CN2777543Y - 丙型肝炎五项指标集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒 - Google Patents

丙型肝炎五项指标集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN2777543Y
CN2777543Y CN 200520039762 CN200520039762U CN2777543Y CN 2777543 Y CN2777543 Y CN 2777543Y CN 200520039762 CN200520039762 CN 200520039762 CN 200520039762 U CN200520039762 U CN 200520039762U CN 2777543 Y CN2777543 Y CN 2777543Y
Authority
CN
China
Prior art keywords
hcv
solid phase
reaction
hole
reacting hole
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
CN 200520039762
Other languages
English (en)
Inventor
穆海东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN 200520039762 priority Critical patent/CN2777543Y/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN2777543Y publication Critical patent/CN2777543Y/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本实用新型涉及丙型肝炎五项指标集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒。所述的反应孔板包括基板和位于基板上的反应孔，所述的反应孔包括5－200个样本孔，1－3个阴性对照孔，1－5个阳性质控孔，其中，每一反应孔的底部有固相载体，且在固相载体上包被着HCVCORE、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5、HCV总五种抗原的微点阵。本实用新型的反应板和试剂盒可简便、快速、准确地实现多个人份的丙型肝炎五项指标的同时检测。

Description

丙型肝炎五项指标集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒
技术领域
本实用新型属于体外临床检验和生物芯片技术领域，确切地说，是一种适于丙型肝炎五项指标(抗-HCVCORE、抗-HCVNS3、抗-HCVNS4、抗-HCVNS5、抗-HCV总)集成检测的反应板和试剂盒
背景技术
丙型肝炎是危害人类健康的一种世界性传染病，建立准确、快速、操作方便的丙肝检测系统已迫在眉睫。
目前检测丙型肝炎的方法主要有三个途径：1、用PCR检测HCV基因；2、用单克隆抗体等检测HCV抗原；3、用酶标法、蛋白印染法等检测抗-HCV，以检测血清中抗HCV抗体的酶标法较为普遍
常用的检测抗-HCV的诊断试剂盒是应用EIA间接法原理，以HCV抗原包被酶标板，用酶标记的抗人IgG作为第二抗体，经酶底物(POD或TMB)显色后，根据颜色的深浅进行阴阳性判断。该方法中所包被的抗原的组成和质量为关键因素。
目前出产的第三代抗-HCV ELISAKit几乎都是检测混合抗体。即：包被的抗原是由丙肝核心、NS3、NS4、NS5等重组在一起的抗原，因此，只具初筛作用，确诊需加做确证实验，而目前只有RIBA3能用于确诊实验，可检测HCV的各个分片段抗体。但RIBA3非常昂贵，操作时间长且繁琐，尽管特异性好，灵敏度稍逊，不适于常规检测。因此，本领域迫切需要寻找一种新的方法，既可检测HCV总抗体，又可检测HCV分片段抗体，同时，该方法克服上述方法的缺点，集高效、准确、价廉、操作简便快速于一体。
发明内容
本实用新型的目的就是提供一种可同时检测血清或血浆中的丙型肝炎病毒总抗体(HCV总)和分片段抗体(HCVCORE抗体、HCVNS3抗体、HCVNS4抗体、HCVNS5抗体)共五项指标，具有HCV感染的初筛和检测分片段抗体双重功能，并充分说明HCV感染的状况的丙型肝炎诊断试剂盒。
在本实用新型的第一方面，提供了一种丙肝五项集成检测反应板，反应孔板包括基板和位于基板上的反应孔，所述的反应孔包括5-200个样本孔，1-3个阴性对照孔，1-5个阳性质控孔。其中，其特征在于：每一反应孔的底部有固相载体，且在固相载体上包被着HCVCORE、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5及它们的混合特异抗原HCV总共五项丙型肝炎病毒抗原组成的微点阵，每一反应孔内设有一个定位基准点。
在一优选例中，所述的固相载体是NC膜、或PDVF膜。
在另一优选例中，所述样本孔的数量为1-197个。
在另一优选例中，所述的HCVCORE、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5及它们的混合特异抗原HCV总五项丙型肝炎病毒抗原在固相载体上各有2个点样点。
在另一优选例中，所述反应孔每孔设有一个定位基准点。
在本实用新型的第二方面，提供了一种丙肝五项集成检测试剂盒，它包括本实用新型上述的丙肝五项集成检测反应板。
在另一优选例中，还包括：酶标工作液、检测液、阴性对照、阳性对照品。
在另一优选例中，所述的酶标工作液由兔抗人酶标抗体组成，所述的检测液由发光物和过氧化氢两种试剂组成，使用前混合。
在另一优选例中，所述的发光物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物。
附图说明
图1是本实用新型一种固相载体上丙肝抗原的点样示意图
图2是本实用新型的反应孔中进行的各抗原——抗体反应的示意图
具体实施方式
丙肝五项集成检测的关键和难点是，检测的灵敏度和特异性直接关系到结果的准确可靠，本实用新型经过深入而广泛的研究，对检测反应板作了改进，在本实用新型应用微点阵检测技术，结合酶免疫间接法和化学发光检测技术，大大提高了检测的灵敏度和特异性，从而解决了上述问题。
具体而言，为提高丙肝五项(HCVCORE、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5、HCV总)的检测效率，本实用新型应用微点阵检测技术，结合酶免疫间接法和化学发光检测技术设计了一种丙肝五项集成检测反应板，反应孔板包括基板和位于基板上的反应孔，所述的反应孔包括5-200个样本孔，1-3个阴性对照孔，1-3个阳性质控孔，其中，其特征在于：每一反应孔的底部平面上有固相载体，且在固相载体上包被着HCVcore、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5、HCV总五种抗原的蛋白质微点阵。
各反应孔的数量没有特别限制，通常样本孔为5-200个，较佳地5-50个。阴性对照孔为1-3个，较佳地2-3个。阳性质控孔为为1-5个，较佳地2-3个。
在本实用新型中，反应孔的形状和大小没有特别限制，可以是圆形、方形、六角形、椭圆形、或其他形状。大小通常为直径0.5-5cm，深度为0.5-2cm。
在本实用新型中，反应板基板的材料可以选用本领域常用的各种材料，较佳的基板材料包括玻璃、塑料、陶瓷等。
在本实用新型中，包被丙肝抗原的固相载体可以选用本领域常用的各种固相载体，包括(但并不限于)：玻璃片、塑料、硝酸纤维(NC)膜、PDVF膜等，较佳的固相载体包括NC膜、PDVF膜。
在固相载体上，HCVCORE、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5、HCV总五种抗原各有1-3个点样点，较佳地2个点样点。此外，较佳地在固相载体上还包括一个定位点(见图1)。各点样点之间的距离通常为0.1-5mm。
另一方面，本实用新型还提供了一种丙肝五项集成检测蛋白芯片试剂盒，该试剂盒可实现多指标并行化、微型化、高通量检测。它包括本实用新型的反应孔板、洗涤液、酶标工作液、检测液(A、B)、阴性对照、阳性质控品等。其中，酶标工作液液由HRP标记的兔抗人抗体组成，检测液由发光物和过氧化氢二种试剂组成，发光物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物，使用前混合。
在本实用新型中，各指标的检测采用酶免间接法，检测原理如图2所示。详细叙述如下：
1)将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原。封闭，除去未结合的位点。
2)加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
3)加酶标抗抗体，与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。
4)加底物：固相上的酶催化底物，化学发光，CCD检测，光强度代表标本中受检抗体的量
本实用新型巧妙地综合利用了蛋白质微点阵检测技术，酶免疫间接法和化学发光检测技术，实现了丙型肝炎感染五种指标的同时检测。
下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
检测反应板的制备
取48孔板，设置42个样本孔，3个阴性对照孔，3个阳性质控孔。在每个反应孔的底部放置一固相载体(NC膜或PDVF膜等所有适合的膜)，且在固相载体上包被着HCVCORE、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5、HCV总五种抗原的蛋白质微列阵(图1)。
实施例2
试剂盒制备
制备含一丙型肝炎五项指标集成检测的试剂盒，它含有实施例1的反应孔板一块(24-48人份)，洗涤浓缩液1瓶，酶标工作液1瓶，检测液A一瓶，检测液B一瓶，阳性对照一瓶，阴性对照一瓶。
洗涤浓缩液、酶标工作液、检测液A、检测液B
实施例3
丙型肝炎五项指标集成检测
按以下方法对各测试血请样品进行检测：
1.加经稀释的待检测血请或阴性对照、阳性对照品于相应反应孔内，150ul/孔。
2.37℃保温振荡反应30分钟。
3.用洗液洗涤4-6次，每次0-2分钟，振动。
4.每孔加酶标工作液50-200ul。
5.用洗液洗涤4-6次，每次0-2分钟，振动。
6.加检测液10-50ul/孔，使检测液均匀分布于孔的底部。
7、CCD检测，视发光信号强度曝光120秒。
结果判定：
依据不同指标的CutOff值，参考阴性对照和阳性质控空，判定样品血清的阴阳性。
与此同时，用常规方法对测试的血清样品进行常规检测。结果表明，用本实用新型的试剂盒得出的测试结果比常规方法更加准确。
在本实用新型提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本实用新型的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本实用新型作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权力要求书所限定的范围。

Claims (9)

1.一种丙肝五项集成检测反应板，其特征在于，反应孔板包括基板和位于基板上的反应孔，所述的反应孔包括5-200个样本孔，1-3个阴性对照孔，1-5个阳性质控孔，其中，每一反应孔的底部有固相载体，且在固相载体上包被着HCVCORE、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5、HCV总五种抗原的微点阵，在每一反应孔内还设有一定位基准点。
2.如权利要求1所述的反应板，其特征在于，所述的固相载体是NC膜、或PDVF膜。
3.如权利要求1所述的反应板，其特征在于，所述样本孔的数量为1-197个。
4.如权利要求1所述的反应板，其特征在于，所述的HCVCORE、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5、HCV总五种抗原在固相载体上各有2个点样点。
5.如权利要求1所述的反应板，其特征在于，在每一反应孔内还设有一定位基准点。
6.一种丙肝五项集成检测蛋白芯片试剂盒，其特征在于，它包括反应板，反应孔板包括基板和位于基板上的反应孔，所述的反应孔包括5-200个样本孔，1-3个阴性对照孔，1-5个阳性质控孔，其中，每一反应孔的底部有固相载体，且在固相载体上包被着HCVCORE、HCVNS3、HCVNS4、HCVNS5、HCV总五种抗原的微点阵，在每一反应孔内还设有一定位基准点。。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括：酶标工作液和检测液、阴性对照、阳性对照品。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的酶标工作液由HRP标记的兔抗人抗体组成，所述的检测液由发光物和过氧化氢二种试剂组成，使用前混合。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的发光物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物。
CN 200520039762 2005-02-24 2005-02-24 丙型肝炎五项指标集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒 Expired - Lifetime CN2777543Y (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200520039762 CN2777543Y (zh) 2005-02-24 2005-02-24 丙型肝炎五项指标集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200520039762 CN2777543Y (zh) 2005-02-24 2005-02-24 丙型肝炎五项指标集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN2777543Y true CN2777543Y (zh) 2006-05-03

Family

ID=36744926

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 200520039762 Expired - Lifetime CN2777543Y (zh) 2005-02-24 2005-02-24 丙型肝炎五项指标集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN2777543Y (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101126759B (zh) * 2007-09-21 2011-05-11 王琳 塑料试管蛋白芯片、其制备方法及应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101126759B (zh) * 2007-09-21 2011-05-11 王琳 塑料试管蛋白芯片、其制备方法及应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1254844A (zh) 改进的侧流分析
CN1854737A (zh) 心血管疾病诊断和预测多指标蛋白芯片检测试剂盒
CN109212201A (zh) 一种用于血清中乙肝病毒五项检测的离心式微流控芯片
CN1217194C (zh) 蛋白芯片及其制备方法和使用方法
CN1928561A (zh) 基于光子晶体微球的多元免疫检测方法
CN1849515A (zh) 用于自动测定的检测盒和使用该检测盒的测定装置
Liu et al. Incorporation of electrospun nanofibrous PVDF membranes into a microfluidic chip assembled by PDMS and scotch tape for immunoassays
CN1675546A (zh) 基于流控技术的测定装置
CN1380551A (zh) 免疫色谱装置以及使用该装置测量样品的方法
CN1700009A (zh) 用单一捕获剂定量检测特异性分析物的方法及其试剂盒
CN2783324Y (zh) 心血管疾病诊断和预测多指标蛋白芯片检测试剂盒
CN101178404A (zh) 人类免疫缺陷病毒抗体化学发光免疫分析诊断试剂盒及其制备方法
CN1164948C (zh) 一种基于抗原抗体反应的试剂盒
CN2777543Y (zh) 丙型肝炎五项指标集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒
JPH09101302A (ja) マイクロプレート
JP2010032215A (ja) 自動分析装置
CN104374921A (zh) 一种用于莱姆病鞭毛抗原免疫血清学诊断的蛋白质芯片及其制备方法和应用
CN1847850A (zh) 诊断对照系统
CN1715923A (zh) 一种用于快速检测食品、农副产品中兽药残留物的蛋白芯片
CN111504959B (zh) C肽稀土荧光微球试剂盒及其检测卡和制备方法
CN1141580C (zh) 对艾滋病与丙型肝炎病毒抗体的联合快速检测方法
CN2613759Y (zh) 一种蛋白质芯片
CN1743845A (zh) 一种蛋白芯片的检测方法
CN1588072A (zh) 不同阻抗系列免疫微球及制备方法、以及对其进行检测的方法与装置
US20080227111A1 (en) Reagent kit and method for measuring hcv antibody

Legal Events

Date Code Title Description
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Assignee: Shanghai Yulong Biological Science And Technology Co., Ltd.

Assignor: Mu Haidong

Contract fulfillment period: 2008.8.8 to 2013.8.8

Contract record no.: 2008310000195

Denomination of utility model: Integrated checking reaction board and protein chip reagent kit for five index of hepatitis C

Granted publication date: 20060503

License type: Exclusive license

Record date: 20081021

LIC Patent licence contract for exploitation submitted for record

Free format text: EXCLUSIVE LICENSE; TIME LIMIT OF IMPLEMENTING CONTACT: 2008.8.8 TO 2013.8.8; CHANGE OF CONTRACT

Name of requester: SHANGHAI YULONG BIOLOGICAL TECHNOLOGY CO., LTD.

Effective date: 20081021

EC01 Cancellation of recordation of patent licensing contract

Assignee: Shanghai Yulong Biological Science And Technology Co., Ltd.

Assignor: Mu Haidong

Contract record no.: 2008310000195

Date of cancellation: 20130823

LICC Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Assignee: Shanghai Yulong Biological Science And Technology Co., Ltd.

Assignor: Mu Haidong

Contract record no.: 2014310000011

Denomination of utility model: Integrated checking reaction board and protein chip reagent kit for five index of hepatitis C

Granted publication date: 20060503

License type: Exclusive License

Record date: 20140121

C17 Cessation of patent right
CX01 Expiry of patent term

Expiration termination date: 20150224

Granted publication date: 20060503