CN213091507U - 一种适用于检测有机溶剂提取样品农药残留的酶抑制速测卡和独立进样卡片 - Google Patents

Abstract

本实用新型提供了一种适用于检测有机溶剂提取样品农药残留的酶抑制速测卡、独立进样卡片，所述酶抑制速测卡由进样卡片、酶区卡片、底物卡片组成，所述进样卡片上设置进样区和环绕完全包围所述进样区的超惰性边缘。所述独立进样卡片可与常规酶抑制速测卡配套使用，所述常规酶抑制速测卡由酶区卡片、底物卡片连接组成。本实用新型提供的酶抑制速测卡，新增进样区卡片；利用纸质材料超大的比表面积，加速进样区有机溶剂的在线挥发，待有机溶剂挥干后，通过折叠、贴合等方式，依次展开酶抑制、显色反应，满足样品有机相前处理与酶抑制法相结合、有机溶剂与固定化酶零接触的双重需求，提高酶抑制速测卡检测灵敏度与准确性。

Description

一种适用于检测有机溶剂提取样品农药残留的酶抑制速测卡 和独立进样卡片

技术领域

本实用新型涉及一种适用于有机溶剂样品提取前处理的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留直接检测的酶抑制速测卡、可与常规农药残留酶抑制速测卡配套使用的的独立进样卡片，属于实验室分析用具领域。

背景技术

酶抑制法是目前为止发展最为成熟和使用最为广泛的农药残留快速检测方法，主要利用农药对酯酶活性的抑制作用，特异性地检测有机磷和氨基甲酸酯类农药。酶抑制速测卡在纸质载体上实施酶抑制法检测，利用纸质材料廉价易得、生物兼容性强等特性，展现出检测时间短、成本低等优势，在我国农药残留速测领域应用广泛。检测时，若样品中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留，酶活性未受抑制，可以正常水解底物生成一定量的产物，在纸质载体表面呈现一定的颜色、荧光等信号变化；而被测样品中含有该类农药时，农药成分对酶活性造成一定程度的破坏，使其无法正常催化水解底物，水解产物的生成量减少，相应的信号变化减少。利用这一原理，酶抑制速测卡可快速、有效地对大量样品进行可视化筛查。

目前，常规酶抑制速测卡主要由两部分组成，分别为酶区和底物区。在检测时，首先在酶区滴加试样进行酶抑制反应；待反应充分后，通过对折试纸条使得酶区和底物区充分接触，从而展开酶显色反应；最后，对比空白及样品的显色结果，判定样品中农药残留水平。由于大部分有机溶剂对酶活性具有抑制作用，常规酶抑制速测卡为了避免有机相溶液对固定化酶造成额外的干扰，在样品前处理过程中通常只能采用磷酸盐缓冲液等水相溶液作为提取溶剂。然而，大部分有机磷和氨基甲酸酯类农药水溶性较差，易溶于有机溶剂。因此，以水相主导的前处理过程的提取效率太低。现有文献已经公开，对有机磷和氨基甲酸酯类农药残留，水提取的回收率大部分在30％以下，甚至很多在10％以下。如此低的提取率显然很大程度上会影响检测结果的准确性和可靠性。即使后续检测再准确，在前处理本身提取就不完全的情况下，检测结果也无法完全的反应样品的农残含量。因此，常规酶抑制速测卡的实用性很大程度上受到提取溶剂的限制。

因此，有必要针对以上问题，打破传统速测卡的构型模式，设计一款可与有机溶剂样品前处理相兼容的新型酶抑制速测卡产品，从而提升现有酶抑制速测卡在实际使用中的检测性能。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种与有机相样品前处理相兼容的酶抑制速测卡，该检测卡能够兼容水相溶剂和有机相溶剂，最主要的是适用于有机相溶剂。在有机溶剂作为样品前处理提取溶剂时，本申请的酶抑制速测卡可以避免样品溶液中的有机溶剂对固定化酶活力造成额外的干扰，提高检测灵敏度、保障检测结果准确性。

并且，本实用新型内还可提供一种可与现有酶抑制速测卡配套使用的进样方式和配套装置，使得现有酶抑制速测卡可以对有机溶剂提取的样品溶液直接进行检测，从而提升酶抑制速测卡的检测性能。

为了解决上述技术问题，本实用新型采用的技术方案是：

一种适用于检测有机溶剂提取样品农药残留的酶抑制速测卡，所述酶抑制速测卡由进样卡片、酶区卡片、底物卡片组成，所述进样卡片上设置进样区和环绕完全包围所述进样区的超惰性边缘，所述酶区卡片上设置酶区和环绕完全包围所述酶区的疏水边缘；所述底物卡片上设置底物区和环绕完全包围所述底物区的疏水边缘；

所述进样区、酶区、底物区以试纸或其他可耐受有机溶剂的多孔性片状或板状材(如厚纸片、厚纸板等)作为基底材料，优选采用试纸基底。其中酶区在试纸基底上固定有酶试剂，底物区在试纸基底上固定有显色底物；所述酶试剂一般为胆碱酯酶；所述显色底物一般为靛酚乙酸酯或吲哚乙酸酯。

本实用新型中，所述的有机溶剂提取样品农药残留主要指有机磷和氨基甲酸酯类农药残留，由于有机磷和氨基甲酸酯类农药水溶性较差，易溶于有机溶剂，用水相溶液提取样品的提取率太低，用有机溶剂提取样品才能提高提取效率，回收率可达90％以上，保证检测的准确性和可靠性。

疏水边缘可通过喷蜡打印等公知技术或塑料薄膜覆盖等方法或材料形成疏水边缘，超惰性边缘可由特殊材料处理获得；

所述进样卡片上，环绕完全包围进样区的超惰性边缘，所述的超惰性是指疏水疏酯，由于卡片进样均为有机相溶液，因此进样区的边缘界限必须既不亲水，又无法被有机溶剂浸润，即为疏水疏酯，一般是用氟化材料来做边缘界限，氟化材料不亲水也不亲脂，可以较好的作为有机样品的进样范围界限。氟化材料可用常用的如特氟龙等。

所述进样卡片、酶区卡片、底物卡片三者可以相连也可以互不相连也可以任意两者相连，所述进样卡片、酶区卡片、底物卡片三者互不相连时，即为三张独立卡片。可相互对齐重叠贴合使用。

所述进样卡片、酶区卡片、底物卡片三张卡片也可以连在一起成为整体，便于使用。

进一步，所述进样卡片、酶区卡片、底物卡片三者连在一起的方式可以有多种，连成整体后，需要满足进样区和酶区、酶区和底物区可通过折叠、对齐等方式能够完全重叠在一起，进行全面、有效的贴合接触；优选将酶区卡片置于进样卡片和底物卡片的中间。

更进一步，优选进样卡片、酶区卡片、底物卡片按顺序线性排列连接成长条形状。

或者将进样卡片、酶区卡片、底物卡片连接成L型，优选将酶区卡片置于L的拐角处，进样卡片和底物卡片分别位于L的两条相邻边。

所述酶区和底物区可通过将酶或底物试剂分别固定于垫片上，再与试纸基底相连，也可直接通过在试纸基底上分隔出相应区域进行固定酶试剂和底物试剂。酶试剂、显色底物的固定方式都是本领域公知的。

所述进样区、酶区和底物区的构型、面积无特定要求，可以根据实验需要进行更改。

优选进样区、酶区和底物区的形状为圆型，更进一步，优选酶区的面积小于或等于进样区，酶区的面积小于或等于底物区，以保证酶区和进样区重叠贴合接触时，进样区能完全覆盖酶区；酶区和底物区重叠贴合时，底物区能完全覆盖酶区。

所述进样区可以根据实验需要加设样品过滤功能，通过通道将进样区与样品过滤区域相连，利用微流控纸芯片等技术实现固体杂质在线过滤功能。

本实用新型装置可以根据保存需求，在制备完成的速测卡表面覆盖保护膜，使用时除去保护膜即可。

进一步，如前所述，所述进样卡片、酶区卡片、底物卡片三者可以相连也可以互不相连也可以任意两者相连，当酶区卡片、底物卡片这两者相连时，即为现有常规的酶抑制速测卡，可以于市场上购买获得。

因此，本实用新型也提供一种适用于检测有机溶剂提取样品农药残留的酶抑制速测卡，由进样卡片和常规酶抑制速测卡组成，所述进样卡片上设置进样区和环绕完全包围所述进样区的超惰性边缘；所述常规酶抑制速测卡由酶区卡片、底物卡片连接组成，所述酶区卡片上设有酶区和环绕完全包围所述酶区的疏水边缘；所述底物卡片上设置底物区和环绕完全包围所述底物区的疏水边缘。所述常规酶抑制速测卡可于市场上购买获得。

所述进样卡片和常规市售酶抑制速测卡组成的酶抑制速测卡体系中，也可将进样卡片，单独作为一种与现有常规的酶抑制速测卡配套使用的独立进样卡片产品，适用有机样品溶液的农药残留酶抑制法速测。独立进样卡片单独产品的意义在于，对于已购买有市售常规的酶抑制速测卡的用户来说，可以节省重复购买常规的酶抑制速测卡的成本。但在实际使用时，独立进样卡片仍然需要与常规酶抑制速测卡配套使用，独立进样卡片无法单独使用。独立进样卡片与常规酶抑制速测卡的配套使用可实现对有机溶剂提取的样品溶液的直接快速检测，这是常规酶抑制速测卡无法做到的。

本实用新型还提供一种技术方案是：

一种与常规酶抑制速测卡配套使用的用于检测有机溶剂提取样品农药残留的独立进样卡片，所述独立进样卡片上设置进样区和环绕完全包围所述进样区的超惰性边缘，所述进样区以试纸或其他可耐受有机溶剂的多孔性片状或板状材料作为基底材料。

所述独立进样卡片要与常规酶抑制速测卡配套使用，组成有机溶剂提取样品农药残留的酶抑制速测卡体系，所述常规酶抑制速测卡由酶区卡片、底物卡片连接组成，所述酶区卡片上设有酶区和环绕完全包围所述酶区的疏水边缘；所述底物卡片上设置底物区和环绕完全包围所述底物区的疏水边缘。所述常规酶抑制速测卡可于市场上购买获得。

所述独立进样卡片上，所述环绕完全包围进样区的超惰性边缘，所述的超惰性是指疏水疏酯，由于卡片进样为有机相溶液，因此进样区的边缘界限必须既不亲水，又无法被有机溶剂浸润，即为疏水疏酯，一般是用氟化材料来做边缘界限，氟化材料不亲水也不亲脂，可以较好的作为有机样品的进样范围界限。氟化材料可用常用的如特氟龙等。

所述独立进样卡片的形状、面积无特定要求，可根据所需配套的常规酶抑制速测卡产品需求进行设定；进样卡形状设计的原则是便于进样区与速测卡的酶区能有效对齐贴合。

所述独立进样卡片上进样区的形状和大小根据所需配套使用的酶抑制速测卡产品的酶区形状和大小设定，根据市场上速测卡形状，优选进样区形状为圆形；更进一步，为便于操作，优选进样区的直径大于或等于酶区的直径，以保证酶区和进样区重叠贴合接触时，进样区能完全覆盖酶区；

所述进样区可以根据实验需要加设样品过滤功能，通过微流控芯片加工技术制备通道将进样区与样品过滤区域相连，样品溶液流经样品过滤区到达进样区，在此过程实现固体杂质在线过滤功能；更进一步，样品过滤区可以预先固定吸附剂，用以吸附去除样品溶液中的特定杂质成分。所述制备微流控通道和过滤区所需技术为公知技术，优选喷蜡打印和特氟龙溶液选择性涂覆方法制备，具体加工方法不影响使用效果。

另外，还可使用物理吸附等方式，在独立进样卡片的进样区的背面固定吸附剂，用于样品中特定杂质成分的在线净化和过滤。使用时将样品溶液直接滴加在进样区背面的吸附剂表面，检测时将进样卡正面的进样区与常规酶抑制速测卡的酶区直接贴合。

根据保存需求，可以在制备完成的独立进样卡片表面覆盖保护膜，使用时除去保护膜即可。

本实用新型具有以下有益效果：

(1)本实用新型提供的检测农药残留的酶抑制速测卡，打破常规酶抑制速测卡构型及样品加入模式，在速测卡体系中新增进样区卡片，这是以往常规酶抑制速测卡构型和使用方法中没有的。现有技术中，常规酶抑制速测卡只含有酶区和底物区，样品直接加入酶区，导致用有机溶剂提取的样品溶液无法直接检测。用水相提取样品则提取效率差，无法保证完全提取；而如果用有机相提取样品，直接加入酶区检测，又会导致检测结果不准确，出现假阳性结果。

本实用新型创造性的增加进样卡片，利用纸质材料超大的比表面积，上样后可加速进样区有机溶剂的在线挥发，待有机溶剂挥干后，通过折叠、贴合等方式，依次展开酶抑制、显色反应，满足样品有机相前处理与酶抑制法相结合、有机溶剂与固定化酶零接触的双重需求，从而提高酶抑制速测卡检测灵敏度与准确性。

(2)本实用新型也提供了可独立使用的独立进样卡片，与现有常规的酶抑制速测卡配套使用，因此对于已购买常规酶抑制速测卡的用户来说，直接配置独立进样卡片即可，避免了重复配置酶区卡片和底物卡片的成本，独立进样卡片的优势如前所述，在显著提高样品前处理效果的同时，避免提取溶剂对速测卡上的酶活性造成额外的破坏和感染，从而达到整体提高快速检测方法灵敏度和准确性的效果。

本实用新型设计合理，分区明确，结构灵活、简单，制作难度低、成本低廉，适合大规模量产；使用方便，操作简便，检测时间短、成本低，易于推广和使用，可适用于食品流通过程中大批量样品的高灵敏度、快速、准确筛查。

附图说明

图1是本实用新型的酶抑制速测卡的长条形结构示意图，图1中A为结构示意图，B图为实物图。

图2是本实用新型的酶抑制速测卡的L型结构示意图，图2中A和B为两种连接方式。

图3是本实用新型的酶抑制速测卡的独立卡片式结构示意图。

图4是本实用新型的酶抑制速测卡的使用流程图。

图5是常规酶抑制速测卡(A、C、E)和本实用新型(B、D、F)对水相溶液和有机相溶液的检测效果图。

图6是本实用新型的独立进样卡片结构示意图。

图7是本实用新型的独立进样卡片的使用流程图。

图8是常规酶抑制速测卡(A、B、C)和配套使用了独立进样卡片后，酶抑制速测卡(D、E、F)对水相溶液和有机相溶液的检测效果图。

具体实施方式

下面以具体实施例并结合附图来对本实用新型的酶抑制速测卡以及独立进样卡片作进一步说明，但本实用新型的保护范围不限于此。

实施例1带有独立进样区的酶抑制速测卡

如图1、2、3所示，本实用新型带有独立进样区的的酶抑制速测卡由进样卡片1、酶区卡片2、底物卡片3组成，所述进样卡片1上设置亲水的进样区1-1和环绕完全包围进样区1-1的超惰性边缘1-2，所述酶区卡片2上设置酶区2-1和环绕完全包围酶区2-1的疏水边缘2-2；所述底物卡片3上设置底物区3-1和环绕完全包围底物区3-1的疏水边缘3-2。

所述进样区1-1、酶区2-1、底物区3-1可以以试纸、厚纸板或厚纸片作为基底材料，优选采用试纸基底，其中酶区2-1在试纸基底上固定酶试剂，底物区3-1在试纸基底上固定底物；所述酶试剂一般为胆碱酯酶；所述底物一般为靛酚乙酸酯或吲哚乙酸酯。

疏水边缘可通过喷蜡打印等公知技术或区域选择性塑料膜覆盖等方法形成；超惰性边缘采用疏水疏酯材料形成，可采用氟化材料如特氟龙。

所述进样卡片1、酶区卡片2、底物卡片3三者可以相连也可以互不相连也可以任意两者相连，所述进样卡片1、酶区卡片2、底物卡片3三者互不相连时，即为三张独立卡片，如图3所示。

所述酶区卡片2、底物卡片3相连时，即为现有常规的酶抑制速测卡，可以于市场上购买获得，如图7的A图右图所示，此时进样卡片1可以作为单独卡片(图7的A图左图)，和常规的酶抑制速测卡配套使用。

优选所述进样卡片1、酶区卡片2、底物卡片3三张卡片连在一起成为整体，便于使用。

进一步，所述进样卡片1、酶区卡片2、底物卡片3连在一起的方式可以有多种，需要满足进样区1-1和酶区2-1、酶区2-1和底物区3-1可通过折叠、对齐等方式能够完全对齐重叠，进行全面、有效的贴合接触；优选将酶区卡片2置于进样卡片1和底物卡片3的中间。

更进一步，优选进样卡片1、酶区卡片2、底物卡片3按顺序排列连接成长条形状。图1即为本实用新型酶抑制速测卡的长条形结构示意图，

或者将进样卡片1、酶区卡片2、底物卡片3连接成L型，优选将酶区卡片3置于L的拐角处，进样卡片1和底物卡片2分别位于L的两条相邻边。图2中的A和B为L型的两种连接方式。

所述酶区和底物区可通过将酶试剂、底物试剂分别固定于垫片上，再与试纸基底相连，也可直接通过在试纸基底上分隔出相应区域进行固定酶试剂和底物试剂。酶试剂和底物试剂的固定方式都是本领域技术人员公知的。

优选进样区1-1、酶区2-1和底物区3-1的形状为圆型，更进一步，优选酶区2-1的面积小于或等于进样区1-1，酶区的面积2-1小于或等于底物区3-1，以保证酶区2-1和进样区1-1贴合接触时，进样区1-1能完全覆盖酶区2-1；酶区2-1和底物区3-1贴合时，底物区3-1能完全覆盖酶区2-1。

所述进样区可以根据实验需要加设样品过滤功能，通过通道将进样区与样品过滤区域相连，利用微流控纸芯片等技术实现固体杂质在线过滤功能。

实施例2

采用本实用新型的带有独立进样区的酶抑制速测卡，可检测有机相溶液中有机磷和氨基甲酸酯类农药成分，具体操作如下：

(1)参照图4中的A图，在进样区滴加待测样品的有机相提取液，放置于室温下，待有机溶剂完全挥发后，一般观察进样区完全干燥即可，大概需要3-10分钟；

(2)参照图4中的B图，在酶区滴加100mM,pH＝8.0的磷酸缓冲液，使酶区保持湿润；通过折叠或对齐方式将进样卡片和酶区卡片重叠贴合，使进样区与酶区完全贴合接触以促发酶抑制反应，在37℃下孵育10min；

(3)参照图4中的C图，孵育完全后，将进样卡片和酶区卡片分离，解除进样区与酶区的接触，通过折叠或对齐等方式将酶区卡片和底物卡片重叠贴合，使酶区与底物区完全贴合接触以促发酶显色反应，在37℃下反应3min，然后将酶区卡片和底物卡片分离，观察酶区得到样品显色图；可根据实验需求，在底物区滴加适量磷酸缓冲液以保持显色反应处于湿润状态；

(4)以100mM,pH＝8.0的磷酸缓冲液作为对照溶液，按照步骤(1)、(2)、(3)同样步骤，与样品进行同时检测，观察酶区得到对照检测图；

(5)将样品显色图与对照检测图进行对比，对样品中农药残留水平进行定性分析：样品显色明显淡于对照显色，判定检测结果为阳性，表明样品中含有有机磷和氨基甲酸酯类农药残留；样品显色相对对照颜色无变化，判定检测结果为阴性，表明样品中不含有有机磷和氨基甲酸酯类农药残留。显色结果也可通过照相机、扫描仪等设备收集图像，并利用图像等软件处理数据，从而对样品中农残水平进行定量分析。

将常规酶抑制速测卡和本实用新型酶抑制速测卡进行对比测试，测试方法如下：

常规酶抑制速测卡只含有酶区和底物区，测试方法如下：

分别在3张常规酶抑制速测卡的酶区滴加40μL磷酸缓冲液(100mM，pH：8.0)，甲醇、甲醇中含0.05mg/L克百威的溶液，在37℃下孵育10min，然后通过折叠的方式将酶区和底物区完全重叠贴合接触，进行酶显色反应，在37℃下反应3min，将酶区和底物区分离，观察酶区颜色，显色反应后的结果分别如图5的A、C、E所示，A图为磷酸缓冲液，即为对照品，为阴性，C图、E图分别为甲醇、甲醇中含0.05mg/L克百威的溶液。与A图相比，C、E均颜色变淡，检测结果显示为阳性，表明常规酶抑制速测卡易受有机溶剂的干扰，无法有效辨别有机相溶液中农药浓度水平，在检测过程中易产生假阳性结果，难以保障检测结果的准确性。

新型酶抑制速测卡的检测方法如下：

分别在3张新型酶抑制速测卡的进样区滴加40μL磷酸缓冲液(100mM，pH：8.0)，甲醇、甲醇中含0.05mg/L克百威的溶液，放置于室温下，待水分和有机溶剂完全挥发后，在酶区滴加40μL磷酸缓冲液(100mM,pH:8.0)，使酶区保持湿润；通过折叠方式将进样区与酶区完全贴合接触以促发酶抑制反应，在37℃下孵育10min，孵育完全后，解除进样区与酶区的接触，通过折叠方式将酶区与底物区完全重叠贴合接触以促发酶显色反应，在37℃下反应3min，将酶区和底物区分离，观察酶区颜色，显色反应后的结果分别如图5的B、D、F所示，B图为磷酸缓冲液，即为对照品，为阴性，D图、F图分别为甲醇、甲醇中含0.05mg/L克百威的溶液。与B图对照品相比，D图无变化，也为阴性，而F图明显颜色变淡，结果表明，速测卡对不含农药的水相溶液和有机相溶液的检测结果均呈阴性，而对甲醇中0.05mg/L克百威的检测结果呈阳性，表明本实用新型速测卡不受检测溶液性质的限制，在兼容有机相待测液的同时可有效筛查溶液中农药残留情况，为酶抑制速测卡检测灵敏度及检测结果准确性的提升提供了良好的途径。

实施例3与常规酶抑制速测卡配套使用的独立进样卡片

实施例1中的进样卡片1可以作为独立进样卡片，作为一种独立产品，和常规酶抑制速测卡(由酶区卡片2和底物卡片3组合而成)配套使用。由于常规酶抑制速测卡已是市场上的成熟商品，因此本实用新型提供独立进样卡片，可供已购买常规酶抑制速测卡的用户使用，避免重复采购酶区卡片2和底物卡片3的成本。

如图6所示，本实用新型的独立进样卡片1上设置进样区1-1和环绕完全包围所述进样区1-1的超惰性边缘1-2。

所述进样区可以以试纸、厚纸片或纸板作为基底材料。

超惰性边缘的制备可以使用不同公知方法，本实用新型提供制备过程示例如下：

(1)预先在电脑上设计进样区形状、大小，绘制相应设计图形；优选进样区的形状为圆型；进一步，优选进样区直径大于或等于所配套使用的速测卡的酶片直径，以保证使用中将进样区与酶片贴合时，进样区能完全覆盖酶片。

(2)使用喷蜡打印机，将(1)所绘制进样区图形打印在纸质基底上；

(3)将打印好的图形放入110摄氏度烘箱，约10min后取出，空气中晾凉。此时，会发现打印的蜡线图案已经完全渗透纸质基底。

(4)采用区域选择性保护的方法，在进样区内滴满水溶液以保护进样区，使用特氟龙溶液完全覆盖修饰未保护区域后，以纯净水整体清洗进样卡，干燥后获得具有超惰性进样区边缘的进样卡。

进一步，可以使用物理吸附等方式，在(4)所制备的进样区背面固定吸附剂，用于样品中特定杂质成分的在线净化和过滤,示例如图6中的独立进样卡片1B所示，其中1B为进样卡正面，使用时此面与酶片直接贴合；1B2为进样卡背面，所示区域内固定有吸附剂材料，使用时样品溶液直接滴加在此面的吸附剂表面。

进一步，可以利用微流控纸芯片加工等公知技术，在进样卡上通过蜡印等手段，集成更为复杂的样品处理功能，示例如图6中的1C中1-3区域所示。

实施例4独立进样卡片与常规酶抑制速测卡配套使用进行农药残留快速检测

采用实施例3的独立进样卡片，配合常规酶抑制速测卡用于有机溶剂提取的样品溶液的酶抑制法农残速测，检测样品提取液中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留。

常规酶抑制速测卡由酶区卡片2、底物卡片3连接组成，如图7中A图的右图所示。这是市售产品。本实用新型实施例所用常规酶抑制速测卡由广州绿洲生化科技股份有限公司采购获得。所述酶区卡片2上设有酶区2-1和环绕完全包围所述酶区的疏水边缘2-2；所述底物卡片3上设置底物区3-1和环绕完全包围所述底物区的疏水边缘3-2。

独立进样卡片和常规酶抑制速测卡配合使用，检测待测样品有机提取液中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的具体操作如下：

(1)参照图7中的A图，在独立进样卡片的进样区滴加待测样品的有机相提取液，放置于室温下，待有机溶剂完全挥发后，一般观察进样区完全干燥即可，大概需要3-10分钟；

(2)参照图7中的B图，在常规酶抑制速测卡的酶区滴加100mM,pH＝8.0的磷酸缓冲液，使酶区保持湿润；通过对齐方式将独立进样卡片和酶区卡片重叠贴合，使进样区与酶区完全贴合接触以促发酶抑制反应，在37℃下孵育10min；

(3)参照图7中的C图，孵育完全后，将独立进样卡片和酶区卡片分离，解除进样区与酶区的接触，按照常规酶抑制速测卡本身说明书条件，将酶区卡片和底物卡片重叠贴合，进行酶促反应和结果判定。

具体来说：通过折叠对齐等方式将酶片和底物卡片重叠贴合，使酶区与底物区完全贴合接触以促发酶显色反应，在37℃下反应3min，然后将酶区卡片和底物卡片分离，观察酶区得到样品显色图；可根据实验需求，在底物区滴加适量磷酸缓冲液以保持显色反应处于湿润状态；

以样品提取所用的空白有机溶剂作为对照溶液，按照步骤(1)、(2)、(3)同样步骤，与样品进行同时检测，观察酶区得到对照检测图；

将样品显色图与对照检测图进行对比，对样品中农药残留水平进行定性分析：样品显色明显淡于对照显色，判定检测结果为阳性，表明样品中含有有机磷和氨基甲酸酯类农药残留；样品显色相对对照颜色无变化，判定检测结果为阴性，表明样品中不含有有机磷和氨基甲酸酯类农药残留。显色结果也可通过照相机、扫描仪等设备收集图像，并利用图像等软件处理数据，从而对样品中农残水平进行定量分析。

集成有净化功能的进样卡使用时，仅在第一步进样时，样品直接滴加在吸附剂区域，样品流经吸附剂区域，最终到达进样区；进样区溶剂挥发完成后，与预先润湿的酶区贴合，之后的操作步骤与步骤(2)、(3)相同。

将常规酶抑制速测卡和本实用新型进样卡配合常规酶抑制速测卡两种检测方法进行对比测试，测试方法如下：

常规酶抑制速测卡只含有酶区和底物区，测试方法如下：

分别在3张常规酶抑制速测卡的酶片区滴加40μL磷酸缓冲液(100mM，pH：8.0)，纯甲醇、含0.05mg/L克百威的甲醇溶液，在37℃下孵育10min，然后通过折叠的方式将酶区和底物区完全重叠贴合接触，进行酶显色反应，在37℃下反应3min，将酶片和底物区分离，观察酶区颜色，显色反应后的结果分别如图8的A、B、C所示，A图为磷酸缓冲液，即为对照品，为阴性，B图、C图分别为甲醇、甲醇中含0.05mg/L克百威的溶液。与A图相比，B、C均颜色变淡，检测结果显示为阳性，表明常规酶抑制速测卡易受有机溶剂的干扰，无法有效辨别有机相溶液中农药浓度水平，在检测过程中易产生假阳性结果，难以保障检测结果的准确性。

本实用新型所研制独立进样卡片与常规酶抑制速测卡配套使用，检测方法如下：

分别在3张进样卡的进样区滴加40μL磷酸缓冲液(100mM，pH：8.0)，纯甲醇、含0.05mg/L克百威的甲醇溶液，放置于室温下，待水分和有机溶剂完全挥发后，在酶区滴加40μL磷酸缓冲液(100mM,pH:8.0)，使酶区保持湿润；将进样区与酶区对齐使其完全贴合接触以促发酶抑制反应，在37℃下孵育10min，孵育完全后，解除进样区与酶区的接触，通过折叠方式将酶区与底物区完全重叠贴合接触以促发酶显色反应，在37℃下反应3min，将酶区和底物区分离，观察酶区颜色，显色反应后的结果分别如图8的D、E、F所示，D图为磷酸缓冲液，即为对照品，为阴性，E图、F图分别为甲醇、甲醇中含0.05mg/L克百威的溶液。与D图对照品相比，E图无变化，也为阴性，而F图明显颜色变淡，结果表明，与独立进样卡片配套使用时，速测卡对不含农药的水相溶液和有机相溶液的检测结果均呈阴性，而对甲醇中0.05mg/L克百威的检测结果呈阳性，表明本实用新型进样卡的使用不受检测溶液性质的限制，在兼容有机相待测液的同时可有效筛查溶液中农药残留情况，为酶抑制速测卡检测灵敏度及检测结果准确性的提升提供了良好的途径。

Claims (11)

1.一种适用于检测有机溶剂提取样品农药残留的酶抑制速测卡，其特征在于所述酶抑制速测卡由进样卡片、酶区卡片、底物卡片组成，所述进样卡片上设置进样区和环绕完全包围所述进样区的超惰性边缘，所述酶区卡片上设置酶区和环绕完全包围所述酶区的疏水边缘；所述底物卡片上设置底物区和环绕完全包围所述底物区的疏水边缘。

2.如权利要求1所述的酶抑制速测卡，其特征在于所述进样区、酶区、底物区以试纸或其他可耐受有机溶剂的多孔性片状或板状材作为基底材料，其中酶区在试纸基底上固定酶试剂，底物区在试纸基底上固定显色底物。

3.如权利要求1所述的酶抑制速测卡，其特征在于所述进样卡片、酶区卡片、底物卡片三者相连或互不相连或任意两者相连。

4.如权利要求3所述的酶抑制速测卡，其特征在于所述进样卡片、酶区卡片、底物卡片连在一起成为整体；成为整体时，所述卡片上的进样区和酶区、以及酶区和底物区可通过折叠、对齐方式能够完全重叠在一起。

5.如权利要求4所述的酶抑制速测卡，其特征在于所述进样卡片、酶区卡片、底物卡片按顺序线性排列连接成长条形状。

6.如权利要求5所述的酶抑制速测卡，其特征在于所述连接成L型，酶区卡片位于L的拐角处，进样卡片和底物卡片分别位于L的两条相邻边。

7.如权利要求1所述的酶抑制速测卡，其特征在于所述进样区、酶区和底物区的形状为圆型；所述酶区的面积小于或等于进样区，酶区的面积小于或等于底物区。

8.如权利要求3所述的酶抑制速测卡，其特征在于所述酶抑制速测卡由进样卡片和常规酶抑制速测卡组成，所述常规酶抑制速测卡由酶区卡片、底物卡片连接组成，所述进样卡片上设置进样区和环绕完全包围所述进样区的超惰性边缘；所述酶区卡片上设有酶区和环绕完全包围所述酶区的疏水边缘；所述底物卡片上设置底物区和环绕完全包围所述底物区的疏水边缘。

9.一种与常规酶抑制速测卡配套使用的用于检测有机溶剂提取样品农药残留的独立进样卡片，所述常规酶抑制速测卡由酶区卡片、底物卡片连接组成，所述酶区卡片上设有酶区和环绕完全包围所述酶区的疏水边缘；所述底物卡片上设置底物区和环绕完全包围所述底物区的疏水边缘；其特征在于所述独立进样卡片上设置进样区和环绕完全包围所述进样区的超惰性边缘。

10.如权利要求9所述的独立进样卡片，其特征在于所述进样区以试纸或其他可耐受有机溶剂的多孔性片状或板状材料作为基底材料。

11.如权利要求9所述的独立进样卡片，其特征在于所述进样区形状为圆形，所述进样区的直径大于或等于酶区的直径。

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