CN205301329U - D-二聚体和纤维蛋白原elisa试剂盒 - Google Patents
D-二聚体和纤维蛋白原elisa试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本实用新型涉及医疗检测仪器技术领域,具体涉及D-二聚体和纤维蛋白原ELISA试剂盒,该试剂盒包括设置有凹槽的盒体(1),其特征在于,所述盒体(1)内设置有酶联板(2)、封板膜和放置于凹槽上的试剂瓶(3);所述酶联板(2)包括基板和设置于基板上的样孔,所述样孔包括间隔平行排列的第一样孔和第二样孔,所述第一样孔包被有抗纤维蛋白原抗体,所述第二样孔包被有抗D-二聚体抗体。所述试剂盒能够联合检测D-二聚体和纤维蛋白原的含量,使得诊断效果更加准确,更有效地进行弥漫性血管内凝血的诊断、静脉血栓栓塞症的排除诊断、血栓形成过程及溶栓治疗的检测以及肿瘤、妊娠高危症与先兆子痫的辅助诊断,具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本实用新型涉及医疗检测仪器技术领域,具体涉及D-二聚体和纤维蛋白原ELISA试剂盒。
背景技术
人体纤维蛋白溶解系统,是人体最重要的抗凝系统,对保持血管壁的正常通透性,维持血液的流动状态和组织修复起到极为重要的作用。纤溶系统有4个主要成分:纤溶酶原、纤溶酶原激活剂(如tPA)、纤溶酶和纤溶酶抑制物。当血液凝固时,纤维蛋白形成凝结块,tPA激活后,使纤溶酶原被转化为纤溶酶,纤溶酶可溶解凝血中的纤维蛋白凝结块,其降解产物,即各种可溶性蛋白片段组成为:X-寡聚体(X-Oligomer)、D-二聚体(D-Dimer)、中间片段(Intermediatefragments)和片段E(FragmentE)。
纤维蛋白原是一种由肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质。纤维蛋白是在凝血过程中,凝血酶切除血纤蛋白原中的血纤肽A和B而生成的单体蛋白质。简单地说,就是一种与凝血有关的蛋白质,即凝血因子。
D-二聚体来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块。D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后,再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物,是一个特异性的纤溶过程标记物,D-二聚体来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块,主要反映纤维蛋白溶解功能,是确定体内有无血栓形成及继发性纤溶的指标。其含量变化可作为体内高凝状态和纤溶亢进的标志。大量研究表明,静脉血栓栓塞病人、肺栓塞病人及深静脉栓塞的病人,体内循环的D-二聚体含量明显增加。D-二聚体含量的增高或阳性见于继发性纤维蛋白溶解功能亢进,如高凝状态、弥散性血管内凝血、肾脏疾病、器官移植排斥反映、溶栓治疗等。只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶剂活动,D-二聚体就会升高。心肌梗死、脑梗死、肺栓塞、静脉血栓形成、手术、肿瘤、弥散性血管内凝血、感染及组织坏死等均可导致D-二聚体升高。特别对老年人及住院患者,因患菌血症等病易引起凝血异常而导致D-二聚体升高。
实用新型内容
本实用新型发明人发现:D-二聚体和纤维蛋白原的联合检测可更有效地用于弥漫性血管内凝血的诊断、静脉血栓栓塞症的排除诊断、血栓形成过程及溶栓治疗的检测以及肿瘤、妊娠高危症与先兆子痫的辅助诊断。
即,本实用新型解决的技术问题是:目前试剂盒只能单独检测D-二聚体或纤维蛋白原含量,不能联合检测D-二聚体和纤维蛋白原的含量。
即,本实用新型的目的是:提供一种能够联合检测D-二聚体和纤维蛋白原含量的试剂盒,使得诊断效果更加准确。
针对现有技术,本实用新型提供一种D-二聚体和纤维蛋白原ELISA试剂盒,包括设置有凹槽的盒体,其特征在于,所述盒体内设置有酶联板、封板膜和放置于凹槽上的试剂瓶;所述酶联板包括基板和设置于基板上的分别包被有抗纤维蛋白原和D-二聚体抗体的样孔。
本实用新型所述试剂盒的操作原理为:将待测样品加入包被有可与纤维蛋白原和D-二聚体同时结合的捕获抗体的酶联板,使样品中的纤维蛋白原和D-二聚体同时与捕获抗体结合,形成捕获抗体-抗原复合物;再将检测抗体加入酶联板,形成捕获抗体-抗原-检测抗体复合物;再加入酶标抗体,对复合物进行标记;再加入底物液,在酶作用下显色;在450nm处检测待测物浓度。
具体来说,针对现有技术的不足,本实用新型提供了如下技术方案:
一种D-二聚体和纤维蛋白原ELISA试剂盒,包括设置有凹槽的盒体1,其特征在于,所述盒体1内设置有酶联板2、封板膜和放置于凹槽上的试剂瓶3;
所述酶联板2包括基板和设置于基板上的样孔,所述样孔包括间隔平行排列的第一样孔和第二样孔,所述第一样孔包被有抗纤维蛋白原抗体,所述第二样孔包被有抗D-二聚体抗体。
优选的,上述试剂盒中,所述第二样孔的半径为第一样孔直径的1-2倍。
优选的,上述试剂盒中,所述第一样孔的数量为25-50个。
优选的,上述试剂盒中,所述第二样孔的数量为25-50个。
优选的,上述试剂盒中,所述试剂瓶包括检测抗体瓶、标准品瓶、酶标抗体瓶和底物液瓶。
优选的,上述试剂盒中,所述试剂瓶还包括洗涤液瓶、稀释液瓶和终止液瓶。
优选的,上述试剂盒中,所述试剂瓶还包括用来盛装待测样品的样品管4。
优选的,上述试剂盒中,所述检测抗体瓶的体积为10mL~20mL,标准品瓶的体积为10mL~20mL。
优选的,上述试剂盒中,所述酶标抗体瓶的体积为10mL~20mL,底物液瓶的体积为10mL~20mL。
优选的,上述试剂盒中,所述洗涤液瓶的体积为50mL~100mL,稀释液瓶的体积为10mL~20mL,终止液瓶的体积为100-300mL。
本实用新型的有益效果是:用微阵列的方法将抗体包被在酶标板上,能实现同时定量检测D-二聚体(DDM)和纤维蛋白原(FIB),简化了临床检验的复杂步骤,有效整合了检测技术,实现的临床检验的便捷化。
附图说明
图1是具体实施方式中所述试剂盒盒体的结构图,其中,1为盒体,2为酶联板,3为试剂瓶,4为样品管。
图2为实施例1所述试剂盒内部的俯视图,其中,21为酶联板槽,31为终止液瓶,32为酶标抗体瓶,33为洗涤液瓶,41为样品管槽。
具体实施方式
鉴于目前没有同时测定D-二聚体和纤维蛋白原的ELISA试剂盒,本实用新型提供一种ELISA试剂盒,可联合测定D-二聚体和纤维蛋白原的含量。
酶联免疫吸附剂测定法,检测酶联免疫法,或者ELISA法。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法时固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
本实用新型一种优选的实施方式中,所述试剂盒如图1所示,包括盒体1、盒体1内设置有酶联板2、试剂瓶3和样品管4,其中,所述酶联板、试剂瓶和样品管的数量和体积不受限制,可按需调整。其使用方法为:可以通过蛋白芯片点样技术将D-二聚体抗体和纤维蛋白原(即FIB)抗体分别点在酶标板条上对应的孔中,包被好之后再加入封闭液制成待用板。采用双抗体夹心法对D-二聚体和FIB进行检测,最后用生物芯片阅读仪进行分析,并出报告。
下面通过实施例来进一步描述本实用新型所述试剂盒及其使用方法,下列实施例中,所用各试剂的厂家为:
兔抗人FIB抗体:厂家为艾美捷科技有限公司
兔抗人DDM抗体:厂家为艾美捷科技有限公司
实施例一
D-二聚体和纤维蛋白原ELISA试剂盒,结构如下:
与图1类似,所述试剂盒包括底部内置有凹槽的盒体,盒体内设置有酶联板、试剂瓶和样品管。
盒体内俯视图如图2所示,所述凹槽包括用于放置酶联板的凹槽21、用于放置试剂瓶的凹槽和用于放置样品管的凹槽41。所述试剂瓶凹槽为十个,凹槽31最大,用于放置终止液瓶;凹槽32最小,与其相同大小的凹槽用于放置酶标抗体瓶、标准品瓶(第一标准品瓶和第二标准品瓶)、检测抗体瓶(第一检测抗体瓶和第二检测抗体瓶)、底物瓶和稀释液瓶,凹槽33较大,与其相同大小的凹槽用于放置洗涤液瓶和封闭瓶。所述样品管为四个,排列于试剂瓶一侧。
其中,第一标准品组分为纤维蛋白原,第二标准品组分为D-二聚体,浓度分别为16μg/L,体积分别为15mL。
酶标抗体:为β-半乳糖苷酶标记的链霉亲和素,体积15mL。
底物液:TMB底物液,成分为3,3,5,5-四甲基联苯胺底物溶液,体积浓度为1%,体积为15mL。
洗涤液:PBS缓冲液,即磷酸缓冲盐溶液,浓度为12g/L,体积为50mL。
稀释液:稀释液为牛血清白蛋白,浓度为1g/L,体积为15mL。
封闭液:成分为牛血清白蛋白,体积浓度为1%,体积为50mL。
终止液:终止液为双蒸水180ml,加浓硫酸至200ml。
第一捕获抗体:为兔抗人FIB抗体,组分为兔抗人FIB抗体、抗体稀释液5%,能与纤维蛋白原结合形成第一捕获抗体-抗原复合物。
第二捕获抗体:为兔抗人DDM抗体,组分为兔抗人DDM抗体,抗体稀释液5%,能和D-二聚体结合形成第二捕获抗体-抗原复合物。
第一检测抗体:为鼠抗人FIB抗体,可与第一捕获抗体-抗原复合物形成第一捕获抗体-抗原-第一检测抗体复合物。
第二检测抗体:为鼠抗人DDM抗体,可与第二捕获抗体-抗原复合物形成第二捕获抗体-抗原-第二检测抗体复合物。
本实施例所述酶联板的制备过程如下:
本实施例选用96孔酶联板,包括间隔平行排列的第一样孔和第二样孔。用稀释液分别将第一捕获抗体和第二捕获抗体稀释为100μg/ml,取200μl分别加入到酶联板第一样孔和第二样孔中,4℃放置过夜后,用洗涤剂洗板,用封闭液在4℃下封闭14小时,甩干后在30℃下烘干12小时,得到间隔平行包被有抗纤维蛋白原和D-二聚体抗体的酶联板。
本实施例所述试剂盒的使用过程如下:
1.标准曲线的绘制
(1)纤维蛋白原标准曲线的绘制
将第一标准品稀释成不同浓度,分别为16、10.67、8、5.33、4、2.67、2、1.3、1、0.67、0.5、0.25、0μg/ml,取16μg/ml第一标准品100μl加入上述包被有抗纤维蛋白原抗体的酶联板第一样孔上,37℃下作用1小时,洗板后,将100μl第一检测标准品抗体加入酶联板中,37℃下作用1小时,洗板后,加入100μl酶标抗体,37℃下作用1小时,洗板后,加入100mL底物液TMB,37℃下作用1小时,加入100mL终止液,37℃下作用1小时后,用酶标仪在450nm处测定吸光度,以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
(2)D-二聚体标准曲线的绘制
将第二标准品稀释成不同浓度,分别为16、10.67、8、5.33、4、2.67、2、1.3、1、0.67、0.5、0.25、0μg/ml,取16μg/ml第二标准品100μl加入上述包被有抗D-二聚体抗体的酶联板第二样孔上,37℃下作用1小时,洗板后,将100μl第二检测标准品抗体加入酶联板中,37℃下作用1小时,洗板后,加入100μl酶标抗体,37℃下作用1小时,洗板后,加入100mL底物液TMB,37℃下作用1小时,加入100mL终止液,37℃下作用1小时后,用酶标仪在450nm处测定吸光度,以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
2.样品的检测
收集待测样品后,稀释100倍,按照上述标准曲线的测试步骤,将标准品换为待测样品,在450nm处检测吸光度,通过标准曲线分别计算出样品中纤维蛋白原和D-二聚体的浓度。
综上所述,本实用新型所述试剂盒可同时检测D-二聚体和纤维蛋白原的含量,使得诊断效果更加准确,更有效的进行弥漫性血管内凝血的诊断、静脉血栓栓塞症的排除诊断,血栓形成过程及溶栓治疗的检测以及肿瘤、妊娠高危症与先兆子痫的辅助诊断,具有广泛的应用前景。
Claims (10)
1.一种D-二聚体和纤维蛋白原ELISA试剂盒,包括设置有凹槽的盒体(1),其特征在于,所述盒体(1)内设置有酶联板(2)、封板膜和放置于凹槽上的试剂瓶(3);
所述酶联板(2)包括基板和设置于基板上的样孔,所述样孔包括间隔平行排列的第一样孔和第二样孔,所述第一样孔包被有抗纤维蛋白原抗体,所述第二样孔包被有抗D-二聚体抗体。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其中,所述第二样孔的半径为第一样孔直径的1-2倍。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其中,所述第一样孔的数量为25-50个。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其中,所述第二样孔的数量为25-50个。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其中,所述试剂瓶包括检测抗体瓶、标准品瓶、酶标抗体瓶和底物液瓶。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其中,所述试剂瓶还包括洗涤液瓶、稀释液瓶和终止液瓶。
7.根据权利要求6所述的试剂盒,其中,所述试剂瓶还包括用来盛装待测样品的样品管(4)。
8.根据权利要求5所述的试剂盒,其中,所述检测抗体瓶的体积为10mL~20mL,标准品瓶的体积为10mL~20mL。
9.根据权利要求5所述的试剂盒,其中,所述酶标抗体瓶的体积为10mL~20mL,底物液瓶的体积为10mL~20mL。
10.根据权利要求6所述的试剂盒,其中,所述洗涤液瓶的体积为50mL~100mL,稀释液瓶的体积为10mL~20mL,终止液瓶的体积为100-300mL。
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