CN211339511U - 用于lamp或rt-lamp的一体化试纸条 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及一种用于LAMP或RT‑LAMP的一体化试纸条，包括试纸条主体，试纸条主体包括上层片、下层片和中层片；上层片与下层片固连形成套状构件；中层片安置于套状构件内并构成移动副；上层片设有样本孔、洗脱孔、试剂孔、反应槽以及染料孔；下层片设有第一废液孔和第二废液孔；第一废液孔与样本孔位置对应，第二废液孔与洗脱孔位置对应；中层片设有反应点，反应点的材质为FTA滤膜或FTA卡或Whatman No.1滤纸。采用本实用新型后，可直接在试纸条上通过加试剂的方式实现核酸抽提，同时不需要配制整个反应体系，能够直接实现样本核酸的抽提、扩增及显示结果，摆脱对自动仪器的依赖，尤其适用于现场检测场景。

Description

用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条

技术领域

本实用新型涉及一种用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，属于核酸检测辅助装置技术领域。

背景技术

据发明人所知，一些相同症候群传染病(如病毒性出血热系列有发热伴出血，病毒疹系列有发热伴出疹等)，它们的主要临床表现相似，早期难以鉴别诊断，最终病因确认有赖于病原检测，尽快筛查并明确诊断对控制疫情至关重要。由于传染病疫情的突发性和快速蔓延性，最好能在现场第一时间展开快速病原检测，因为患者标本或虫媒标本从现场或野外辗转后送至具备条件的实验室，往往距离较远，耗时长，延误救治和防控，并且标本易失活造成假阴性，此外还存在一定的传播隐患。然而，目前针对传染病病原的现场检测手段相对单薄，仍以胶体金试纸条为主，存在灵敏度低、检测谱窄、钩状效应等问题，常致假阴性。

核酸检测是早期、可靠、敏感的方法。然而常规PCR及DNA探针杂交技术因假阳性高等问题不适合临床诊断；实时荧光定量PCR技术灵敏度高，可靠性好，为全封闭反应，但该技术需要价格昂贵的荧光定量PCR仪，并且要保证高特异性往往需要荧光标记探针，检测成本较高，需要注意的是，精密贵重仪器对质量控制、操作环境和人员的专业能力要求较高，难以在基层卫生部门和防疫机构推广使用，也难以直接用于现场检测。

与上述各检测手段相比，LAMP(环介导等温扩增反应)或RT-LAMP(逆转录环介导等温扩增反应)方法应能更好地在现场进行早期病原学筛查。

LAMP/RT-LAMP方法具有较高特异性和抗干扰能力，只有当引物组与目的片段的6-8个区域都匹配上时才能进行扩增；反应体系稳定可靠，在室温下放置2周后仍然稳定，并且对于样品中原有或污染的无关、干扰片段仍然不敏感，而其他类似技术则无法做到这一点；敏感性较高，扩增快速、高效，1小时内产物量可达约10¹⁰倍，逆转录反应和LAMP扩增可同时进行，扩增效率和检测灵敏度可比普通RT-PCR高10-100倍左右；结果鉴别相对简便，如检测反应管的沉淀浊度就能判断扩增与否，也可在管盖或管底蜡封(高熔点)SYBR荧光染料直接观察反应后的颜色变化即可判断，或直接在反应体系加入不影响扩增效率的羟基萘酚蓝染料(hydroxy naphthol blue,HNB)来大幅度增强显色。总之，LAMP/RT-LAMP方法对于样品处理、操作技术和仪器设备的要求都比较低，更适宜于现场检测、医疗机构(如各类中小医院、社区医院等)、床边检验(Point of care testing,POCT)等场景下使用。

然而，将LAMP/RT-LAMP方法推广应用于以上现场检测等场景同样存在瓶颈问题：一方面该方法需抽提核酸，手工操作繁琐，或需要配置价格较昂贵的全自动核酸提取仪；另一方面该方法需要配制反应体系，整合度不高。因此，亟待研制出能克服上述技术问题的技术手段，以利于LAMP/RT-LAMP方法在现场检测、医院临床诊断中的应用。

经检索发现，申请号CN201610710500.3、申请公布号CN106337085A的中国发明专利申请，公开了一种核酸检测卡及其使用方法，包括封口膜、卡体、试剂孔、核酸扩增试剂、反应孔、核酸收集试纸、配套使用的核酸纯化试剂、冲洗缓冲液、防止溶液挥发的有机相。打开封口膜，将病原体样本加入到封装有核酸收集试纸的反应孔中，经核酸纯化试剂和冲洗缓冲液自动冲洗数次后，将试剂孔内的核酸扩增试剂分别加入每个对应的反应孔，在防止溶液挥发的有机相保护下，进行核酸扩增反应，反应的结果可通过配套使用的光学检测仪进行定性与定量分析。

申请号CN201810583631.9、申请公布号CN108642569A的中国发明专利申请，公开了一种核酸检测芯片，包括：设置在中间位置的样本室单元，其存储加入的核酸样本，并在旋转作用下将核酸样本等分；与样本室单元连通，并通过虹吸现象将核酸样本引入反应室单元的第一虹吸阀；反应室单元，其设置在边缘位置，其将核酸样本与试剂混合并进行核酸反应，反应室单元的反应室还连通有第二虹吸阀；与反应室单元连通的试剂存储导入单元，其内存储有反应试剂，在反应室单元内导入核酸样本后，向反应室单元内导入反应试剂，以使反应试剂与核酸样本反应可以针对各种血液病毒进行检测。

然而，以上两种技术方案都不能脱离价格昂贵的自动仪器，难以适用于目前现场检测等场景的现状。

经检索还发现，专利号CN201410363297.8、授权公告号CN104101706B的中国发明专利，公开了一种检测甲流抗原的胶体金免疫层析试纸条及检测甲流抗原的方法，试纸条包括底板和顺次搭接粘贴在所述底板上的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中结合物垫为金标-生物素结合物垫和链霉亲和素-金-抗体结合物垫的组合；检测甲流抗原的方法中，将待检样品滴加在所述的试纸条上，若在检测线(1)处显示红色条带，则说明所述待检样品中含有甲流抗原。

申请号CN201710569444.0、申请公布号CN107287351A的中国发明专利申请，提到了一种横向流动试纸条(Lateral flow dipstick，LFD)，其原理是将FITC标记的探针与生物素标记的LAMP扩增产物特异性杂交，LFD检测无需特殊的设备，操作者只需将产物和试纸条浸入缓冲液，LFD试纸条上具有控制带和检测带，两条带均显色表示检测结果为阳性，只有控制带显色检测带不显色表明检测结果为阴性。

然而，以上两种试纸条技术方案都不能在试纸条上直接进行核酸的洗脱和扩增，仍然无法满足现场检测等场景的需求。

实用新型内容

本实用新型目的在于：针对上述现有技术存在的问题，提出一种用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，能够直接实现样本核酸的抽提、扩增及显示结果，摆脱对自动仪器的依赖，适用于现场检测场景，尤其适用于传染病现场防控、医院临床科室、口岸检验检疫。

为了达到以上目的，本实用新型的技术方案如下：

一种用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，包括试纸条主体，其特征是，所述试纸条主体包括上层片、下层片和中层片；所述上层片、下层片和中层片分别呈长条状；所述上层片的两条长边与下层片的两条长边一一对应，所述上层片的各长边与下层片的对应长边密封固连，所述上层片与下层片形成套状构件；所述中层片安置于套状构件内，所述中层片与套状构件构成移动副；

所述上层片设有样本孔、洗脱孔、试剂孔、反应槽以及染料孔；所述下层片设有第一废液孔和第二废液孔；所述第一废液孔与样本孔位置对应，所述第二废液孔与洗脱孔位置对应；所述中层片设有反应点；

所述样本孔、洗脱孔、第一废液孔、第二废液孔分别为开孔，所述试剂孔为开孔或半密封孔，所述染料孔为预装有染料的半密封孔；所述开孔的一端开口通向中层片且另一端开口通向外界；所述半密封孔的一端开口与中层片贴合或相接且另一端以封膜封闭，所述封膜为透水膜或隔水膜；所述反应槽为开口远离中层片的凹槽，所述反应槽的槽底面与中层片相贴。

采用该结构，可通过抽拉中层片使其反应点依次位于上层片各位点下，然后实施加样、洗脱抽提核酸、加扩增反应试剂、进行恒温扩增反应、显色以判断结果的LAMP或RT-LAMP实验过程，从而摆脱对自动仪器的依赖，也不需要进行额外的核酸抽提操作，尤其适用于现场检测场景。

本实用新型还可以采用以下优选方案：

优选地，所述反应点的材质为FTA滤膜或FTA卡或Whatman No.1滤纸。

优选地，所述一体化试纸条具有：

中层片在外力抽拉作用下使其反应点对准样本孔，向反应点加入待检样本的加样状态；

在加样状态基础上且在加入待检样本后，中层片在外力抽拉作用下使其反应点对准洗脱孔，向反应点加入洗脱液的洗脱状态；

在洗脱状态基础上且在加入洗脱液后，中层片在外力抽拉作用下使其反应点对准试剂孔，向反应点加入扩增反应试剂的预备状态；

在预备状态基础上且在加入扩增反应试剂后，中层片在外力抽拉作用下使其反应点位于反应槽的槽底面覆盖区域内，中层片与反应槽的槽底面贴合使中层片的反应点位于密闭空间内，试纸条主体的反应槽所处区域置于恒温环境中进行反应的扩增反应状态；

在扩增反应状态基础上且在扩增反应完成后，中层片在外力抽拉作用下使其反应点对准染料孔，染料孔内预装的染料与反应点接触使其显色，以备判定结果的结果显示状态。

采用该优选方案，可通过更加明确的各个状态在试纸条上顺利实施LAMP或RT-LAMP实验过程。

优选地，当试剂孔为半密封孔时，所述试剂孔内预装有扩增反应试剂冻干粉，所述封膜为透水膜；所述试剂孔朝向中层片的一端开口处还设有开关膜，所述开关膜上固连有拨动块；所述上层片还设有长孔，所述拨动块位于长孔内，所述开关膜对长孔靠近中层片的末端保持封闭；所述试剂孔具有：开关膜封闭试剂孔朝向中层片一端开口的封闭状态；拨动块在外力作用下沿长孔移动并带动开关膜移动，使试剂孔朝向中层片一端开口与中层片贴合或相接的使用状态。

采用该优选方案，在反应点位于试剂孔位置时，可经透水膜向试剂孔内加纯水复溶冻干粉，然后打开开关膜使试剂加至反应点即可。

优选地，所述染料孔的封膜为隔水膜且采用透明材质制成；所述染料孔朝向中层片的一端开口处还设有开关膜或石蜡密封层，所述开关膜上固连有拨动块，所述石蜡密封层的熔点高于扩增反应温度；所述上层片还设有长孔，所述拨动块位于长孔内，所述开关膜对长孔靠近中层片的末端保持封闭；所述染料孔具有：开关膜或石蜡密封层封闭染料孔朝向中层片一端开口的封闭状态；拨动块在外力作用下沿长孔移动并带动开关膜移动、或者石蜡密封层在温度高于其熔点的恒温环境下熔化，使染料孔朝向中层片一端开口与中层片贴合或相接的使用状态。

采用该优选方案，在反应点位于染料孔位置时，可打开开关膜使染料加至反应点上，或者，将整个试纸条或染料孔位置放入恒温环境，其温度高于石蜡密封层的熔点，即可使其熔化，从而使染料加至反应点上。另外，石蜡密封层采用高熔点石蜡，其熔点高于扩增反应时所需温度，这样在扩增反应时石蜡密封层不会熔化。

优选地，所述中层片与套状构件之间的间隙填充有润滑脂，且润滑脂位于样本孔、洗脱孔、试剂孔、反应槽、染料孔、第一废液孔、第二废液孔的周围。

优选地，所述上层片、下层片的材质为聚丙烯材料；所述中层片与套状构件之间的间隙填充有液态硅胶层，所述液态硅胶层与套状构件固连，所述液态硅胶层位于样本孔、洗脱孔、试剂孔、反应槽、染料孔、第一废液孔、第二废液孔的周围。

采用以上两优选方案的任意一个均能实现更好地密封效果，更好地确保检测的可靠性，并尽量避免扩增反应可能带来的气溶胶污染。

优选地，所述上层片内设有第一磁力片，所述下层片内设有第二磁力片，所述第一磁力片与第二磁力片以磁力彼此相吸；所述中层片的材质为铁氧体磁性薄膜。

采用该优选方案，可使上层片与下层片能借助磁吸力夹紧中层片，中层片本身的材质可进一步确保夹紧效果，实现更好地密封效果，更好地确保检测的可靠性，并尽量避免扩增反应可能带来的气溶胶污染。

优选地，所述反应槽的槽底面靠近中层片的侧面设有液态硅胶层，所述中层片位于反应点周围的部位也设有液态硅胶层；当反应点位于反应槽的槽底面覆盖区域内时，所述反应槽的液态硅胶层与中层片的液态硅胶层相贴合。

采用该优选方案，可使反应点位于反应槽位置时，能够更加有效地将反应点封闭起来，这样在整个试纸条或反应槽部位放入恒温环境(如水浴锅、恒温设备等)后，能够使反应点在封闭状态下进行扩增反应，以更好地确保检测的可靠性，并尽量避免扩增反应可能带来的气溶胶污染。

优选地，所述上层片还具有两条短边，所述下层片还具有两条短边；所述上层片的两条短边与下层片的两条短边一一对应，所述上层片的一短边与下层片的对应短边密封固连并构成套状构件的密封端，所述上层片的另一短边与下层片的对应短边彼此分离并构成套状构件的开口端，所述中层片的一端位于套状构件内，所述中层片的另一端露出开口端。

采用该优选方案，可确保中层片只能从开口端抽拉出。

优选地，所述试纸条主体还包括吸水纸层，所述吸水纸层位于下层片背离中层片的一侧。

采用该优选方案，可利用吸水纸层吸掉第一、第二废液孔流出的废液，使整个试纸条使用更加方便。

采用本实用新型后，可直接在试纸条上通过加试剂的方式实现核酸抽提，同时不需要配制整个反应体系，能够直接实现样本核酸的抽提、扩增及显示结果，摆脱对自动仪器的依赖，尤其适用于现场检测场景。

附图说明

下面结合附图对本实用新型作进一步的说明。

图1为本实用新型实施例的主体结构示意图。

图2为本实用新型实施例的套状构件示意图。

图3为图2的局部放大图。

图4为本实用新型实施例的主视方向示意图。

图5为本实用新型实施例的后视方向示意图。

图6为本实用新型实施例的中层片示意图。

图7、图8分别为图4中试剂孔的开关膜机构A-A剖视图、B-B剖视图。

图9为本实用新型实施例染料孔的开关膜机构与图7对应位置的剖视图。

图10为本实用新型实施例染料孔的开关膜机构与图8对应位置的剖视图。

图11为本实用新型实施例染料孔的石蜡密封层示意图，其位置与图9对应。

图12为图4的C-C剖视图。

图13为图4中反应槽的D-D剖视图。

具体实施方式

实施例

如图1至图13所示，本实施例用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，包括试纸条主体01，试纸条主体01包括上层片11、下层片13和中层片12；上层片11、下层片13和中层片12分别呈长条状；上层片11的两条长边与下层片13的两条长边一一对应，上层片11的各长边与下层片13的对应长边密封固连，上层片11与下层片13形成套状构件14；中层片12安置于套状构件14内，中层片12与套状构件14构成移动副。

上层片11设有样本孔21、洗脱孔22、试剂孔23、反应槽24以及染料孔25(如图4所示)；下层片13设有第一废液孔26和第二废液孔27(如图5所示)；第一废液孔26与样本孔21位置对应，第二废液孔27与洗脱孔22位置对应；中层片12设有反应点28，反应点28的材质为FTA滤膜或FTA卡或Whatman No.1滤纸。注：反应点直径可设为5mm左右。

样本孔21、洗脱孔22、第一废液孔26、第二废液孔27分别为开孔，试剂孔23为开孔或半密封孔，染料孔25为预装有染料的半密封孔；对于各开孔而言，开孔的一端开口通向中层片12且另一端开口通向外界；半密封孔的一端开口与中层片12贴合或相接且另一端以封膜封闭，封膜为透水膜或隔水膜；反应槽24为开口远离中层片12的凹槽，反应槽24的槽底面与中层片12相贴。

上层片11还具有两条短边，下层片13还具有两条短边；上层片11的两条短边与下层片13的两条短边一一对应，上层片11的一短边与下层片13的对应短边密封固连并构成套状构件14的密封端29，上层片11的另一短边与下层片13的对应短边彼此分离并构成套状构件14的开口端30，中层片12的一端位于套状构件14内，中层片12的另一端露出开口端30。

试纸条主体01还包括吸水纸层15，吸水纸层15位于下层片13背离中层片12的一侧。

具体而言，试剂孔23可采用两种结构之一：开孔或半密封孔。

当试剂孔23为开孔时，反应点28对准试剂孔23后，直接经试剂孔23向反应点28加入扩增反应试剂即可。

当试剂孔23为半密封孔时，试剂孔23内预装有扩增反应试剂冻干粉，封膜为透水膜；如图4、图7、图8所示，试剂孔23朝向中层片12的一端开口处还设有开关膜31，开关膜31上固连有拨动块32；上层片11还设有长孔33，拨动块32位于长孔33内，开关膜31对长孔33靠近中层片12的末端保持封闭；试剂孔23具有：开关膜31封闭试剂孔23朝向中层片12一端开口的封闭状态；拨动块32在外力作用下沿长孔33移动并带动开关膜31移动，使试剂孔23朝向中层片12一端开口与中层片12贴合或相接的使用状态。这样，在反应点28对准试剂孔23后，先经透水膜向试剂孔23内加入一定体积的纯水复溶冻干粉得到扩增反应试剂，然后打开开关膜31使试剂加至反应点28即可。

具体而言，染料孔25的封膜为隔水膜且采用透明材质制成；如图4、图9至图11所示，染料孔25朝向中层片12的一端开口处还设有开关膜34或石蜡密封层35，开关膜34上固连有拨动块37，石蜡密封层35的熔点高于扩增反应温度；上层片11还设有长孔36，拨动块37位于长孔36内，开关膜34对长孔36靠近中层片12的末端保持封闭；染料孔25具有：开关膜34或石蜡密封层35封闭染料孔25朝向中层片12一端开口的封闭状态；拨动块37在外力作用下沿长孔36移动并带动开关膜34移动、或者石蜡密封层35在温度高于其熔点的恒温环境下熔化，使染料孔25朝向中层片12一端开口与中层片12贴合或相接的使用状态。

为确保试纸条的密封性，可采用以下两种结构之一(如图12所示)：

(1)中层片12与套状构件14之间的间隙填充有润滑脂41，且润滑脂41位于样本孔21、洗脱孔22、试剂孔23、反应槽24、染料孔25、第一废液孔26、第二废液孔27的周围。

润滑脂41可采用杜邦的

lvp高真空润滑脂。润滑脂41可在中层片12与套状构件14之间形成润滑膜，并起到封闭作用。

(2)上层片11、下层片13的材质为聚丙烯材料；中层片12与套状构件14之间的间隙填充有液态硅胶层42，液态硅胶层42与套状构件14固连，液态硅胶层42位于样本孔21、洗脱孔22、试剂孔23、反应槽24、染料孔25、第一废液孔26、第二废液孔27的周围。

注：液态硅胶层是指材质为液态硅胶的固体层，并非液体层。

为进一步确保试纸条的密封性，如图12所示，上层片11内设有第一磁力片43，下层片13内设有第二磁力片44，第一磁力片43与第二磁力片44以磁力彼此相吸；中层片12的材质为铁氧体磁性薄膜。

为进一步确保扩增反应时试纸条反应部位的密封性，如图6、图13所示，反应槽24的槽底面靠近中层片12的侧面设有液态硅胶层45，中层片12位于反应点28周围的部位也设有液态硅胶层46；当反应点28位于反应槽24的槽底面覆盖区域内时，反应槽24的液态硅胶层45与中层片12的液态硅胶层46相贴合。

需要说明的是，由于上层片、中层片、下层片均采用具有适度刚性又不失柔韧的材质制成，因此，虽然反应槽的结构相对于上层片向中层片略为凸出，但并不会对中层片的抽拉运动造成阻滞，也不会导致上层片的其余部分与中层片之间形成过大间隙，不会影响整个试纸条顺利使用。

经试验，本实施例试纸条可满足在65℃下孵育1小时以上的要求。

本实施例的一体化试纸条具有以下具体状态：

(1)中层片12在外力抽拉作用下使其反应点28对准样本孔21，向反应点28加入待检样本的加样状态。(注：待检样本为血液、细菌培养液等。)

(2)在加样状态基础上且在加入待检样本后，中层片12在外力抽拉作用下使其反应点28对准洗脱孔22，向反应点28加入洗脱液的洗脱状态。(注：扩增反应试剂包括LAMP检测试剂和扩增引物。)

(3)在洗脱状态基础上且在加入洗脱液后，中层片12在外力抽拉作用下使其反应点28对准试剂孔23，向反应点28加入扩增反应试剂的预备状态。(注：扩增反应试剂包括LAMP检测试剂和扩增引物。)

(4)在预备状态基础上且在加入扩增反应试剂后，中层片12在外力抽拉作用下使其反应点28位于反应槽24的槽底面覆盖区域内，中层片12与反应槽24的槽底面贴合使中层片12的反应点28位于密闭空间内，试纸条主体01的反应槽24所处区域置于恒温环境中进行反应的扩增反应状态。

(5)在扩增反应状态基础上且在扩增反应完成后，中层片12在外力抽拉作用下使其反应点28对准染料孔25，染料孔25内预装的染料与反应点28接触使其显色，以备判定结果的结果显示状态。(注：染料为SYBR green。)

本实施例试纸条在具体使用时，可通过抽拉中层片12使其反应点28依次位于上层片11的样本孔21、洗脱孔22、试剂孔23、反应槽24、染料孔25下，并对应实施加入待检样本、加洗脱液进行洗脱抽提核酸、加扩增反应试剂、放于恒温环境中进行恒温扩增反应、加染料显色以判断结果的LAMP或RT-LAMP实验过程。

其中，在进行恒温扩增反应时可采用水浴锅或小型恒温设备；将试纸条放入恒温环境前，以外力按压，使反应槽24的液态硅胶层45与中层片12的液态硅胶层46能更好地贴合；在将试纸条放入恒温环境时，通常将整个试纸条放入，如果条件允许，可以在反应时只将反应槽部位放于恒温环境中进行扩增反应，或者可以在染色时只将染料孔部位放于恒温环境中使高熔点的石蜡密封层35熔化。

除上述实施例外，本实用新型还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本实用新型要求的保护范围。

Claims (10)

1.一种用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，包括试纸条主体，其特征是，所述试纸条主体包括上层片、下层片和中层片；所述上层片、下层片和中层片分别呈长条状；所述上层片的两条长边与下层片的两条长边一一对应，所述上层片的各长边与下层片的对应长边密封固连，所述上层片与下层片形成套状构件；所述中层片安置于套状构件内，所述中层片与套状构件构成移动副；

所述上层片设有样本孔、洗脱孔、试剂孔、反应槽以及染料孔；所述下层片设有第一废液孔和第二废液孔；所述第一废液孔与样本孔位置对应，所述第二废液孔与洗脱孔位置对应；所述中层片设有反应点；

所述样本孔、洗脱孔、第一废液孔、第二废液孔分别为开孔，所述试剂孔为开孔或半密封孔，所述染料孔为预装有染料的半密封孔；所述开孔的一端开口通向中层片且另一端开口通向外界；所述半密封孔的一端开口与中层片贴合或相接且另一端以封膜封闭，所述封膜为透水膜或隔水膜；所述反应槽为开口远离中层片的凹槽，所述反应槽的槽底面与中层片相贴。

2.根据权利要求1所述用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，其特征是，所述反应点的材质为FTA滤膜或FTA卡或Whatman No.1滤纸。

3.根据权利要求1所述用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，其特征是，当试剂孔为半密封孔时，所述试剂孔内预装有扩增反应试剂冻干粉，所述封膜为透水膜；所述试剂孔朝向中层片的一端开口处还设有开关膜，所述开关膜上固连有拨动块；所述上层片还设有长孔，所述拨动块位于长孔内，所述开关膜对长孔靠近中层片的末端保持封闭；所述试剂孔具有：开关膜封闭试剂孔朝向中层片一端开口的封闭状态。

4.根据权利要求1所述用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，其特征是，所述染料孔的封膜为隔水膜且采用透明材质制成；所述染料孔朝向中层片的一端开口处还设有开关膜或石蜡密封层，所述开关膜上固连有拨动块，所述石蜡密封层的熔点高于扩增反应温度；所述上层片还设有长孔，所述拨动块位于长孔内，所述开关膜对长孔靠近中层片的末端保持封闭；所述染料孔具有：开关膜或石蜡密封层封闭染料孔朝向中层片一端开口的封闭状态。

5.根据权利要求1所述用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，其特征是，所述中层片与套状构件之间的间隙填充有润滑脂，且润滑脂位于样本孔、洗脱孔、试剂孔、反应槽、染料孔、第一废液孔、第二废液孔的周围。

6.根据权利要求1所述用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，其特征是，所述上层片、下层片的材质为聚丙烯材料；所述中层片与套状构件之间的间隙填充有液态硅胶层，所述液态硅胶层与套状构件固连，所述液态硅胶层位于样本孔、洗脱孔、试剂孔、反应槽、染料孔、第一废液孔、第二废液孔的周围。

7.根据权利要求1所述用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，其特征是，所述上层片内设有第一磁力片，所述下层片内设有第二磁力片，所述第一磁力片与第二磁力片以磁力彼此相吸；所述中层片的材质为铁氧体磁性薄膜。

8.根据权利要求1所述用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，其特征是，所述反应槽的槽底面靠近中层片的侧面设有液态硅胶层，所述中层片位于反应点周围的部位也设有液态硅胶层；当反应点位于反应槽的槽底面覆盖区域内时，所述反应槽的液态硅胶层与中层片的液态硅胶层相贴合。

9.根据权利要求1至8任一项所述用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，其特征是，所述上层片还具有两条短边，所述下层片还具有两条短边；所述上层片的两条短边与下层片的两条短边一一对应，所述上层片的一短边与下层片的对应短边密封固连并构成套状构件的密封端，所述上层片的另一短边与下层片的对应短边彼此分离并构成套状构件的开口端，所述中层片的一端位于套状构件内，所述中层片的另一端露出开口端。

10.根据权利要求1至8任一项所述用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，其特征是，所述试纸条主体还包括吸水纸层，所述吸水纸层位于下层片背离中层片的一侧。

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