CN85103399B - 促进伤口肉芽生长和上皮形成的局部药物制剂的制备及生产方法 - Google Patents

Abstract

描叙了局部的药剂，该药剂含有一种在药理上相容的载体和一种有效物质，这种药剂的特征在于，有效物质提高了胞浆膜对钙的通透性，并且其可以是：ａ）以载体为基准，由０．２至１０重量百分数的可离子化的在药理上相容的Ｃａ²⁺和Ｋ⁺盐类所组成，Ｃａ²⁺∶Ｋ⁺克分子比为１∶３至４∶１或者ｂ）由一浓度为３×１０^-8至３×１０^-6Ｍ的Ｃａ²⁺－离子载体，与一浓度为０．１至５０ｍＭ的钙盐结合一起组成，或者ｃ）在一浓度为５×１０^-3至２×１０^-2的Ｋ⁺－高子和浓度为１０^-3Ｍ和３×１０^-2Ｍ的Ｃａ²⁺离子存在情况下，由一浓度为１0^-5至10^-9Ｍ的钙一激动剂所组成。

Description

促进伤口肉芽生长和上皮形成的局部药物制剂的制备及生产方法

由细胞培养的体外试验已知，Ca²⁺离子的存在对细胞分裂有影响，（Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 70，p.675-679）。此外通过提高细胞外的K⁺浓度可以达到膜电位的去极化作用也是已知的。但这些效应对伤口肉芽生长和上皮形成的影响至今没有为公众所知。但大量的试验已经表明，在细胞培养中找到的最佳Ca²⁺浓度和较高的Ca²⁺浓度，对伤口治疗既没有促进影响也没有阻止影响。

既使同时作到保持一种细胞外的最佳的Ca²⁺浓度，在细胞外围额外增加的生理钾量，对伤口治疗也没有促进的效果。

现在出乎意料的发现，Ca²⁺和K⁺离子一起，以完全一定的浓度比例对伤口肉芽生长和上皮形成，具有意想不到的好作用，并且在理想摩尔浓度的情况下作用很强烈，因此以结合形式使用是一种有价值的促进伤口治愈的制剂。

若对伤口表面直接施用一含水的电解液，其中在该电解液中，以这种电解液含有的水为基准计算，包含20至100mMCa²⁺离子和25至60mMK⁺离子，则可以得到本发明的浓度比例。

电解液本身可以由伤口分泌物构成和/或由一种附加用在伤口上的含水药剂构成。

在前一种情况下，使生理上相容的可离子化的Ca盐和K盐与一固体载体一起，按摩尔比1∶3至4∶1组合，敷在伤口上，该量为在伤口分泌物的溶液中使Ca盐和K盐形成上面所指定的浓度范围。但因为所说的伤口分泌物的数量是可变的，并且是不能准确估计的，因此用干凝胶，药粉，离子交换剂，羊毛，浸渍过的绷带材料，聚糖类，或类似的干燥药剂总是不能确保达到本发明的浓度范围，并不能维持一段较长的时间。

尽管这样一些制剂是以干燥形式投入市场，但这些药剂是十分有用的，因此也决定了，在使用前要掺入相当准确的定量水。在这种药剂吸收了掺入的水量，并且使Ca²⁺盐和K⁺盐分离以后，再将它敷于伤口上。根据联邦德国的公开说明书28 49 570，药剂是用干凝胶就属于这种情况的例子。

也有混合形式的，在这种形式中，干的载体一开始就用水润湿，水中含有按所要求的比例溶解的Ca²⁺离子和K⁺离子。属于这种形式的例子有离子交换剂，适用于凝胶层析（分子筛）的凝胶，或者简单的固体，例如首先被润湿的，然后以密封消过毒的织物制成的伤口复盖物。

在后一种情况下，提到的药剂本身是典型的含水药剂。通过比较可以理解为这样一些制剂，特别是以水作为载体起作用的制剂，必要时除了其他的辅助物和/或有效物以外，制剂所含的Ca²⁺离子以及K⁺离子的浓度为20至100nM或25至60mM。优先选用的范围在这里是25至35mMCa²⁺离子和35至45mMK⁺离子。特别选用的比例是30mMCa²⁺离子和40mMK⁺离子。

把各种有药物作用的制剂作为含水制剂考虑其中所含水份，可以根据本发明来调整它的摩尔离子浓度。除了简单的水溶液，洗液或水包油型乳状液以外，粘稠溶液，分散系统和泡沫也属于这一类。

上面所述及的凝胶类药剂，例如像聚丙烯酰胺/琼脂一凝胶是特别适用于伤口的，因此是优先选用的。

对于上述能促进伤口肉芽生长和上皮形成的制剂，优先选用了一种制造方法，该方法的特征是以已知方法，将药理上相容的盐形成的Ca²⁺和K⁺离子加入一含水的药物载体中，除了其他的辅助物和或有效物质外，以所含水量为基准，各离子的浓度为20到100mM的Ca²⁺离子和25到60mM的K⁺离子，并且这些离子均匀地分布在水相中。

作为药理上相容的盐类主要是考虑氯化物和磷酸盐，但也可以使用其他的无机盐和有机盐，例如像柠檬酸盐，马来酸盐，琥珀酸盐或类似的盐类，只要是它们与细胞组织是相容的及可分解的。

在含水液的药剂情况下，将水相调至等渗压是适合的。为了避免外界离子，最好选用葡萄糖来进行等渗压作用。除了添加的Ca²⁺和K⁺外，阳离子的电解质的效果还没有研究过。在许多情况下，向水相中添加表面活化剂以提高电解质对皮肤的通透性，也是适宜的。

因为上面提到的制剂作用仅仅依赖于，在细胞外空间所要求的Ca²⁺与K⁺离子比，所以不言而喻，凡这样一些以提到的离子作为唯一活性成份的制剂也是完全有效的。但是有些情况下，添加一些其他的活性成份是受欢迎的，例如像抗生剂或抑制真菌剂或表面麻醉剂。

通过研究上文所叙的制剂机理，已发现不只是在Ca²⁺和K⁺离子存在时，有促进伤口肉芽生长和上皮形成的积极作用，而往往是在提高了胞浆膜的钙通透性，因此能使Ca²⁺离子流入细胞以后，才有这种促进的积极作用。

这不但能够作到，如上所述，在一种药理上相容的载体上，有时除了其他的活性物质或辅助物质外，均匀分布0.2至10重量百分数的活性物质的混合物，而该混合物是由在药理上相容的可离子化的Ca²⁺和K⁺盐所组成，其中Ca²⁺∶K⁺摩尔比为1∶3至4∶1，并借此用K⁺离子打开所谓胞浆膜中的钙通道，而且也可以做到，不用所叙述的活性物质的混合物的话，或者使一种浓度为3×10^-8至3×10^-6M的Ca²⁺离子载体与浓度为0.1-50mM的钙盐结合一起，或者使用浓度为10^-5至10^-9M的一种钙激动剂，在浓度为5×10^-3至2×10^-2M的K⁺离子和浓度为10^-3M至3×10^-2MCa²⁺的存在情况下，均匀地分布在一药理上相容的载体上，得到的制剂用作伤口治疗剂。

Ca²⁺离子载体是一些化合物，这些化合物能选择性地使钙透过胞浆膜。

例如这样一种离子载体是最初以A23 187为代表的已知的抗生素6S〔6α（2S＊，3S＊），8β（R）＊，9β，11α〕-5-甲基氨基-2-〔3，9，11-三甲基-8-〔1-甲基-2-氧代-3-（1H-吡咯-2-基）-乙基〕-1，7-二氧杂螺旋〔5，5〕十一-2-基〕甲基〕苯并噁唑-4-羧酸。

按照本发明，A23 187与钙一起，在浓度为3×10^-8至3×10^-6M时起作用，在这当中，为了保证足够的Ca²⁺流入细胞中，在细胞处的钙盐，必须处于浓度为0.1至50mM。

因为原则上是通过胞浆膜提供钙给细胞，所以本发明的较迅速的治愈伤口的效果，同样可以通过所有其他的Ca²⁺离子载体达到。

因为Ca激动剂也提高胞浆膜对钙的通透性，所以它的作用也一定如此。在有钾存在的情况下，通过Ca兴奋剂打开了钙的通道。但在按照本发明使用Ca激动剂时，只需要使用很少的钾，所以，尤其在大面积烧伤时，不致破坏钾的平衡。对于使用纯的Ca²⁺和K⁺离子来说，如上面对它所描述的那样，这是一种改进。

钙兴奋剂的最有效的浓度范围是10^-5至10^-9M。所需钾的浓度处在5×10^-3至2×10^-2M范围内，钙浓度应处在10^-3M和3×10^-2M之间。

一种这样的钙兴奋剂，例如是物质拜克8644（Bayk 8644），关于这种物质早已公知，它刺激钙流入细胞中〔如参阅，Arzneimittelforschung/Drug.Res.，33（11）9号（1983）以及Biochem.and Biophys.Res.（1984）118、第3号，第842-847页〕。

使人最出乎意料的是，在细胞内部钙是伤口肉芽生长的一个重要因素。提高细胞外的空间中钙的浓度，并没有象本发明制剂这样的提高通透性的作用，也决没有治愈伤口的作用。通过加入一种钙的螯合物如乙二醇一双（β-氨基-乙基）-N，N，N′，N′-四乙酸（EGTA）带走钙，在细胞外部空间提高钙的浓度大约为生理浓度的二十倍，亦不能导致伤口肉芽生长的改变。因此专业技术人员可以得出结论，细胞外的钙对伤口肉芽生长没有重要的关系。

因此本发明的主题是促进伤口肉芽生长和上皮形成的一种局部的药物制剂，含有一种在药理上相容的载体和一种有效物，该制剂通过特征表明，有效物提高了胞浆膜的钙通透性，其可以是：

a）以载体为基准，由0.2至10重量百分数的可离子化的在药理上相容的Ca²⁺和K⁺盐类所组成，Ca²⁺∶K⁺摩尔比为1∶3至4∶1或者

b）由一浓度为3×10^-8至3×10^-6M的Ca²⁺离子载体与一浓度为0.1至50mM的钙盐结合一起组成，或者

c）在一浓度为5×10^-3至2×10^-2的K⁺离子和浓度为10^-3M和3×10^-2M的Ca²⁺离子存在情况下，由一浓度为10^-5至10^-9M的钙激励剂所组成。

本发明的另一主题是促进伤口肉芽生长和上皮形成的局部药剂的一种制造方法，该方法的特征在于，有时除了其他的有效物和/或辅助物外，将一种有效物a）或b）或c）均匀分布在一种药理上相容的载体上，并使用所述的这种药物制剂促进伤口肉芽生长和上皮形成。

附图可以进一步说明发明的主题：

由图1可以看出，伤口肉芽组织的形成与细胞外的钙浓度无关。

图2表明，提高通透性的有效物质A23187，在细胞外围空间中存在钙离子，浓度在10^-7和3×10^-6M之间时，特别是在浓度为3×10^-6M时与对照组相比，伤口肉芽生长有明显提高。若在细胞外的空间利用EGTA去掉Ca²⁺，减少细胞中的Ca²⁺浓度，并且少用作为提高通透性药剂的A23 187时，则伤口肉芽生长明显降低。这个试验表明，肉芽组织的形成，伤口治愈的前提条件，与细胞内的Ca²⁺含量有很大的依赖关系，若使用本发明的提高通透性的药剂提高细胞的Ca²⁺含量，则伤口肉芽生长可以显著的提高。

作为图1和图2基础的试验，是以下列方式进行的。

割断豚鼠的脊部皮肤直至结缔组织膜，在伤口中缝入一直径为21mm的聚四氟乙烯环。由此可以阻止伤口的上皮愈合。在背部肌肉的结缔组织膜上，该结缔组织直至手术时没有肉芽组织，连续三天敷上一含水的规定浓度的有效物的聚丙烯酰胺-琼脂凝胶。三天以后，当肉芽生长到最佳状态的时候，用一锋利的小匙刮除全部肉芽组织，称重和进行组织发生学处理。

在使用一浓度为30mMCa²⁺离子和40mMK⁺离子的方法（a）的情况下，由于等渗压的原因，向凝胶中掺入了0.9重量%的NaCl，可以得到明显提高肉芽组织生长数量，直至大约180%。组织发生学的对比试验表明了一种真正的细胞增殖，不只是细胞的体积增加。

下边的例子用来进一步说明本发明：

例1

等渗压的溶液

在100毫升量瓶中放入80毫升的净水，然后在电磁搅拌器搅拌下，加入20毫克苯亚甲基毒芹氯化物，并溶解之，接着先后加入0.3克氯化钾，0.44克氯化钙（两种盐一起Ph.Eur.I.）和2.62克葡萄糖水合物（Ph.Eur.Ⅱ.）。将烧瓶在水浴中加热至20℃，接着注入纯的同样为20℃的温水至刻度记号处。然后将溶液经一内径为0.2mm的滤膜无菌过滤，并且无菌灌入容器内。

〔0.29822克KCl～40mMol K⁺

0.44106克CaCl₂～30mMol Ca²⁺〕

例2

油在水中的乳化液

在第一个配方中，用7克由饱和脂肪酸，脂肪醇，羊毛脂，石油和非离子乳化剂所组成的混合物与2.5克聚乙二醇甘油脂肪酸酯，3克硬脂酸的和棕榈酸的单酸甘油酯，0.3克十六烷基醇和3克异丙基棕榈酸酯，经在水浴中加温至70℃，使之均匀熔化。

在第二个配方中，在搅拌情况下，将80克的净水与3克丙二醇混合，并加温至70℃。然后将这样得到的混合物掺入0.3克氯化钾，0.44克氯化钙和0.2克防腐剂。得到的透明溶液，于70℃搅拌下，加入到第一配方中进行乳化。这样得到的乳化液冷却至40℃，补足由于蒸发损失的水分。然后将冷却至30℃的乳化液灌入容器。

例3

透明的液体绷带材料（凝胶片）

配方A：

3.5克丙烯酰胺和0.091克双丙烯酰胺溶于100毫升的净水中。然后将溶液加温至60℃。

配方B：

0.3克氯化钾和0.44克氯化钙，溶于100毫升的净水中，并掺入0.2克防腐剂。加入2克琼脂（

AB9）以后，在电磁搅拌器搅拌情况下，将溶液煮沸，然后冷却至60℃。

接着于60℃搅拌情况下，将配方A和B混合。然后加入0.045克氨过氧化物二亚硫酸盐和0.045克（60Ml）四甲撑二胺。经短时间的剧烈搅拌以后，将其倒入培养皿中，该培养皿事先已在温箱中加热至60℃。然后将培养皿贮存于56℃的温箱中温育30分钟。接着将其冷却至室温，并将培养皿与得到的透明硬化片放在-4℃温度下的箱中熟化24小时。这样得到的凝胶片可以直接敷盖在伤口上。

例4

可涂敷的凝胶

将94克净水加热至70℃，并掺入0.3克氯化钾和0.44克氯化钙。在加入0.2克防腐剂以后，使5克甲基羟乙基纤维素分散在所得的溶液中。然后在搅拌下冷却。在冷却以后，得到一具有粘度为90帕斯卡秒的高粘度的充满空气泡的凝胶，该凝胶可以直接用于处理伤口。

例5

织品制成的伤口敷盖物

将4×4cm大小和5mm原无菌漂白薄纱布块，按照例1浸入无菌的渗透溶剂中，接着将溶液挤出，使布片不再滴液为止。然后将这样得到的纱布块在无菌的条件下与聚乙烯薄膜粘合在一起。

例6

载有A23 187的可涂敷的凝胶

将1000克净水加热至70℃，掺入1.6mg A 23 187和560mg氯化钙。在加入2克防腐剂以后，将50克甲基羟乙基纤维素分散到制得的溶液中。然后在搅拌下进行冷却。冷却后得到一具有粘度为90帕斯卡秒的、充满空气泡的高粘度凝胶，该凝胶可以直接用于处理伤口。

例7

带有拜克8644（Bag K8644）的可涂敷的凝胶

1000克净水加热至70℃，掺入1.49克KCl、3.3克CaCl和3.56mg拜克8644（Bag K 8644）。在加入2克防腐剂以后，将50克甲基羟乙基纤维素分散于所得到的溶液中，并按例1所述的方法进一步制备。

实施例8

将0.30克氯化钾和0.44克氯化钙溶解于40克80℃的净化水中。然后，加入0.18克羟苯甲酸甲酯和0.02克双羟苯甲酸丙酯的混合物。在澄清溶液中，将4.5克甲基羟乙基纤维素胶液化。当分散均匀后，再添加54.56克冷水，该溶液在慢慢搅拌下被迅速地冷却到环境温度。得到的凝胶其粘度为50帕。

实施例9

将0.30克氯化钾和0.44克氯化钙溶解于55.06克60℃的净化水中。然后，再加入0.2克羟苯甲酸甲酯。在澄清的溶液中，将4.0克甲基羟乙基纤维素胶液化，当分散均匀后，再添加40克冷水，该溶液在慢慢搅拌下被迅速地冷却到环境温度，得到的凝胶其粘度为40帕秒。

实施例10

将3.0克氯化钾和4.4克氯化钙溶解于882.6克60℃的净化水中。然后，添加28克山梨醇水溶液〔70%（重量）〕，0.2克对羟苯甲酸丙酯以及1.8克羟苯甲酸甲酯。在澄清溶液中，将40克甲基羟乙基纤维素和40克0.01N的盐酸胶液化，于是在搅拌下将该溶液冷却到环境温度。得到的凝胶其粘度为35帕秒。

用下列钾盐和钙盐来化替上文各实例中所用的氯化钾和氯化钙，其所用的量限定如下：

钙 克/1000克 钾 克/1000克

乙酸钙 4.7451 乙酸钾 3.926

葡糖酸钙 13.4517 葡糖酸钾 9.370

CaI₂·6H₂O 12.0606 KI 6.6404

乳酸钙 9.249 乳酸钾 5.127

泛酸钙 14.2959 泛酸钾 10.293

一代磷酸钙 7.5627 一代磷酸钾 2.830

三代磷酸钾 8.4912

蔗糖酸钙 7.4463 蔗糖酸二钾 5.727

水杨酸钙 11.0505 水杨酸钾 7.049

青霉素V钙 23.247 青霉素V钾 15.54

Claims (4)

1、制备促进伤口肉芽生长和上皮形成的局部药物制剂的方法，其特征在于将提高胞浆膜的钙渗透性的活性组合物均匀分布在药理上相容的以及电解质的载体中，而该胞浆膜含有0.2到10%（重量）的药理上相容的、可溶性的以及可离子化的Ca²⁺和K⁺盐的混合物，其中Ca²⁺∶K⁺摩尔比为1∶3到4∶1。

2、根据权利要求1的方法，其中载体主要是由水和甲基羟乙基纤维素组成的水合凝胶。

3、根据权利要求1或2所述的方法，其中该组合物含有Ca²⁺离子的浓度为20到100mM以及K⁺离子的浓度的25到60mM。

4、根据权利要求1或2所述的方法，其中该组合物含有Ca²⁺离子的浓度为大约30mM以及K⁺离子的浓度大约为40mM。

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