CN210347666U - 非洲猪瘟抗体胶体金检测卡 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及免疫检测技术领域，公开了一种非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，包括壳体和检测试纸，检测试纸嵌在壳体内，壳体由上盖板和下盖板扣合而成，上盖板上设有加样口和视窗，上盖被内侧设有挡板；检测试纸包括PVC衬板、样品垫、全血膜、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次相连铺设在PVC衬板上，全血膜覆盖在样品垫上方，硝酸纤维素膜上依次设有检测线、半对照线、对照线和质控线，检测线设在靠近胶体金结合垫的一侧，质控线设在靠近吸水垫的一侧。本实用新型可以辨别出样品中非洲猪瘟病毒的抗体滴度的大致范围，以及是否能够抵抗病毒，并为是否需要再次接种疫苗给出了实际的参考意义。

Description

非洲猪瘟抗体胶体金检测卡

技术领域

本实用新型涉及免疫检测技术领域，尤其涉及了一种非洲猪瘟抗体胶体金检测卡。

背景技术

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)引起一种急性、出血性、烈性传染病。其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100％，临床表现为发热(达40～42℃)，心跳加快，呼吸困难，部分咳嗽，眼、鼻有浆液性或粘液性脓性分泌物，皮肤发绀，淋巴结、肾、胃肠粘膜明显出血。

ASFV粒子的直径为175-215nm，呈20面体对称，有囊膜。基因组为双股线状DNA，大小170-190kb。在猪体内，ASFV可在几种类型的细胞浆中，尤其是网状内皮细胞和单核巨噬细胞中复制。该病毒可在钝缘蜱中增殖，并使其成为主要的传播媒介。

我国是养猪及猪肉消费大国，生猪出栏量、存栏量以及猪肉消费量均位于全球首位，每年种猪及猪肉制品进口总量巨大，与多个国家贸易频繁；而且，我国与其它国家的旅客往来频繁，旅客携带的商品数量多、种类杂。因此，非洲猪瘟传入我国的风险日益加大，一旦传入，其带来的直接以及间接损失将不可估量。

在血清学检测技术中，ASFV感染猪在感染后7-10天即可产生特异抗体，并能维持很长时间，所以可用间接免疫荧光和酶联免疫吸附法(ELISA)等方法检测。其中，ELISA是OIE(世界动物卫生组织)规定的国际贸易检验方法，但检测抗原需从病毒感染细胞制备，病毒培养有导致病毒扩散风险，诊断可靠性也有待提高，结果需用免疫印迹等方法验证；为了解决这些问题，国内外都在进行重组抗原ELISA的尝试，法国和西班牙已有商品化试剂盒供应，但因重组抗原制备难度较大，不仅试剂盒供应有限、价格昂贵，而且不同地区病毒株的检测结果有待进一步验证。

胶体金免疫层析技术是近年来快速发展的一项诊断技术，有逐渐取代 ELISA等血清学检测方法的趋势，其优点具体表现在：①操作简单，能在几分钟内得出诊断结果，特别适合野外、现场诊断；②受外界因素影响较小，检测灵敏度和准确性高；③能稳定保存，携带方便；④不需仪器设备，综合成本较低，非常适合临床和基层单位使用。

目前，专利申请号为201310197035.4的发明专利，公开了一种非洲猪瘟病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸条制备方法，用胶体金颗粒标记纯化p54重组抗原，以金黄色葡萄球菌A蛋白捕捉标记抗原与病毒抗体复合物作为检测线，以p54免疫血清捕捉未结合至检测线上的胶体金标记的p54抗原作为质量控制线，制备胶体金免疫层析试纸条，该试纸条能在5分钟内获得明确的诊断结果，并能直接检测可疑猪血浆中的病毒抗体，特别适合现场ASFV血清学诊断、流行病学调查和生猪国际贸易检疫检验。但是只能定性检测出猪体内是否有该抗体，而不能定量检测出该抗体的含量是否已经达到抵抗病毒的滴度，无法判断猪体内的抗体是否足以抵抗非洲猪瘟病毒。

实用新型内容

本实用新型针对现有技术中存在上述缺点，提供了一种非洲猪瘟抗体胶体金检测卡。

为了解决上述技术问题，本实用新型通过下述技术方案得以解决：

非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，包括壳体和检测试纸，检测试纸嵌在壳体内，壳体由上盖板和下盖板扣合而成，上盖板上设有加样口和视窗，上盖板内侧设有挡板；检测试纸包括PVC衬板、样品垫、全血膜、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次相连铺设在PVC衬板上，全血膜覆盖在样品垫上方，挡板覆盖在胶体金结合垫、全血膜靠近胶体金结合垫一侧以及硝酸纤维素膜与胶体金结合垫接触的上方，胶体金结合垫上包被有胶体金标记的非洲猪瘟重组抗原，加样口与全血膜对应设置，视窗与硝酸纤维素膜对应设置，硝酸纤维素膜上依次设有检测线、半对照线、对照线和质控线，检测线设在靠近胶体金结合垫的一侧，质控线设在靠近吸水垫的一侧。

作为优选，样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次部分重叠相连铺设在PVC衬板上。

作为优选，上盖板上设有分别对应检测线、半对照线、对照线和质控线的标识。

作为优选，检测线上包被非洲猪瘟病毒重组抗原。

作为优选，半对照线上包被非洲猪瘟病毒重组抗原。

作为优选，对照线上包被非洲猪瘟病毒重组抗原。

作为优选，质控线上包被兔抗金黄色葡萄球菌A多克隆抗体。

在检测过程中，样本中的非洲猪瘟抗体会被胶体金结合垫上胶体金标记的非洲猪瘟重组抗原特异性识别并结合，然后沿硝酸纤维素膜移动，和硝酸纤维素膜上的半对照线、对照线和检测线上的非洲猪瘟重组抗原结合，通过加样孔滴加样本后，如果检测线的颜色等同或者较对照线深，就表明该猪体内有较高非洲猪瘟抗体滴度，具有一定的保护力，不需要再打疫苗；如果检测线不出线或者检测线的颜色等同或者较半对照线浅，则说明该猪体内非洲猪瘟抗体滴度较低，需要加强免疫；如果检测线的颜色介于对照线与半对照线之间的颜色，则可以根据实际情况再做打算。

本实用新型由于采用了以上技术方案，具有显著的技术效果：

本实用新型操作简单，灵明度高，检测结果快速准确。本实用新型的样品垫上设有全血膜，通过全血膜的作用，避免血液中的成份与检测卡中的成份反应，也可以防止血液凝血的作用影响样品的检测；本实用新型通过抗原特异性检测条带的显色颜色深浅与对照线和半对照线进行对比，不仅可以分辨出样品中是否具有非洲猪瘟病毒的抗体，而且可以辨别出样品中非洲猪瘟病毒的抗体滴度的大致范围，以及是否能够抵抗病毒，并为是否需要再次接种疫苗给出了实际的参考意义。

此外，为了克服钩状效应，本实用新型上盖板内侧的挡板覆盖在胶体金结合垫、全血膜靠近胶体金结合垫一侧以及硝酸纤维素膜与胶体金结合垫接触的上方。这样可以使样本更好地渗透到胶体金结合垫上，和标记物充分结合，并均匀释放胶体金，从而改善层析效果，提高产品检测速度和稳定均一性，不需要稀释样品就可以避免钩状效应的产生，也提高了产品灵敏度。

附图说明

图1是本实用新型的结构示意图。

图2是本实用新型的俯视图。

图3是检测试纸的结构示意图。

附图中各数字标号所指代的部位名称如下：1—壳体、2—全血膜、3—加样口、4—样品垫、5—胶体金结合垫、6—硝酸纤维素膜、61—检测线、62—半对照线、63—对照线、64—质控线、7—吸水垫、8—PVC衬板、9—挡板、10—视窗、11—上盖板、12—下盖板。

具体实施方式

下面结合附图与实施例对本实用新型作进一步详细描述。

实施例1

非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，如图1-3所示，包括壳体1和检测试纸，检测试纸嵌在壳体1内，壳体1由上盖板11和下盖板12扣合而成，上盖板11上设有加样口3和视窗10，上盖板11内侧设有挡板9；检测试纸包括PVC衬板8、样品垫4、全血膜2、胶体金结合垫5、硝酸纤维素膜6和吸水垫7，样品垫4、胶体金结合垫5、硝酸纤维素膜6和吸水垫7依次相连铺设在PVC衬板8上，全血膜2覆盖在样品垫4上方，挡板9覆盖在胶体金结合垫5、全血膜2靠近胶体金结合垫5一侧以及硝酸纤维素膜6与胶体金结合垫5接触的上方，胶体金结合垫5上包被有胶体金标记的非洲猪瘟重组抗原，加样口3与全血膜2对应设置，视窗10与硝酸纤维素膜6对应设置，硝酸纤维素膜6上依次设有检测线 61、半对照线62、对照线63和质控线64，检测线61设在靠近胶体金结合垫5 的一侧，质控线64设在靠近吸水垫7的一侧。

样品垫4、胶体金结合垫5、硝酸纤维素膜6和吸水垫7依次部分重叠相连铺设在PVC衬板8上。

检测线61上包被非洲猪瘟病毒重组抗原。

半对照线62上包被非洲猪瘟病毒重组抗原。

对照线63上包被非洲猪瘟病毒重组抗原。

检测结果判定：

阳性：质控线显示红色色带，检测线也显示红色反应线；

阴性：质控线显示红色反应线，检测线不显示红色反应线，判为阴性；

无效：质控线不显示红色反应线，无论检测线是否显示红色反应线，该检测试纸均判为无效。

如果检测线的颜色等同或者较对照线深，就表明该猪体内有较高非洲猪瘟抗体滴度，具有一定的保护力，不需要再打疫苗；

如果检测线不出线或者检测线的颜色等同或者较半对照线浅，则说明该猪体内非洲猪瘟抗体滴度较低，需要加强免疫；

如果检测线的颜色介于对照线与半对照线之间的颜色，则可以根据实际情况再做打算。

实施例2

同实施例1，所不同的是，本实施例中上盖板11上设有分别对应检测线61、半对照线62、对照线63和质控线64的标识。

实施例3

同实施例1，所不同的是，本实施例中质控线64上包被兔抗金黄色葡萄球菌A多克隆抗体。

总之，以上所述仅为本实用新型的较佳实施例，凡依本实用新型申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本实用新型专利的涵盖范围。

Claims (7)

1.非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，包括壳体(1)和检测试纸，检测试纸嵌在壳体(1)内，其特征在于：壳体(1)由上盖板(11)和下盖板(12)扣合而成，上盖板(11)上设有加样口(3)和视窗(10)，上盖板(11)内侧设有挡板(9)；检测试纸包括PVC衬板(8)、样品垫(4)、全血膜(2)、胶体金结合垫(5)、硝酸纤维素膜(6)和吸水垫(7)，样品垫(4)、胶体金结合垫(5)、硝酸纤维素膜(6)和吸水垫(7)依次相连铺设在PVC衬板(8)上，全血膜(2)覆盖在样品垫(4)上方，挡板(9)覆盖在胶体金结合垫(5)、全血膜(2)靠近胶体金结合垫(5)一侧以及硝酸纤维素膜(6)与胶体金结合垫(5)接触的上方，胶体金结合垫(5)上包被有胶体金标记的非洲猪瘟重组抗原，加样口(3)与全血膜(2)对应设置，视窗(10)与硝酸纤维素膜(6)对应设置，硝酸纤维素膜(6)上依次设有检测线(61)、半对照线(62)、对照线(63)和质控线(64)，检测线(61)设在靠近胶体金结合垫(5)的一侧，质控线(64)设在靠近吸水垫(7)的一侧。

2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，其特征在于：样品垫(4)、胶体金结合垫(5)、硝酸纤维素膜(6)和吸水垫(7)依次部分重叠相连铺设在PVC衬板(8)上。

3.根据权利要求1所述的非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，其特征在于：上盖板(11)上设有分别对应检测线(61)、半对照线(62)、对照线(63)和质控线(64)的标识。

4.根据权利要求1所述的非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，其特征在于：检测线(61)上包被非洲猪瘟病毒重组抗原。

5.根据权利要求1所述的非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，其特征在于：半对照线(62)上包被非洲猪瘟病毒重组抗原。

6.根据权利要求1所述的非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，其特征在于：对照线(63)上包被非洲猪瘟病毒重组抗原。

7.根据权利要求1所述的非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，其特征在于：质控线(64)上包被兔抗金黄色葡萄球菌A多克隆抗体。

Images