CN216747743U - 一种新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡 - Google Patents

Abstract

本实用新型提供一种新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡，包括第一检测试纸和第二检测试纸，第一检测试纸包括依次设置的第一样品垫、第一金标垫、IgM检测线和IgG检测线，第一金标垫中含胶体金标记的新型冠状病毒S蛋白、N蛋白和鸡IgY，IgM检测线用鼠抗人IgM包被，IgG检测线用鼠抗人IgG包被，第二检测试纸包括依次设置的第二样品垫、抗原垫、链接垫、第二金标垫和中和抗体检测线，抗原垫中含RBD蛋白，第二金标垫中含胶体金标记的RBD抗体和鸡IgY，中和抗体检测线用ACE2包被，两个样品垫与加样口间的距离相等。本技术提高了检测效率，减少标记RBD蛋白产生的位阻效应，提高了检测灵敏度和准确度。

Description

一种新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡

技术领域

本实用新型涉及POCT试纸检测技术领域，具体地，涉及一种新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡。

背景技术

现场快速检验(point-of-care testing，POCT)，是指在采样现场进行的、利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的一种检测方式，操作简单，免去了标本在实验室检验时的复杂处理程序，省时省力。

由于病原微生物在侵入人体时，会导致人体免疫系统产生相应的抗体，因此，特异性抗体检测可以协助临床诊断，在某些疾病中也可以作为观察疗效及预后的一个指标，或者是预防接种效果的观察，在传染病流行病学调查中，特异性抗体检测也具有十分重要的意义。

在对新型冠状病毒进行POCT检测时，目前所用的检测试纸存在如下缺陷：

1、仅能针对单一种类的抗体进行检测，若要进一步检测同一体液样本内是否含有其他抗体，如IgG、IgM、中和抗体等，则需要重复取样检测，不仅操作不方便，还容易造成加样误差。

2、中和抗体是由B淋巴细胞产生的一种抗体，能够与新型冠状病毒表面的RBD蛋白结合，在检测中和抗体时，通常采用竞争法，首先用胶体金标记RBD蛋白，然后使样本中移动的中和抗体与固定在检测线上的ACE2竞争结合RBD蛋白，被ACE2捕获的RBD蛋白越少，胶体金沉积显色越浅。

由于常用的胶体金颗粒直径约为20nm左右，接近甚至大于RBD蛋白的直径，当用胶体金标记RBD蛋白时，胶体金相对于RBD蛋白过大的尺寸会产生明显的空间位阻效应，影响RBD蛋白与中和抗体、ACE2的结合效率，从而导致相关抗体检测的灵敏度和准确度下降，检测试纸无法对低浓度样本做出准确的判断，从而造成错误结果，影响对疾病的防控。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种可检测多种抗体且减少因胶体金标记RBD蛋白而产生的位阻效应的检测试纸，以解决背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本实用新型提供一种新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡，包括用于检测新型冠状病毒IgG和IgM的第一检测试纸以及用于检测新型冠状病毒中和抗体的第二检测试纸；

所述第一检测试纸包括沿样本层析方向设置第一样品垫、第一金标垫和免疫球蛋白抗体检测线，所述免疫球蛋白抗体检测线包括IgM检测线和IgG检测线，且二者排列的先后顺序可调，所述第一金标垫中含有均被胶体金标记的新型冠状病毒S蛋白和N蛋白，所述IgM检测线中含有鼠抗人IgM单克隆抗体，所述IgG检测线中含有鼠抗人IgG单克隆抗体；

所述第二检测试纸包括沿样本层析方向设置的第二样品垫、抗原垫、第二金标垫和中和抗体检测线，所述抗原垫中含有RBD蛋白，所述第二金标垫中含有被胶体金标记的RBD抗体，所述中和抗体检测线中含有ACE2蛋白。

在部分可能的实施例中，所述第二检测试纸还包括链接垫，所述链接垫设置在抗原垫和第二金标垫之间并与二者连接，用于使样本中的中和抗体充分与抗原垫中的RBD蛋白结合。

在部分可能的实施例中，所述抗原垫中RBD蛋白的浓度为0.1～3.0μg/mL。

在部分可能的实施例中，所述IgM检测线用0.01～3.0mg/mL浓度的鼠抗人IgM单克隆抗体包被。

在部分可能的实施例中，所述IgG检测线用0.01～3.0mg/mL浓度的鼠抗人IgG单克隆抗体包被。

在部分可能的实施例中，所述中和抗体检测线用0.01～3.0mg/mL浓度的ACE2蛋白包被。

在部分可能的实施例中，所述第一检测试纸还包括沿样本层析方向依次设置在IgG检测线下游的第一质控线和第一吸水垫，所述第一质控线中含有羊抗鸡IgY抗体，所述第一金标垫中还含有被胶体金标记的鸡IgY抗体；

所述第二检测试纸还包括沿样本层析方向依次设置在中和抗体检测线下游的第二质控线和第二吸水垫，所述第二质控线中含有羊抗鸡IgY抗体，所述第二金标垫中还含有被胶体金标记的鸡IgY抗体。

在部分可能的实施例中，所述第一质控线用0.01～3.0mg/mL浓度的羊抗鸡IgY抗体包被，所述第二质控线用0.1～3.0μg/mL浓度的羊抗鸡IgY抗体包被。

在部分可能的实施例中，所述IgM检测线、IgG检测线和第一质控线均设置在连接第一金标垫和第一吸水垫的NC膜上；

所述中和抗体检测线和第二质控线均设置在连接第二金标垫和第二吸水垫的NC膜上。

在部分可能的实施例中，还包括外壳，所述第一检测试纸和第二检测试纸均设置在外壳中，所述外壳上设有加样口、中和抗体观察区以及IgG和IgM观察区，所述IgG和IgM观察区位于IgM检测线和IgG检测线上方，所述中和抗体观察区位于中和抗体检测线上方，所述加样口与第一样品垫、第二样品垫的距离相等。

本实用新型提供的技术方案至少具有如下有益效果：

1、通过一次加样实现对多个项目的检测，无需重复加样，提高了检测效率且操作更加方便。

2、用于检测中和抗体的第二检测试纸中胶体金的标记物是RBD抗体，而非RBD蛋白，可实现RBD抗体以及样本中的中和抗体与抗原垫中的RBD蛋白充分结合，在确保标记效果的同时，避免因标记RBD蛋白而产生的位阻效应，扩大了检测信号，使得检测更加灵敏，准确度更高，相比于常规竞争法更适合检测新型冠状病毒中和抗体。

附图说明

为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本实用新型实施例1中新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡的外部俯视图；

图2是本实用新型实施例1中新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡的第一检测试纸的结构图；

图3是本实用新型实施例1中新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡的第二检测试纸的结构图；

图中标号：11、加样口，12、IgG及IgM观察区，13、中和抗体观察区；21、第一样品垫，22、第一金标垫，23、IgM检测线，24、IgG检测线，25第一质控线，26第一吸水垫；31、第二样品垫，32、抗原垫，33、链接垫，34、第二金标垫，35、中和抗体检测线，36、第二质控线，37、第二吸水垫。

具体实施方式

为了便于理解本实用新型，下面将结合说明书附图和较佳的实施例对本实用新型中的技术方案作更全面、细致地描述，但本实用新型的保护范围并不限于以下具体的实施例，基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，均属于本实用新型保护的范围。

需要特别说明的是，当某一元件被描述为与另一元件存在“固定、固接、连接或连通”关系时，它可以是直接固定、固接、连接或连通在另一元件上，也可以是通过其他中间件间接固定、固接、连接或连通在另一元件上。

除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本实用新型的保护范围。

实施例1

参见图1-图3(箭头表示样本层析方向)，一种新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡，包括外壳以及设置在外壳中的第一检测试纸和第二检测试纸。

所述第一检测试纸用于检测新型冠状病毒IgG和IgM。所述第一检测试纸包括底垫以及底垫上沿样本层析方向依次设置的第一样品垫21、第一金标垫22、IgM检测线23、IgG检测线24、第一质控线25和第一吸水垫26。

所述第一样品垫21中含有缓冲物质，该缓冲物质中包含0.03～0.1M Tris-HCl、1～10％tween-20、0.01～2％BSA(或其他蛋白保护剂)、1～10％NaCl、1～5％Proclin300和1～5％Triton X-100等组分，整个缓冲体系的pH为7.5～8.5；所述第一金标垫22中含有被胶体金标记的新型冠状病毒S蛋白、N蛋白和鸡IgY抗体；所述IgM检测线23用0.01～3.0mg/mL浓度的鼠抗人IgM单克隆抗体包被；所述IgG检测线24用0.01～3.0mg/mL浓度的鼠抗人IgG单克隆抗体包被；所述第一质控线25用0.01～3.0mg/mL浓度的羊抗鸡IgY抗体包被；所述第一吸水垫26不添加其他物质。

所述第二检测试纸用于检测新型冠状病毒中和抗体。所述第二检测试纸包括底垫以及底垫上沿样本层析方向依次设置的第二样品垫31、抗原垫32、链接垫33、第二金标垫34、中和抗体检测线35、第二质控线36和第二吸水垫37。

所述第二样品垫31中含有缓冲物质，该缓冲物质中包含0.01～0.1M PB7.4、1％BSA(或其他蛋白保护剂)、1～5％蔗糖、0.1～2％NaCl、0.05～2％PVP、0.1～1％曲拉通和0.1～1％Proclin300等组分，整个缓冲体系的pH为7.5～8.5；所述抗原垫32中含有0.1～3.0μg/mL浓度的RBD蛋白；所述链接垫33用于使样本中的中和抗体充分与抗原垫中的RBD蛋白结合；所述第二金标垫34中含有被胶体金标记的RBD抗体和鸡IgY抗体，所述中和抗体检测线35用0.01～3.0mg/mL浓度的ACE2蛋白包被；所述第二质控线36用0.1～3.0μg/mL浓度的羊抗鸡IgY包被抗体；所述第二吸水垫37不添加其他物质。

所述IgM检测线23、IgG检测线24和第一质控线25均设置在连接第一金标垫22和第一吸水垫26的NC膜上；所述中和抗体检测线35和第二质控线36均设置在连接第二金标垫34和第二吸水垫37的NC膜上。所述NC膜即硝酸纤维素膜，在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，其中，T代表检测线，用于确定待测物是否存在，C代表控制线，用于证明样本确实经过了整个试纸条。

所述外壳上设有加样口11、中和抗体观察区13以及IgG和IgM观察区12。所述IgG和IgM观察区12位于IgM检测线23、IgG检测线24和第一质控线25上方，所述中和抗体观察区13位于中和抗体检测线35和第二质控线36上方。所述加样口11与第一样品垫21、第二样品垫31间的距离相等，且均通过毛细管路连接。

所述第一样品垫21和第二样品垫31均采用滤血膜材质，不用额外添加滤血膜，提高了样本的移行速度，缩短了检测时间。

本实施例中的联合检测卡的工作原理如下：

将待测样本加入加样口11中，样本通过内部毛细管路分别流入到两个检测试纸的样品垫上，具体地：

第一检测试纸：样本中的新型冠状病毒IgG抗体和IgM抗体通过第一样品垫21到达第一金标垫22，溶解其中被胶体金标记的新型冠状病毒S蛋白、N蛋白和鸡IgY抗体，且与新型冠状病毒S蛋白或新型冠状病毒N蛋白结合，样本继续前进，在经过IgM检测线23(IgG检测线24)时，与对应蛋白结合的IgM抗体(IgG抗体)会被鼠抗人IgM单克隆抗体(鼠抗人IgG单克隆抗体)捕获，从而使得胶体金沉积显色，样本继续前进，金标记的鸡IgY抗体与第一质控线25上的羊抗鸡IgY抗体结合沉积，从而使第一质控线25显色。

第二检测试纸：样本中的新型冠状病毒中和抗体通过第二样品垫31到达抗原垫32，此时中和抗体与抗原垫中的RBD蛋白结合，形成复合物，通过链接垫3使中和抗体与RBD蛋白有充分的时间结合，然后到达第二金标垫34，溶解其中被胶体金标记的RBD抗体，RBD抗体与RBD蛋白结合实现金标记，若样本中中和抗体的数量足够，则RBD蛋白全被中和抗体结合，没有多余的RBD蛋白可以被NC膜上包被的ACE2蛋白捕获，即中和抗体检测线35不能沉积显色；若样本中中和抗体的数量不足以完全结合抗原垫中的RBD蛋白，则剩余的RBD蛋白被NC膜上包被的ACE2蛋白捕获结合，从而形成双抗体夹心结构使胶体金沉积显色，样本继续前进，金标记的鸡IgY抗体与第二质控线36上的羊抗鸡IgY抗体结合沉积，从而使第二质控线36显色。

以上所述仅为本实用新型的部分实施例，并非因此限制本实用新型的专利保护范围，对于本领域的技术人员来说，本实用新型可以有各种更改和变化。在本实用新型的精神和原则之内，凡是利用本实用新型说明书及附图内容所作的任何改进或等同替换，直接或间接运用在其它相关的技术领域，均应包括在本实用新型的专利保护范围内。

Claims (5)

1.一种新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡，其特征在于，包括用于检测新型冠状病毒IgG和IgM的第一检测试纸以及用于检测新型冠状病毒中和抗体的第二检测试纸；

所述第一检测试纸包括沿样本层析方向设置第一样品垫（21）、第一金标垫（22）和免疫球蛋白抗体检测线，所述免疫球蛋白抗体检测线包括IgM检测线（23）和IgG检测线（24），且二者排列的先后顺序可调，所述第一金标垫（22）为含有均被胶体金标记的新型冠状病毒S蛋白和N蛋白的金标垫，所述IgM检测线（23）中含有鼠抗人IgM单克隆抗体，所述IgG检测线（24）中含有鼠抗人IgG单克隆抗体；

所述第二检测试纸包括沿样本层析方向设置的第二样品垫（31）、抗原垫（32）、第二金标垫（34）和中和抗体检测线（35），所述抗原垫（32）中含有RBD蛋白，所述第二金标垫（34）中含有被胶体金标记的RBD抗体，所述中和抗体检测线（35）中含有ACE2蛋白。

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡，其特征在于，所述第二检测试纸还包括链接垫（33），所述链接垫（33）设置在抗原垫（32）和第二金标垫（34）之间并与二者连接，用于使样本中的中和抗体充分与抗原垫中的RBD蛋白结合。

3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡，其特征在于，所述第一检测试纸还包括沿样本层析方向依次设置在IgG检测线（24）下游的第一质控线（25）和第一吸水垫（26），所述第一质控线（25）中含有羊抗鸡IgY抗体，所述第一金标垫（22）中还含有被胶体金标记的鸡IgY抗体；

所述第二检测试纸还包括沿样本层析方向依次设置在中和抗体检测线（35）下游的第二质控线（36）和第二吸水垫（37），所述第二质控线（36）中含有羊抗鸡IgY抗体，所述第二金标垫（34）中还含有被胶体金标记的鸡IgY抗体。

4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡，其特征在于，所述IgM检测线（23）、IgG检测线（24）和第一质控线（25）均设置在连接第一金标垫（22）和第一吸水垫（26）的NC膜上；

所述中和抗体检测线（35）和第二质控线（36）均设置在连接第二金标垫（34）和第二吸水垫（37）的NC膜上。

5.根据权利要求1~4中任意一项所述的新型冠状病毒IgG、IgM及中和抗体联合检测卡，其特征在于，还包括外壳，所述第一检测试纸和第二检测试纸均设置在外壳中，所述外壳上设有加样口（11）、中和抗体观察区（13）以及IgG和IgM观察区（12），所述IgG和IgM观察区（12）位于IgM检测线（23）和IgG检测线（24）上方，所述中和抗体观察区（13）位于中和抗体检测线（35）上方，所述加样口（11）与第一样品垫（21）、第二样品垫（31）的距离相等。

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