CN218481404U - 一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，包括试剂盒以及放在试剂盒内的多个药剂盒，其中，具有放置不同荧光编码磁性微球的一号药剂盒，荧光编码微球包含有分别包被冰毒抗原和吗啡抗原的荧光编码微球；具有放置检测抗体的二号药剂盒，检测抗体包括分别偶联藻红蛋白的冰毒抗体和吗啡抗体，具有放置标准品溶液的三号药剂盒，标准品溶液包括冰毒标准品和吗啡标准品溶液，具有放置缓冲液的四号药剂盒，缓冲液为pH7.4的PBS缓冲液，具有结构简单，操作方便，冰槽以及可发性聚苯乙烯泡沫层便于保存各个药剂，多药剂盒统一保存在一个试剂盒内，可以同时检测待测样品中冰毒和吗啡含量，效率高、可用于缉毒筛查。

Description

一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒

技术领域

本实用新型涉及一种检测试剂盒，更具体一点说，涉及一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，属于生物技术检测领域。

背景技术

毒品威胁着人类的健康，威胁着全世界的社会稳定和经济发展，是当今世界最严重的社会问题。在同一样品中，同步地、准确地、快速地检测待测样品中冰毒和海洛因的含量具有重要的意义。

而流式微球技术利用球形基质作为载体，以流式细胞术作为检测平台，可以在较短时间内对样品进行大规模检测。其主要基于流式荧光编码微球，检测通量大、灵敏度高，可实现同步检测多靶标，具有较为广阔的应用空间。

本实用新型提供了一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，具有结构简单，操作方便，便于保存各个药剂，可以分装荧光编码微球、吗啡抗体、冰毒与吗啡标准品、缓冲液以便于检测使用。

实用新型内容

本实用新型提供了一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，具有结构简单，操作方便，便于保存各个药剂，可以分装荧光编码微球、吗啡抗体、冰毒与吗啡标准品、缓冲液以便于检测使用。

为了实现上述目的，本实用新型是通过以下技术方案实现的：

一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒检测的试剂盒，包括试剂盒以及放在试剂盒内的多个药剂盒，其中，具有放置不同荧光编码磁性微球的一号药剂盒，荧光编码微球包含有分别包被冰毒抗原和吗啡抗原的荧光编码微球；具有放置检测抗体的二号药剂盒，检测抗体包括分别偶联藻红蛋白的冰毒抗体和吗啡抗体，具有放置标准品溶液的三号药剂盒，所述标准品溶液包括冰毒标准品和吗啡标准品溶液，具有放置缓冲液的四号药剂盒，所述缓冲液为pH7.4 的PBS缓冲液。

优选的，所述试剂盒内设有可发性聚苯乙烯泡沫层，试剂盒包块盒体和盒盖，所述盒体与盒盖由酚醛塑料材质的连接轴连接，盒体底部预制有存放碎冰的冰槽。

优选的，所述一号药剂盒设有一个，其插在盒体的上端面上，所述二号药剂盒设有一个，其插在盒体的上端面上，所述三号药剂盒设有6个，其中3个装有冰毒标准品溶液，另外3个装有吗啡标准品溶液，所述三号药剂盒插在盒体的上端面上，所述四号药剂盒设有一个，其插在盒体的上端面上。

优选的，所述三号药剂盒位于盒体的上端面的左侧，所述四号药剂盒位于盒体的上端面的右侧，所述一号药剂盒、二号药剂盒均位于三号药剂盒和四号药剂盒间的盒体的上端面上，并且所述二号药剂盒位于一号药剂盒前端。

优选的，所述二号药剂盒、一号药剂盒大小尺寸相同。

优选的，所述三号药剂盒的大小尺寸小于二号药剂盒的大小尺寸，所述二号药剂盒的大小尺寸小于四号药剂盒的大小尺寸。

有益效果：具有结构简单，操作方便，冰槽以及可发性聚苯乙烯泡沫层便于保存各个药剂，可以分装荧光编码微球、吗啡抗体、冰毒与吗啡标准品、缓冲液以便于检测使用，多药剂盒统一保存在一个试剂盒内，可以同时检测待测样品中冰毒和吗啡含量，效率高、重复性好，可用于缉毒筛查，具有较好的应用前景。

附图说明

图1是本实用新型试剂盒结构示意图。

图2是本实用新型冰毒检测标准曲线图。

图3是本实用新型吗啡检测标准曲线图。

具体实施方式

以下结合说明书附图1-3，对本实用新型作进一步说明，但本实用新型并不局限于以下实施例。

为使本实用新型的目的、方法及优点更加清楚明确，下面结合具体实施例对本实用新型做出详细说明，所述的实施例只用于说明本实用新型，而不是用于对本实用新型进行限定，任何在本实用新型基础上所做的修改、等同替换等均在本实用新型的保护范围内。

一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒检测的试剂盒，包括试剂盒以及放在试剂盒内的多个药剂盒，其中，具有放置不同荧光编码磁性微球的一号药剂盒1，荧光编码微球包含有分别包被冰毒抗原和吗啡抗原的荧光编码微球；具有放置检测抗体的二号药剂盒2，检测抗体包括分别偶联藻红蛋白的冰毒抗体和吗啡抗体，具有放置标准品溶液的三号药剂盒3，所述标准品溶液包括冰毒标准品和吗啡标准品溶液，具有放置缓冲液的四号药剂盒4，所述缓冲液为 pH7.4的PBS缓冲液。

所述试剂盒内设有可发性聚苯乙烯泡沫层，试剂盒包块盒体和盒盖，所述盒体与盒盖由酚醛塑料材质的连接轴连接，盒体底部预制有存放碎冰的冰槽。

所述一号药剂盒1设有一个，其插在盒体的上端面上，所述二号药剂盒2 设有一个，其插在盒体的上端面上，所述三号药剂盒3设有6个，其中3个装有冰毒标准品溶液，另外3个装有吗啡标准品溶液，所述三号药剂盒3插在盒体的上端面上，所述四号药剂盒4设有一个，其插在盒体的上端面上。所述三号药剂盒3位于盒体的上端面的左侧，所述四号药剂盒4位于盒体的上端面的右侧，所述一号药剂盒1、二号药剂盒2均位于三号药剂盒3和四号药剂盒4间的盒体的上端面上，并且所述二号药剂盒2位于一号药剂盒1前端。

所述二号药剂盒2、一号药剂盒1大小尺寸相同。所述三号药剂盒3的大小尺寸小于二号药剂盒2的大小尺寸，所述二号药剂盒2的大小尺寸小于四号药剂盒4的大小尺寸。

利用本申请中的试剂盒进行一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测：

首先，将冰毒和吗啡抗原分别包被在不同荧光编码磁性微球表面，形成微球-抗原复合物，10μg抗原包被5×10⁶个磁珠，抗原与微球的孵育条件为室温避光震荡1.5h。利用离心管和磁力架对编码荧光微球进行洗涤和分离，去除未结合抗原。将冰毒抗体和吗啡抗体分别与藻红蛋白偶联，并对抗体的使用量进行优化，确定适合的抗体使用剂量，避免检测抗体过量。将优化剂量的偶联抗体和待测样品同时与微球孵育，孵育条件为避光、37℃震荡1h，最终形成微球- 冰毒/吗啡-藻红蛋白偶联抗体荧光免疫复合物，经仪器检测荧光类型和荧光信号强度完成检测。

所述包被抗原是指BSA-冰毒和BSA-吗啡。所述包被抗原微球，是通过活化荧光微球表面的羧基[利用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC) 和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)]，将其与BSA-冰毒和BSA-吗啡上的氨基形成共价键，从而形成复合物。所述检测抗体是指与藻红蛋白偶联的冰毒单克隆抗体和吗啡单克隆抗体。所述样品制备过程中的离心管和磁力架，可用酶标板和 96孔板磁力架替代。所述荧光检测分析是指利用检测仪器发射的两束不同波长激发光照射免疫复合体，由荧光编码微球的荧光类型确定检测指标类型、由藻红蛋白的荧光强度确定检测指标含量。检测仪器优选Tesmi F4000全自动流式荧光发光免疫分析仪。磁性微球优选美国Luminex生产。

美国Luminex公司可以提供编码微球。

以下结合附图1-3、实施例1-4对本申请作进一步详细说明。

实施例1微球-冰毒抗原偶联

5×10⁶个微球为一个批次，将其加入至1.5mL离心管中，依次加入EDC和 NHS溶液，在室温、酸性条件下活化微球表面30min，随后利用磁力架将微球清洗，加入10μg抗原，室温避光震荡1.5h，利用磁力架去除未过量的抗原，加入1％BSA，室温避光震荡30h以封闭未结合位点。

实施例2藻红蛋白偶联冰毒抗体

藻红蛋白冻干粉用0.1M pH值7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解，浓度调整到5-10mg/mL。将琥珀酰亚胺-4-(N-甲基马来酰亚胺)环已烷-1-碳酸酯)(SMCC) 溶解于无水二甲基亚砜(DMSO)配制成10mg/mL，每毫克的藻红蛋白添加11uL 的琥珀酰亚胺-4-(N-甲基马来酰亚胺)环已烷-1-碳酸酯)(SMCC)，室温旋转反应 1h。将衍生化的藻红蛋白过柱，收集藻红蛋白峰。二硫苏糖醇(DTT)溶解于蒸馏水中，配制成1mol/L，调整抗体的浓度，使其浓度为4mg/mL。每mL抗体溶液中加入20ul的二硫苏糖醇(DTT)，室温静置反应40min，将反应液过柱，收集抗体部分。每mg抗体加入3.2mg的琥珀酰亚胺-4-(N-甲基马来酰亚胺)环已烷-1-碳酸酯)(SMCC)衍生化的藻红蛋白，于室温旋转反应1h，使藻红蛋白分子上的马来酰亚胺基和抗体上的巯基实现共价交联。加入3.4微升N-乙基马来酰胺(NEM)，于室温旋转反应1h，使抗体上的巯基封闭。将交联物于存储缓冲液中透析后保存于冰箱。

实施例3微球-冰毒/吗啡-藻红蛋白偶联抗体荧光免疫复合物形成

1.5mL离心管中加入微球-冰毒抗原偶联物，将藻红蛋白偶联抗体和待测样品同时与微球孵育，孵育条件为避光、37℃震荡1h，得到微球-冰毒/吗啡-藻红蛋白偶联抗体荧光免疫复合物，上机检测，由荧光编码微球的荧光类型确定检测指标类型、由藻红蛋白的荧光强度确定检测指标含量。

实施例4冰毒、吗啡检测的线性范围、灵敏度、特异性及精密度

分别配制冰毒和吗啡的标准品，利用本试剂盒进行检测，绘制标准曲线，利用荧光值和浓度值绘制标准曲线，冰毒检测的线性方程为：Log10(Y) ＝5.75148-0.72868Log10(X)，R2＝0.99672，线性范围为2ng/ml～1000ng/ml，吗啡检测的线性方程为：Log10(Y)＝5.90790-0.78742Log10(X)，R2＝0.99088，线性范围为2ng/ml～1000ng/ml，结果图1所示。

平行测定10次0ng/ml参考标准品的荧光值，并计算其均值(mean)及标准差(SD)，采用mean-2SD代入标准曲线方程，计算得到本试剂盒对冰毒的检测灵敏度为1.21ng/ml，对吗啡的检测灵敏度为0.75ng/ml。

分别检测冰毒和吗啡的低值样本、中值样本、高值样本各10次，得到冰毒检测的批内变异系数为5.77％-7.12％(＜10％)，批间变异系数为7.52％-12.36％(＜15％)。吗啡检测的批内变异系数为3.40％-5.68％(＜10％)，批间变异系数为8.14％-13.62％。

表1冰毒检测精密度

表2吗啡检测精密度

最后，需要注意的是，本实用新型不限于以上实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员能从本实用新型公开的内容中直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本实用新型的保护范围。

Claims (6)

1.一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，其特征在于包含：包括试剂盒以及放在试剂盒内的多个药剂盒，其中，具有放置不同荧光编码磁性微球的一号药剂盒(1)，荧光编码微球包含有分别包被冰毒抗原和吗啡抗原的荧光编码微球；具有放置检测抗体的二号药剂盒(2)，检测抗体包括分别偶联藻红蛋白的冰毒抗体和吗啡抗体，具有放置标准品溶液的三号药剂盒(3)，所述标准品溶液包括冰毒标准品和吗啡标准品溶液，具有放置缓冲液的四号药剂盒(4)，所述缓冲液为pH7.4的PBS缓冲液。

2.根据权利要求1所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒内设有可发性聚苯乙烯泡沫层，试剂盒包块盒体和盒盖，所述盒体与盒盖由酚醛塑料材质的连接轴连接，盒体底部预制有存放碎冰的冰槽。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，其特征在于：所述一号药剂盒(1)设有一个，其插在盒体的上端面上，所述二号药剂盒(2)设有一个，其插在盒体的上端面上，所述三号药剂盒(3)设有6个，其中3个装有冰毒标准品溶液，另外3个装有吗啡标准品溶液，所述三号药剂盒(3)插在盒体的上端面上，所述四号药剂盒(4)设有一个，其插在盒体的上端面上。

4.根据权利要求3所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，其特征在于：所述三号药剂盒(3)位于盒体的上端面的左侧，所述四号药剂盒(4)位于盒体的上端面的右侧，所述一号药剂盒(1)、二号药剂盒(2)均位于三号药剂盒(3)和四号药剂盒(4)间的盒体的上端面上，并且所述二号药剂盒(2)位于一号药剂盒(1)前端。

5.根据权利要求1或2或4所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，其特征在于：所述二号药剂盒(2)、一号药剂盒(1)大小尺寸相同。

6.根据权利要求5所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的试剂盒，其特征在于：所述三号药剂盒(3)的大小尺寸小于二号药剂盒(2) 的大小尺寸，所述二号药剂盒(2)的大小尺寸小于四号药剂盒(4)的大小尺寸。

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