CN113607724A - 用于lamp或rt-lamp的一体化检测装置及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于LAMP或RT‑LAMP的一体化检测装置及检测方法,包括支架,支架包括固定板和活动板,固定板设有一排反应管,反应管内安置有扩增反应试剂冻干粉;固定板底面设有支撑件;固定板顶面设有一副安置部件,活动板两端与安置部件滑动连接;活动板设有一排冲洗孔,冲洗孔内分别固设有FTA卡片,冲洗孔底部设有第一密封圈;活动板底面还设有一排第二密封圈、以及呈长条状布置的显色剂组件;显色剂组件内安置有显色剂。该检测方法基于上述装置实施LAMP或RT‑LAMP实验检测过程。本发明不需依赖难携带且昂贵的自动检测仪器,即能顺利实施LAMP或RT‑LAMP实验检测过程,结构设计简洁巧妙,操作过程简便易行。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置及检测方法,属于核酸检测辅助装置技术领域。
背景技术
一些相同症候群传染病(如病毒性出血热系列有发热伴出血,病毒疹系列有发热伴出疹等)主要临床表现相似,早期难以鉴别诊断,最终病因确认有赖于病原检测,尽快筛查并明确诊断对控制传染病疫情至关重要。由于传染病疫情的突发性和快速蔓延性,最好能在现场第一时间展开快速病原检测,因为患者标本或虫媒标本从现场或野外辗转后送至具备条件的实验室,往往距离较远,耗时长,延误救治和防控,并且标本易失活造成假阴性,此外还存在一定的传播隐患。然而,目前针对传染病病原的现场检测手段相对单薄,仍以胶体金试纸条为主,存在灵敏度低、检测谱窄、钩状效应等问题,常致假阴性。
核酸检测是早期、可靠、敏感的方法。然而常规PCR及DNA探针杂交技术因假阳性高等问题不适合临床诊断;实时荧光定量PCR技术灵敏度高,可靠性好,为全封闭反应,但该技术需要价格昂贵的荧光定量PCR仪,并且要保证高特异性往往需要荧光标记探针,检测成本较高,需要注意的是,精密贵重仪器对质量控制、操作环境和人员的专业能力要求较高,难以在基层卫生部门和防疫机构推广使用,也难以直接用于现场检测。
与上述各检测手段相比,LAMP(环介导等温扩增反应)或RT-LAMP(逆转录环介导等温扩增反应)方法应能更好地在现场进行早期病原学筛查。
LAMP/RT-LAMP方法具有较高特异性和抗干扰能力,只有当引物组与目的片段的6-8个区域都匹配上时才能进行扩增;反应体系稳定可靠,在室温下放置2周后仍然稳定,并且对于样品中原有或污染的无关、干扰片段仍然不敏感,而其他类似技术则无法做到这一点;敏感性较高,扩增快速、高效,1小时内产物量可达约1010倍,逆转录反应和LAMP扩增可同时进行,扩增效率和检测灵敏度可比普通RT-PCR高10-100倍左右;结果鉴别相对简便,如检测反应管的沉淀浊度就能判断扩增与否,也可在管盖或管底蜡封(高熔点)SYBR荧光染料直接观察反应后的颜色变化即可判断,或直接在反应体系加入不影响扩增效率的羟基萘酚蓝染料(hydroxy naphthol blue,HNB)来大幅度增强显色。总之,LAMP/RT-LAMP方法对于样品处理、操作技术和仪器设备的要求都比较低,更适宜于现场检测、医疗机构(如各类中小医院、社区医院等)、床边检验(Point of care testing,POCT)等场景下使用。
然而,将LAMP/RT-LAMP方法推广应用于以上现场检测等场景同样存在瓶颈问题:一是该方法需抽提核酸,手工操作繁琐,或需要配置价格较昂贵的全自动核酸提取仪,且核酸提取与检测分离易导致污染和假阳性问题;二是该方法需要配制反应体系,整合度不高;三是LAMP/RT-LAMP的相关试剂一般需冷链储存,运输储存不便;四是目前LAMP/RT-LAMP反应还难以实现多重反应,一般只能针对单个病原进行检测,通量不足,难以适应相同症候群(如发热伴出血、传染病四项筛查等)多种病原筛查的需要。因此,亟待研制出能克服上述技术问题的技术手段,以利于LAMP/RT-LAMP方法在现场检测、医院临床诊断中的应用。
发明人研究团队长期致力于传染病病原检测研究,并且于2019年申请了多件与“用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条”相关的专利。目前,发明人研究团队已有进一步的研究成果,并以本专利予以申报。
发明内容
本发明目的在于:针对上述现有技术存在的问题,基于发明人最近研究成果,提出一种用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,能一次检测多个样本或多个目标核酸,且能适用于现场检测场景,尤其适用于传染病现场防控、医院临床科室、口岸检验检疫。同时,还提出相应的检测方法。
为了达到以上目的,本发明的技术方案如下:
一种用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,包括支架,其特征是,所述支架包括固定板和活动板,所述固定板设有一排贯穿固定板的反应管,所述反应管的上端开口且位于固定板顶面,所述反应管的下端封闭;所述反应管内安置有扩增反应试剂冻干粉;所述固定板底面还设有支撑件;
所述固定板顶面设有一副安置部件,所述活动板两端分别经滑轨组件与对应安置部件滑动连接;
所述活动板设有一排贯通活动板的冲洗孔,所述冲洗孔内分别设有FTA卡片,所述冲洗孔底部分别设有第一密封圈;所述活动板底面还设有一排第二密封圈、以及呈长条状布置的显色剂组件;所述显色剂组件内安置有显色剂;
所述一体化检测装置具有:冲洗孔底部的第一密封圈与固定板顶面相抵接使冲洗孔底部密闭,活动板的第二密封圈对准相应反应管上端开口使其密闭的初始状态;
所述一体化检测装置还具有:在初始状态基础上,活动板经滑动使其冲洗孔对准相应反应管上端开口,且各冲洗孔底部的第一密封圈使相应的反应管与冲洗孔密封连通的第一状态;
所述一体化检测装置还具有:在第一状态基础上,活动板经滑动使其第二密封圈再次对准相应反应管上端开口使其密闭,冲洗孔底部的第一密封圈与固定板顶面相抵接使冲洗孔底部密闭的第二状态;
所述一体化检测装置还具有:在第二状态基础上,活动板经滑动使其显色剂组件对准反应管上端开口的第三状态。
该结构中,反应管作为主要反应容器设于固定板上;固定板下的支撑件可使固定板位于适当的高度,从而使反应管悬空;反应管中预先安置有扩增反应试剂冻干粉(即LAMP或RT-LAMP检测试剂、扩增引物),只要在使用时加入复溶液即可形成反应体系;活动板可沿安置部件滑动,从而能在各个阶段将其相应部位滑移至目标位置,具体如:在加样时,使装置处于初始状态,利用活动板的冲洗孔中的FTA卡片进行样本的核酸抽提;在建立反应体系时,先滑动活动板使装置处于第一状态,再将FTA卡片戳入反应管中,然后加入预定体积的复溶液即可;在恒温反应时,先滑动活动板使装置处于第二状态,再将装置放入恒温仪器中进行反应;在显色时,先滑动活动板使装置处于第三状态,再将装置倒置使反应液溶解显色剂,然后以颜色判定检测结果,实现可视化判定。
如此即可将全部检验过程集中在一套装置中,能一次检测多个样本或多个目标核酸,且能适用于现场检测场景,尤其适用于传染病现场防控、医院临床科室、口岸检验检疫。
本发明还可以采用以下优选方案:
优选地,所述固定板设有第一紧固孔,所述活动板设有第二紧固孔,所述第一紧固孔与第二紧固孔相配;所述装置还包括紧固件,所述紧固件与第一紧固孔、第二紧固孔相配;当装置处于初始状态或第二状态时,对应的第一紧固孔和第二紧固孔同轴对准。
采用以上优选方案,可在装置处于初始状态或第二状态时,以紧固件(如手拧螺丝等)将固定板与活动板位置锁定并压紧,配合各密封圈,进一步确保反应管足够密闭,从而在储存备用时避免外界污染,或在后续恒温反应时避免反应体系蒸发。
更优选地,所述支撑件底端与固定板底面的间距大于或等于反应管下端与固定板底面的间距;所述固定板的顶面还设有试剂管架;所述第一密封圈、第二密封圈分别采用氟胶O型圈。
采用以上优选方案,可进一步优化固定板的支撑高度;通过优化使固定板上有放置其它试剂管(如EP管)的空间;优化各密封圈的具体材质。
优选地,所述滑轨组件由轨道和滑块配合构成,当轨道设于安置部件时滑块设于活动板,当轨道设于活动板时滑块设于安置部件;所述滑轨组件设有由彼此相配的弹簧销和限位孔构成的限位构件,所述弹簧销、限位孔分别有至少一个,当弹簧销设于轨道时限位孔设于滑块,当弹簧销设于滑块时限位孔设于轨道;当装置处于初始状态、第一状态、第二状态或第三状态时,至少一个弹簧销与当前相应的限位孔卡接,或者至少一个限位孔与当前相应的弹簧销卡接。
更优选地,所述安置部件为板件;所述安置部件、活动板分别在相应的限位构件旁设有刻度线层和/或文字标识层。
采用以上优选方案,可进一步优化滑轨组件的结构,使其更加简洁;通过设置限位构件可以更好地按需锁定活动板与安置部件的相对位置;刻度线可辅助操作人员判断是否对准,文字标识可辅助操作人员判断当前状态。
优选地,所述显色剂组件具有一排显色杯,所述显色杯开口朝向固定板,所述显色剂安置在显色杯内;所述反应管所成排、冲洗孔所成排、第二密封圈所成排、显色杯所成排彼此平行;所述活动板的滑动方向与各所成排垂直;所述冲洗孔、第二密封圈、显色杯分别与反应管一一对应且相配;在活动板上,所述冲洗孔所成排与显色杯所成排位于第二密封圈所成排的两侧。
更优选地,所述显色剂组件还具有长条状底板,所述显色杯安置于该底板的底面,所述底板的顶面设有一组推杆,所述推杆穿过并露出活动板的顶面;所述显色剂呈冻干粉状。
更优选地,当装置处于第三状态时,所述显色杯对准相应反应管的上端开口,所述推杆在外力作用下经底板将显色杯推插入反应管,且显色杯外壁与反应管内壁密封相接。
采用以上优选方案,可进一步优化显色剂组件的具体结构,并且优化各部件或结构的具体布置方案。其中,推杆便于施加外力,使显色杯能更加紧密地与反应管接触,更好地确保装置全封闭。
优选地,所述冲洗孔内分别设有套管,所述套管两端开口,所述套管一端位于冲洗孔内、另一端穿出活动板顶面且位于冲洗孔外,所述套管另一端分别设有管盖;所述FTA卡片的部分边缘或全部边缘与相应套管固连;所述FTA卡片的布置方向与冲洗孔的轴向垂直。
采用以上优选方案,可进一步优化冲洗孔的具体结构,并优化FTA卡片与冲洗孔的连接结构,更利于核酸抽提操作过程顺利实施。
本发明还提出:
一种非疾病诊断目的LAMP或RT-LAMP检测方法,其特征是,采用前文所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置;所述检测方法包括以下步骤:
第一步、所述一体化检测装置处于初始状态;取预定体积的待测样本并加至预定冲洗孔内的FTA卡片上,以FTA提取液和TE缓冲液依次对FTA卡片进行洗涤并吸除废液;干燥FTA卡片,即获得含有待测样本核酸的FTA卡片;此时,若固定板与活动板经紧固件锁定位置,则移除该紧固件;
第二步、推动活动板沿安置部件滑动,使一体化检测装置处于第一状态;以洁净器具(如移液器枪头)戳捅FTA卡片,使含有待测样本核酸的FTA卡片脱离冲洗孔并落入对应反应管内;向反应管内加入预定体积的复溶液,或者依次加入预定体积的复溶液、预定体积的石蜡油(密封液面用);此时即得配制好的反应体系;
第三步、推动活动板沿安置部件滑动,使一体化检测装置处于第二状态;将一体化检测装置放入恒温仪器中进行扩增反应;反应结束后取出一体化检测装置;
第四步、推动活动板沿安置部件滑动,使一体化检测装置处于第三状态;将一体化检测装置倒置使反应液与显色剂组件中的显色剂溶解并混合,之后观察反应液颜色按预设判断标准判定检测结果。
基于一体化检测装置的巧妙设计,该检测方法不需依赖难携带且昂贵的自动检测仪器,即能顺利实施LAMP或RT-LAMP实验检测过程,能一次检测多个样本或多个目标核酸,适用于现场检测场景,尤其适用于传染病现场防控、医院临床科室、口岸检验检疫。
本发明的一体化检测装置结构设计简洁巧妙且可靠,该装置集成抽提区、反应区、染料区三个关键功能区,通过滑动活动板可在这三个功能区中切换,从而无需依赖离心机、泵等设备,也无需结果判定仪器等,不需依赖难携带且昂贵的自动检测仪器,在一个装置上即能完成样本核酸抽提、LAMP或RT-LAMP核酸扩增、检测结果判定一系列功能,从而顺利实施LAMP或RT-LAMP实验检测过程;同时,自扩增反应开始,整个装置处于全封闭状态,无需扩增后开盖处理,也无需电泳检测,且不使用溴化乙锭,能避免核酸产物气溶胶污染导致后续假阳性可能。基于该一体化检测装置的检测方法,操作过程简便易行,能一次检测多个样本或多个目标核酸,适用于现场检测场景,尤其适用于传染病现场防控、医院临床科室、口岸检验检疫。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步的说明。
图1为本发明实施例1一体化检测装置的整体结构示意图。
图2为本发明实施例1一体化检测装置的爆炸结构示意图。
图3为本发明实施例1固定板的示意图。
图4为本发明实施例1活动板的示意图。
图5为本发明实施例1一副安置部件的示意图。
图6、图7分别为本发明实施例1显色剂组件、显色杯的示意图。
图8为本发明实施例1试剂管架的示意图。
图9为本发明实施例1紧固件的示意图。
图10为本发明实施例1冲洗孔具体结构示意图。
图11为本发明实施例1刻度线和文字标识示意图。
具体实施方式
实施例1
如图1至图11所示,本实施例用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,包括支架01,支架01包括固定板02和活动板03,固定板02设有一排贯穿固定板02的反应管04,反应管04的上端开口且位于固定板02顶面,反应管04的下端封闭;反应管04内安置有扩增反应试剂冻干粉(包括LAMP或RT-LAMP检测试剂、扩增引物);固定板02底面还设有支撑件05;固定板02顶面设有一副安置部件06,活动板03两端分别经滑轨组件A与对应安置部件06滑动连接;活动板03设有一排贯通活动板03的冲洗孔07,冲洗孔07内分别设有FTA卡片08,冲洗孔07底部分别设有第一密封圈(图中未示);活动板03底面还设有一排第二密封圈09、以及呈长条状布置的显色剂组件B;显色剂组件B内安置有显色剂。
具体而言,如图2至图4所示,固定板02设有第一紧固孔10,活动板03设有第二紧固孔11,第一紧固孔10与第二紧固孔11相配;本实施例装置还包括紧固件12(例如手拧螺丝,如图9所示例),紧固件12与第一紧固孔10、第二紧固孔11相配。支撑件05底端与固定板02底面的间距大于或等于反应管04下端与固定板02底面的间距;固定板02的顶面还设有试剂管架13(可放置EP管等,如图8所示);第一密封圈、第二密封圈分别采用氟胶O型圈。
如图2、图4和图5所示,滑轨组件A由轨道14和滑块15配合构成,当轨道14设于安置部件06时滑块15设于活动板03,当轨道14设于活动板03时滑块15设于安置部件06;滑轨组件A设有由彼此相配的弹簧销16和限位孔17构成的限位构件,弹簧销16(如滚珠弹簧销等)、限位孔17分别有至少一个,当弹簧销16设于轨道14时限位孔17设于滑块15,当弹簧销16设于滑块15时限位孔17设于轨道14。安置部件06、活动板03分别在相应的限位构件旁设有刻度线层和/或文字标识层。本实施例中,安置部件06为板件;滑轨组件A中,轨道14设于安置部件06,滑块15设于活动板03;限位构件中,弹簧销16有三个且设于安置部件06的轨道14,限位孔17有三个且设于活动板03的滑块15;刻度标识的设置方式例如:活动板03的刻度标识为“1”、“2”、“3”及其旁边的刻度线,安置部件06的刻度标识为“抽提区”、“反应区”、“染料区”及其旁边的刻度线(如图11所示例)。
如图2、图6和图7所示,显色剂组件B具有一排显色杯18,显色杯18开口朝向固定板02,显色剂安置在显色杯18内;反应管04所成排、冲洗孔07所成排、第二密封圈09所成排、显色杯18所成排彼此平行;活动板03的滑动方向与各所成排垂直;冲洗孔07、第二密封圈09、显色杯18分别与反应管04一一对应且相配;在活动板03上,冲洗孔07所成排与显色杯18所成排位于第二密封圈09所成排的两侧。显色剂组件B还具有长条状底板19,显色杯18安置于该底板19的底面,底板19的顶面设有一组推杆20,推杆20穿过并露出活动板03的顶面;显色剂呈冻干粉状。注:由于显色剂在显色杯18时直接冻干成型,因此在显色杯18倒置时,显色剂仍能附着在显色杯18内并维持足够长的时间。
此外,如图10所示,冲洗孔07内分别设有套管21,套管21两端开口,套管21一端位于冲洗孔07内、另一端穿出活动板03顶面且位于冲洗孔07外,套管21另一端分别设有管盖(图中未示);FTA卡片08的部分边缘或全部边缘与相应套管21固连;FTA卡片08的布置方向与冲洗孔07的轴向垂直。
本实施例一体化检测装置具有以下具体状态:
(1)冲洗孔07底部的第一密封圈与固定板02顶面相抵接使冲洗孔07底部密闭,活动板03的第二密封圈09对准相应反应管04上端开口使其密闭的初始状态。注:在初始状态下,由于第一密封圈将冲洗孔07底部密闭,再加上核酸抽提过程中每次加入的液体体积均较小且及时吸除,可以确保利用FTA卡片08进行核酸抽提时不会因加入液体而漏液。
(2)在初始状态基础上,活动板03经滑动使其冲洗孔07对准相应反应管04上端开口,且各冲洗孔底部的第一密封圈使相应的反应管与冲洗孔密封连通的第一状态。
(3)在第一状态基础上,活动板03经滑动使其第二密封圈09再次对准相应反应管04上端开口使其密闭,冲洗孔07底部的第一密封圈与固定板02顶面相抵接使冲洗孔07底部密闭的第二状态。
(4)在第二状态基础上,活动板03经滑动使其显色剂组件B对准反应管04上端开口的第三状态。
当装置处于初始状态或第二状态时,对应的第一紧固孔10和第二紧固孔11同轴对准,以供安装紧固件12(如手拧螺丝等)将固定板02与活动板03位置锁定并压紧。
当装置处于第三状态时,显色杯18对准相应反应管04的上端开口,推杆20在外力作用下经底板19将显色杯18推插入反应管04,且显色杯18外壁与反应管04内壁密封相接。
当装置处于初始状态、第一状态、第二状态或第三状态时,至少一个弹簧销16与当前相应的限位孔17卡接,或者至少一个限位孔17与当前相应的弹簧销16卡接。本实施例中,在装置处于初始状态或第二状态时,三个限位孔17与三个弹簧销16对应卡接,在装置处于第一状态或第三状态时,分别有两个限位孔17与两个弹簧销16对应卡接,同时有一个限位孔17空余以及一个弹簧销16空余。
实施例2
本实施例为采用实施例1用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置的检测方法,包括:
第一步、一体化检测装置处于初始状态;去除各冲洗孔07套管21的管盖;取预定体积的待测样本并加至预定冲洗孔07内的FTA卡片08上,以FTA提取液和TE缓冲液对依次FTA卡片08进行洗涤并吸除废液;干燥FTA卡片08,即获得含有待测样本核酸的FTA卡片;此时,若固定板02与活动板03经紧固件12锁定位置,则移除该紧固件12。
此步骤为加入待测样本并抽提核酸,吸除废液后病原体的核酸就留在了FTA卡片08上。其中,待测样本可以为血液等各种生物体液、混悬液(菌落、白色粉末等)、均浆液(植物、动物尸体等)、咽拭子液、细胞培养液等;加入待测样本后可等待一段时间再开始洗涤;加样、吸样均采用移液器。
第二步、推动活动板03沿安置部件06滑动,使一体化检测装置处于第一状态;以洁净器具(如移液器枪头)戳捅FTA卡片08,使含有待测样本核酸的FTA卡片08脱离冲洗孔07并落入对应反应管04内;向反应管04内加入预定体积的复溶液,或者依次加入预定体积的复溶液、预定体积的石蜡油(密封液面用);此时即得配制好的反应体系。
此步骤为配制反应体系以备后续扩增反应。当加入石蜡油时可辅助封闭反应体系液面,进一步避免反应过程中反应体系因加热而蒸发过多,例如:先加25μl复溶液,再加30μl石蜡油。
第三步、推动活动板03沿安置部件06滑动,使一体化检测装置处于第二状态;将一体化检测装置放入恒温仪器中进行扩增反应;反应结束后取出一体化检测装置。
此步骤即为扩增反应。在进行恒温扩增反应时可采用便携的小型金属浴恒温设备。
第四步、推动活动板03沿安置部件06滑动,使一体化检测装置处于第三状态;将一体化检测装置倒置使反应液与显色剂组件B中的显色剂溶解并混合,之后观察反应液颜色按预设判断标准判定检测结果。
此步骤即为显色判断结果。例如:以SYBR green粉末为显色剂,且整个实验检测中设有阴性对照反应管04、阳性对照反应管04;显色后,若阴性对照反应管04呈橙色或浅红色,阳性对照反应管04呈绿色,则本次检测有效,继续判断各待测样本的检测结果:若待测样本反应管04呈绿色,则该待测样本为检测阳性,若待测样本反应管04呈橙色或浅红色,则该待测样本为检测阴性。
本实施例的具体实施过程示例如下:
1、加样
取一体化检测装置,一体化检测装置处于初始状态,且固定板02与活动板03经紧固件12锁定位置;去除管盖。此时,冲洗孔07旁边的数字1及其刻度线对准固定板02的“抽提区”字样及其刻度线,第二密封圈09旁边的数字2及其刻度线对准固定板02的“反应区”字样及其刻度线,显色剂组件B旁边的数字3及其刻度线对准固定板02的“染料区”字样及其刻度线。
用移液器将约5~10μl待测样本滴至冲洗孔07内的FTA卡片08上。如滴入过量样本如1滴,需将孔内FTA卡片08外的多余的液体尽可能全部轻轻吸弃(此时建议另备内置消毒液的不锈钢废液罐)。加样后建议稍等几分钟,待样本在FTA卡片内充分灭活,卡片略阴干。有条件时可放入含干燥剂的多层保护袋内。
2、第一次冲洗
往冲洗孔07内加入80~200μl的FTA纯化试剂(即FTA提取液,Whatman产品编号:WG120204),静置5min,吸弃。重复3次。注意轻轻操作,避免戳出FTA卡片08。
3、第二次冲洗
往冲洗孔07内加入80~200μl的TE缓冲液(10mM Tris-HCl,0.1mM EDTA,pH 8.0),静置5min,吸弃。重复3次。注意轻轻操作,避免戳出FTA卡片08。之后干燥FTA卡片08时可选择烘干或晾干FTA卡片08。此时,移除紧固件12使活动板03可以滑动。
4、推拉移动一
向上推动活动板03沿安置部件06滑动,使一体化检测装置处于第一状态,即冲洗孔07对准相应反应管04上端开口,此时冲洗孔07旁边的数字1及其刻度线对准固定板02的“反应区”字样及其刻度线,且在滑动到位时弹簧销16与限位孔17卡接并发出“嗒”的声音。
用洁净的移液器枪头轻轻戳下FTA卡片08,使其掉落至“反应区”的反应管04内。
5、建立体系
配置25μl反应体系。该检测实验中设有待测样本孔、阴性对照孔、阳性对照孔。待测样本孔为每孔加入25μl复溶液;阴性对照孔则为22.5μl复溶液和2.5μl阴性对照液;阳性对照孔则为22.5μl复溶液和2.5μl阳性对照液。建议每管可再加入30μl的石蜡油,防止体系蒸发。
6、推拉移动二
往下推动活动板03沿安置部件06滑动,使一体化检测装置处于第二状态,即第二密封圈09再次对准相应反应管04上端开口使其密闭,此时第二密封圈09旁边的数字2及其刻度线对准固定板02的“反应区”字样及其刻度线,且在滑动到位时弹簧销16与限位孔17卡接并发出“嗒”的声音。
7、恒温扩增
将整个装置放入恒温仪器中进行扩增反应(65℃,60min);反应结束后取出装置。
8、推拉移动三
往下推动活动板03沿安置部件06滑动,使一体化检测装置处于第三状态,即显色剂组件B的显色杯18对准反应管04上端开口,此时显色剂组件B旁边的数字3及其刻度线对准固定板02的“反应区”字样及其刻度线,且在滑动到位时弹簧销16与限位孔17卡接并发出“嗒”的声音。
9、显色及观察
按下推杆20,使其经底板19将显色杯18推插入反应管04,且显色杯18外壁与反应管04内壁密封相接。将装置倒置使反应液与显色杯18中的显色剂(SYBR green粉末)溶解并混合。之后,观察反应液颜色。建议在黑色背景下观察。
10、结果判定
按预设判断标准判定检测结果。
若阴性对照反应管呈橙色或浅红色,阳性对照反应管呈绿色,则本次检测有效,继续判断各待测样本的检测结果:若待测样本反应管呈绿色,则该待测样本为检测阳性,若待测样本反应管呈橙色或浅红色,则该待测样本为检测阴性。
如阴阳性对照反应管与上述结果不符,则本次检测结果无效,应重新检测。
除上述实施例外,本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案,均落在本发明要求的保护范围。
Claims (10)
1.一种用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,包括支架,其特征是,所述支架包括固定板和活动板,所述固定板设有一排贯穿固定板的反应管,所述反应管的上端开口且位于固定板顶面,所述反应管的下端封闭;所述反应管内安置有扩增反应试剂冻干粉;所述固定板底面还设有支撑件;
所述固定板顶面设有一副安置部件,所述活动板两端分别经滑轨组件与对应安置部件滑动连接;
所述活动板设有一排贯通活动板的冲洗孔,所述冲洗孔内分别设有FTA卡片,所述冲洗孔底部分别设有第一密封圈;所述活动板底面还设有一排第二密封圈、以及呈长条状布置的显色剂组件;所述显色剂组件内安置有显色剂;
所述一体化检测装置具有:冲洗孔底部的第一密封圈与固定板顶面相抵接使冲洗孔底部密闭,活动板的第二密封圈对准相应反应管上端开口使其密闭的初始状态;
所述一体化检测装置还具有:在初始状态基础上,活动板经滑动使其冲洗孔对准相应反应管上端开口,且各冲洗孔底部的第一密封圈使相应的反应管与冲洗孔密封连通的第一状态;
所述一体化检测装置还具有:在第一状态基础上,活动板经滑动使其第二密封圈再次对准相应反应管上端开口使其密闭,冲洗孔底部的第一密封圈与固定板顶面相抵接使冲洗孔底部密闭的第二状态;
所述一体化检测装置还具有:在第二状态基础上,活动板经滑动使其显色剂组件对准反应管上端开口的第三状态。
2.根据权利要求1所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,其特征是,所述固定板设有第一紧固孔,所述活动板设有第二紧固孔,所述第一紧固孔与第二紧固孔相配;所述装置还包括紧固件,所述紧固件与第一紧固孔、第二紧固孔相配;当装置处于初始状态或第二状态时,对应的第一紧固孔和第二紧固孔同轴对准。
3.根据权利要求2所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,其特征是,所述支撑件底端与固定板底面的间距大于或等于反应管下端与固定板底面的间距;所述固定板的顶面还设有试剂管架;所述第一密封圈、第二密封圈分别采用氟胶O型圈。
4.根据权利要求1所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,其特征是,所述滑轨组件由轨道和滑块配合构成,当轨道设于安置部件时滑块设于活动板,当轨道设于活动板时滑块设于安置部件;所述滑轨组件设有由彼此相配的弹簧销和限位孔构成的限位构件,所述弹簧销、限位孔分别有至少一个,当弹簧销设于轨道时限位孔设于滑块,当弹簧销设于滑块时限位孔设于轨道;当装置处于初始状态、第一状态、第二状态或第三状态时,至少一个弹簧销与当前相应的限位孔卡接,或者至少一个限位孔与当前相应的弹簧销卡接。
5.根据权利要求4所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,其特征是,所述安置部件为板件;所述安置部件、活动板分别在相应的限位构件旁设有刻度线层和/或文字标识层。
6.根据权利要求1所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,其特征是,所述显色剂组件具有一排显色杯,所述显色杯开口朝向固定板,所述显色剂安置在显色杯内;所述反应管所成排、冲洗孔所成排、第二密封圈所成排、显色杯所成排彼此平行;所述活动板的滑动方向与各所成排垂直;所述冲洗孔、第二密封圈、显色杯分别与反应管一一对应且相配;在活动板上,所述冲洗孔所成排与显色杯所成排位于第二密封圈所成排的两侧。
7.根据权利要求6所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,其特征是,所述显色剂组件还具有长条状底板,所述显色杯安置于该底板的底面,所述底板的顶面设有一组推杆,所述推杆穿过并露出活动板的顶面;所述显色剂呈冻干粉状。
8.根据权利要求7所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,其特征是,当装置处于第三状态时,所述显色杯对准相应反应管的上端开口,所述推杆在外力作用下经底板将显色杯推插入反应管,且显色杯外壁与反应管内壁密封相接。
9.根据权利要求1所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置,其特征是,所述冲洗孔内分别设有套管,所述套管两端开口,所述套管一端位于冲洗孔内、另一端穿出活动板顶面且位于冲洗孔外,所述套管另一端分别设有管盖;所述FTA卡片的部分边缘或全部边缘与相应套管固连;所述FTA卡片的布置方向与冲洗孔的轴向垂直。
10.一种非疾病诊断目的LAMP或RT-LAMP检测方法,其特征是,采用权利要求1至9任一项所述的用于LAMP或RT-LAMP的一体化检测装置;所述检测方法包括以下步骤:
第一步、所述一体化检测装置处于初始状态;取预定体积的待测样本并加至预定冲洗孔内的FTA卡片上,以FTA提取液和TE缓冲液依次对FTA卡片进行洗涤并吸除废液;干燥FTA卡片,即获得含有待测样本核酸的FTA卡片;此时,若固定板与活动板经紧固件锁定位置,则移除该紧固件;
第二步、推动活动板沿安置部件滑动,使一体化检测装置处于第一状态;以洁净器具戳捅FTA卡片,使含有待测样本核酸的FTA卡片脱离冲洗孔并落入对应反应管内;向反应管内加入预定体积的复溶液,或者依次加入预定体积的复溶液、预定体积的石蜡油;此时即得配制好的反应体系;
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