CN202903793U - 检测莱克多巴胺残留量的化学发光检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及一种检测莱克多巴胺残留量的化学发光检测试剂盒。该试剂盒组成包括：96孔化学发光板、RAC6个浓度的标准品溶液、酶标抗原浓缩液、酶标抗原稀释液、化学发光液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、自封袋、盖板膜、说明书和质检报告。采用直接竞争CELIA方法，在发光板微孔中预包被抗RAC抗体，样本中含有的RAC将和酶标RAC偶联抗原竞争结合抗RAC抗体，加入发光液，测量各孔发光强度值，样本发光强度值与标准曲线比较计算出相应浓度值再乘以其样品前处理的稀释倍数，即可得出样品中RAC的残留量。与仪器分析技术相比具有使用方便、高灵敏度等特点，可在动物组织中RAC的残留量检测中发挥重要作用。

Description

检测莱克多巴胺残留量的化学发光检测试剂盒

技术领域

本实用新型涉及检测莱克多巴胺残留量的化学发光试剂盒，特别是检测动物组织、饲料和尿液中莱克多巴胺残留量的化学发光酶联免疫（CLEIA）检测试剂盒。 

背景技术

莱克多巴胺（Ractopamin,RAC）名雷托帕明、舒喘灵、权莱克、金莱多巴、Paylean，化学成分为1-(4-羟基苯基)-2[1-甲基-3-(4-羟基苯基)-丙氨基]-乙醇盐酸盐，分子式为C18H23NO3Cl，属于β-兴奋剂。β-兴奋剂是营养重分配剂的一种，是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物，它能改善脂肪型动物的肉与脂肪的比例，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率，并能加速动物生长，而被添加于动物饲料中。常见的β2-兴奋剂有克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇等。随着我国对克伦特罗(俗称“瘦肉精”)监管力度的加大，克伦特罗的使用逐渐减少，其他β2-兴奋剂的使用逐渐增加。由于莱克多巴胺有类似于克伦特罗的作用，在动物组织中残留，从而对人体产生不利影响。 

我国农业部、卫生部和国家药品监督管理局共同发布的176公告中明确规定，禁止在饲料中使用β2-兴奋剂药物。176公告中明确规定的此类药物除莱克多巴胺、盐酸克仑特罗外，还有沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、盐酸多巴胺、西吗特罗、硫酸特布他林等。商务部、海关总署公告2009年第110号，公布自2009年12月9日起，禁止进出口莱克多巴胺和盐酸莱克多巴胺。因此，做好莱克多巴胺残留检测，对于保障食品安全至关重要。 

目前，检测莱克多巴胺的方法主要有：微生物法、薄层色谱法( TLC)、放射免疫法，高效液相色谱法(HPLC )、色/质联用分析法(LC-MS)、液/质联用分析法(LC-MS/MS)。微生物法的缺陷是:费时而且缺乏特异性。薄层色谱法的缺陷是:操作过程复杂，时间长；操作人员需要经过专业培训;影响分析的干扰因素较多，结果重复性差。薄层色谱法、放射免疫法，高效液相色谱法、色/质连用分析法、液/质联用分析法这些理化方法的缺陷是仪器设备昂贵，样品前处理复杂，费时，费力，不易普及，检测费用高，特别是放射免疫法还需要配备放射源，有一定危险性。鉴于此，建立一种 有效、快速、简单、灵敏的检测莱克多巴胺的方法具有重要意义。 

实用新型内容

本实用新型所要解决的问题是提供一种小巧轻便的莱克多巴胺残留量检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中莱克多巴胺残留量的测定，减少了检测样本所需要的时间。 

本实用新型的技术方案是：一种检测莱克多巴胺残留量的化学发光酶联免疫试剂盒，试剂盒采用直接竞争CLEIA方法，在化学发光板微孔中预包被抗莱克多巴胺抗体，样本中残留的莱克多巴胺和酶标莱克多巴胺偶联抗原竞争包被在化学发光板微孔中的抗莱克多巴胺抗体，加入化学发光液，测量各孔发光强度值，样本发光强度值与标准曲线比较计算出相应浓度值再乘以其样品前处理的稀释倍数，即可得出样品中莱克多巴胺的残留量。 

本实用新型涉及的化学发光检测试剂盒包括盒体和盒内的一块96孔的化学发光板、12瓶试剂、一个自封袋、一张盖板膜、放置试剂的下凹瓶位、一份说明书和一份质检报告，其中化学发光板是采用96孔不透明的可拆卸化学发光板作为固相载体，在发光板微孔中预包被抗莱克多巴胺抗体制成的化学发光检测板，12瓶试剂分别为6瓶莱克多巴胺标准品溶液，酶标莱克多巴胺抗原浓缩液，酶标莱克多巴胺抗原稀释液，化学发光液A、B液，浓缩洗涤液，浓缩复溶液。盒体是硬纸盒，96孔化学发光板为不透明可拆卸聚苯乙烯化学发光板，放于真空铝铂袋内，标准品溶液、酶标莱克多巴胺抗原浓缩液、酶标莱克多巴胺抗原稀释液、化学发光液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液用塑料瓶盛放，下凹瓶位共12个，由塑料泡沫制成。 

化学发光板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条化学发光反应微孔条组成，每个可拆装化学发光反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被抗莱克多巴胺抗体；标准品溶液6瓶，1mL/瓶；酶标莱克多巴胺抗原浓缩液1瓶，1mL；酶标莱克多巴胺抗原稀释液1瓶，7mL；化学发光液A液1瓶，7mL；化学发光液B液1瓶，7mL；浓缩洗涤液1瓶，40mL；浓缩复溶液1瓶，50mL。 

经实验表明本试剂盒具有很高的灵敏度：动物组织样本的最低检测限为0.5ng/g，回收率为80±15%；饲料样本的最低检测限为2.0ng/g，回收率为80±15%；尿液样本的最低检测限为0.1ng/mL，回收率为90±15%，相对于其他莱克多巴胺检测方法，本试剂盒所需仪器较少，所需成本较低。 

本实用新型的有益效果是：能快速、简便、灵敏、准确地用于动物组织、饲料和尿液中莱克多巴胺残留量的检测。 

附图说明

图1为本实用新型化学发光板的侧面纵剖面图(长为8.55cm)； 

图2为本实用新型化学发光板的侧面横剖面图(长为12.8cm)； 

图3为本实用新型化学发光板的俯视图； 

图4为本实用新型试剂瓶纵剖面平面图； 

图5为本实用新型固定泡沫模具的俯视图； 

图6为本实用新型盒体与固定泡沫模具的侧视图。 

参见附图：化学发光板反应微孔条(2)预包被抗莱克多巴胺单克隆抗体(3)固定于化学发光板的外框支撑架(1)上，化学发光板反应微孔条(2)可随要求拆卸；半透明塑料试剂瓶(4)分别用于封装40mL浓缩洗涤液和50mL浓缩复溶液；白色塑料试剂瓶(5)分别用于封装7mL显色液A液和7mL显色液B液；白色塑料试剂瓶(6)分别用于封装1mL酶标莱克多巴胺偶联抗原浓缩液和酶标莱克多巴胺偶联抗原稀释液；白色塑料试剂瓶(7)分别用于封装1mL/瓶的标准品溶液；泡沫塑料模具(15)有12个瓶位，放置位置依次为：40mL浓缩洗涤液瓶位(8)，50mL浓缩复溶液(9)，7mL化学发光液A液瓶位(10)，7mL化学发光液B液瓶位(11)，1mL酶标莱克多巴胺偶联抗原浓缩液瓶位(12)，7mL酶标莱克多巴胺偶联抗原稀释液瓶位(13)，6瓶1mL/瓶各种浓度的标准品溶液瓶位(14)，盒体为(16)是硬纸盒。 

具体实施方式

具体实施例一：样本的前处理 

1、配液： 

配液1: 

复溶工作液：用去离子水将2×浓缩复溶液按1:1体积比进行稀释（1份2×浓缩复溶液+1份去离子水）用于提取样本的复溶，复溶工作液在4℃环境可保存一个月。 

配液2:  

洗涤工作液：用去离子水将20×浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释（1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水）用于化学发光板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个 月。 

配液3: 

0.1M盐酸溶液：量取4.15mL浓盐酸加入去离子水定容至500mL。 

配液4： 

5%三氯乙酸溶液：称取5g三氯乙酸加去离子水100mL。 

配液5: 

6%三氯乙酸溶液：称取6g三氯乙酸加去离子水100mL。 

2、样本处理步骤： 

尿液：取50L清亮尿样直接测定（如尿样浑浊必须通过过滤或3000g以上，15℃离心10min直至清亮），暂不使用的样本应冷冻保存。 

猪肉：称取2.0±0.05g匀浆样本至50mL聚苯乙烯离心管中；分别加入1mL 5%三氯乙酸，1 mL 0.1M HCL，1mL甲醇，振荡5min；称取2g酸性氧化铝，加入到振荡均匀的样品中；继续振荡5min；3000g以上，室温（20-25℃）离心5min；取上清液0.5mL加入0.5mL复溶工作液混匀；取50μL用于分析。 

羊肉、牛肉、肝脏：称取2.0±0.05g匀浆样本至50mL聚苯乙烯离心管中；分别加入1mL 6%三氯乙酸，1 mL 0.1M HCL，1 mL 甲醇，振荡5min；称取2g酸性氧化铝，加入到振荡均匀的样品中；继续振荡5min；3000g以上，室温（20-25℃）离心5min；取上清液0.5mL加入0.5mL复溶工作液混匀；取50μL用于分析。 

饲料：称取1.0±0.05g样本至50mL聚苯乙烯离心管中；称取1.0±0.05g酸性氧化铝加入到样品中；再加入4mL丙酮，6mL甲醇，振荡5min；3000g以上，室温（20-25℃）离心5min；移取1mL上层有机相至10mL干净玻璃试管中，于50-60℃水浴氮气/空气流下吹干；加入1mL复溶工作液，涡动3min；取50μL用于分析。 

具体实施例二：使用试剂盒的操作步骤 

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 

2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。 

3、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。 

4、酶标抗原工作液配制：将酶标抗原稀释液和酶标抗原浓缩液按10:1体积比混合并混匀。 

5、加标准品/样本/酶标抗原工作液：加标准品/样本50L到对应的微孔中，再加 入酶标抗原工作液50L/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15min。 

6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250L/孔，充分洗涤7次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。 

8、底物配制：根据底物的使用量，将A液和B液按1:1混合并混匀，每孔加入新配制的发光底物100L，震荡约30秒左右，用盖板膜盖板后室温放置3min。 

9、测定：直接放入微孔板发光分析仪内测量读数。 

具体实施例三：结果判定 

（1）发光百分比的计算，标准品或样本的发光百分比等于标准品或样本的发光强度值的平均值（双孔）除以0浓度标准品的发光强度度值，再乘以100%，即 

RLU—标准溶液或样本溶液的平均发光强度值 

RLU0—0浓度标准溶液的平均发光强度值 

（2）标准曲线的绘制与计算 

以标准品发光百分比为纵坐标，以标准品浓度（ng/mL）的对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的发光百分比代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中莱克多巴胺实际浓度。 

具体实施例四：注意事项 

1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的光子计数值偏低。 

2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。 

3、每加一种试剂前需要将其摇匀。 

4、不要使用过了有效期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。 

5、储存条件：保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发光剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。 

6、该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致光子计数值和灵敏度发生变化。 

Claims (3)

1.一种检测莱克多巴胺残留量的化学发光检测试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的化学发光板、12瓶试剂，其特征在于：化学发光板是采用96孔不透明的可拆卸化学发光板作为固相载体，在发光板微孔中预包被抗莱克多巴胺抗体制成的化学发光检测板，12瓶试剂分别为6瓶莱克多巴胺标准品溶液，酶标莱克多巴胺抗原浓缩液，酶标莱克多巴胺抗原稀释液，化学发光液A、B液，浓缩洗涤液，浓缩复溶液。

2.根据权利要求1所述的化学发光检测试剂盒，其特征在于：还包括一个自封袋、一张盖板膜、放置试剂的下凹瓶位、一份说明书和一份质检报告，盒体是硬纸盒；96孔化学发光板为不透明可拆卸聚苯乙烯化学发光板，放于真空铝铂袋内；标准品溶液、酶标莱克多巴胺抗原浓缩液、酶标莱克多巴胺抗原稀释液、化学发光液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液用塑料瓶盛放，下凹瓶位共12个，由塑料泡沫制成。

3.根据权利要求1所述的化学发光检测试剂盒，其特征在于：化学发光板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条化学发光反应微孔条组成，每个可拆装化学发光反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被抗莱克多巴胺抗体；标准品溶液6瓶，1mL/瓶；酶标莱克多巴胺抗原浓缩液1瓶，1mL；酶标莱克多巴胺抗原稀释液1瓶，7mL；化学发光液A液1瓶，7mL；化学发光液B液1瓶，7mL；浓缩洗涤液1瓶，40mL；浓缩复溶液1瓶，50mL。 

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