CN208167029U

CN208167029U - 一种核糖核酸提取用高效纯化柱

Info

Publication number: CN208167029U
Application number: CN201820187751.2U
Authority: CN
Inventors: 吹野丰
Original assignee: Suzhou Yu Chi New Mstar Technology Ltd
Current assignee: Suzhou Yu Chi New Mstar Technology Ltd
Priority date: 2018-02-02
Filing date: 2018-02-02
Publication date: 2018-11-30
Anticipated expiration: 2028-02-02

Abstract

本实用新型公开了一种核糖核酸提取用高效纯化柱，包括柱体和设于柱体内的至少一层滤芯，其特征在于所述滤芯为无机纤维滤芯，其无机纤维的平均直径小于2μm。本实用新型提供的这种核糖核酸提取用高效纯化柱，其采用无机纤维滤芯，并将无机纤维的平均直径限定为小于2μm，通过实验证明这种滤芯对于核糖核酸具有更好的吸附效果。根据人体血清miRNA提取实验的qPCR检测实验结果，本实用新型的纯化效果相比国产纯化柱提高10倍左右，而相比某进口纯化柱提高4倍左右。

Description

一种核糖核酸提取用高效纯化柱

技术领域

本实用新型涉及一种核糖核酸提取用高效纯化柱。

背景技术

核糖核酸纯化柱(Spin column)是目前公知的用于各种材料的RNA提取以及精制的核心装置。其具有操作简单、回收率高、性能稳定等特点，目前这种产品已经为国内外大多数实验室和公司使用。

纯化柱的构成主要包括柱体和设于柱体内的滤芯，而滤芯的性能对于吸附效果有决定性的影响。目前的一部分滤芯采用对于核糖核酸具有特异性吸附功能的纤维材料，这类滤芯对其他生物材料基本不吸附，可以保障最大程度地回收样品中的DNA\RNA，同时去除其他杂质。

根据我们了解的情况并通过长期实践，目前国产或进口的纯化柱滤芯在提取效果上(miRNA含量)的提升有限，提取含量低于预期。这归结为现有纯化柱中的滤芯均为有机材料滤芯，例如硅胶膜或有机高分子树脂滤芯，影响了吸附效能的发挥。因此为了提取得到纯度更高，量更大的核糖核酸，需对纯化柱滤芯加以改进。

发明内容

本实用新型目的是：提供一种核糖核酸提取用高效纯化柱，其相比目前的国产或进口纯化柱，提取效果更好。

本实用新型的技术方案是：一种核糖核酸提取用高效纯化柱，包括柱体和设于柱体内的至少一层滤芯，其特征在于所述滤芯为无机纤维滤芯，其无机纤维的平均直径小于2μm。

进一步的，本实用新型中所述无机纤维滤芯为氧化铝纤维滤芯。

进一步的，本实用新型中所述无机纤维滤芯为硅酸铝纤维滤芯。

进一步的，本实用新型中所述无机纤维滤芯为玻璃纤维滤芯。

更进一步的，本实用新型中所述玻璃纤维滤芯是指C-玻璃纤维滤芯， D-玻璃纤维滤芯，E-玻璃纤维滤芯和AR玻璃纤维滤芯中的一种。

进一步的，本实用新型中所述无机纤维滤芯的密度为0.2～1g/cm³。

进一步的，本实用新型中所述无机纤维滤芯的密度为0.3～0.5g/cm³。

本实用新型中涉及的无机纤维均为公知技术。

本实用新型的优点是：

本实用新型提供的这种核糖核酸提取用高效纯化柱，其采用无机纤维滤芯，并将无机纤维的平均直径限定为小于2μm，通过实验证明这种滤芯对于核糖核酸具有更好的吸附效果。根据人体血清miRNA提取实验的qPCR 检测实验结果，本实用新型的纯化效果相比国产纯化柱提高10倍左右，而相比某进口纯化柱提高4倍左右。

附图说明

下面结合附图及实施例对本实用新型作进一步描述：

图1为本实用新型的结构示意图。

图中标号含义为：

1、柱体；2、无机纤维滤芯。

具体实施方式

实施例1：纯化柱的编号NO-1，其结构如图1所示，由柱体1和设于柱体1内的无机纤维滤芯2构成，无机纤维滤芯2是氧化铝纤维滤芯，氧化铝纤维的平均直径为1.8μm，氧化铝纤维滤芯的密度为0.42g/cm³。此外该滤芯用量为0.03g，滤芯的厚度为2mm。

实施例2：纯化柱的编号NO-2，其结构如图1所示，由柱体1和设于柱体1内的无机纤维滤芯2构成，无机纤维滤芯2是E-玻璃纤维滤芯，E- 玻璃纤维的平均直径为1.2μm，E-玻璃纤维滤芯的密度为0.38g/cm³。此外该滤芯用量为0.03g，滤芯的厚度为2mm。

实施例3：纯化柱的编号NO-3，其结构如图1所示，由柱体1和设于柱体1内的无机纤维滤芯2构成，无机纤维滤芯2是硅酸铝纤维滤芯，硅酸铝纤维的平均直径为0.5μm，硅酸铝纤维滤芯的密度为0.38g/cm³。此外该滤芯用量为0.03g，滤芯的厚度为2mm。

作为比较例：

国产纯化柱：为目前市面上可以买到的硅胶膜滤芯纯化柱。该纯化柱使用滤芯重量0.03克，厚度2毫米，其滤芯密度0.38g/cm³。

进口纯化柱：某欧洲公司的217004miRNeasy Mini Kit，其中纯化柱滤芯为有机高分子树脂滤芯。该进口纯化柱使用滤芯重量0.03克，厚度2 毫米，其滤芯密度0.38g/cm³。

下面通过将上述实施例的纯化柱样例与国产、进口纯化柱共同进行人体血清miRNA的提取，并且通过qPCR检测法检测总RNA中特定基因 Hsa-miR-16，Hsa-miR-122两种miRNA的Ct值来评估纯化柱性能。对应纯化柱检测得到的Ct值越小，说明对应纯化柱得到的miRNA越多，则其纯化效率越高。

1.纯化柱：

NO-1 3个

NO-2 3个

NO-3 6个

国产纯化柱3个

进口纯化柱2个。

2.RNA提取方法采用经典的Trizol法：

取3ml血清样品，加入Trizol裂解液裂解，再加入氯仿，离心后取上清，上清液中加入结合液，混匀后将混合液均匀加入17个纯化柱内(一定要保证每个纯化柱内加入的混合液均匀且量相等)提取RNA，之后用100ul 无RNase水洗脱得到样品。

对17个纯化柱分别进行编号NO-1(1)，NO-1(2)，NO-1(3)，NO-2 (1)，NO-2(2)，NO-2(3)，NO-3(1)，NO-3(2)，NO-3(3)，NO-3(4)， NO-3(5)，NO-3(6)，国产纯化柱(1)，国产纯化柱(2)，国产纯化柱(3)，进口纯化柱(1)，进口纯化柱(2)。

3.从各纯化柱中取等体积RNA样品做hsa-miR-16和hsa-miR-122的逆转录反应，之后用逆转录产物做qPCR检测。

4.结果：

而各纯化柱提取后经qPCR检测的Hsa-miR-16的Ct值见下表(对获取的每一样品均检测记录两次Ct值)：

从上述表格我们可以看出：NO-1和NO-2纯化柱系中，Ct值结果偏差最大的一个是NO-1(2)，其获取的样品两次检测结果为25.21544和25.25136，略大于NO-1和NO-2系中其他纯化柱获取样品检测的Ct值，但仍旧小于国产和进口纯化柱获取样品检测的Ct值。

NO-3纯化柱中最好的三个是NO-3(1)，NO-3(2)和NO-3(5)。而偏差最大的一个是NO-3(3)，其获取的样品两次检测结果为25.62504和25.68264，略大于NO-3系中其他纯化柱获取样品检测的Ct值，但仍旧小于国产和进口纯化柱获取样品检测的Ct值。

各纯化柱提取后经PCR检测的hsa-miR-122的CT值见下表：

从上述表格中我们可以得出结论：

采用本实用新型无机材料滤芯的NO-1、NO-2、NO-3纯化柱提取得到的hsa-miR-16d的Ct值几乎无差异，且均小于国产纯化柱和进口纯化柱的提取样品Ct值。同样NO-1、NO-2、NO-3纯化柱提取得到的hsa-miR-122 的Ct值也几乎无差异，且均小于国产纯化柱和进口纯化柱的提取样品Ct 值，Ct值小，说明纯化柱对样品的提取效果好(提取物量更大，纯度更高)。这表明本实用新型的纯化柱其对于miRNA的纯化效果大大优越于国产纯化柱和进口纯化柱。经过长期实验对比检测，本实用新型的纯化柱的纯化效果比国产纯化柱效果高10倍左右，比进口纯化柱的纯化效果高4倍左右。

实施例4：纯化柱的编号NO-4，其结构如图1所示，由柱体1和设于柱体1内的无机纤维滤芯2构成，无机纤维滤芯2是氧化铝纤维滤芯，氧化铝纤维的平均直径为1.2μm，氧化铝纤维滤芯的密度为0.42g/cm³。此外该滤芯用量为0.03g，滤芯的厚度为2mm。

实施例5：纯化柱的编号NO-5，其结构如图1所示，由柱体1和设于柱体1内的无机纤维滤芯2构成，无机纤维滤芯2是C-玻璃纤维滤芯，C- 玻璃纤维的平均直径为1.1μm，C-玻璃纤维滤芯的密度为0.38g/cm³。此外该滤芯用量为0.03g，滤芯的厚度为2mm。

实施例6：纯化柱的编号NO-6，其结构如图1所示，由柱体1和设于柱体1内的无机纤维滤芯2构成，无机纤维滤芯2是硅酸铝纤维滤芯，硅酸铝纤维的平均直径为0.8μm，硅酸铝纤维滤芯的密度为0.38g/cm³。此外该滤芯用量为0.03g，滤芯的厚度为2mm。

作为比较例：

自制对比例1：其结构如图1所示，由柱体1和设于柱体1内的无机纤维滤芯2构成，无机纤维滤芯2为氧化铝纤维滤芯，氧化铝纤维的平均直径为5μm，氧化铝纤维滤芯的密度为0.42g/cm³。此外该滤芯用量为0.03g，滤芯的厚度为2mm。

自制对比例2：其结构如图1所示，由柱体1和设于柱体1内的无机纤维滤芯2构成，无机纤维滤芯2为C-玻璃纤维滤芯，C-玻璃纤维的平均直径为5μm，C-玻璃纤维滤芯的密度为0.38g/cm³。此外该滤芯用量为0.03g，滤芯的厚度为2mm。

自制对比例3：其结构如图1所示，由柱体1和设于柱体1内的无机纤维滤芯2构成，无机纤维滤芯2为硅酸铝纤维滤芯，硅酸铝纤维的平均直径为3μm，硅酸铝纤维滤芯的密度为0.38g/cm³。此外该滤芯用量为0.03g，滤芯的厚度为2mm。

下面通过将上述实施例4～6的纯化柱样例与三个自制对比例共同进行人体血清microRNA的提取，并且通过qPCR检测法检测总RNA中特定基因Hsa-miR-16，Hsa-miR-122两种microRNA的Ct值来评估纯化柱性能。对应纯化柱检测得到的Ct值越小，说明对应纯化柱得到的miRNA越多，则其纯化效率越高。

5.纯化柱：

NO-4 3个

NO-5 3个

NO-6 6个

自制对比例1 2个

自制对比例2 2个

自制对比例3 2个。

6.RNA提取方法采用经典的Trizol法：

取3ml血清样品，加入Trizol裂解液裂解，再加入氯仿，离心后取上清，上清液中加入结合液，混匀后将混合液均匀加入18个纯化柱内(一定要保证每个纯化柱内加入的混合液均匀且量相等)提取RNA，之后用100ul 无Rnase水洗脱得到样品。

对18个纯化柱分别进行编号NO-4(1)，NO-4(2)，NO-4(3)，NO-5 (1)，NO-5(2)，NO-5(3)，NO-6(1)，NO-6(2)，NO-6(3)，NO-6(4)， NO-6(5)，NO-6(6)，自制对比例1(1)，自制对比例1(2)，自制对比例 2(1)，自制对比例2(2)，自制对比例3(1)，自制对比例3(2)。

7.从各纯化柱中取等体积RNA样品做hsa-miR-16和hsa-miR-122的逆转录反应，之后用逆转录产物做qPCR检测。

8.结果：

从上述表格我们可以看出：NO-4和NO-5纯化柱系中，Ct值结果偏差最大的一个是NO-4(2)，其获取的样品两次检测结果为25.17644和25.23254，略大于NO-4和NO-5系中其他纯化柱获取样品检测的Ct值，但仍旧小于自制对比例的各化柱获取样品检测的Ct值。

NO-6纯化柱中最好的三个是NO-6(1)，NO-6(2)和NO-6(5)。而偏差最大的一个是NO-6(3)，其获取的样品两次检测结果为25.52504和25.63234，略大于NO-6系中其他纯化柱获取样品检测的Ct值，但仍旧小于自制对比例的各化柱获取样品检测的Ct值。

各纯化柱提取后经PCR检测的hsa-miR-122的CT值见下表：

从上述表格我们可以看出：NO-4、NO-5和NO-6纯化柱系中，Ct值结果偏差最大的一个是NO-6(3)，其获取的样品两次检测结果为29.98688和 29.96645，略大于系中其他纯化柱获取样品检测的Ct值，但仍旧小于自制对比例的各化柱获取样品检测的Ct值。

从上述表格我们可以得出结论：

采用本发明无机材料滤芯的NO-4、NO-5、NO-6纯化柱提取得到的 hsa-miR-16d的Ct值几乎无差异，且均小于自制对比例的各化柱获取样品检测的Ct值。同样NO-4、NO-5、NO-6纯化柱提取得到的hsa-miR-122的 Ct值也几乎无差异，且均小于自制对比例的各化柱获取样品检测的Ct值。 Ct值小，说明纯化柱对样品的提取效果好(提取物量更大，纯度更高)。这表明本发明的纯化柱其对于miRNA的纯化效果大大优越于自制对比例(以平均直径>2μm的无机材料作为滤芯)的各化柱。

当然上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明主要技术方案的精神实质所做的修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种核糖核酸提取用高效纯化柱，包括柱体(1)和设于柱体(1)内的至少一层滤芯，其特征在于所述滤芯为无机纤维滤芯(2)，其无机纤维的平均直径小于2μm。

2.根据权利要求1所述的一种核糖核酸提取用高效纯化柱，其特征在于所述无机纤维滤芯(2)为氧化铝纤维滤芯。

3.根据权利要求1所述的一种核糖核酸提取用高效纯化柱，其特征在于所述无机纤维滤芯(2)为硅酸铝纤维滤芯。

4.根据权利要求1所述的一种核糖核酸提取用高效纯化柱，其特征在于所述无机纤维滤芯(2)为玻璃纤维滤芯。

5.根据权利要求4所述的一种核糖核酸提取用高效纯化柱，其特征在于所述玻璃纤维滤芯是指C-玻璃纤维滤芯，D-玻璃纤维滤芯，E-玻璃纤维滤芯和AR玻璃纤维滤芯中的一种。

6.根据权利要求1所述的一种核糖核酸提取用高效纯化柱，其特征在于所述无机纤维滤芯(2)的密度为0.2～1g/cm³。

7.根据权利要求6所述的一种核糖核酸提取用高效纯化柱，其特征在于所述无机纤维滤芯(2)的密度为0.3～0.5g/cm³。