CN211505561U - 一种检测呕吐毒素的elisa试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，盒体包括垂直设置的第一盒体和第二盒体，盖体包括并排设置的第一盖体和第二盖体，第一盖体和第二盖体分别转动盖合在所述第一盒体上；第一盒体内设置有固定垫，固定垫上开设有呈放检测试剂瓶的若干个下凹瓶位，第一盖体和第二盖体内分别设置有与固定垫相配合对检测试剂瓶进行限制的卡紧垫，卡紧垫上开设有与所述下凹瓶位一一对应的卡紧瓶位；第二盒体内放置有酶标板、微吸管、枪头、吸水纸、说明书和盖板膜。本实用新型结构设计紧凑，使用方便，检测快捷，固定垫和卡紧垫将装有试剂的试剂瓶或者试剂管限制在两者之间，避免在携带或者输送过程中，形成损坏。

Description

一种检测呕吐毒素的ELISA试剂盒

技术领域

本实用新型涉及检测试剂盒技术领域，尤其涉及一种检测呕吐毒素的ELISA试剂盒。

背景技术

呕吐毒素(vomitoxin)，又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)，化学名为3α,7α,15一三羟基草镰孢菌-9-烯-8-酮，属单端孢霉烯族化合物，所引起典型症状是采食量降低，所以这类毒素又叫饲料拒食毒素。呕吐毒素(DON)是其中最重要一种毒素，主要来自镰刀菌属(Fusarium)，尤其是禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)和黄色镰刀菌(Fusariumculmorum)。由于它可以引起猪的呕吐而得名，对人体有一定危害作用。

呕吐毒素多分布于小麦、大麦、玉米等谷物籽实中，具有很强的细胞毒性，对原核细胞、真核细胞、植物细胞、肿瘤细胞等均具有明显的毒性作用。另外，呕吐毒素还可以作用于骨髓造血干细胞引起细胞毒性作用，因此，该毒素对人体和动物都带来了极大的危害。

目前测定呕吐毒素的主要方法有薄层层析法、高效液相色谱法，气相色谱法，虽然这些方法灵敏度高，定性准确，但是实验方法复杂，耗时较长，使用不便；目前在检测呕吐毒素方面已经研究出相应的试剂盒，解决了上述问题。但是现有的试剂盒结构设计方面存在一些不足，导致试剂盒在运输或者携带过程中，易使装有试剂的试剂瓶或者试剂管损坏。

实用新型内容

为了解决上述问题，本实用新型提供了一种检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，该试剂盒结构设计紧凑，使用方便，检测快捷，固定垫和卡紧垫将装有试剂的试剂瓶或者试剂管限制在两者之间，避免在携带或者输送过程中，形成损坏。

为实现上述目的，本实用新型提供如下技术方案：

一种检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，包括盒体和盖体，所述盒体包括垂直设置的第一盒体和第二盒体，所述盖体包括并排设置的第一盖体和第二盖体，所述第一盖体和第二盖体分别转动盖合在所述第一盒体上；所述第一盒体内设置有固定垫，所述固定垫上开设有呈放检测试剂瓶的若干个下凹瓶位，所述第一盖体和第二盖体内分别设置有与所述固定垫相配合对检测试剂瓶进行限制的卡紧垫，所述卡紧垫上开设有与所述下凹瓶位一一对应的卡紧瓶位；所述第二盒体内放置有酶标板、微吸管、枪头、吸水纸、说明书和盖板膜。

进一步地，所述固定垫中间设置有分隔筋，所述分隔筋将固定垫划分为第一区域和第二区域。

进一步地，其中若干个下凹瓶位中至少一部分形状为圆形，至少另一部分形状为方形；其中，圆形的下凹瓶位均设置在第一区域内，用于放置试剂管或者形状为圆形的试剂瓶，方形的下凹瓶位均设置在第二区域内，用于放置形状为方形的试剂瓶。

进一步地，若干个下凹瓶位31上放置装有呕吐毒素标准品溶液的试剂瓶，装有底物显色A液的试剂瓶，装有底物显色B液的试剂瓶，装有终止液的试剂瓶，装有洗涤液试的剂瓶，装有复溶液的试剂瓶和装有抗体工作液的试剂瓶，以及备用试剂瓶和装有备用工作液的试剂瓶。

进一步地，所述第一盖体和第二盖体分别通过第一连接条和第二连接条与所述第一盒体相连，且所述第一连接条和第二连接条的两端分别铰接在盖体和第一盒体的两侧。

进一步地，所述第一连接条和第二连接条之间始终相互平行。

进一步地，所述第一盒体上设置有凸缘，所述第一盖体和第二盖体上均设置有与所述凸缘相配合的凹口。

进一步地，所述固定垫为泡沫固定垫或者海绵固定垫；所述卡紧垫为泡沫卡紧垫或者海绵卡紧垫。

进一步地，所述第一盒体和第二盒体可拆卸连接。

进一步地，所述盒体和盖体均为塑料材质。

与现有技术相比，本实用新型的有益效果如下：

1)本实用新型第一盖体和第二盖体分别盖合在第一盒体上方时，固定垫和卡紧垫将试剂瓶或者试剂管包裹住，限制试剂瓶或者试剂管在携带或者输送过程中发生位移，撞击破碎。

2)本实用新型的试剂盒，专用于呕吐毒素的检测，所用试剂种类固定，程序固定，适用于较少的实验人员同时进行大批量的样品同时检测；当第一盖体和第二盖体反转打开时，可以充当实验台或者置物台，将使用过的试剂放置在打开的盖体上，未使用的试剂依旧放置在第一盒体内，避免检测过程中试剂混淆，使用方便，检测快捷。

3)本实用新型携带运输相对比较安全，试剂瓶不易破碎；适用范围广，适合不同类别的人员使用，像食品检测，海关检疫，卫生监督等，具有明显的社会经济效益。

附图说明

图1为本实用新型检测呕吐毒素的ELISA试剂盒的展开示意图；

图2为本实用新型检测呕吐毒素的ELISA试剂盒的闭合示意图；

图3为本实用新型检测呕吐毒素的ELISA试剂盒的局部闭合示意图；

图4为本实用新型检测呕吐毒素的ELISA试剂盒中固定垫的结构示意图；

图5为本实用新型另一实施例的结构示意图。

图中：盒体1，第一盒体11，第二盒体12，盖体2，第一盖体21，第二盖体22，固定垫3，下凹瓶位31，分隔筋32，第一区域33，第二区域34，卡紧垫4，卡紧瓶位41，第一连接条5，第二连接条6，连接件7，拉手8。

具体实施方式

下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没做出创造性劳动前提下所获得的所其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。

需要说明的是，当组件被称为“固定于”另一个组件，它可以直接在另一个组件上或者也可以存在居中的组件。当一个组件被认为是“连接”另一个组件，它可以是直接连接到另一个组件或者可能同时存在居中组件。当一个组件被认为是“设置于”另一个组件，它可以是直接设置在另一个组件上或者可能同时存在居中组件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的。

本实用新型实施例一：

请参阅图1-4，本实用新型提供一种检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，该试剂盒包括盒体1和盖体2，盒体1和盖体2均为塑料材质，其中，盒体1包括垂直设置的第一盒体11和第二盒体12，第一盒体11位于第二盒体12的上方，其面积相等；盖体2包括并排设置的第一盖体21和第二盖体22，第一盖体21和第二盖体22分别转动盖合在第一盒体11上；第一盒体11内设置有固定垫3，固定垫3上开设有呈放检测试剂瓶的若干个下凹瓶位31，第一盖体21和第二盖体22内分别设置有与固定垫3相配合对检测试剂瓶进行限制的卡紧垫4，卡紧垫4上开设有与下凹瓶位31一一对应的卡紧瓶位41。

在本实施例中，固定垫3中间一体设置有分隔筋32，分隔筋32将固定垫3划分为第一区域33和第二区域34；其中若干个下凹瓶位31中至少一部分形状为圆形，至少另一部分形状为方形；其中，圆形的下凹瓶位31均设置在第一区域33内，用于放置试剂管或者形状为圆形的试剂瓶，方形的下凹瓶位31均设置在第二区域34内，用于放置形状为方形的试剂瓶，归类放置，试剂盒使用起来比较方便。

在本实施例中，若干个下凹瓶位31上放置装有呕吐毒素标准品溶液的试剂瓶，装有底物显色A液的试剂瓶，装有底物显色B液的试剂瓶，装有终止液的试剂瓶，装有洗涤液试的剂瓶，装有复溶液的试剂瓶和装有抗体工作液的试剂瓶，以及备用试剂瓶和装有备用工作液的试剂瓶；其中备用试剂瓶为空的试剂瓶，以备检测过程中需要；装有备用工作液的试剂瓶是装有备用的工作液，比如装有高浓度标准品溶液的试剂瓶，装有稀释液的试剂瓶。

试剂盒的第二盒体12内放置有酶标板、微吸管、枪头、吸水纸、说明书和盖板膜；其中酶标板采用96孔或者48孔试剂板作为固相载体，放置于铝箔袋内，酶标板由外框支架和放置其上的可拆卸酶标反应微孔条组成，每个可拆卸酶标反应微孔条有微孔，微孔上包被呕吐毒素偶联抗原。其中微吸管、枪头、吸水纸和盖板膜的数量及规格根据检测样品进行确定，在此不做限定，该试剂盒可用作不同种类的样品检测，因此根据检测对象来放置相应的微吸管、枪头、吸水纸和盖板膜；说明书中介绍了试剂盒的原理，标准曲线，适用范围，交叉反应率，使用仪器，使用试剂，操作方法和注意事项。本实用新型的第一盒体11主要盛放试剂管或者试剂瓶，第二盒体12放置辅助仪器，归类明确，操作起来比较便利。

在本实施例中，第一盖体21和第二盖体22分别通过第一连接条5和第二连接条6与第一盒体11相连，且第一连接条5和第二连接条6的两端分别铰接在盖体2和第一盒体11的两侧，其中在第一盖体21和第二盖体22的两侧均开设有用于铰接的连接孔(图中未示出)，该连接孔的数量没有限制，至少为两组，在第一盒体11的两侧对应开设有用于铰接的连接槽(图中未示出)。设置该连接槽的目的是，确保盖体2带动连接条移动的过程中，比较灵活，不会出现限位卡死。其中第一连接条5和第二连接条6之间始终相互平行，且两个连接条与两个连接条的铰接点之间的连线构成一个平行四边形的连杆机构，结构稳定，可靠，开合使用方便。该试剂盒在打开时，给盖体2一个力(向上提拉)，盖体2以与第一盒体11接触的边缘部为支点，绕着该支点旋转，以反转打开盖体2；当第一盖体21和第二盖体22盖合在第一盒体11上方时，固定垫3和卡紧垫4将试剂瓶包裹住，限制试剂瓶或者试剂管在携带或者输送过程中发生位移，撞击破碎；当第一盖体21和第二盖体22反转打开时，可以充当实验台或者置物台，将使用过的试剂放置在打开的盖体2上，未使用的试剂依旧在第一盒体11内，避免检测过程中试剂混淆，使用方便，检测快捷。

在本实施例中，第一盒体11上设置有凸缘(图中未标号)，第一盖体21和第二盖体22上均设置有与凸缘相配合的凹口(图中未标号)，整个试剂盒的密封性好。

另外，在本实施例中，优选固定垫3为泡沫固定垫3或者海绵固定垫3，可拆卸地安装在第一盒体11内部；优选卡紧垫4为泡沫卡紧垫4或者海绵卡紧垫4，同样可拆卸地安装在第一盖体21和第二盖体22内。

另外，在本实施例中，第一盒体11和第二盒体12可拆卸连接，第二盒体12可以是推拉的方式拉出；或者在第一盒体11和第二盒体12上分别设置有相应的滑槽和滑块，通过滑槽滑块相配合将第一盒体11和第二盒体12连接(图中未示出该结构)。

本实用新型实施例二

请参阅图5，为了实现第一盖体21和第二盖体22稳定连接，在第一盖体21和第二盖体22的侧面设置有连接件7，该连接件7采用现有常用的连接件7，比如卡钩与卡环的连接。同时为了便于第二盒体12的打开，在第二盒体12上设置有拉手8。

下面实施例中所使用的实验方法若是没有特殊说明，均为常规方法；所用到的材料，试剂等，若是没有特殊说明，均可从商业途径得到。

试剂盒的组建以及利用试剂盒进行检测的步骤如下：

1、需要说明的是：呕吐毒素包被抗原以及单克隆抗体均来自于南昌科技大学。

2、酶标二抗的制备

以山羊作为免疫动物，以呕吐毒素单克隆抗体为免疫原对无病原体山羊进行免疫，得到呕吐毒素抗抗体。将呕吐毒素抗抗体与辣根过氧化物酶(HRP)进行偶联得到酶标二抗。

3、酶标板的制备

用包被缓冲液(pH8.0磷酸盐盐)将包被原稀释成1μg/mL，每孔加入100μl，4℃避光孵育16h，倾去孔中液体，用洗涤液洗涤1次，静置30s，拍干，然后在每孔中加入200μl的封闭液，37℃避光孵育2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用铝膜真空密封保存。

4、检测呕吐毒素的酶联免疫试剂盒的组建

组建检测呕吐毒素的酶联免疫试剂盒，包含下述组分：

(1)包被呕吐毒素偶联抗原的酶标板；

(2)呕吐毒素标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，10μg/L，30μg/L，90μg/L，270μg/L，810μg/L；

(3)用辣根过氧化物酶标记的呕吐毒素抗抗体；

(4)底物显色液由A液和B液组成；其中A液为过氧化脲，B液为四甲基联苯胺；

(5)终止液为2mol/L硫酸；

(6)洗涤液为pH值为7.2，含有0.01％吐温-20、3g/L叠氮化钠防腐剂、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比；

(7)复溶液为pH值为7.0、0.02mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。

5、粮食中呕吐毒素的检测

(1)用试剂盒检测

首先，加标准溶液/样本50μl到对应的微孔中，再加入抗体50μl/孔，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min，小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μl/孔，充分洗涤4-5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头轻轻戳破,加入酶标二抗100μl/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μl/孔，充分洗涤4-5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头轻轻戳破)。加入底物液A液50μl/孔，再加底物液B液50μl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中显色15min。加入终止液50μl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪检测波长450nm，参比波长620nm，测定每孔OD值。

(2)、检测结果分析

标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值除以第一个标准品(0标准)的吸光度值，再乘以100％，得到标准品或样本的百分吸光度值。以标准品百分吸光率为纵坐标，以呕吐毒素标准品浓度(μg/L)的对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中呕吐毒素的实际浓度。

6、精密度检测

样本的精密度检测

将不含呕吐毒素的玉米粉添加500μg/L呕吐毒素，从3个不同试剂盒批次中各抽取10个试剂盒，计算变异系数.

玉米粉(含60μg/L呕吐毒素)精密度检测

试剂盒	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	变异系数CV
												批次1	478	469	534	521	530	470	471	450	587	423	9.8％
批次2	563	567	533	489	603	549	613	603	573	572	6.5％
												批次3	542	578	421	456	576	458	567	521	509	568	11％

7、试剂盒稳定性试验

试剂盒保存条件为2～8℃，经过12个月的测定，试剂盒的最大吸光度值(零标准)、50％抑制浓度、呕吐毒素添加实际测定值均在正常范围之内。考虑在运输和使用过程中，会有非正常保存条件出现，将试剂盒在37℃保存条件下放置7天，进行加速老化实验，结果表明该试剂盒各项指标完全符合要求。考虑到试剂盒冷冻情况发生，将试剂盒放入-20℃冰箱冷冻7天，测定结果也表明试剂盒各项指标完全正常。从以上结果可得出试剂盒可以在2～8℃至少保存12个月以上。

在本实用新型的描述中，需要说明的是，除非另明确的规定和限定，术语“安装”、“设有”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接或可以相互通讯；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。

尽管已经示出和描述了本实用新型的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本实用新型的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型。本实用新型不受此处所公开的具体实施例的限制，所有落入本申请的权利要求范围内的实施例都属于本实用新型的保护范围，简而言之，其保护范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，包括盒体(1)和盖体(2)，其特征在于：所述盒体(1)包括垂直设置的第一盒体(11)和第二盒体(12)，所述盖体(2)包括并排设置的第一盖体(21)和第二盖体(22)，所述第一盖体(21)和第二盖体(22)分别转动盖合在所述第一盒体(11)上；所述第一盒体(11)内设置有固定垫(3)，所述固定垫(3)上开设有呈放检测试剂瓶的若干个下凹瓶位(31)，所述第一盖体(21)和第二盖体(22)内分别设置有与所述固定垫(3)相配合对检测试剂瓶进行限制的卡紧垫(4)，所述卡紧垫(4)上开设有与所述下凹瓶位(31)一一对应的卡紧瓶位(41)；所述第二盒体(12)内放置有酶标板、微吸管、枪头、吸水纸、说明书和盖板膜。

2.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其特征在于：所述固定垫(3)中间设置有分隔筋(32)，所述分隔筋(32)将固定垫(3)划分为第一区域(33)和第二区域(34)。

3.根据权利要求2所述的检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其特征在于：其中若干个下凹瓶位(31)中至少一部分形状为圆形，至少另一部分形状为方形；其中，圆形的下凹瓶位(31)均设置在第一区域(33)内，用于放置试剂管或者形状为圆形的试剂瓶，方形的下凹瓶位(31)均设置在第二区域(34)内，用于放置形状为方形的试剂瓶。

4.根据权利要求3所述的检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其特征在于：若干个下凹瓶位(31)上放置装有呕吐毒素标准品溶液的试剂瓶，装有底物显色A液的试剂瓶，装有底物显色B液的试剂瓶，装有终止液的试剂瓶，装有洗涤液试的剂瓶，装有复溶液的试剂瓶和装有抗体工作液的试剂瓶，以及备用试剂瓶和装有备用工作液的试剂瓶。

5.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其特征在于：所述第一盖体(21)和第二盖体(22)分别通过第一连接条(5)和第二连接条(6)与所述第一盒体(11)相连，且所述第一连接条(5)和第二连接条(6)的两端分别铰接在盖体(2)和第一盒体(11)的两侧。

6.根据权利要求5所述的检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其特征在于：所述第一连接条(5)和第二连接条(6)之间始终相互平行。

7.根据权利要求6所述的检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其特征在于：所述第一盒体(11)上设置有凸缘，所述第一盖体(21)和第二盖体(22)上均设置有与所述凸缘相配合的凹口。

8.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其特征在于：所述固定垫(3)为泡沫固定垫或者海绵固定垫；所述卡紧垫(4)为泡沫卡紧垫或者海绵卡紧垫。

9.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其特征在于：所述第一盒体(11)和第二盒体(12)可拆卸连接。

10.根据权利要求1-9任一项所述的检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其特征在于：所述盒体(1)和盖体(2)均为塑料材质。

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