CN219434850U - 沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条、检测卡及试剂盒 - Google Patents
沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条、检测卡及试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本实用新型提供了沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条、检测卡及试剂盒，试纸条包括底板以及位于底板上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包被有胶体金标记的淋病奈瑟菌单克隆抗体1和沙眼衣原体单克隆抗体1，所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向依次设有第二检测线、第一检测线和质控线，所述第一检测线包被有淋病奈瑟菌单克隆抗体2、所述第二检测线包被有沙眼衣原体单克隆抗体2，所述质控线包被有羊抗鼠兔IgG抗体。本实用新型采用免疫层析胶体金试纸条方法检测病原微生物，同一样本，可快速检测联合检测沙眼衣原体与淋病奈瑟菌两种病菌，在疾病的检测、诊断上具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本实用新型属于免疫层析体外检测技术领域，具体涉及沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条、检测卡及试剂盒。
背景技术
衣原体(Chlamydia)包括沙眼衣原体(C.trachomatis)、鹦鹉热衣原体(C.psittaci)和肺炎衣原体(C.pneumonia)3种。沙眼衣原体又分为沙眼、性病淋巴肉芽肿(Lymphogranuloma venereum，LGV)和鼠生物变种3个生物变种。沙眼衣原体生物变种有A-K18个血清型，其中A、B、Ba、C引起沙眼，D-K型引起泌尿生殖道感染，如包涵体结膜炎、非淋菌性尿道炎、宫颈炎、输卵管炎、附睾炎、直肠炎、新生儿肺炎和中耳炎等。衣原体性泌尿生殖道炎是目前世界最多的性病之一。淋病以泌尿生殖系统化脓性感染为主要表现，其病原体是淋病奈瑟菌(简称淋球菌，Neisseria gonorrhoeae，NG)。人类是淋球菌唯一的自然宿主，淋病主要由性接触而传播。淋球菌侵入泌尿生殖系统繁殖，男性引发尿道炎，女性引起尿道炎和子宫颈炎。如治疗不彻底，可扩散至生殖系统。胎儿可经产道感染造成新生儿淋病性急性结膜炎。人类对淋球菌无自然免疫力，均易感，病后免疫力不强，不能防止再感染。
淋球菌与衣原体的检测方法比较多，有培养法、免疫层析法、核酸检测法、镜检法和生化酶法等。传统的培养法虽然是诊断奈瑟菌的标准，一般需要5-10天得到结果，且操作过程繁琐，不能适应快速检测的要求；核酸检测法虽然准确、灵敏、快速，但是检测时间约40min，且成本较高，对检测人员技术要求极高。镜检法特异性高经济实用，但是检出率低。
实用新型内容
基于以上，本实用新型的目的在于提供沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条、检测卡及试剂盒。
本实用新型的技术目的通过如下技术方案实现：
本实用新型提供了沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条，包括底板以及位于底板上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包被有胶体金标记的淋病奈瑟菌单克隆抗体1和沙眼衣原体单克隆抗体1，所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向依次设有第二检测线、第一检测线和质控线，所述第一检测线包被有淋病奈瑟菌单克隆抗体2、所述第二检测线包被有沙眼衣原体单克隆抗体2，所述质控线包被有羊抗鼠兔IgG抗体。
优选地，所述第二检测线、第一检测线和质控线相互平行。
优选地，所述底板为PVC底板。
优选地，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫在结合处上下叠加。
优选地，所述淋病奈瑟菌单克隆抗体1采用淋病奈瑟菌单克隆抗体clone GC12-351.2，所述淋病奈瑟菌单克隆抗体2采用淋病奈瑟菌单克隆抗体clone801，所述沙眼衣原体单克隆抗体l采用沙眼衣原体单克隆抗体clone HM031，所述沙眼衣原体单克隆抗体2采用沙眼衣原体单克隆抗体clone HM032。
本实用新型还提供了沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的检测卡，包括上述试纸条。
优选地，还包括卡壳，所述试纸条置于所述卡壳内部，所述卡壳上开设有加样孔和观察窗，所述加样孔对应试纸条的样品垫，所述观察窗对应所述硝酸纤维素膜上的第二检测线、第一检测线和质控线。
本实用新型另提供了沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试剂盒，包括上述检测卡。
本实用新型提供了沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条、检测卡及试剂盒，采用免疫层析胶体金试纸条方法检测病原微生物，具有简便、快速、成本低的优点，而且，同一样本，可快速检测联合检测沙眼衣原体与淋病奈瑟菌两种病菌，在疾病的检测、诊断上具有广泛的应用前景。
附图说明
图1是本实用新型沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条及卡壳的结构示意图，图中：
1、试纸条，11、样品垫，12、金标垫，13、硝酸纤维素膜，14、吸水垫，2、卡壳，21、加样孔，22、观察窗。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本实用新型进行详细说明，以下具体实施例有助于本领域技术人员对进一步理解本实用新型，但不以任何形式限制本实用新型。应当指出的是，在不脱离本实用新型构思的前提下，都可以对产品做出若干的变形或改造。这些都属于本实用新型的保护范围。
以下实施例中，淋病奈瑟菌单克隆抗体clone GC12-351.2购于Abnova货号MAB6185，淋病奈瑟菌单克隆抗体clone 801购于Abnova货号MAB4272，沙眼衣原体单克隆抗体clone HM031购于Abnova货号MAB13498，沙眼衣原体单克隆抗体clone HM032购于Abnova货号MAB13499。
实施例
如图1所示，本实用新型提供的沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条，包括：底板(公知结构，图中未示出)以及位于底板上依次相连的样品垫11、金标垫12、硝酸纤维素膜13和吸水垫14，样品垫11、金标垫12、硝酸纤维素膜13和吸水垫14在结合处上下叠加，本申请中，底板优选采用PVC底板，PVC底板的一端粘附样品垫11，是样品加样处；PVC底板的另一端粘附有吸水垫14，其中部依次粘附有金标垫12、硝酸纤维素膜13；金标垫12的一端与样品垫11相粘附，另一端与硝酸纤维素膜13相粘附，硝酸纤维素膜13的另一端与吸水垫14相粘附。金标垫12包被了胶体金标记的淋病奈瑟菌单克隆抗体clone GC12-351.2(抗体与胶体金标记：25μg/mL)和沙眼衣原体单克隆抗体clone HM031(抗体与胶体金标记：32μg/mL)，硝酸纤维素膜13上沿样品流动方向依次设有第二检测线T2、第一检测线T1和质控线C；第一检测线T1包被淋病奈瑟菌单克隆抗体clone 801，包被浓度为0.1～1mg/mL，第二检测线T2包被沙眼衣原体单克隆抗体clone HM032，包被浓度为0.5～1.5mg/mL，硝酸纤维素膜的质控线C包被羊抗鼠兔IgG抗体，包被浓度为0.2～2mg/mL。
本申请胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：
1.胶体金制备：取1mL 10g/L氯金酸溶液加入到经泡酸和硅化处理过的试剂瓶中，加入99mL去离子水，加入转子，盖上盖子，放在可加热磁力搅拌器上，待到溶液煮至沸腾，加入1.5mL 10g/L柠檬酸三钠溶液，溶液会从无色，变为灰黑色最后变为酒红色后，颜色稳定后继续加热5分钟待其冷却至室温后，用去离子水补至100mL，4℃避光保存，胶体金颗粒直径为40nm；
2.胶体金标记：将制备好的胶体金于4℃3000r/min离心30min，取上清，用0.1mol/L的K2CO3溶液调pH至8.4，逐滴加入单克隆抗体，室温搅拌20min，加入50g/L的BSA溶液，使其终质量浓度为10g/L，继续搅拌15min；此即为胶体金标记的兔抗鸭IgG抗体，4℃保存备用；
3.标记抗体纯化：低温超速离心法纯化单克隆抗体，以去除溶液中未标记的单克隆抗体和未充分标记的胶体金。首先将金标单克隆抗体在4℃下，以3000rpm/min低速离心40分钟，吸取上清液，弃沉淀；再将上清液在4℃下，以10000rpm/min离心40分钟，弃去上清，用0.01mol/L、pH7.4的PBS缓冲溶液(内含1％BSA和0.02％叠氮钠)溶解沉淀至原体积，充分稳定后过夜：4℃下，再以10000rpm/min离心40分钟，弃去上清，用0.01mol/L、pH7.4的PBS缓冲溶液(内含1％BSA和0.02％叠氮钠)溶解沉淀至原体积的1/10，获得纯化的单克隆抗体，4℃保存备用；
4.胶体金试纸条的组装：1)将标记好的金标单克隆抗体喷涂于封闭好的结合垫上制得金标垫；用划膜仪将淋病奈瑟菌单克隆抗体clone 801包被在NC膜上的第一检测线T1位置，沙眼衣原体单克隆抗体clone HM032包被在NC膜上的第二检测线T2位置，羊抗鼠IgG抗体喷包被在NC膜上的质控线C制得硝酸纤维素膜(NC膜)；2)将制得的样品垫、金标垫、NC膜和吸水纸依次粘贴于PVC底板上，得所述胶体金试纸条。
以上所用材料及方法步骤也可以通过本领域其他公知的常规技术手段来实现，本申请对此不做限定。
试验例
为了测试本申请产品的效果，申请人通过以下几个试验进行了验证。
一、交叉试验
本试纸条对淋病奈瑟菌、白色念珠菌、大肠杆菌、阴道加德纳菌、B组链球菌、沙眼衣原体、解脲支原体样本进行检测，结果显示淋病奈瑟菌和沙眼衣原体出现明显的检测线，其他样品检测均为阴性，说明本试纸条与以上菌种无交叉反应。
二、特异性试验
淋病奈瑟菌100份阴性样本和100份阳性样本，检测结果如下：
表1.采用核酸检测及本试纸条检测淋病奈瑟菌结果对比
沙眼衣原体100份阴性样本和100份阳性样本，检测结果如下：
表2.采用核酸检测及本试纸条检测沙眼衣原体结果对比
本试纸条检测结果与核酸检测结果一致，说明该试纸条具有良好的特异性和灵敏性。
三、重复性试验
取淋病奈瑟菌和沙眼衣原体混合阳性样本一份，连续测试20个试纸条，结果显示第一检测线T1和第二检测线T2显色均匀一致，说明本试纸条有良好的重复性。
本实用新型还提供了包括上述试纸条的检测卡，通过将试纸条1置于卡壳2内部实现，卡壳2上开设有加样孔21和观察窗22，加样孔21对应试纸条的样品垫11，观察窗22对应硝酸纤维素膜13上的第二检测线T2、第一检测线T1和质控线C。制作材料及方法为本领域常规技术手段，在此不做赘述。
另外，基于本申请提供的检测卡，还可以将其制作为试剂盒，试剂盒中可进一步包括采样拭子、样品处理液等，具体制作材料及方法可采用本领域常规技术手段，在此不做赘述。
显然，本实用新型的上述实施例仅仅是为更清楚地说明本实用新型所作的举例，而并非是对本实用新型的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方法予以穷举，凡是属于本实用新型的技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本实用新型的保护范围之列。
Claims (8)
1.沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条，其特征在于，包括底板以及位于底板上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包被有胶体金标记的淋病奈瑟菌单克隆抗体1和沙眼衣原体单克隆抗体1，所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向依次设有第二检测线、第一检测线和质控线，所述第一检测线包被有淋病奈瑟菌单克隆抗体2、所述第二检测线包被有沙眼衣原体单克隆抗体2，所述质控线包被有羊抗鼠兔IgG抗体。
2.根据权利要求1所述的沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条，其特征在于，所述淋病奈瑟菌单克隆抗体1采用淋病奈瑟菌单克隆抗体clone GC12-351.2，所述淋病奈瑟菌单克隆抗体2采用淋病奈瑟菌单克隆抗体clone 801，所述沙眼衣原体单克隆抗体l采用沙眼衣原体单克隆抗体clone HM031，所述沙眼衣原体单克隆抗体2采用沙眼衣原体单克隆抗体clone HM032。
3.根据权利要求1所述的沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条，其特征在于，所述第二检测线、第一检测线和质控线相互平行。
4.根据权利要求1所述的沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条，其特征在于，所述底板为PVC底板。
5.根据权利要求1所述的沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试纸条，其特征在于，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫在结合处上下叠加。
6.沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的检测卡，其特征在于，包括权利要求1-5任意一项所述的试纸条。
7.根据权利要求6所述的沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的检测卡，其特征在于，还包括卡壳，所述试纸条置于所述卡壳内部，所述卡壳上开设有加样孔和观察窗，所述加样孔对应试纸条的样品垫，所述观察窗对应所述硝酸纤维素膜上的第二检测线、第一检测线和质控线。
8.沙眼衣原体与淋病奈瑟菌联检的试剂盒，其特征在于，包括权利要求6所述的检测卡。
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