1 +1 4- · O- ΓΌ ' 4· · C0 : 1Ό : Λ Λ «« ·* ·» CO OJ : OJ : ts r—f LO 0 1—I H H OJ : OJ : H rH H H H H Ή 43 > o >0 ctí
S o i—)
H
G X3
Ctí
EH A- [>. 00 ' CO 00 00 · H r~í H H r4 H co CA · O O H H 03 03 Ή £0 Ή CO >O 1—1 co >O 1—1 O O co O O Η G CO g A- ctí -P 1—1 CO -P 1—1 H G F=H H G Ai O O • U O O • 'H 4í cS. P-Aářl >o^ ΉΛί^. FM^· >υ^ΐ. >H >G a P. 3
i—IΪΑ.ONGΦXII
S r-1°303
G o
G xl
O ra 'Ctí a o a O' α
N
O 4" co 1—1
S
O F4
J
I—1r-sO ctí
<D
-P 03 1
řG i—1
•G ra 2 o
G
tJ
O 03 'Ctí
G co g
N O- ΓΌ
CO ι-l
1645 znamená sodnou sůl N—kapryol-PGIvI 1646 znamená sodnou sůl N—kaprinoyl—PGM
1647 znamená sodnou sůl N—lauroyl—PGIvI 1648 znamená sodnou sůl N-palmitoyl—PGM
1665 znamená sodnou sůl N-olecryl-PGM 1668 znamená sodnou sůl N-acetyl-PGM I7OO znamená sodnou sůl N-pivaloyl-PGM Ly znamená lymfocytjz 11 -
Statisticky významné zvýšeni hmotnosti sleziny bylozjištěno po aplikaci sodné soli N-stearoyl-PGM a sodné soliN-oleoyl-PGM (13 % a 21 % ve srovnáni s kontrolními hodnota-mi). Relativní zvýšení hmotnosti sleziny bylo zjištěno taképo použití sodné soli N-benzoyl-PGM, sodné soli N-lauroyl-PGIvl a sodné soli N-pivaloyl-PGMj i když rozdíly vzhledem kekontrolním hodnotám nebyly významně zvýšeny, byla zde zřetel-ná tendence zlepšené účinnosti uvedených derivátů. Změny vpočtech lymfocytů sleziny (absolutní počet v 1 ml) byly různépro každý derivát. U skupiny myší, jimž byla podána sodnásůl N-lauroyl-PGM, bylo zjištěno statisticky významné sníženío 20 % ve srovnání s kontrolními hodnotami. U myší, na něžbylo působeno sodnou solí N-kaprjbl-PGM, bylo získáno statis-ticky významné zvýšení počtu lymfocytů sleziny (19 %). Popodání pivaloyl- a acetyl-derivátů bylo u myší zjištěnosnížení počtu lymfocytů sleziny o 4 až 6 %, naproti tomupři aplikaci oleoyl-, kaprinoyl- a palmitoyl-derivátů PGMbylo nalezeno zvýšení o 3 θζ 9 %· 1 když byla zřejmá jistátendence těchto získaných změn, neměly tyto změny žádnoustatistickou významnost. Sodné soli stearoyl- a benzoyl-de-rivátů PGM neměly na počet lymfocytů sleziny žádný vliv.Prakticky všechny testované sloučeniny vykazovaly zvýšenéPPC. Toto zvýšení se pohybovalo v rozmezí od 10 do 66vzhledem ke kontrolním hodnotám. Statisticky významný rozdílbyl však nalezen pouze pro sodné soli Ν-henzoyl-, N-lauroyl- 12 - a N-palmitoyl-derivátů PGM. Všechny použité sloučeniny zvy-šovaly aktivitu PPC, jak je zřejmé z počtu lymfocytů slezi-ny. Tato hodnota se pohybovala v rozmezí od 9 % do 75 %ve srovnání s hodnotami nalezenými u kontrolní skupiny myší.statisticky významný rozdíl byl zjištěn u lauroyl-derivátůPGM. Zřetelně vyjádřená tendence zvýšení byla nalezena ubenzoyl- a acetyl-derivátů PGM, kdy rozdíly ve srovnání skontrolními hodnotami prakticky dosáhly statisticky významnéhodnoty (0,5 menší než p menší než 0,1).
Na zákadě získaných výsledků lze uzavřít, že všechnystudované Ν-acyl-deriváty monomeru peptidoglykanu vykazujíjistou imunostimulační učinost, i když se jednotlivé deri-váty liší svojí efektivitou. Jedna z možných interpretacírůzných výsledných rozdílů v počtu lymfocytů a ve zvýšeníhmotnosti sleziny by mohla spočívat v různých mechanismechúčinku PGM a jeho N-acyl-derivátů, uvedených v bodechpředmětu vynálezu, na buněčný imunitní systém. Jinýmmožným důvodem by mohla být skutečnost, že se podobají vmechanismu účinku, ale liší se svojí vnitřní účiností}vliv na humorální imunitu je zřejmý ze změn v aktivitěPPC a v jistém rozsahu se liší od vlivu na počet lymfocytůsleziny. Významný vliv na celkovou PPC aktivitu byl nalezenu benzoyl-, lauroyl- a palmitoyl-derivátů PGM, které v pod-statě nemění nebo nesnižují počet lymfocytů v 1 mg tkáněo 1 e z j. ny · - 13 -
Strukturní modifikace molekuly PGM vedou k nové a ni-koliv zřejmé biologické účinnosti K-acyl-derivátů PGM, uve-dených v bodech předmětu vynálezu, demonstrovaných dvěmarůznými směry: významný vliv na imunitní odpověň buňky, cha-rakteristický pro benzoyl- a kapryloyl-deriváty PGMj na dru-hé straně benzoyl-, lauroyl- a palmitoyl-deriváty byly vý-znamněji zahrnuty v humorální imunitě. Získané výsledky u-kazují na nejlepší účinnost lauroyl-derivátu PGM vzhledemk jeho vlivu na buněčnou a humorální imunitu. Vedle tohovykazuje lepší účinnost ve srovnání s původním PGM, jest-liže je podáván ve stejné koncentraci.
Tento vynález je i^gjíutrován následujícími příklady. Příklad 1
Příprava sodné soli K-acetyl-PGM K roztoku PGM (500 mg, 0,495 mmolu) ve vodě (7 ml) se přidá nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného(NaHCO^, 2,75 ml) a směs se v ledové lázni ochladí na 5 °C.
Do ochlazené směsi se přikape anhydrid kyseliny octové(2,75 ml, 29 mmmlů) a směs se míchá 24 hodin při 20 °C.
Směs se zahustí odpařením za sníženého tlaku. Získá se ole-jovitá sraženina (0,95 g), která se rozpustí ve vodě (2,5 ml)a rozdělí na koloně naplněné 150 ml nosičem "SephadexG—25 fine", eluce vodou. Frakce, které obsahují produkty, - 14 se spojí a lyofilizují. Výtěžek 490 mg (92 %). Teplota tání196 až 198 °C. UF spektrum (H20, max): 202 nm. ič spektrum(KBr): ^400 až 5240, 1660, 1550 a 1410 cm“1. NMR spektrum(D20, ppm): 1,90 s, 5H (CH^CONH-Agpm), 1,96 s, 5H (GH^CO.•NH-Glc), 2,05 s, 5H (CH^CONH-Mur). Význam zkratek je ná-sledující: A2pm znamená diaminopimelylovou skupinu, Kurznamená muramoylovou skupinu a Glc znamená glukosaminylovouskupinu. Příklad 2
Příprava N-stearoyl-PGM K roztoku PGM (1,546 mg, 1,55 mmolu) v dimethylformami-du (DMF, 26,6 ml) se přidá sukcinimidostearát (800 mg, 2,09mmolu) a triethylamin (ΤΞΑ) (0,4 ml, 2,18 mmolu). Směs semíchá dvacet hodin při teplotě 20 až 25 °C. Získá se želati-nová suspense, do které se za míchání přikape ethylacetát(180 ml). Sqiěs se míchá dalších pět hodin. Sraženina se od-filtruje a vysuší. Výtěžek 2 g. Produkt se vyčistí chromatp-grafií na koloně silikagelu (25 g), eluce rozpuuštědlovýmsystémem A. Frakce, které obsahují produkt, se spojí a zahustí odpařením rozpouštědla za sníženého tlaku. Výtěžeko . 1,44 g (57 %). Teplota tání: 217 až 220 C. UF spektrum(max, H20): 204 nm. IČ spektrum (KBr): 5280, 2910, 2550, 1655 a 1530 cm“1. - 15 - Příklad. 3
Příprava N-pivaloyl-PGM K roztoku PGM (500 mg, 0,495 mmolu) v dimethylf^Smami-du (10 ml) se přidá sukeinimido-pivalát (137 mg, 0,688 mmolu)a triethylamin (TEA) (0,13 ml, 0,7 mmolu). Směs se míchá24 hodin při 25 °C. Do čirého roztoku se přikape ethylace-tát (5θ ml) a výsledná sraženina se míchá dvě hodiny.
Sraženina se odfiltruje, promyje se ethylacetátem (dvakrátpěti ml) a vysuší. Výtěžek 550 mg. Produkt se vyčistí chroma-tografií na koloně silikagelu, eluce rozpouštědlovým systé-mem A. Frakce, které obsahují produkt, se spojí a zahustí seodpařením rozpouštědla za sníženého tlaku. Výtěžek 270 mg(49,8 %). Teplota tání: 202 až 204 °C. UF spektrum (max, H^O):201 nm. IČ spektrum (KBr): 3400, 3500, 3080, 3050, 2980, I65O a I54O cm Příklad 4
Příprava N-oleoyl-PGM K roztoku PGM (500 mg, 0,495 mmolu) v dimethyl-formamidu (9 ml) se přidá sukcinimido-oleát (258 mg, 0,679 mmolu) a triethylamin (TEA) (0,13 ml, 0,7 mmolu).
Směs se míchá 24 hodin za teploty 25 °C. Potom se přikapeethylacetát (50 ml) a výsledná sraženina se míchá tři ho-diny. Sraženina se odfiltruje a vysuší. Výtěžek 680 mg.Sraženina se vyčistí chromátografií na koloně silikagelu, 1S - eluce rozpouštědlovým systémem A. Frakce, které obsahujíprodukt, se spojí a zahustí odpařením rozpouštědla za sní-ženého tlaku. Výtěžek: 0,345 g (54,6 %). Teplota tání204 až 206 °C. UF spektrum (max, E^O) : 198 nm. IČ spektrum.(KBr): 3300, 2950, 2875, 1640 a 1555 cm“1. Příklad 5
Příprava K-benzoyl-PGM K roztoku PGM (1,346 mg, 1,35 mmolu) v dimethylform-amidu (23,3 ml) se přidá sukcinimido-benzoát (400 mg, 1,825mmolu) a triethylamin (TEA) (0,35 ml). Směs se míchá 24 ho-din za teploty 25 °C. Přikape se 160 ml ethylacetátu a výsledná suspense se míchá 5 hodin. Sraženina se odfiltruje, promy-je se dvakrát 10 ml ethylacetátu a vysuší. Výtěžek 1,45 g.Produkt se vyčistí chromatografií na koloně silikagelu,eluce rozpouštědlovým systémem A. Frakce, které obsahujíprodukt, se spojí a zahustí odpařením rozpouštědla za sníže-ného tlaku. Výtěžek 1,04 g (69,1 %)♦ Teplota tání 173 až175 °C. UF spektrum (max, H^O) : 203 a 224 (sh) nm. IČ spek-trum (KBr): 3260, 1680 a 1515 cm“1. Příklady 6 až 9
Podobným způsobem jako je popsáno v příkladech 2 až 5byly získány následující deriváty: kapryloylový-PGM, kapri-noyl-PGM, lauroyl-PGM a palmitoyl-PGM. ZáUkladní fyzikálníkonstanty uvedených derivátů jsou v tabulce 2. - 17 -
Tabulka 2
Základní fyzikální konstanty N-3^pryloyl~, N-kaprinoyl-,N-lauroyl- a N-palmitoyl-derivátů PGM N-acyl-PGM t.t. (°C) UF-spektrum(max^gO, nm) IČ-spektrum) (KBr, cm“i) kaprýloyl 154 až 195 203 3280, 2930, 1655, 1638, 1545 kaprinoyl 196 až 197 203 2990, 1610, 1580, ... IO9O lauroyl 203 až 205 204 3280, 2920, 2850, 1655, 1543 · palmitoyl 205 až 208 203 3280, 2920, 2845, .. ' * - · 1635, 1520 . . Příklad 10
Příprava N-stearoyl-PGM K roztoku kyseliny stearové (284,5 mg, 1 mmol) ve směsirozpouštědel ethylacetát - tetrahydrofuran (1 : 1, objemovédíly k objemovým dílům, 25 ml) se přidá N-hydroxy-benzothi-azol (HOBt) (162,2 mg, 1,2 mmolu) a DCC (247 mg, 1,2 mmolu).Směs se míchá 16 hodin při 20 až 25 °C. Získaný produkt seodfiltruje a promyje se na filtru ethylacetátem (2x3 ml).Matečné louhy a extrakty se spojí a za sníženého tlaku seodpaří dosucha. Surový produkt (470 mg) se vyčistí chroma-tografií na koloně silikagelu (5 g), eluce rozpouštědlovýmsystémem chloroform - methanol (100 : 1, v objem, dílech). - 18 - Získá se 55θ mg vyčištěného W-benztriazol-stearátu,který se rozpustí v dimethylformamidu (20 ml). K tomutoroztoku se přidá PGM (511 mg, 0,499 mmolu) a triethylamin(TEá) (0,15 ml) a směs se míchá 16 hodin při teplotě 20až 25 °C. Získá se šelatinosní sraženina, ke které sepřidá ethylacetát (88 ml). Směs se míchá další hodinu.Sraženina se odfiltruje, resuspenduje se v ethylacetátu(45 ml), míchá se jednu hodinu a ještě jednou se odfiltrujea vysuší. Výtěžek 621 mg. Produkt se vyčistí chromátografií » na koloně silikagelu (8 g), eluce rozpouštědlovým systémem á. Frakce, které obsahují produkt, se spojí, rozpouštědlo * se odpaří za sníženého tlaku a produkt se vysuší. Výtěžek 542,5 mg (85 %). Produkt byl identický s produktem z pří-kladu 2. Příklad 11
Příprava sodné soli N-stearoyl-PGM
Do vody (20 ml), v níž bylo rozpuštěno ekvimolární množ ství hydroxidu sodného se přidá N-stearoyl-PGM z příkladu 2(1 276,5 mg, 1 mmol). Čirý roztok se míchá jednu hodinu alyofilizuje se. Výtěžek 1 281 mg. Příklad 12
Příprava sodné soli N-stearoyl-PGM
Postupem podle příkladu 2 se surový produkt, který byl 19 získán vysrážením ethylacetátem, suspenduje ve vodě, zneutra-lizuje se přidáním hydroxidu sodného na pH 7. Čirý roztokse nanese na kolonu s nosičem Sephadex G-25 řine, která seeluuje vodou. Frakce, které obsahují produkt; identický sproduktem získaným podle příkladu 11, se spojí a lyofilizují.
Podobným způsobem jako v příkladech 11 a 12 byly získánydalší farmaceuticky přijatelné soli.
Claims (2)
- - 20 PATENTOVÉ nároky1. Způsob přípravy N-acyl-derivauu luCndSSru peptido-glykanu obecného vzorce I ch2oh CH20HOn (D, RHOCCH. CH i 5 CIL· CHCO1ÍH0HCOKHCH-CONH. CH, CH. CH, , I 3 I 3 CONHCHCONHCHCONHCHCCOH I CH~ 0Ho i 2 l c I CH CHO I 2 R-NH-CH-CONH, v němž R znamená acylovou skupinu alkylkarboxylové kyselinys přímým řetězcem se 2 až 18 atomy uhlíku, alkylkarboxylovékyseliny s větveným řetězcem s 5 až 18 atomy uhlíku, nena-sycené alkenylkarboxylové kyseliny s 12 až 18 atomy uhlíkunebo aromatické karboxylové kyseliny se 7 až 12 atomy uhlíku,a jejich farmaceuticky přijatelnýclr^olí/ -vprznačující -setím, že PGIví obecného vzorce II 33 > O o < c·c > 3?<; i- — > I Γ: I" o i5 ·; .ň - 21 -CH, I 3 (II), CONHCHCORHOHCOITHCHCCOHI chi i 2 CHI I 2 H-EKt-CH-C0NH2 se acyluje reakcí s kyselinou obecného vzorce III R - COOH (III), v němž R znamená jako v obecném vzorci I, za přítomnosti báze, při čemž kyselina je v aktivované formě.
- 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že kyselinaobecného vzorce III je ve formě anhydridu nebo esteru.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| YU00626/89A YU62689A (en) | 1989-03-27 | 1989-03-27 | N-acyl derivatives of peptidoglican monomer, their pharmaceutically acceptable salts, process for preparing thereof and their use as immunity modulators and immunoadjuvant |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS149090A2 true CS149090A2 (en) | 1991-08-13 |
Family
ID=25550749
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS901490A CS149090A2 (en) | 1989-03-27 | 1990-03-27 | Method of peptidoglycan's monomer's n-acyl derivatives preparation |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5153173A (cs) |
| EP (1) | EP0390039A3 (cs) |
| JP (1) | JPH04193898A (cs) |
| BG (1) | BG51456A3 (cs) |
| CA (1) | CA2013065A1 (cs) |
| CS (1) | CS149090A2 (cs) |
| DD (1) | DD296085A5 (cs) |
| HU (1) | HU202546B (cs) |
| PL (1) | PL162969B1 (cs) |
| RO (1) | RO105699B1 (cs) |
| RU (1) | RU1779258C (cs) |
| YU (1) | YU62689A (cs) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0492478B1 (en) * | 1990-12-21 | 1995-07-19 | Pliva Farmaceutska, Kemijska, Prehrambena I Kozmeticka Industrija S P.O. | Tert-butyloxycarbonyl-L-tyrosyl-peptidoglycan monomer and 125 I-labelled derivative thereof, their preparation and use |
| RU94027699A (ru) * | 1991-08-15 | 1996-04-10 | Плива Хандельс ГмбХ (DE) | Применение пептидогликанового монометра (пгм), его n-ацилпроизводных и его комплексов с металлами в приготовлении лекарственных средств, предназначенных для коррекции иммуносупрессивных и гепатосупрессивных состояний организма |
| CA2320228A1 (en) * | 1998-02-02 | 1999-08-05 | Min Ge | Substrate analogs for murg, methods of making same and assays using same |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| YU40472B (en) * | 1977-03-22 | 1986-02-28 | Pliva Pharm & Chem Works | Process for obtaining the basic repeated disaccharide-pentapeptide unit of peptidoglycane from the peptidoglycane complex generated in the submersion culturing of microorganisms |
| JPS58198496A (ja) * | 1982-05-14 | 1983-11-18 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | グルコサミニルムラミルペプチド誘導体 |
| YU45382B (en) * | 1986-11-19 | 1992-05-28 | Pliva Sour Zagreb | Process for preparing complex of n-acethyl-glucosis-aminyl-n-acethyl-muramoil-l-alanyl-d-izoglutaminyl-(l)-mezodiaminopimelyl-(d-amid)-(l)-al |
-
1989
- 1989-03-27 YU YU00626/89A patent/YU62689A/xx unknown
-
1990
- 1990-03-26 EP EP19900105723 patent/EP0390039A3/en not_active Withdrawn
- 1990-03-26 HU HU901831A patent/HU202546B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-03-26 RU SU904743571A patent/RU1779258C/ru active
- 1990-03-26 CA CA002013065A patent/CA2013065A1/en not_active Abandoned
- 1990-03-26 DD DD90339076A patent/DD296085A5/de not_active IP Right Cessation
- 1990-03-27 PL PL28448190A patent/PL162969B1/pl unknown
- 1990-03-27 CS CS901490A patent/CS149090A2/cs unknown
- 1990-03-27 RO RO144579A patent/RO105699B1/ro unknown
- 1990-03-27 JP JP2075786A patent/JPH04193898A/ja active Pending
- 1990-03-27 US US07/499,586 patent/US5153173A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-03-27 BG BG91592A patent/BG51456A3/bg unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD296085A5 (de) | 1991-11-21 |
| EP0390039A2 (en) | 1990-10-03 |
| BG51456A3 (en) | 1993-05-14 |
| RU1779258C (ru) | 1992-11-30 |
| HUT53661A (en) | 1990-11-28 |
| CA2013065A1 (en) | 1990-09-27 |
| JPH04193898A (ja) | 1992-07-13 |
| US5153173A (en) | 1992-10-06 |
| HU202546B (en) | 1991-03-28 |
| RO105699B1 (ro) | 1992-11-30 |
| EP0390039A3 (en) | 1991-11-13 |
| PL162969B1 (en) | 1994-01-31 |
| HU901831D0 (en) | 1990-08-28 |
| YU62689A (en) | 1991-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4406890A (en) | Novel lipophilic muramyl peptides and processes for their manufacture | |
| US4323560A (en) | Novel phosphorylmuramyl peptides and processes for the manufacture thereof | |
| Rietschel et al. | Chemical structure and biologic activity of bacterial and synthetic lipid A | |
| PL110787B1 (en) | Method of producing new derivatives of glucosoamine | |
| EP0038750B1 (en) | Immunologically active dipeptidyl 4-0-, 6-0-acyl-2-amino-2-deoxy-d-glucose derivatives and methods for their preparation | |
| RO115731B1 (ro) | Derivati de dizaharide glucozamina beta (1 - 6), procedeu pentru prepararea acestora si compozitie farmaceutica | |
| US4409209A (en) | Novel phosphorylmuramyl peptides and processes for the manufacture thereof | |
| CN111760020B (zh) | 一种缀合物及其制备方法和应用 | |
| EP1945651A1 (en) | Analogs of alpha galactosylceramide and uses thereof | |
| CN1656113A (zh) | 唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素抑制剂 | |
| EP0041896B1 (en) | Immunologically active dipeptidyl 2-amino-1,2-dideoxy-d-glucose derivatives and methods of preparation | |
| Charon et al. | Chemical synthesis and immunological activities of glycolipids structurally related to lipid A | |
| EP0039637B1 (en) | Immunologically active dipeptidyl 5-0,6-0-acyl-2-amino-2-deoxy-d-glucofuranose derivatives and methods of preparation | |
| CS149090A2 (en) | Method of peptidoglycan's monomer's n-acyl derivatives preparation | |
| US5597573A (en) | Lipid-A analogs: new monosaccharide and disaccharide intermediates for eliciting therapeutic antibodies and for antitumor and antiviral activities | |
| US5593969A (en) | Lipid-A analogs: monosaccharide and dissaccharide compounds for inhibiting binding of lipid A receptors to lipid A receptors | |
| EP0014159B1 (en) | Immunologically active dipeptidyl saccharides and methods of preparation | |
| CN121108210A (zh) | Tlr4激动剂及其应用和疫苗组合物 | |
| EP0018901B1 (en) | Immunologically active peptidyl disaccharides, methods of preparation and vaccine | |
| Amano et al. | A monosaccharide precursor of Escherichia coli lipid A has the ability to induce tumor-cytotoxic factor production by a murine macrophage-like cell line, J774. 1. | |
| PL123483B1 (en) | Process for preparing novel compunds of n-acetylmuramylpeptides type | |
| Shimoyama et al. | Chemical synthesis and immunomodulatory functions of bacterial lipid as | |
| AU667900B2 (en) | Lipid-A analogs: New monosaccharide and disaccharide intermediates for eliciting therapeutic antibodies and for antitumor and antiviral activities | |
| EP0118364A1 (en) | Immunostimulatory dipeptidyl D-glucose derivatives and methods of preparation | |
| Krasikova et al. | Structure and properties of lipid A—A component of Gram-negative bacteria |