CN209820899U - 一种细胞吸印富集与染色一体化装置 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种细胞吸印富集与染色一体化装置，其特征在于：包括上盖和下仓，其中上盖中央向下凸出设置有反应槽，反应槽底壁由微孔膜和固定件构成，固定件夹持微孔膜；下仓上部设置有微孔膜支持件，微孔膜支持件上设置有渗透孔，在微孔膜支持件下方设置有吸水物质。细胞悬液通过微孔膜时，由于采用吸引过滤截留方式，使大于膜孔径的细胞截留在反应容器内，吸附于膜面。由于吸水物质吸引速度稳定、吸引力度柔和、缓慢基本无压力，使细胞贴服于膜的表面。该装置能对过滤时间和流量精确控制，提高富集效率，增加富集结果可靠性。

Description

一种细胞吸印富集与染色一体化装置

技术领域

本实用新型属于医学器械领域，具体涉及一种细胞吸印富集与染色一体化装置，主要用于体液(血液、尿液、胸腹水、脑脊液、关节积液、唾液、痰液、分泌物、咽喉及宫颈拭子等)中的有核细胞(恶性肿瘤细胞、血液病细胞、心血管脱落细胞、母体血胎儿细胞及微生物细胞)等的吸印富集与吸印染色鉴定，具有重要的临床应用价值。

背景技术

目前，从体液中富集有核病理细胞，其中主要手段为：(1)基于CTC(外周血肿瘤细胞)依赖抗体捕获富集血液中的恶性细胞：由于恶性细胞抗原表达的差异性或缺失、捕获效率差异性很大(有时相当低)，可能出现较多的假阳性或假阴性；(2)采用依赖细胞大小ISET式的细胞过滤截留技术富集CTC，由于采用正压和负压驱动或吸引液体中的细胞通过微孔膜，其细胞被压力或吸引力被动的积压和积压在微孔膜表面、可改变或破坏细胞的形态结构、或堵塞微孔膜、或穿透微孔膜进入废弃液中，导致不能准确的染色鉴定或漏检，出现假阳性或假阴性；(3)脱落细胞检查：采集的目标细胞少，杂细胞多，难以准确灵敏的检测鉴定体液中已出现的病理细胞。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种细胞吸印富集与染色一体化装置，基于微孔膜的毛细微滤反应方法与反应装置，不依赖于抗体，通过微孔膜毛细微滤装置来富集截留体液中的有核病理细胞；并在富集截留有核病理细胞的微孔膜上进行细胞化学、细胞免疫学和细胞遗传学反应，通过毛细微滤装置吸收反应过的液体或洗涤液体，完成细胞的富集与鉴定程序。对体液中出现的恶性细胞、心血管脱落细胞、母体血胎儿细胞及微生物细胞吸印与富集。

根据本实用新型的细胞吸印富集与染色一体化装置，包括上盖和下仓，其中上盖中央向下凸出设置有反应槽，反应槽底壁由微孔膜和固定件构成，固定件夹持微孔膜；下仓上部设置有微孔膜支持件，微孔膜支持件上设置有渗透孔，在微孔膜支持件下方设置有吸水物质。

具体情况下，所述的微孔膜具体为聚碳酸酯膜、聚醚砜膜、硝酸纤维素薄膜等。微孔膜支持件为刚性膜支持物，如硅片网、金属网等。

具体情况下，所述的固定件可以为普通玻片式：将两片玻片制孔，将微孔膜粘着或夹在孔中间，用环形垫支撑夹紧微孔膜(防止细胞和反应液泄露)；其中一玻片与反应槽粘接，用于加体液或反应液。

具体情况下，所述的固定件可以为3D打印玻片式：分有适当孔径的上下两片，上片直接在孔的上方打印反应槽，将微孔膜粘在或夹在上下片的两孔之间，用环形垫支撑夹紧微孔膜。

具体情况下，所述的吸水物质包括吸水纸(包括滤纸、卫生巾、卫生纸等)、吸水海绵、吸水树脂或吸水棉等。

相对于现有技术，本实用新型的有益效果为：

本装置实际上就是一个有核细胞富集与染色一体化实验室，由吸水物质部分来吸取接收和驱动样品液与反应液体流动，反应液覆盖、混悬细胞液体，由微孔膜过滤截留目标物(恶性细胞、病原生物)，通过吸水物质吸收、驱动样品和反应液体，在微孔膜上完成一切反应。

(1)基于吸水物质吸取截留物质：细胞悬液通过微孔膜时，由于采用吸引过滤截留方式，使大于膜孔径的细胞截留在反应容器内，吸附于膜面。由于吸水物质吸引速度稳定、吸引力度柔和、缓慢基本无压力，使细胞贴服于膜的表面。

(2)低速过滤截留：低速过滤截留其剪切力小，不破坏细胞的形态结构。

(3)可设定吸印反应时间：使反应物(抗原抗体、标记物等试剂)与细胞充分接触并持续反应一定的时间，达到充分反应并反应完全增加检测灵敏度之目的。

(4)可设定洗涤时间和洗涤次数：充分的洗涤可除去非特异性物质或未结合剩余的反应物，增加检测反应的特异性。

(5)微孔膜的应用：因为膜的孔径是基于检验物质的直径大小而指定的(如检测CTC时给定膜的孔径一般为8um,检测白血病细胞时给定膜的孔径一般为5um,检测结核杆菌时给定膜的孔径一般为0.8um,其它微生物细胞截留的微孔膜孔径根据需要而应用，蛋白质芯片检测抗原、病原体或抗体用0.4um的硝酸纤维素膜。)

(6)物理方式捕获富集多类恶性细胞(癌细胞、肉瘤细胞、血液病细胞和黑色素瘤细胞)和病原生物包括细菌、真菌、寄生虫及病毒等致病生物。

(7)检测标本种类多、包括血液、尿液、唾液、脑脊液、胸腹水等，几乎概括了人和动物所有能取得的检测样本。

(8)简便快速、在2小时内可得到细胞病理学或病原学检测结果。

本实用新型基于检测体液中的恶性细胞和病原生物，发明有核细胞富集与染色一体化装置用于体液中(特别是血液)的恶性细胞和病原生物的捕获富集与染色鉴定。达到对体液中出现的恶性细胞的早期检测和鉴定、指导临床用药、检测转移和复发的目的。达到早期准确检测和鉴定病原生物，用于感染性疾病的急诊检验、ICU病人的即刻检验、重大公共传染病的及时筛查等目的。

附图说明

图1为根据本实用新型一个具体实施例的细胞吸印富集与吸印染色一体化装置的结构示意图。

图2为根据本实用新型另一个具体实施例的细胞吸印富集与吸印染色一体化装置的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本实用新型做进一步说明，本领域技术人员应该理解，如下所述并不用于对本实用新型的保护范围作出任何限制。

实施例1

图1示出了一种方形细胞吸印富集与染色一体化装置，包括上盖1和下仓5，其中上盖1中央向下凸出设置有反应槽2，反应槽2底壁由微孔膜4和固定件3构成，固定件3夹持微孔膜4；下仓5上部设置有微孔膜支持件6，微孔膜支持件6上设置有渗透孔7，在微孔膜支持件6下方设置有吸水物质。

微孔膜4具体可以为聚碳酸酯膜、聚醚砜膜、硝酸纤维素薄膜等，微孔膜4的孔径通常为3-8微米，具体视所要截留富集的细胞的大小而定。

微孔膜4与固定件3相连接。固定件3可以采用以下两种方式制成：

(1)普通玻片式：将两片玻片制孔，将微孔膜4粘着或夹在孔中间，用环形垫支撑夹紧微孔膜4；其中一玻片与反应槽2粘接，用于加体液或反应液。

(2)3D打印玻片式：分有适当孔径的上下两片，上片直接在孔的上方打印反应槽2，将微孔膜4粘在或夹在上下片的两孔之间，用环形垫支撑夹紧微孔膜4。

上述普通玻片式或3D打印玻片式的固定件3的材质可以是高分子材料、金属材料、陶瓷或复合材料等。

吸水物质(吸收材料)具体可以为吸水纸(包括滤纸、卫生巾、卫生纸等)、吸水海绵、吸水树脂或吸水棉。

实施例2

图2示出了一种圆形细胞吸印富集与染色一体化装置，包括上盖11和下仓15，其中上盖11中央向下凸出设置有反应槽12，反应槽12底壁由微孔膜14和固定件13构成，固定件13夹持微孔膜14；下仓15上部设置有微孔膜支持件16，微孔膜支持件16上设置有渗透孔17，在微孔膜支持件16下方设置有吸水物质。

实施例1中的其他具体方式也适用于实施例2。

下面具体介绍利用本实用新型的装置进行细胞吸印富集和染色的方法。包括以下步骤：

(1)视实验细胞的大小选择固定好的微孔膜，安装在上盖上；

(2)在反应槽中加入适量的微孔膜活化液，待吸滤；

(3)在反应槽中加入适量的细胞悬浮液悬浮的体液，将上盖压在下仓上，使微孔膜与微孔膜支持件抵接，吸印富集截留有核细胞；

(4)在反应槽中加入适量的红细胞裂解液，裂解微孔膜上的少许红细胞；

(5)在反应槽中加入适量的细胞悬液，洗涤微孔膜；

(6)加入细胞固定液固定目标细胞，上盖脱离下仓；时间5-10分钟后，压盖于下仓上吸滤液体；

(7)脱离下仓，加入0.1-0.2％的Triton X 100和1-10％的BSA或小牛血清，通透和封闭细胞及微孔膜；时间10-30分钟，压盖于下仓上吸滤液体；

(8)脱离下仓，加入细胞染色液或荧光标记抗体，染色30-60分钟，压盖于下仓上吸滤液体。

Claims (7)

1.一种细胞吸印富集与染色一体化装置，其特征在于：包括上盖和下仓，其中上盖中央向下凸出设置有反应槽，反应槽底壁由微孔膜和固定件构成，固定件夹持微孔膜；下仓上部设置有微孔膜支持件，微孔膜支持件上设置有渗透孔，在微孔膜支持件下方设置有吸水物质。

2.根据权利要求1所述的细胞吸印富集与染色一体化装置，其特征在于，所述的微孔膜包括聚碳酸酯膜、聚醚砜膜、硝酸纤维素薄膜。

3.根据权利要求1所述的细胞吸印富集与染色一体化装置，其特征在于：所述的固定件为普通玻片式：将两片玻片制孔，将微孔膜粘着或夹在孔中间，用环形垫支撑夹紧微孔膜，其中一玻片与反应槽粘接。

4.根据权利要求1所述的细胞吸印富集与染色一体化装置，其特征在于：所述的固定件为3D打印玻片式：分有适当孔径的上下两片，上片直接在孔的上方打印反应槽，将微孔膜粘在或夹在上下片的两孔之间，用环形垫支撑夹紧微孔膜。

5.根据权利要求1所述的细胞吸印富集与染色一体化装置，其特征在于：所述的反应槽的内径与微孔膜的直径相等。

6.根据权利要求1所述的细胞吸印富集与染色一体化装置，其特征在于：所述上盖和下仓为方形。

7.根据权利要求1所述的细胞吸印富集与染色一体化装置，其特征在于：所述上盖和下仓为圆形。