CN214225181U - 一种拉曼光谱检测装置 - Google Patents
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Abstract
本实用新型涉及一种拉曼光谱检测装置。具体地，本实用新型提供一种拉曼光谱检测装置，所述的拉曼光谱检测装置包括激光器、容器和磁铁；所述的磁铁为锥形磁铁，所述的锥形磁铁包括圆柱形椎体和锥尖端，所述的锥形磁铁的锥尖端垂直于所述容器的外侧壁；所述激光器发射的激发光与所述容器的外侧壁垂直且所述激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上。本实用新型所述的拉曼光谱检测装置能够用于SERS磁免疫均相免疫分析，测定得到的拉曼信号测定波动小和稳定性强，从而提高提高拉曼检测的准确度。
Description
技术领域
本实用新型属于体外检测技术领域，具体地涉及一种拉曼光谱检测装置。
背景技术
在免疫检测领域中，常常需要对各类抗原或抗体进行定性或定量检测。现有技术中，以“竞争抑制和双抗夹心”为基础衍生出多种免疫反应分析方法，如：放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法、时间分辨荧光法、荧光免疫法和表面增强拉曼(SERS)免疫分析法等，可用于确定病原微生物，对人体的特异性蛋白定量检测，从而对疾病进行辅助诊断或监测等等，用途非常广泛。其中SERS方法因其超高的灵敏度、多指标同时检测和光信号稳定的特点而备受研究者的瞩目。
SERS免疫分析的基本原理是：将针对目标分析物的捕获抗体(Ab1)固定于固相拉曼增强基底(一般为金、银薄膜或金、银纳米微粒或金、银与无机材料组成的复合纳米微粒)，针对目标分析物的信号抗体(Ab2)也固定在另一类似材料的纳米微粒上，同时该纳米微粒表面还固定有拉曼报告分子(Ranman Report，RR)。当阳性样本与Ab1和Ab2形成“三元夹心复合物”时，纳米微粒的近表面(一般小于5nm)和彼此聚集靠近的纳米微粒间的狭缝形成了“热点结构”，使RR的信号得到极大增强，目标分析物越多，形成的“三元夹心复合物”越多，相应地，“热点结构”和RR越多，拉曼信号越强，从而对目标分析物进行定量定性分析。
由于纳米微粒表面的RR极易受到“热点结构”的影响，而每次免疫反应所形成的“热点结构”数量和状态很难做到一致，所以最终测到的拉曼信号波动较大，从而严重影响了SERS的定量检测性能。
因此，本领域需要开发一种拉曼信号测定波动小和稳定性强的拉曼分析装置，提高拉曼检测的准确度。
实用新型内容
本实用新型的目的在于提供具有拉曼信号测定波动小和稳定性强的拉曼光谱检测装置。
本实用新型的另一目的在于本实用新型所述的拉曼光谱检测装置能够用于SERS磁免疫均相免疫分析，测定得到的拉曼信号测定波动小和稳定性强，从而提高提高拉曼检测的准确度。
在本实用新型的第一方面，提供一种拉曼光谱检测装置，所述的拉曼光谱检测装置包括激光器1、容器2和磁铁；
所述的磁铁为锥形磁铁，所述的锥形磁铁包括圆柱形椎体3和锥尖端4，所述的锥形磁铁的锥尖端垂直于所述容器的外侧壁；
所述激光器发射的激发光5与所述容器的外侧壁垂直且所述激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上。
在另一优选例中，所述的激发光从所述容器的外侧壁射入。
在另一优选例中，所述的容器位于所述激光器和所述锥形磁铁之间。
在另一优选例中，所述的容器为圆柱形容器。
在另一优选例中，所述的容器为微孔容器。
在另一优选例中，所述的容器的材料选自下组：塑料、玻璃、陶瓷、或其组合。
在另一优选例中，所述的容器的材料选自下组：聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚乙烯、聚丙烯、密胺、或其组合。
在另一优选例中，所述的容器由聚苯乙烯制成。
在另一优选例中，所述的容器为透明容器。
在另一优选例中，所述的激光器能够发射波长为300-600nm，较佳地600-900nm,更佳地900-1200nm的激发光。
在另一优选例中，所述的拉曼光谱检测装置还包括支架和放置板6，所述的支架用于支撑激光器，所述的放置板设有圆形凹槽7和矩形凹槽8，所述的圆形凹槽用于放置容器，所述的矩形凹槽用于放置锥形磁铁。
在另一优选例中，所述的激光器包括一圆柱形激光头9。
在另一优选例中，所述矩形凹槽的槽深度小于所述圆形凹槽的槽深度。
在另一优选例中，所述的矩形凹槽与所述的圆形凹槽相通。
在另一优选例中，所述的矩形凹槽与所述的圆形凹槽对应。
在另一优选例中，当所述容器放置在所述圆形凹槽和所述锥形磁铁放置矩形凹槽，所述的锥形磁铁的锥尖端垂直于所述反应容器的外侧壁。
在另一优选例中，所述的锥形磁铁的锥尖端的锥内中心线10与所述激光器发射的激发光处于同一直线上。
在另一优选例中，所述的拉曼光谱检测装置还包括拉曼光谱信号采集单元，用于采集拉曼信号。
在另一优选例中，所述的容器中含有选自下组的一种或多种成分：霉亲合素(Streptavdin，SA)标记的磁珠。
在另一优选例中，所述的磁铁包括永磁铁、电磁铁、或其组合。
在本实用新型的第二方面，提供了一种光谱分析方法，包括步骤：
(a)提供一待测样品，所述待测样品含有待检测的测试物；
(b)在一容器内，将所述待测样品与捕获颗粒和拉曼检测试剂进行混合，从而形成含“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物的第一混合物；
其中，所述的捕获颗粒为负载有第一捕获剂的磁性颗粒；而所述的拉曼检测试剂为负载有第二捕获剂且标记有拉曼信号分子的固相载体；
其中，所述的第一捕获剂和第二捕获剂均特异性针对所述测试物，并与所述测试物结合形成“第一捕获剂-测试物-第二捕获剂”的三元复合物；
(c)通过磁场，将所述“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物富集于所述容器的内侧壁的检测区；
所述磁场由锥形磁铁产生，所述的锥形磁铁包括锥尖端，所述锥形磁铁的锥尖端垂直于所述容器的外侧壁；
(d)将激发光从所述容器的外侧壁射入并照射于所述的“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物，所述激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上，并测量所述“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物经照射后产生的拉曼光谱信号。
在另一优选例中，所述的激发光打在富集的捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂的中心位置。
在另一优选例中，所述的激发光垂直于所述容器的外侧壁。
在另一优选例中，所述的锥形磁铁包括圆柱形椎体和锥尖端。
在另一优选例中，所述的锥尖端与所述容器的外壁接触。
在另一优选例中，所述的容器为圆柱形容器。
在另一优选例中，所述的容器的材料选自下组：塑料、玻璃、陶瓷、或其组合。
在另一优选例中，所述的容器的材料选自下组：聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚乙烯、聚丙烯、密胺、或其组合。
在另一优选例中，所述容器是透明的或半透明的。
在另一优选例中，所述的激发光为激光。
在另一优选例中，所述的激发光的波长为300-600nm，较佳地600-900nm,更佳地900-1200nm。
在另一优选例中，所述的拉曼信号分子为4-巯基苯甲酸。
在另一优选例中，所述的待测样品包括血清、血浆或血液样品。
在另一优选例中，所述的待测样品包括待测物为FABP的血清、血浆或血液样品。
在另一优选例中，所述的捕获颗粒是具有式I结构的负载有捕获剂磁性颗粒：
Z1-Z2-Z3 (I)
式中，
Z1为磁性颗粒；
Z2为第一连接元件；和
Z3为第一捕获剂。
在另一优选例中，所述的磁性颗粒包括磁珠。
在另一优选例中，所述的第一连接元件选自下组：含有巯基、羟基、醛基和/或羧基的连接分子、多肽连接元件、或其组合。
在另一优选例中，所述的多肽连接元件包括“亲和素-生物素”连接臂。
在另一优选例中，所述的“亲和素-生物素”连接臂包括“链霉亲合素-Biotin”连接臂。
在另一优选例中，所述的第一捕获剂为第一抗体。
在另一优选例中，所述的拉曼检测试剂是具有式II结构的微粒：
Y1-Y2-Y3-Y4-Y5 (II)
式中，
Y1为贵金属微粒；
Y2为拉曼信号分子；和
Y3为包裹涂层；
Y4为第二连接元件；
Y5为第二捕获剂。
在另一优选例中，所述的贵金属微粒选自下组：Au微粒、Ag微粒、或其组合。
在另一优选例中，所述的拉曼信号分子选自下组：4-巯基苯甲酸、4-巯基苯硫酚、硝基苯硫酚、氨基苯硫酚、苯并咪唑、苯并噻唑、巯基吡啶、异硫氰酸醋、5，5二巯基双(硝基苯甲酸)、4-乙酰氨基苯硫酸、2-硫脲嘧啶或其组合。
在另一优选例中，所述的包裹涂层为Ag涂层、Au涂层、或其组合。
在另一优选例中，所述的包裹涂层将贵金属微粒和拉曼信号分子进行包裹。
在另一优选例中，所述的包裹涂层将贵金属微粒和拉曼信号分子进行包裹，形成颗粒(优选为纳米颗粒)。
在另一优选例中，所述的第一连接元件选自下组：含有巯基、羟基、醛基和/或羧基的连接分子、多肽连接元件、或其组合。
在另一优选例中，所述的多肽连接元件包括“亲和素-生物素”连接臂。
在另一优选例中，所述的第二捕获剂为第二抗体。
在另一优选例中，所述的拉曼光谱信号为拉曼光谱中1074±5cm-1(较佳地1074±2cm-1)处特征峰的峰值。
在另一优选例中，所述的拉曼光谱信号为拉曼光谱中1004±5cm-1(较佳地1004±2cm-1)处特征峰的峰值F2。
在另一优选例中，所述方法是离体方法。
在另一优选例中，所述方法是非诊断性的和非治疗性的。
在本实用新型的第三方面，提供了一种光谱分析系统，所述系统包括：
(i)富集单元，所述富集单元用于通过磁场将容器中的所述“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物富集于所述容器的内侧壁的检测区；
所述磁场由锥形磁铁产生，所述的锥形磁铁包括锥尖端，所述锥形磁铁的锥尖端垂直于所述容器的外侧壁；
(ii)激发光发射源，所述的激发光发射源发射激发光，所述的激发光从所述容器的外侧壁射入检测区中的“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物，所述激发光发射源发射的激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上；
(iii)拉曼光谱信号采集单元，所述的拉曼光谱信号采集单元用于采集所述“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物经照射后产生的拉曼光谱信号；
(iv)输出单元。
在另一优选例中，所述的容器的检测区中富集有“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物
在另一优选例中，所述的磁铁包括永磁铁、电磁铁、或其组合。
在另一优选例中，所述的光谱分析系统还包括一容器，所述容器用于盛装待测样品。
在另一优选例中，所述的待测样品为第一混合物为液态。
在另一优选例中，所述的光谱分析系统用于本实用新型第二方面中所述方法。
应理解，在本实用新型范围内中，本实用新型的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1为拉曼光谱检测装置的示意图，其中的放置板为俯视图。
附图中，各编号代表：
1为激光器、2为容器、3为圆柱形椎体、4为锥尖端、5为激发光、6为放置板、7为圆形凹槽、8为矩形凹槽、9为圆柱形激光头和10为锥内中心线。
具体实施方式
本发明人通过深入研究，开发了一种拉曼光谱检测装置，所述的拉曼光谱检测装置能够用于SERS磁免疫均相免疫分析，测定得到的拉曼信号测定波动小和稳定性强，从而提高提高拉曼检测的准确度。
在本实用新型所述的拉曼光谱检测装置能够用于SERS磁免疫均相免疫分析中，锥形磁铁的锥尖端垂直于所述容器的外侧壁，锥形磁铁将“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物富集于所述容器的内侧壁的检测区，激光光源发出的激发光与锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上，测量时，只需把含有SA-M的反应容器置于激光光源与锥形磁铁之间，就能始终确保激发光打在聚集的SA-M的中心位置，能够以避免因磁铁移动导致的聚集的SA-M的微小移动，避免每次测量时激光光斑对准SA-M的中心位置的误差，使检测更加稳定可靠。在此基础上，发明人完成了本实用新型。
和现时较流行的其他方法学磁免疫分析试剂体系一样(如：化学发光磁免疫分析技术)，本实用新型也采用链霉亲合素(Streptavdin，SA)标记的磁珠(SA-M)作为固相载体。本实用新型的Ab2是标记在内嵌RR的Au/Ag核壳型纳米材料上，即：“Au-RR@Ag-Ab2”。当样本、生物素标记的捕获抗体biotin-Ab1和“Au-RR@Ag-Ab2”以适当的比例加入高分子材料(如：聚苯乙烯)反应容器反应适当时间后，再向反应容器中加适量的SA-M，最后通过垂直于容器外侧壁的锥形磁铁的锥尖端使得锥形磁铁的锥尖端将“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物富集于所述容器的内侧壁的检测区，激光光源发出的激发光与锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上，测量时，只需把含有SA-M的反应容器置于激光光源与锥形磁铁之间，就能始终确保激发光打在聚集的SA-M的中心位置，能够以避免因磁铁移动导致的聚集的SA-M的微小移动，避免每次测量时激光光斑对准SA-M的中心位置的误差，使检测更加稳定可靠。
术语
除非另有定义，否则本文中所用的所有技术和科学术语的含义与本实用新型所属领域普通技术人员普遍理解的含义相同。
如本文所用，术语“包括”、“包含”与“含有”可互换使用，不仅包括开放式定义，还包括半封闭式、和封闭式定义。换言之，所述术语包括了“由……构成”、“基本上由……构成”。
为了便于说明，以下结合附图1进一步描述本实用新型，在本实用新型应当理解的是，附图并不限定本实用新型的范围。
拉曼光谱检测装置
本实用新型提供一种拉曼光谱检测装置，所述的拉曼光谱检测装置包括激光器1、容器2和磁铁；
所述的磁铁为锥形磁铁，所述的锥形磁铁包括圆柱形椎体3和锥尖端4，所述的锥形磁铁的锥尖端垂直于所述容器的外侧壁；
所述激光器发射的激发光5与所述容器的外侧壁垂直且所述激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上。
在本实用新型的一个优选例中，所述的激发光从所述容器的外侧壁射入。
在另一优选例中，所述的容器位于所述激光器和所述锥形磁铁之间。
在另一优选例中，所述的容器为圆柱形容器。
在另一优选例中，所述的容器的材料包括但不限于：塑料、玻璃、陶瓷、或其组合。
在另一优选例中，所述的容器的材料包括但不限于：聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚乙烯、聚丙烯、密胺、或其组合。
在另一优选例中，所述的容器由聚苯乙烯制成。
在另一优选例中，所述的容器为透明容器。
在另一优选例中，所述的激光器能够发射波长为300-600nm，较佳地600-900nm,更佳地900-1200nm的激发光。
在另一优选例中，所述的拉曼光谱检测装置还包括支架和放置板6，所述的支架用于支撑激光器，所述的放置板设有圆形凹槽7和矩形凹槽8，所述的圆形凹槽用于放置容器，所述的矩形凹槽用于放置锥形磁铁。
在另一优选例中，所述的激光器包括一圆柱形激光头9。
在另一优选例中，所述矩形凹槽的槽深度小于所述圆形凹槽的槽深度；
在另一优选例中，所述的矩形凹槽与所述的圆形凹槽相通。
在另一优选例中，所述的矩形凹槽与所述的圆形凹槽对应。
在另一优选例中，当所述容器放置在所述圆形凹槽和所述锥形磁铁放置矩形凹槽，所述的锥形磁铁的锥尖端垂直于所述反应容器的外侧壁。
在另一优选例中，所述的锥形磁铁的锥尖端的锥内中心线10与所述激光器发射的激发光处于同一直线上。
在另一优选例中，所述的拉曼光谱检测装置还包括拉曼光谱信号采集单元，用于采集拉曼信号。
在另一优选例中，所述的容器中含有选自下组的一种或多种成分：霉亲合素(Streptavdin，SA)标记的磁珠。
光谱分析方法
本实用新型提供一种光谱分析方法，所述的方法包括步骤：
(a)提供一待测样品，所述待测样品含有待检测的测试物；
(b)在一容器内，将所述待测样品与捕获颗粒和拉曼检测试剂进行混合，从而形成含“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物的第一混合物；
其中，所述的捕获颗粒为负载有第一捕获剂的磁性颗粒；而所述的拉曼检测试剂为负载有第二捕获剂且标记有拉曼信号分子的固相载体；
其中，所述的第一捕获剂和第二捕获剂均特异性针对所述测试物，并与所述测试物结合形成“第一捕获剂-测试物-第二捕获剂”的三元复合物；
(c)通过磁场，将所述“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物富集于所述容器的内侧壁的检测区；
所述磁场由锥形磁铁产生，所述的锥形磁铁包括锥尖端，所述锥形磁铁的锥尖端垂直于所述容器的外侧壁；
(d)将激发光从所述容器的外侧壁射入并照射于所述的“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物，所述激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上，并测量所述“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物经照射后产生的拉曼光谱信号。
在另一优选例中，所述的激发光打在富集的捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂的中心位置。
在本实用新型的一个优选例中，所述的激发光垂直于所述容器的外侧壁。
在另一优选例中，所述的锥形磁铁包括圆柱形椎体和锥尖端。
在另一优选例中，所述的锥尖端与所述容器的外壁接触。
在另一优选例中，所述的容器为圆柱形容器。
在另一优选例中，所述的反应容器中含有捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂。
在另一优选例中，所述的容器的材料选自下组：塑料、玻璃、陶瓷、或其组合。代表性地，所述的容器的材料选自下组：聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚乙烯、聚丙烯、密胺、或其组合。
在另一优选例中，所述容器是透明的或半透明的。
在另一优选例中，所述的激发光为激光。
在本实用新型的一个优选例中，所述的拉曼信号分子为4-巯基苯甲酸。
在本实用新型的一个优选例中，所述的待测样品包括血清、血浆或血液样品。代表性地，所述的待测样品包括待测物为FABP的血清、血浆或血液样品。
在本实用新型的一个优选例中，所述的光谱分析方法是离体方法。
在另一优选例中，所述的光谱分析方法是非诊断性的和非治疗性的。
在本实用新型的一个优选例中，所述的捕获颗粒是具有式I结构的负载有捕获剂磁性颗粒：
Z1-Z2-Z3 (I)
式中，
Z1为磁性颗粒；
Z2为第一连接元件；和
Z3为第一捕获剂。
在另一优选例中，所述的磁性颗粒包括磁珠。
在另一优选例中，所述的第一连接元件选自下组：含有巯基、羟基、醛基和/或羧基的连接分子、多肽连接元件、或其组合。
在另一优选例中，所述的多肽连接元件包括“亲和素-生物素”连接臂。
在另一优选例中，所述的“亲和素-生物素”连接臂包括“链霉亲合素-Biotin”连接臂。
在另一优选例中，所述的第一捕获剂为第一抗体。
在本实用新型的一个优选例中，所述的拉曼检测试剂是具有式II结构的微粒：
Y1-Y2-Y3-Y4-Y5 (II)
式中，
Y1为贵金属微粒；
Y2为拉曼信号分子；和
Y3为包裹涂层；
Y4为第二连接元件；
Y5为第二捕获剂。
在另一优选例中，所述的贵金属微粒选自下组：Au微粒、Ag微粒、或其组合。
在另一优选例中，所述的拉曼信号分子选自下组：4-巯基苯甲酸、4-巯基苯硫酚、硝基苯硫酚、氨基苯硫酚、苯并咪唑、苯并噻唑、巯基吡啶、异硫氰酸醋、5，5二巯基双(硝基苯甲酸)、4-乙酰氨基苯硫酸、2-硫脲嘧啶或其组合。
在另一优选例中，所述的包裹涂层为Ag涂层、Au涂层、或其组合。
在另一优选例中，所述的包裹涂层将贵金属微粒和拉曼信号分子进行包裹。
在另一优选例中，所述的包裹涂层将贵金属微粒和拉曼信号分子进行包裹，形成颗粒(优选为纳米颗粒)。
在另一优选例中，所述的第一连接元件选自下组：含有巯基、羟基、醛基和/或羧基的连接分子、多肽连接元件、或其组合。
在另一优选例中，所述的多肽连接元件包括“亲和素-生物素”连接臂。
在另一优选例中，所述的第二捕获剂为第二抗体。
在另一优选例中，所述的拉曼光谱信号为拉曼光谱中1074±5cm-1(较佳地1074±2cm-1)处特征峰的峰值。
在另一优选例中，所述的拉曼光谱信号为拉曼光谱中1004±5cm-1(较佳地1004±2cm-1)处特征峰的峰值F2。
光谱分析系统
本实用新型提供一种光谱分析系统，所述系统包括：
(i)富集单元，所述富集单元用于通过磁场将容器中的所述“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物富集于所述容器的内侧壁的检测区；
所述磁场由锥形磁铁产生，所述的锥形磁铁包括锥尖端，所述锥形磁铁的锥尖端垂直于所述容器的外侧壁；
(ii)激发光发射源，所述的激发光发射源发射激发光，所述的激发光从所述容器的外侧壁射入检测区中的“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物，所述激发光发射源发射的激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上；
(iii)拉曼光谱信号采集单元，所述的拉曼光谱信号采集单元用于采集所述“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物经照射后产生的拉曼光谱信号；
(iv)输出单元。
在另一优选例中，所述的容器的检测区中富集有“捕获颗粒-测试物-拉曼检测试剂”的复合物
在另一优选例中，所述的磁铁包括永磁铁、电磁铁、或其组合。
在另一优选例中，所述的光谱分析系统还包括一容器，所述容器用于盛装待测样品。
在另一优选例中，所述的待测样品为第一混合物为液态。
在另一优选例中，所述的光谱分析系统是用于本实用新型第二方面中所述方法的光谱分析系统。
本实用新型的主要优点包括：
本实用新型提供一种拉曼光谱检测装置，所述的拉曼光谱检测装置能够用于SERS磁免疫均相免疫分析，测定得到的拉曼信号测定波动小和稳定性强，从而提高提高拉曼检测的准确度。
下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold SpringHarbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
实施例
试剂：
1.FABP(心脏型脂肪酸结合蛋白)单克隆抗体(抗体2302，以下以Ab1代替，5.1mg/mL,批号：0040011；抗体2304,以下以Ab2代替，5.2mg/mL,批号：0038392；Medix公司)；
2.牛血清白蛋白(68KD，批号：Y161201，Genview公司)；
3.氯金酸(分析纯，批号：20180423，国药集团化学试剂有限公司)；
4.磷酸氢二钠(分析纯，批号：20141015，国药集团化学试剂有限公司)；
5.磷酸二氢钠(分析纯，批号：20140922，国药集团化学试剂有限公司)；
6.氯化钠(分析纯，批号：20180223，国药集团化学试剂有限公司)；
7.SH-PEG-COOH(分析纯，批号：D06112，芃圣生物)；4-巯基苯甲酸(4-MBA，分析纯，批号：20160617，国药集团化学试剂有限公司)；
8.乙醇(分析纯，批号：20170918，国药集团化学试剂有限公司)，
9.硝酸银(分析纯，批号：20161001，上海试剂一厂)；
10.柠檬酸三钠(分析纯，批号：20161209，国药集团化学试剂有限公司)，
11.EDC(分析纯，批号：20160817，国药集团化学试剂有限公司)。
以上实验用水均为二次离子水。
12.链霉亲合素(Streptavdin，SA)标记的磁珠(SA-M),上海英芮诚生物科技
有限公司
设备：
1.L6S型紫外-可见分光光度计(上海仪电分析仪器有限公司)；
2.CT14RD型台式高速冷冻离心机(上海天美生化仪器设备工程有限公司)；
3.FA1004型电子天平(上海舜宇衡平科学仪器有限公司)；
4.雷磁GB-3A型恒温定时搅拌器(上海雷磁创益仪器仪表有限公司)；
5.R10拉曼光谱仪(Ocean optics公司)；
6.Orbital Shaker TS-1(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)。
实施例1
本实施例1提供一种拉曼光谱检测装置，参考图1，所述的拉曼光谱检测装置包括激光器1、圆柱形聚苯乙烯微孔反应容器2和磁铁；
所述的磁铁为锥形磁铁，所述的锥形磁铁包括圆柱形椎体3和锥尖端4，所述的锥形磁铁的锥尖端垂直于所述反应容器的外侧壁；
所述激光器发射的激发光5与所述反应容器的外侧壁垂直且所述激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上，所述的锥形磁铁的锥尖端的锥内中心线10与所述激光器发射的激发光处于同一直线上；
所述的拉曼光谱检测装置还包括支架和放置板6，所述的支架用于支撑激光器，所述的放置板设有圆形凹槽7和矩形凹槽8，所述的圆形凹槽用于放置圆柱形聚苯乙烯微孔反应容器，所述的矩形凹槽用于放置锥形磁铁。
实施例2
1.拉曼检测试剂的制备
1.1Au-4MBA@Ag的制备
1.1.1胶体金的制备：100mL 0.01％的氯金酸水溶液煮沸后，快速加入1％的柠檬酸三钠溶液1.75mL，继续煮沸5min。其UV-Vis值大约在518nm左右。
1.1.2Au-4MBA@Ag的制备：取1mL胶体金溶液加入1mM的4-巯基苯甲酸(4-MBA)溶液后反应一段时间后离心，获得Au-4MBA。
将Au-4MBA离心复溶于27μM的柠檬酸三钠溶液中加热煮沸，先后逐滴加入60μL20mM硝酸银溶液和60μL 20mM柠檬酸三钠溶液后继续煮沸十分钟后室温冷却，4℃保存备用。
1.1.3Au-4MBA@Ag-Ab2的制备：将1mL合成好的Au-4MBA@Ag离心弃上清复溶于超纯水中，加入适量SH-PEG-COOH 4℃保存过夜，离心去除多余SH-PEG-COOH后，加入5μg抗FABP的信号抗体Ab2偶联30min后加入适量EDC固定三次，每30min加一次，最后加入20μL 10％的BSA溶液封闭30min后再加入EDC固定一次，最后离心弃上清定溶于100μL超纯水中4℃保存备用。
1.2Biotin-Ab1的制备
1.2.1Biotin标记Ab1：将100μL 1.5mg/mL的抗FABP的捕获抗体(Ab1)加入10μLBiotin，4℃震荡反应2h，再加入10％的甘氨酸溶液100μL反应30min后放入透析袋中避光4℃透析三天，每8h换一次PBS透析液。
3.反应
3.1样本的配制：利用血清作为基质配制100ng/mL的FABP样本。
3.2免疫反应：取50μLFABP样本于聚苯乙烯微孔反应容器中，分别加入2μL Au-4MBA@Ag-Ab2和3μL Biotin-Ab1室温反应10min后，加入6μL链霉亲合素(Streptavdin，SA)标记的磁珠(SA-M)，继续反应5min后，经磁板使负载FABP的SA-M富集后用纯水200μL洗涤3次，脱离磁场后加纯水100μL，使负载FABP的SA-M充分分散。
3.3检测
3.3.1将步骤3.2的反应容器放入参照图1所示实施例1的拉曼光谱检测装置中，静置1min使其中的负载FABP的SA-M聚集在反应容器的内侧壁，激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上，且激发光打在聚集的负载FABP的SA-M的中心位置，测量拉曼信号，然后取出反应容器，使负载FABP的SA-M脱离磁场，并充分分散于溶液中，再将反应容器放入参照图1所示实施例1的检测装置中，静置1min使其中的负载FABP的SA-M聚集，激发光测量拉曼信号，如此重复操作，检测10次聚集的负载FABP的SA-M的拉曼信号强度，求均值和测值的变异系数CV，结果如表1所示：
表1测定的拉曼信号强度数据
从表1中可以看出，实施例1测定的拉曼信号具有优异的稳定性。
对比例1
本对比例1同实施例2，不同点在于：
在步骤“3.3.1检测”中，通过磁铁磁场，使负载FABP的SA-M富集于所述反应容器的底部的检测区，然后去掉磁场，将激发光从所述容器的底部射入，测定拉曼信号，充分分散溶液后，再次通过磁铁磁场，使负载FABP的SA-M富集于所述反应容器的底部的检测区，将激发光从所述容器的底部射入，测定拉曼信号，如此重复操作，检测10次聚集的负载FABP的SA-M的拉曼信号强度，求均值和测值的变异系数CV，结果如表2所示：
表2测定的拉曼信号强度数据
从表2中可以看出，对比例1测定的拉曼信号具的稳定性差于实施例1测定的拉曼信号。
在本实用新型提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本实用新型的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本实用新型作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (9)
1.一种拉曼光谱检测装置，其特征在于，所述的拉曼光谱检测装置包括激光器(1)、容器(2)和磁铁；
所述的磁铁为锥形磁铁，所述的锥形磁铁包括圆柱形椎体(3)和锥尖端(4)，所述的锥形磁铁的锥尖端垂直于所述容器的外侧壁；
所述激光器发射的激发光(5)与所述容器的外侧壁垂直且所述激发光与所述锥形磁铁的锥尖端处于同一直线上。
2.如权利要求1所述的拉曼光谱检测装置，其特征在于，所述的容器为圆柱形容器。
3.如权利要求1所述的拉曼光谱检测装置，其特征在于，所述的容器为透明容器。
4.如权利要求1所述的拉曼光谱检测装置，其特征在于，所述的拉曼光谱检测装置还包括支架和放置板(6)，所述的支架用于支撑激光器，所述的放置板设有圆形凹槽(7)和矩形凹槽(8)，所述的圆形凹槽用于放置容器，所述的矩形凹槽用于放置锥形磁铁。
5.如权利要求1所述的拉曼光谱检测装置，其特征在于，所述的激光器包括一圆柱形激光头(9)。
6.如权利要求4所述的拉曼光谱检测装置，其特征在于，所述矩形凹槽的槽深度小于所述圆形凹槽的槽深度。
7.如权利要求4所述的拉曼光谱检测装置，其特征在于，所述的矩形凹槽与所述的圆形凹槽对应。
8.如权利要求1所述的拉曼光谱检测装置，其特征在于，所述的锥形磁铁的锥尖端的锥内中心线(10)与所述激光器发射的激发光处于同一直线上。
9.如权利要求1所述的拉曼光谱检测装置，其特征在于，所述的拉曼光谱检测装置还包括拉曼光谱信号采集单元，用于采集拉曼信号。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202022624740.6U CN214225181U (zh) | 2020-11-13 | 2020-11-13 | 一种拉曼光谱检测装置 |
Applications Claiming Priority (1)
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Publications (1)
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| CN214225181U true CN214225181U (zh) | 2021-09-17 |
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Country Status (1)
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| CN (1) | CN214225181U (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115646562A (zh) * | 2022-09-27 | 2023-01-31 | 郑州大学 | 基于微磁作用的操控芯片、检测组件和检测系统、方法 |
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2020
- 2020-11-13 CN CN202022624740.6U patent/CN214225181U/zh active Active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115646562A (zh) * | 2022-09-27 | 2023-01-31 | 郑州大学 | 基于微磁作用的操控芯片、检测组件和检测系统、方法 |
| CN115646562B (zh) * | 2022-09-27 | 2023-08-11 | 郑州大学 | 基于微磁作用的操控芯片、检测组件和检测系统、方法 |
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