CN212808310U - 一种检测AD7c-NTP试纸卡 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了本发明提供一种检测AD7c‑NTP试纸卡，所述试纸条包括底纸板，以及沿所述试纸条长度方向顺次粘覆于所述底板上的吸水纸、硝酸纤维素包被膜、单克隆抗体结合垫以及样品垫；所述硝酸纤维素包被膜粘覆于所述底板的中间部位，且其上设置有相间隔的检测带和质控带，所述检测带靠近所述单克隆抗体结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸；所述单克隆抗体结合垫为喷涂有表面修饰了AD7c‑NTP单克隆抗体Ⅰ的荧光微球的聚酯膜。所述检测AD7c‑NTP试纸条及应用其的试剂卡可实现快速、单人份定量检测，且灵敏度高，批内、批间误差小，为临床使用提供了极大的便利。
Description
技术领域
本实用新型涉及临床免疫学检测领域，具体涉及一种快速、定量检测 AD7c-NTP的荧光免疫层析试纸条及应用其的试剂卡。
背景技术
阿尔茨海默症(Alzheimer's disease，AD，又叫老年性痴呆)是一种起病隐袭、进行性发展的慢性神经退行性疾病，是一种严重的智力致残症。随着人口老龄化的高速发展，AD已成为继心脏病、癌症、中风之后，导致老年人死亡的第四大病因，也是花费最多的三种疾病之一(仅次于肿瘤和心脏病)。病人从轻度记忆与认知障碍到最后的植物状态，要经历几年甚至几十年，这对病人和家属都是一个痛苦的过程。AD不是自然衰老，是疾病，早发现，早干预，早治疗，至关重要。
AD相关神经丝蛋白(AD-associated neuronalthread protein，AD7C-NTP) 是一种安全、有效的生物标记物，在AD诊断有着重要意义，具有广阔的应用前景。AD7C-NTP隶属于神经丝蛋白家族，是一种相对分子质量为41000的跨膜磷蛋白。AD7C-NTP自神经元胞体中表达后，广泛存在于神经细胞发生的轴突中，并大量出现在AD患者脑中的NFTs里，呈分泌性上调表达。研究表明， AD7C-NTP在神经元中的沉积在神经元变性早期即可出现，并且发生在NFTs形成之前，在早期AD患者的脑组织抽提物、脑脊液、尿液中均可以检测到 AD7C-NTP。同时AD7C-NTP含量水平随病程延长和痴呆严重程度呈正相关逐渐增高，这可能是由于AD患者脑组织NTP免疫活性及信使RNA表达增强，导致神经元细胞凋亡增多，继而使死亡细胞释放大量的AD7C-NTP。文献报道，神经元胞体和神经突触的丢失、神经元结构蛋白功能受损等病理过程，均可以使 AD7C-NTP表达升高。但也有学者认为，AD7c-NTP主要来源于血液，易通过受损的血-脑脊液屏障，从而迅速进入脑组织。
AD7C-NTP测定实验表明，尿中AD7C-NTP分子量与脑脊液中AD7C-NTP分子量相同，检测早期AD患者尿液中AD7c-NTP的水平，其灵敏度和特异度均可达到80％以上。
同时，研究也表明，血液检测Aβ和Tau蛋白虽然微创、快速、便捷，但迄今为止其敏感性和特异性较难达到诊断要求。
尿液AD7c-NTP的检测有较高的灵敏度和特异性，且尿液无创检测，易被患者和家属接受，检测操作简便，十分适合AD的早期诊断，指导合理用药和患者长期动态监测，具有广阔的应用前景。
实用新型内容
本部分的目的在于概述本实用新型的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例，在本部分以及本申请的说明书摘要和实用新型名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和实用新型名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本实用新型的范围。
鉴于上述和/或现有技术中所存在的问题，提出了本实用新型。
因此，本实用新型所要解决的技术问题是现有技术中胃蛋白酶原I的检测方法不可兼顾高灵敏度和简单操作的技术问题，提供一种操作简单、灵敏度高，可快速、定量检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试纸条及应用其的试剂卡。
为解决上述技术问题，本实用新型提供如下技术方案：一种检测AD7c-NTP 试纸条，包括，底纸板，以及沿所述底纸板长度方向顺次粘覆于所述底纸板上的吸水纸、硝酸纤维素包被膜、单克隆抗体结合垫以及样品垫；
所述硝酸纤维素包被膜粘覆于所述底纸板的中间部位，且其上设置有相间隔的喷涂有ADc-NTP单克隆抗体的检测带和喷涂有兔抗鼠lgG抗体的质控带，所述检测带靠近所述ADc-NTP单克隆抗体结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸；
所述单克隆抗体结合垫处喷涂有表面修饰了ADc-NTP单克隆抗体Ⅰ的荧光微球的聚酯膜；
所述吸水纸、所述硝酸纤维素包被膜、所述单克隆抗体结合垫以及所述样品垫之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠。
作为本实用新型所述一种检测AD7c-NTP试纸条的一种优选方案，其中：所述荧光微球的粒径为10～1000nm。
作为本实用新型所述一种检测AD7c-NTP试纸条的一种优选方案，其中：所述试纸条的宽度为0.3～2cm。
作为本实用新型所述一种检测AD7c-NTP试纸条的一种优选方案，其中：所述吸水纸、所述硝酸纤维素包被膜、所述单克隆抗体结合垫以及所述样品垫之间，依次与且仅与相邻部位部分重叠区域的重叠长度彼此独立的为1～5mm。
作为本实用新型所述一种检测AD7c-NTP试纸条的一种优选方案，其中：所述吸水纸与所述硝酸纤维素包被膜的所述部分重叠区域在所述硝酸纤维素包被膜的上侧。
本实用新型还提供了一种检测AD7c-NTP试纸卡，包括上述的一种检测 AD7c-NTP试纸条,以及试剂盒，所述试剂盒内从侧面开设有放置槽，所述试剂盒上还设置有观察口和加样口，所述观察口和加样口设置于所述试剂盒顶部并与所述放置槽相通；
承载屉，所述承载屉包括端盖和存放盒，所述端盖设置于所述存放盒端部，所述存放盒顶部开口，试纸条放置于所述存放盒中；
所述存放盒放置在所述放置槽内，所述样品垫与所述加样口位置对应，所述硝酸纤维素包被膜位置与所述观察口位置对应。
作为本实用新型所述一种检测AD7c-NTP试纸卡的一种优选方案，其中：所述试剂盒底面上设置有导槽，所述导槽内设置有卡槽。
作为本实用新型所述一种检测AD7c-NTP试纸卡的一种优选方案，其中：所述端盖上还设置有弹性片，所述弹性片设置于所述存放盒下方。
作为本实用新型所述一种检测AD7c-NTP试纸卡的一种优选方案，其中：所述弹性片端部设置有卡块。
作为本实用新型所述一种检测AD7c-NTP试纸卡的一种优选方案，其中：所述弹性片端部还设置有拨动块。
本实用新型的有益效果：1、本发明所提供的检测AD7c-NTP的荧光免疫层析试剂条以荧光微球为信号源，荧光微球的体积远大于荧光染料分子的体积，不但可以负载大量的荧光染料分子，而且便于荧光染料分子在检测带和质控带处的聚集，起到信号放大的作用，可实现快速、单人份定量检测，且灵敏度高、误差小，为临床使用提供了极大的便利。
2、本发明所提供的检测AD7c-NTP的荧光免疫层析试剂卡，体积小、便于携带，易于保存，有利于基层医院的应用与推广，可实现批量生产，且其内的试纸条可更换，试剂盒可循环利用。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
图1为本实用新型提供的一种实施例所述的检测AD7c-NTP试纸卡的整体结构示意图；
图2为本实用新型提供的一种实施例所述的检测AD7c-NTP试纸卡的背面结构示意图；
图3为本实用新型提供的一种实施例所述的检测AD7c-NTP试纸卡的展开结构示意图；
图4为本实用新型提供的一种实施例所述的检测AD7c-NTP试纸卡的剖面结构示意图；
图5为本实用新型提供的一种实施例所述的检测AD7c-NTP试纸卡的分层结构示意图。
具体实施方式
为使本实用新型的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书附图对本实用新型的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本实用新型，但是本实用新型还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本实用新型内涵的情况下做类似推广，因此本实用新型不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，本实用新型结合示意图进行详细描述，在详述本实用新型实施例时，为便于说明，表示器件结构的剖面图会不依一般比例作局部放大，而且所述示意图只是示例，其在此不应限制本实用新型保护的范围。此外，在实际制作中应包含长度、宽度及深度的三维空间尺寸。
再其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本实用新型至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
下述实施例中，所述AD7c-NTP单克隆抗体1、AD7c-NTP单克隆抗体2、兔抗鼠lgG抗体、磷酸缓冲溶液、牛血清白蛋白(BSA)、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲溶液、包裹有荧光染料且表面修饰有氨基或羧基的聚苯乙烯球、碳二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀亚酰胺(NHS)、蔗糖、聚酯膜、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、高强度吸水纸均为市售。
实施例1
参照图3和图5，本实施例提供了一种检测AD7c-NTP试纸条，包括，底纸板100，以及沿底纸板100长度方向顺次粘覆于底纸板100上的吸水纸101、硝酸纤维素包被膜102、单克隆抗体结合垫103以及样品垫104；
硝酸纤维素包被膜102粘覆于底纸板100的中间部位，且其上设置有相间隔的喷涂有AD102c-NTP单克隆抗体2的检测带105和喷涂有兔抗鼠lgG抗体的质控带106，检测带105靠近AD102c-NTP单克隆抗体结合垫103，质控带 106靠近吸水纸101；
单克隆抗体结合垫103处喷涂有表面修饰了AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ的荧光微球的聚酯膜；
吸水纸101、硝酸纤维素包被膜102、单克隆抗体结合垫103以及样品垫 104之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠。
荧光微球的粒径为10～1000nm。
试纸条的宽度为0.3～2cm。
吸水纸101、硝酸纤维素包被膜102、单克隆抗体结合垫103以及样品垫 104之间，依次与且仅与相邻部位部分重叠区域的重叠长度彼此独立的为 1～5mm。
吸水纸101与硝酸纤维素包被膜102的部分重叠区域在硝酸纤维素包被膜 102的上侧。
所述样品垫104是玻璃纤维素膜。所述检测带105是涂布在所述硝酸纤维素上的AD7c-NTP单克隆抗体2带，质控带106是涂布在所述硝酸纤维素包被膜102上的兔抗鼠lgG抗体带。
所述底纸板100是塑料底板。所述荧光微球的粒径为10～1000nm，本实施例优选200nm。所述荧光微球是包裹有荧光染料的聚苯乙烯球，且修饰有鼠源性单克隆抗体；所述吸水纸101优选高强度吸水纸；所述检测AD7c-NTP的荧光免疫层析试剂卡的制备方法为：
S1、制备底座和具有观察口202、加样口203的卡盖2，所述底座和卡盖相扣合后形成仅具有观察口202、加样口203两个开口的中空腔体，所述底座为塑料底座，所述卡盖为塑料卡盖。
S2、提纯AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ。选用商品化AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ (AD-J7)，4℃条件下，用浓度为0.05mol/L，pH值为7.2-7.6的磷酸缓冲溶液对的商品化AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ进行透析提纯处理。
S3、制备单克隆抗体结合垫103。所述荧光微球选用商品化包裹有荧光染料且表面修饰有氨基或羧基的聚苯乙烯球，粒径为200nm；首先用浓度为 0.05mol/L，pH值为7.2-7.6的MES冲溶液对的荧光微球进行洗涤处理，并将荧光微球质量浓度调整为1％，然后用碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀亚酰胺 (NHS)共价偶联的方式将步骤S2中处理得到的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ标记在所述荧光微球上；再使用定量喷膜仪以3～5μl/cm的量将标记有AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ喷涂于聚酯膜上，避光条件下35～38℃烘干1小时，制得单克隆抗体结合垫103，加入干燥剂封存备用。荧光微球的体积远大于荧光染料分子的体积，不但可以负载大量的荧光染料分子，而且便于荧光染料分子在检测带 8和质控带106处的聚集，起到信号放大的作用。
S4、制备硝酸纤维素包被膜102。使用含有1wt％蔗糖的浓度为0.05mol/L， pH值为7.4的磷酸缓冲溶液分别将AD7c-NTP单克隆抗体2(检测带划膜抗体， AD-H3抗体)Ⅰ、兔抗鼠lgG抗体(质控带标记抗体)、稀释至1mg/ml的浓度，再使用定量喷膜仪以1μl/cm的量将二者间隔喷涂在硝酸纤维素膜上， 35～38℃烘干1小时，制成包括检测带105和质控带106的硝酸纤维素包被膜 102，加入干燥剂封存备用。
S5、制备样品垫104。用含有1wt％BSA、0.1wt％tritonx-100的浓度为 0.02mol/L，pH值为7.4的磷酸缓冲溶液浸泡玻璃纤维素膜0.5～3小时，35～38℃烘干3小时，制得样品垫104。
S6、组装试纸条。在湿度小于35％，温度为20～25℃条件下进行试纸条的组装，所述底纸板100选用聚氯乙烯(PVC)板，在所述底纸板100的同一面的长度方向上顺次连接且相邻部位部分重叠的样品垫104、单克隆抗体结合垫 103、硝酸纤维素包被膜102、吸水纸101，所述部分重叠区域的重叠长度为 1～5mm，本实施例优选2mm；所述硝酸纤维素包被膜102设置时，在远离所述样品垫104的方向上依次为检测带105和质控带106，所述吸水纸101为高强度吸水纸；组装好后进行裁切，形成宽度为0.3～2cm的试纸条，本实施例优选0.5cm。
S7、组装检测AD7c-NTP的荧光免疫层析试剂卡。将步骤S6中制备得到的试纸条在所述底座上居中设置，所述底纸板100与所述底座相连，扣合卡盖，所述观察口202正对硝酸纤维素包被膜102，加样口203正对样品垫104；也可以在所述底座和卡盖相扣合后形成的中空腔体中加入干燥剂。
使用时，将样品液通过加样口203滴加到样品垫104上，在毛细作用下，样品液向吸水纸101一侧泳动，当样品液中含有AD7c-NTP时，AD7c-NTP与荧光微球上的AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ形成抗原-抗体复合物，随着层析作用，所述抗原-抗体复合物继续向吸水纸101一侧泳动，到达识别不同抗原表位的 AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ处，即检测带105处，形成抗体-抗原-抗体复合物，在检测带105处形成带有抗体-抗原-抗体复合物的荧光微球的聚集。而未结合单克隆抗体Ⅰ的荧光微球继续向吸水纸101一侧泳动，到达质控带106时，兔抗鼠lgG抗体与荧光微球上的鼠源性单克隆抗体结合，在质控带106处产线荧光微球的聚集。
反应完全后，将上述检测AD7c-NTP的荧光免疫层析试剂卡置于荧光检测仪内，读取检测带105和质控带106两处的荧光信号，将读取值与预设的标准值进行比对就可以计算出定量的结果。
取143个健康阴性样本，及98个患者样本进行重复检测，计算批内和批间差CV、灵敏度、特异性、Cut off值。计算得批内差CV为7.68％，批间差 CV为11.23％，灵敏度为93.2％，特异性为86.7％，Cut off值为1.5ng/mL。检测限为0.10ng/mL，线性范围0.1～10ng/mL，相关系数r>0.98。
本发明所提供的检测AD7c-NTP的荧光免疫层析试剂卡可实现快速、单人份定量检测，且灵敏度高，批内、批间误差小，为临床使用提供了极大的便利；而且，体积小、便于携带，易于保存，有利于基层医院的应用与推广；另外，制备方法简单，可实现批量生产。
实施例2
参照图1～5，本实施例提供了一种检测AD7c-NTP的试剂卡，包括上述检测AD7c-NTP试纸条试纸条,以及试剂盒200，试剂盒200内从侧面开设有放置槽201，试剂盒200上还设置有观察口202和加样口203，观察口202和加样口 203设置于试剂盒200顶部并与放置槽201相通；
承载屉300，承载屉300包括端盖301和存放盒302，端盖301设置于存放盒302端部，存放盒302顶部开口，试纸条放置于存放盒302中；
存放盒302放置在放置槽201内，样品垫104与加样口203位置对应，硝酸纤维素包被膜102位置与观察口202观察口202位置对应。
试剂盒200底面上设置有导槽204，导槽204内设置有卡槽205。
端盖301上还设置有弹性片301a，弹性片301a设置于存放盒302下方。
弹性片301a端部设置有卡块301b。
弹性片301a端部还设置有拨动块301c。
所述试剂盒200和承载屉300为塑料材质，优选聚氯乙烯(PVC)。
在本实施例中，存放盒302为长方体替补开设有开口也即其上设置有槽结构的塑料结构，试纸条放置于存放盒302上的槽内，端盖301设置于存放盒302 端部，放置槽201大小与存放盒302相同，存放盒302可完全放置于其内，也可进行抽插，以方便更换试纸条。
在存放盒302放置在放置槽201中时，样品垫104与加样口203位置对应，硝酸纤维素包被膜102位置与观察口202观察口202位置对应，使用时从加样口203向样品垫104加样。
端盖301上还设置有弹性片301a，弹性片301a自然状态下雨存放盒302 平行，当将存放盒302推入放置槽201中时，卡块301b与导槽204底部接触，弹性片301a形变，当卡块301b到达卡槽205中，卡块301b侧面与卡槽205侧壁接触卡合，直接将存放盒302向外抽出无法抽出，此时向下拨动拨动块301c，使卡块301b离开卡槽205，此时可将承载屉300整个抽出，以对试纸条进行更换。
较佳的，拨动块301c侧面设置为粗糙面，以更加容易将其拨动。
重要的是，应注意，在多个不同示例性实施方案中示出的本申请的构造和布置仅是例示性的。尽管在此公开内容中仅详细描述了几个实施方案，但参阅此公开内容的人员应容易理解，在实质上不偏离该申请中所描述的主题的新颖教导和优点的前提下，许多改型是可能的(例如，各种元件的尺寸、尺度、结构、形状和比例、以及参数值(例如，温度、压力等)、安装布置、材料的使用、颜色、定向的变化等)。例如，示出为整体成形的元件可以由多个部分或元件构成，元件的位置可被倒置或以其它方式改变，并且分立元件的性质或数目或位置可被更改或改变。因此，所有这样的改型旨在被包含在本实用新型的范围内。可以根据替代的实施方案改变或重新排序任何过程或方法步骤的次序或顺序。在权利要求中，任何“装置加功能”的条款都旨在覆盖在本文中所描述的执行所述功能的结构，且不仅是结构等同而且还是等同结构。在不背离本实用新型的范围的前提下，可以在示例性实施方案的设计、运行状况和布置中做出其他替换、改型、改变和省略。因此，本实用新型不限制于特定的实施方案，而是扩展至仍落在所附的权利要求书的范围内的多种改型。
此外，为了提供示例性实施方案的简练描述，可以不描述实际实施方案的所有特征(即，与当前考虑的执行本实用新型的最佳模式不相关的那些特征，或于实现本实用新型不相关的那些特征)。
应理解的是，在任何实际实施方式的开发过程中，如在任何工程或设计项目中，可做出大量的具体实施方式决定。这样的开发努力可能是复杂的且耗时的，但对于那些得益于此公开内容的普通技术人员来说，不需要过多实验，所述开发努力将是一个设计、制造和生产的常规工作。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本实用新型的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本实用新型进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本实用新型的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本实用新型技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本实用新型的权利要求范围当中。
Claims (9)
1.一种检测AD7c-NTP试剂卡，其特征在于：包括，
试纸条，所述试纸条包括底纸板（100），以及沿所述底纸板（100）长度方向顺次粘覆于所述底纸板（100）上的吸水纸（101）、硝酸纤维素包被膜（102）、单克隆抗体结合垫（103）以及样品垫（104）；
所述硝酸纤维素包被膜（102）粘覆于所述底纸板（100）的中间部位，且其上设置有相间隔的喷涂有AD102c-NTP单克隆抗体2的检测带（105）和喷涂有兔抗鼠lgG抗体的质控带（106），所述检测带（105）靠近所述AD102c-NTP单克隆抗体结合垫（103），所述质控带（106）靠近所述吸水纸（101）;
所述单克隆抗体结合垫（103）处喷涂有表面修饰了AD7c-NTP单克隆抗体Ⅰ的荧光微球的聚酯膜；
所述吸水纸（101）、所述硝酸纤维素包被膜（102）、所述单克隆抗体结合垫（103）以及所述样品垫（104）之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠；
以及试剂盒（200），所述试剂盒（200）内从侧面开设有放置槽（201），所述试剂盒（200）上还设置有观察口（202）和加样口（203），所述观察口（202）和加样口（203）设置于所述试剂盒（200）顶部并与所述放置槽（201）相通；
承载屉（300），所述承载屉（300）包括端盖（301）和存放盒（302），所述端盖（301）设置于所述存放盒（302）端部，所述存放盒（302）顶部开口，试纸条放置于所述存放盒（302）中；
所述存放盒（302）放置在所述放置槽（201）内，所述样品垫（104）与所述加样口（203）位置对应，所述硝酸纤维素包被膜（102）位置与所述观察口（202）位置对应。
2.根据权利要求1所述的一种检测AD7c-NTP试剂卡，其特征在于：所述荧光微球的粒径为10~1000nm。
3.根据权利要求1或2所述的一种检测AD7c-NTP试剂卡，其特征在于：所述试纸条的宽度为0.3~2cm。
4.根据权利要求3所述的一种检测AD7c-NTP试剂卡，其特征在于：所述吸水纸（101）、所述硝酸纤维素包被膜（102）、所述单克隆抗体结合垫（103）以及所述样品垫（104）之间，依次与且仅与相邻部位部分重叠区域的重叠长度彼此独立的为1~5mm。
5.根据权利要求4所述的一种检测AD7c-NTP试剂卡，其特征在于：所述吸水纸（101）与所述硝酸纤维素包被膜（102）的所述部分重叠区域在所述硝酸纤维素包被膜（102）的上侧。
6.根据权利要求5所述的一种检测AD7c-NTP试剂卡，其特征在于：
所述试剂盒（200）底面上设置有导槽（204），所述导槽（204）内设置有卡槽（205）。
7.根据权利要求6所述的一种检测AD7c-NTP试剂卡，其特征在于：所述端盖（301）上还设置有弹性片（301a），所述弹性片（301a）设置于所述存放盒（302）下方。
8.根据权利要求7所述的一种检测AD7c-NTP试剂卡，其特征在于：所述弹性片（301a）端部设置有卡块（301b）。
9.根据权利要求8所述的一种检测AD7c-NTP试剂卡，其特征在于：所述弹性片（301a）端部还设置有拨动块（301c）。
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