CN1990482B - 一类新型的二氢黄酮醇类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及具有抗乙型肝炎病毒，抗氧化，保肝护肝和抗真菌作用的式(1)所示的的一类新型5，6，7-三氧代二氢黄酮醇化合物及其制备方法和用途。本发明的式(1)化合物可以用于制备防治乙型病毒性肝炎、保肝护肝、治疗真菌感染、防治病变过程中产生自由基的疾病包括炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗后遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应、动脉粥样硬化等疾病的药物组合物。本发明的药物组合物可以使用多种制剂形式。
Description
技术领域
本发明属于有机化学和药物化学领域，具体而言，本发明涉及具有抗乙型肝炎病毒，抗氧作用，保肝护肝，抗真菌感染和防治肿瘤时一类新型的5，6，7-三氧取代的二氢黄酮醇化合物及其制备方法和用途。
背景技术
二氢黄酮醇广泛存在于天然产物中，对于其活性的研究今年来逐渐趋向于活跃。近来的研究表明，二氢黄酮醇具有抗氧化，抗真菌和抗肿瘤等活性(Yeom，Seung-Hwan等，Saengyak Hakhoechi(2003)，34(4)，344-351；Piccinelli，AL等，Joumalof Agricultural and Food Chemistry(2004)，52(19)，5863-5868)。近来对于其抗氧化活性进行的研究表明可提高小鼠红细胞、肝脏和心肌SOD(超氧化物岐化酶)活性，降低血浆、肝脏和心脏的LPO(脂质过氧化合物)水平，降低脑水肿动物血、脑组织中LPO含量，提高动物血、脑组织中SOD，对小鼠过氧化损伤有较强的抗氧化作用。北美甘草Glycyrrhiza lepidota中提取得到的二氢黄酮醇glepidotin B对于白假丝酵母具有较好的抑菌活性(MIC：50μg/ml)。还有研究表明二氢黄酮醇类化合物能增加SD大鼠GSHPx酶活性，减少MDA的含量，降低体内脂质过氧化水平，说明其对DMBA诱发大鼠乳腺肿瘤具有抑制作用。此外，二氢黄酮醇类化合物还被报道具有一定的抗病毒作用(Chu S.C.等，Joumal of Natural Products(1992)，55(2)，179-83)。然而天然界存在的二氢黄酮醇类化合物并不太多，且难以得到。这一类天然存在的二氢黄酮醇类化合物一般以5，7-二氧取代者较为多见。而5，6，7-三氧化取代的二氢黄酮醇类化合物未见报道。为了探讨此类全新结构的二氢黄酮醇的活性规律，并为了发现活性更好的具有二氢黄酮醇骨架的化学药物，需要有更多的结构与活性相结合的实例。
据此我们设计并制备出一类结构全新的5，6，7-三氧化取代的二氢黄酮醇类化合物，并对其抑制人体乙肝病毒脱氧核糖核酸HBVDNA活性、降低乙肝病毒表面抗原HBsAg和乙肝e抗原HBeAg的活性、体外清除超氧化自由基、抑制自由基诱导的脂过氧化物生成的活性、对四氯化碳致大鼠肝细胞损伤体内模型以及体外模型、大鼠原代肝细胞损伤保护活性，以及抗真菌活性进行了测试。
本发明涉及一类全新结构的二氢黄酮醇类衍生物，它具有抑制乙肝病毒表面抗原、乙肝e抗原和乙肝病毒脱氧核糖核酸分泌及复制活性、清除超氧自由基活性、抑制自由基诱导的脂过氧化物生成的活性，对大鼠体内外化学致肝损伤具肝细胞保护活性，并具有抑制真菌生长活性，可以预期发展成为防治乙型病毒性肝炎药 物或保健品、保肝护肝药物或保健品、治疗真菌感染类药物或保健品以及成为防治病变过程中产生自由基的疾病包括炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗后遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应、动脉粥样硬化等疾病的药物组合物。由此完成了本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种式(1)所示的5，6，7-三氧化取代的二氢黄酮醇类化合物及其可药用盐或其溶剂化物：
其中：R1，R2和R3可以相同或者不同，分别选自氢或含1-8个碳的烷基；R4，R5，R6可以是取代在苯环(B环)任意位置，R4，R5，R6可以相同或不同，分别选自氢、1-8个碳的烷基、卤素、硝基，1-8个碳的烷氧基，或氨基，R4，R5和/或R6 可以与苯环稠合形成取代或未取代的稠环化合物；R7一般为氢，也可以是可供药用的金属盐基如钠盐、镁盐离子。式(1)中2，3位的立体构型分别是或同时是R或者S构型；式(1)化合物包括经柱层析、重结晶等方法纯化后的光学活性化合物，也包括未经纯化且具有同一平面结构的立体异构体的混合物。
本发明的另一目的是提供了制备式(1)化合物的方法；
本发明的再一目的是提供了式(1)化合物用于制备防治乙型病毒性肝炎药物、治疗真菌感染类药物、保肝护肝药物以及成为防治病变过程中产生自由基的疾病包括炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗后遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应、动脉粥样硬化等疾病的药物的用途；
本发明的又一目的是提供了含有式(1)化合物的用于防治乙型病毒性肝炎药物、治疗真菌感染类药物、保肝护肝药物以及成为防治病变过程中产生自由基的疾病包括炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗后遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应、动脉粥样硬化等疾病的药物组合物。
本发明提供了一种具有式(1)所示的5，6，7-三氧化取代的二氢黄酮醇类化合物及其可药用盐或其溶剂化物：
其中：
R1，R2，R3和R7可以相同或者不同，分别选自氢或含1-8个碳的浣基；1-8个碳的烷氧酰基或者芳基酰基；或是可以药用的盐基，如钠盐，钾盐，镁盐，硫酸钠盐，硫酸钾盐，磺酸钠盐，磺酸钾盐等；R4，R5，R6可以是取代在苯环(B环)任意位置，R4，R5，R6可以相同或不同，分别选自氢、1-8个碳的烷基、卤素、硝基，1-8个碳的烷氧基，或氨基，R4，R5和/或R6可以与苯环稠合形成取代或未取代的稠环化合物;
本发明优选的式(1)化合物包括：
化合物1-a：3，4′-二羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-b：3-羟基-5，6，7，4′-四甲氧基二氢黄酮；
化合物1-c：3-羟基-4′-甲基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-d：3，4′-二羟基-5，6，7，3′-四甲氧基二氢黄酮；
化合物1-e：3，3′-二羟基-5，6，7，4′-四甲氧基二氢黄酮；
化合物1-f： 3-羟基-5，6，7，3′，4′-五甲氧基二氢黄酮；
化合物1-g：3-羟基-5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基二氢黄酮；
化合物1-h：4′-氯-3-羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-i：3，3′，4′-三羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-j：3′，4′-亚甲二氧基-3-羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-k：5，7-二甲氧基-3，6，4′-三羟基二氢黄酮；
化合物1-l：3，6-二羟基-5，7，4′-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-m：3，6-二羟基-4′-甲基-5，7，-二甲氧基二氢黄酮；
化合物1-n：3，6，4′-三羟基-5，7，3′-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-o：3，6，3′-三羟基-5，7，4′-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-p：3，6-二羟基-5，7，3′，4′-四甲氧基二氢黄酮；
化合物1-q：3，6-二羟基-5，7，3′，4′，5′-五甲氧基二氢黄酮；
化合物1-r：4′-氯-3，6-二羟基-5，7-二甲氧基二氢黄酮；
化合物1-s：5，7-二甲氧基-3，6，3′，4′-四羟基二氢黄酮；
化合物1-t：3′，4′-亚甲二氧基-3，6-二羟基-5，7-二甲氧基二氢黄酮；
化合物I-u：2′，3-二羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物I-v：3，4′-二羟基-5，6，7，3′，5′-五甲氧基二氢黄酮。
本发明的另一目的是提供了式(1)化合物的全合成方法，该方法的合成工艺路线特征是：以化合物6-羟基-2，3，4-三烷氧基苯乙酮I-1为起始原料，在有机溶剂和碱水溶液中，以相转移催化剂催化，用氯甲醚作保护剂，得到羟基保护的产物6-甲氧甲氧基-2，3，4-三烷氧基苯乙酮I-2，在氢氧化钾甲醇溶液中，产物与取代的醛I-3缩合得到查尔酮，其环氧化产物I-4在酸性醇溶液中搅拌得到化合物1，具体流程如下所示：
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7的定义与式(1)化合物定义相同。碱为氢氧化钠或氢氧化钾，醇为甲醇，乙醇，丙醇，丁醇。酸为盐酸，硫酸或醋酸。
原料化合物的制备
本发明的另一特点是提供了制备式1化合物的中间体，这些化合物是新结构化合物，他们构成本发明的另一特征。该中间体化合物包括式I-2，式I-4和式I-5所包括的化合物。
下面的方法给出了代表性中间体化合物的具体制备例和实施例。实施例给出了代表性化合物的制备方法和部分谱学数据。这些实施例是为了说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行简单的改进都属于本发明要求保护的范围。
中间体I-2：(6-甲氧基甲基2，3，6-三氧取代基苯乙酮)的制备
其中，R1，R2，R3的定义与式(1)化合物定义相同。
实施例1：化合物I-2-1(6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基苯乙酮)的制备
1.5克6-羟基-2，3，4-三甲氧基苯乙酮溶解于20毫升二氯甲烷中，再加入溶有1.5克氢氧化钠得20毫升水和0.4克四丁基溴化铵，搅拌降温到0℃，缓慢加入1.5毫升重蒸过的氯甲醚，于室温搅拌十二小时，静置，分出有机层，水层用10毫升二氯甲烷提取三次后合并，用饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物经柱层析得浅黄色油状物1.4克，收率80％。Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)：0.21，1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：2.56(s，3H，CH3)，3.78(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，OCH3)，5.15(s，2H，OCH2O)，6.35(s，1H，H-3)。
实施例2：化合物I-2-2(2，4-二甲氧基-3，6-二甲氧甲氧基苯乙酮)的制备：
1.76克3，6-二羟基-2，4-二甲氧基苯乙酮溶解于20毫升二氯甲烷中，再加入溶有1.5克氢氧化钠得20毫升水和0.4克四丁基溴化铵，搅拌降温到0℃，缓慢加入1.5亳升重蒸过的氯甲醚，于室温搅拌十二小时，静置，分出有机层，水层用10毫升二氯甲烷提取三次后合并，用饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物经柱层析得浅黄色油状物1.63克，收率82％。Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)：0.30，1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：2.48(s，3H，CH3)，3.60(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.86(s，3H，OCH3)，5.05(s，2H，OCH2O)，5.15(s，2H，OCH2O)，6.54(s，1H，H-5)。
中间体I-4：(6-二甲氧甲氧基-2，3，4-三氧取代基查尔酮)的制备
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6的定义与式(1)化合物定义相同。
实施例3：化合物I-4-1(6，4′-二甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基查尔酮)的制备
1.6克I-2-1溶解于溶有0.5克氢氧化钾的60毫升甲醇中，再加入1.5克对甲氧甲氧基苯甲醛，于室温搅拌8小时后减压蒸去溶剂，残余物中加入30毫升水，用20毫升乙酸乙酯提取三次，合并有机相后用饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，残余物经柱层析得到浅黄色油状物2.1克，收率84％。
Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.13；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.41(s，3H，OCH3)，3.47(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，OCH3)，5.10(s，2H，OCH2O)，5.20(s，2H，OCH2O)，6.57(s，1H，H-5)，6.89(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.03(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.27(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，7.48(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝419。
根据与实施例3相同的方法，制备得到以下化合物：
实施例4：化合物I-4-2(6-甲氧甲氧基2，3，4，4′-四甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.14；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.40(s，3H，OCH3)，3.45(s，3H，OCH3)，3.80(s，3H，OCH3)，3.82(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，5.21(s，2H，OCH2O)，6.55(s，1H，H-5)，6.89(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.01(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，725(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，7.45(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝389。
实施例5：化合物I-4-3(4′-甲基-6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/酸乙酯＝3∶1)＝0.16；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：2.30(s，3H，CH3)，3.42(s，3H，OCH3)，3.46(s，3H，OCH3)，3.81(s，3H，OCH3)，3.88(s，3H，OCH3)，5.21(s，2H，OCH2O)，6.55(s，1H，H-5)，6.85(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，6.99(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.05(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，7.25(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝373。
实施例6：化合物I-4-4(6，4′-二甲氧甲氧基-2，3，4，3′-四甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.48(s，3H，OCH3)，3.80(s，3H，OCH3)，3.81(s，3H，OCH3)，3.83(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.88(s，3H，OCH3)，5.08(s，2H，OCH2O)，522(s，2H，OCH2O)，6.60(s，1H，H-5′)，6.81(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.85(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.03(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H，H-6′)，7.05(d，J＝1.6Hz，1H，H-2′)，7.20(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝449。
实施例7：化合物I-4-5(6，3′-二甲氧甲氧基-2，3，4，4′-四甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.10；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.52(s，3H，OCH3)，3.81(s，3H，OCH3)，3.82(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.86(s，3H，OCH3)，3.88(s，3H，OCH3)，5.02(s，2H，OCH2O)，5.20(s，2H，OCH2O)，6.61(s，1H，H-5)，6.83(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.88(d，J＝16.0Hz 1H，H-α)，7.03(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H，H-6′)，7.04(d，J＝2.0，1H，H-2)，7.24(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)；ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝449。
实施例8：化合物I-4-6(6-甲氧甲氧基-2，3，4，3′，4′-五甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.44(s，3H，OCH3)，3.60(s，3H，OCH3)，3.80(s，3H，OCH3)，3.82(s，3H，OCH3)，3.83(s，3H，OCH3)，3.88(s，3H，OCH3)，5.08(s，2H，OCH2O)，6.59(s，1H，H-5)，6.83(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.87(d，J＝16.0Hz 1H，H-α)7.01(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H，H-6′)，7.08(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，7.28(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝419。
实施例9：化合物I-4-7(6-甲氧甲氧基2，3，4，3′，4′，5′-六甲氧基查尔酮)的
制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.13；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.42(s，3H，OCH3)，3.78(s，3H，OCH3)，3.81(s，3H，OCH3)，3.83(s，6H，OCH3)，3.86(s，6H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，5.15(s，2H，OCH2O)，6.62(s，1H，H-5)，6.73(s，2H，H-2′，6′)，6.85(d，J＝16.0Hz 1H，H-α)，7.28(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝449。
实施例10：化合物I-4-8(4′-氯-6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.16；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.41(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.86(s，3H，OCH3)，5.10(s，2H，OCH2O)，6.55(s，1H，H-5)，6.89(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，6.91(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.18(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，7.26(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝393。
实施例11：化合物I-4-9(6，3′，4′-三甲氧甲氧基2，3，4-三甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.15；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.41(s，3H，OCH3)，3.45(s，3H，OCH3)，3.47(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.86(s，3H，OCH3)，5.10(s，2H，OCH2O)，5.21(s，2H，OCH2O)，5.22(s，2H，OCH2O)，6.63(s，1H，H-5)，6.87(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.89(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.03(dd，J＝8.0，2.0Hz， 1H，H-6)，7.06(dd，J＝8.0，2.0，1H，H-2)，7.12(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，7.33(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)；ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝479。
实施例12：化合物I-4-10(3′，4′-亚甲二氧基-6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.14；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.40(s，3H，OCH3)，3.55(s，3H，OCH3)，3.47(s，3H，OCH3)，3.83(s，3H，OCH3)，3.86(s，3H，OCH3)，3.86(s，3H，OCH3)，5.08(s，2H ，OCH2O)，6.00(s，2H，OCH2O)，6.62(s，1H，H-5)，6.82(d，J＝8.0Hz，1H，H-5)，6.79(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.82(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.01(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H，H-2)，7.04(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，7.30(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)；ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝403。
实施例13：化合物I-4-11(2，4-二甲氧基-3，6，4′-三甲氧甲氧基查尔酮)的制备
1.78克I-2-2溶解于溶有0.5克氢氧化钾的60毫升甲醇中，再加入1.5克对甲氧甲氧基苯甲醛，于室温搅拌8小时后减压蒸去溶剂，残余物中加入30毫升水，用20毫升乙酸乙酯提取三次，合并有机相后用饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，残余物经柱层析得到浅黄色油状物2.0克，收率75％。Rf(石油醚 /乙酸乙酯＝3∶1)＝0.18；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.40(s，3H，OCH3)，3.47(s，3H，OCH3)，3.60(s，3H，OCH3)，3.83(s，3H，OCH3)，3.88(s，3H，OCH3)，5.08(s，4H，OCH2O)，5.20(s，2H，OCH2O)，6.59(s，1H，H-5′)，6.88(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.02(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.31(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，7.47(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝449。
根据与实施例13相同的方法，制备得到以下化合物：
实施例14：化合物I-4-12(3，6-二甲氧甲氧基-2，4，4′-三甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.17；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.40(s，3H，OCH3)，3.60(s，3H，OCH3)，3.83(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.88(s，3H，OCH3)，5.08(s，2H，OCH2O)，5.09(s，2H，OCH2O)，5.11(s，2H，OCH2O)，6.59(s，1H，H-5′)，6.87(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，6.88(d，J＝8.0Hz，2H，H-3，5)，7.31(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，7.47(d，J＝8.0Hz，2H，H-2，6)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝419。
实施例15：化合物I-4-13(4′-甲基-3，6-二甲氧甲氧基-2，4-二甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.19；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)2.34(s，3H，CH3)，δ：3.40(s，3H，OCH3)，3.61(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.88(s，3H，OCH3)，5.07(s，2H，OCH2O)，5.09(s，2H，OCH2O)，6.59(s，1H，H-5)，6.85(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，6.86(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.32(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，7.44(d，J＝8.0Hz，2H，H-2，6)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝403。
实施例16：化合物I-4-14(3，6，4′-三甲氧甲氧基-2，4，3′-三甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.40(s，3H，OCH3)，3.50(s，3H，OCH3)，3.60(s，3H，OCH3)，3.83(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，OCH3)，5.09(s，2H，OCH2O)，5.11(s，2H，OCH2O)，5.26(s，2H，OCH2O)，6.60(s，1H，H-5)，6.88(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.06-7.15(m，3H，Ar-H)，7.29(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝479。
实施例17：化合物I-4-15(3，6，3′-三甲氧甲氧基-2，4，4′-三甲氧基查尔酮)Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.41(s，3H，OCH3)，3.52(s，3H，OCH3)，3.61(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，3.91(s，3H，OCH3)，5.09(s，2H，OCH2O)，5.10(s，2H，OCH2O)，5.23(s，2H，OCH2O)，6.59(s，1H，H-5)，6.85(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，6.86(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，7.17(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H，H-6)，7.28(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，7.36(d，J＝2Hz，1H，H-2)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝479。
实施例18：化合物I-4-16(3，6-二甲氧甲氧基-2，4，3′，4′-四甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.40(s，3H，OCH3)，3.61(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，OCH3)，3.91(s，3H，OCH3)，5.09(s，2H，OCH2O)，5.10(s，2H，OCH2O)，525(s，2H，OCH2O)，6.60(s，1H，H-5)，6.85(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H，H-5′)，6.87(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.06(d，J＝1.6Hz，1H，H-2)，7.08(d，J＝8.0Hz，1H，H-6)，7.29(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝449。
实施例19：化合物I-4-17(3，6-二甲氧甲氧基-2，4，3′，4′，5′-五甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.41(s，3H，OCH3)，3.62(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.87(s，6H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，3.91(s，3H，OCH3)，5.10(s，2H，OCH2O)，5.25(s，2H，OCH2O)，6.60(s，1H，H-5)，6.75(s，2H，H-2′，6′)，6.89(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.25(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)；ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝479。
实施例20：化合物I-4-18(4′-氯-2，4-二甲氧基-3，6-二甲氧甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.14；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.41(s，3H，OCH3)，3.47(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，5.10(s，2H，OCH2O)，5.12(s，2H，OCH2O)，6.58(s，1H，H-5)，6.85(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，7.00(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.22(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，7.43(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝423。
实施例21：化合物I-4-19(2，4-二甲氧基-3，6，3′，4′-四甲氧甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.13；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.40(s，3H，OCH3)，3.43(s，3H，OCH3)，3.48(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，5.09(s，2H，OCH2O)，5.11(s，2H，OCH2O)，5.23(s，2H，OCH2O)，5.25(s，2H，OCH2O)，6.62(s，1H，H-5)，6.85(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H，H-5)，6.89(d，J＝16Hz，1H，H-α)，7.08(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，7.09(d，J＝8Hz，1H，H-6′)，7.30(d，J＝16Hz，1H，H-β)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝509。
实施例22：化合物I-4-20(3′，4′-亚甲二氧基-2，4-二甲氧基-3，6-二甲氧甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.40(s，3H，OCH3)，3.44(s，3H，OCH3)，3.46(s，3H，OCH3)，3.61(s，3H，OCH3)，3.86(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，5.09(s，2H，OCH2O)，5.10(s，2H，OCH2O)，5.26(s，4H，OCH2O)，6.58(s，1H，H-5)，6.83(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H，H-5′)，6.86(d，J＝16Hz，1H， H-α)，7.02(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，7.04(d，J＝8Hz，1H，H-6′)，7.30(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝433。
实施例23：化合物I-4-21(6，2′-二甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.30；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.42(s，3H，OCH3)，3.43(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，OCH3)，5.09(s，2H，OCH2O)，5.19(s，2H，OCH2O)，6.58(s，1H，H-5)，7.05(d，J＝16Hz，1H，H-α)，6.99-7.57(m，4H，Ar-H)，7.73(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝419。
实施例24：化合物I-4-V(6，4′-二甲氧甲氧基-2，3，4，3′，5′-五甲氧基查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ：3.43(s，3H，OCH3)，3.44(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.85(s，6H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，OCH3)，5.10(s，2H，OCH2O)，5.15(s，2H，OCH2O)，6.96(s，1H，H-5)，6.30(s，2H，H-2′，6′)，7.05(d，J＝16Hz，1H，H-α)，7.73(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝479。
中间体I-5：6-羟基-2，4-二甲氧基苯乙酮的制备
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6的定义与式(1)化合物定义相同。
实施例25：化合物I-5-1(6，4′-二甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基环氧查尔酮)的制备：
1克I-4-1溶解于25毫升甲醇中，再加入1.5毫升2N氢氧化钠溶液和1.5毫升30％过氧化氢，于室温搅拌8小时，减压蒸去溶剂，残留物甲入10毫升水，用乙酸乙酯提取三次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤浓缩，得浅黄色油状物，0.9克，收率87％，直接用于下一步反应。
Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.15，λMeOH max＝212，257nm，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝435。
根据与实施例25相同的方法，得到以下化合物：
实施例26：化合物I-5-2(6-甲氧甲氧基-2，3，4，4′-四甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.15，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝405。
实施例27：化合物I-5-3(4′-甲基-6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.16，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝389。
实施例28：化合物I-54(4′，6-二甲氧甲氧基-3′，2，3，4-四甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝465。
实施例29：化合物I-5-5(6，3′-二甲氧甲氧基-2，3，4，4′-四甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.10，ESI-MS(/z)：[M+1]+＝465。
实施例30：化合物I-5-6(6-甲氧甲氧基-2，3，4，3′，4′-五甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝435。
实施例31：化合物I-5-7(6-甲氧甲氧基-2，3，4，3′，4′，5′-六甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.13，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝465。
实施例32：化合物I-5-8(4′-氯-6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.16，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝409。
实施例33：化合物I-5-9(6，3′，4′-三甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.15，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝435。
实施例34：化合物I-5-10(3′，4′-亚甲二氧基-6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基环氧查尔酮)的制备：。Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.14，ESI-MS(m/z)：[M+1]+ ＝419。
实施例35：化合物I-5-11(2，-二甲氧基-3，6，4′-三甲氧甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.18，ESI-MS(m/z)[M+1]+＝465。
实施例36：化合物I-5-12(3，6-二甲氧甲氧基-2，4，4′-三甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.17，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝435。
实施例37：化合物I-5-13(4′-甲基-3，6-二甲氧甲氧基-2，4-二甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.19，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝419。
实施例38：化合物I-5-14(3，6，4′-三甲氧甲氧基-2，4，3′-三甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝495。
实施例39：化合物I-5-15(3，6，3′-三甲氧甲氧基-2，4，4′-三甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝495。
实施例40：化合物I-5-16(3，6-二甲氧甲氧基-2，4，3′，4′-四甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝465。
实施例41：化合物I-5-17(3，6-三甲氧甲氧基-2，4，3′，4′，5′-五甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝495。
实施例42：化合物I-5-18(4′-氯-2，4-二甲氧基-3，6-二甲氧甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.14，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝439。
实施例43：化合物I-5-19(2，4-二甲氧基-3，6，3′，4′-四甲氧甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.13，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝525。
实施例44：化合物I-5-20(3′，4′-亚甲二氧基-2，4-二甲氧基-3，6-二甲氧甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.17，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝419。
实施例45：化合物I-5-21(6，2′-二甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.30，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝435。
实施例46：化合物I-5-22(6，4′-二甲氧甲氧基-2，3，4，3′，5′-五甲氧基环氧查尔酮)的制备：Rf(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)＝0.12，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝495。
实施例47：化合物1-a(3，4′-二羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮)的制备：
1克化合物I-4-1溶解于10毫升甲醇和8毫升四氢呋喃中，搅拌，加入2毫升 浓盐酸，于50-55℃之间保温20分钟后减压蒸去溶剂，加10毫升水，用乙酸乙酯提取，合并有机相，水洗，硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残余物经柱层析得浅黄色粉末0.47克，收率60％Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.11；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.70(s，3H，OCH3)，3.83(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，4.47(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，6.37(s，1H，H-8)，6.86(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.38(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝347。
根据实施例47的方法，制备得到以下化合物：
实施例48：化合物1-b(3-羟基-5，6，7，4′-四甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.25；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.68(s，3H，OCH3)，3.80(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，4.45(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.91(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，6.36(s，1H，H-8)，6.90(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.45(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝361。
实施例49：化合物1-c(3-羟基4′-甲基5，6，7-三甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.27；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：2.32(s，3H，CH3)，3.82(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，4.47(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.93(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，6.34(s，1H，H-8)，6.97(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.22(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝345。
实施例50：化合物1-d(3，4′-二羟基5，6，7，3′-四甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶3∶0.25)＝0.12；1HNMR(400Mz，氘代丙酮)δ：3.83(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，4.52(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.08(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.33(s，1H，H-8)，6.80(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.88(dd，J＝1.8，8.0Hz，1H，H-6′)，7.05(d，J＝1.8Hz，1H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝377。
实施例51：化合物1-e(3，3′-二羟基5，6，7，4′-四甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶3∶0.25)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.84(s，3H，OCH3)，3.86(s，3H，OCH3)，3.88(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，4.50(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.05(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.30(s，1H，H-8)，6.81(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.86(dd，J＝1.8，8.0Hz，1H，H-6′)，7.04(d，J＝1.8Hz，1H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝377。
实施例52：化合物1-f(3-羟基-5，6，7，3′，4′-五甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯 仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.14；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.84(s，3H，OCH3)，3.86(s，3H，OCH3)， 3.88(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，3.91(s，3H，OCH3)，4.55(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.06(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.35(s，1H，H-8)，6.88(d，J＝8.8Hz，1H，H-5′)，6.94(dd，J＝2.0，8.8Hz，1H，H-6′)，7.04(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝391。
实施例53：化合物1-g(3-羟基-5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶025)＝0.12；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.83(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，3.89(s，6H，OCH3)，3.92(s，3H，OCH3)，4.56(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.02(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.37(s，1H，H-8)，6.92(s，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝421。
实施例54：化合物1-h(4′-氯-3-羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.16；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.84(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，OCH3)，4.41(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.89(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，6.32(s，1H，H-8)，6.87(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.18(d，J＝8.0Hz，1H，H-2′，6′)；ESI-MS(m/z)：[M+1]＝365。
实施例55：化合物1-I(3，3′，4′-三羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶4∶0.25)＝0.13；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.83(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，OCH3)，4.40(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，4.88(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.37(s，1H，H-8)，6.85(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.89(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H，H-6′)，7.06(d，J＝2Hz，1H，H-2′)；ESI-MS(m/z)：[M+1]＝363。
实施例56：化合物1-j(3′，4′-亚甲二氧基-3-羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶3∶0.25)＝0.20；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.86(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，3.92(s，3H，0VH3)，4.50(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，5.09(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.96(s，1H，OCH2O)，6.32(s，1H，H-8)，6.82(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.88(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H，H-6′)，7.00(d，J＝2Hz，1H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝391。
实施例57：化合物1-k(5，7-二甲氧基-3，6，4′-三羟基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶3∶0.25)＝0.14；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.86(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，3.92(s，3H，OCH3)，4.50(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.09(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，5.96(s，1H，OCH2O)，6.32(s，1H，H-8)，6.82(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.88(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H，H-6′)，7.00(d，J＝2Hz，1H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝ 333。
实施例58：化合物1-l(3，6-二羟基-5，7，4′-三甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶3∶025)＝0.16；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.84(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，3.98(s，3H，OCH3)，4.50(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，5.00(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，6.35(s，1H，H-8)，6.98(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.48(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝347。
实施例59：化合物1-m(3，6-二羟基4′-甲基-5，7-二甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.19；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：2.35(s，3H，CH3)，3.84(s，3H，OCH3)，3.89(s，3H，OCH3)，4.53(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，5.02(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，6.35(s，1H，H-8)，6.89(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.18(d，J＝8.0Hz，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝331。
实施例60：化合物1-n(3，6，4′-三羟基-5，7，3′-三甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶4∶0.25)＝0.14；1HNMR(400MH，氘代丙酮)δ：3.86(s，3H，OCH3)，3.94(s，3H，OCH3)，3.98(s，3H，OCH3)，4.55(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.07(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.37(s，1H，H-8)，6.81(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.89(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H，H-6′)，7.05(d，J＝2.0Hz，2H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝363。
实施例61：化合物1-o(3，6，3′-三羟基-5，7，4′-三甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶3∶0.25)＝0.14；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.85(s，3H，OCH3)，3.911(s，3H，OCH3)，3.97(s，3H，OCH3)，4.53(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.02(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.35(s，1H，H-8)，6.80(d，J＝8.0Hz，1H，H-5′)，6.85(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H，H-6′)，7.00(d，J＝2.0Hz，2H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝363。
实施例62：化合物1-p(3，6，-二羟基-5，7，3′，4′-四甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.14；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.80(s，3H，OCH3)，3.82(s，3H，OCH3)，3.94(s，3H，OCH3)，3.98(s，3H，OCH3)，4.57(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.09(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.39(s，1H，H-8)，6.92(d，J＝8.4Hz，1H，H-5′)，6.96(dd，J＝8.4，1.6Hz，1H，H-6′)，7.06(d，J＝1.6Hz，2H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝363。
实施例63：化合物1-q(3，6，-二羟基-5，7，3′，4′，5′-五甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.13；1HNMR(400MHz，氘代丙 酮)δ：3.80(s，3H，OCH3)，3.83(s，3H，OCH3)，3.92(s，6H，OCH3)，3.98(s，3H，OCH3)，4.56(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.01(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.41(s，1H，H-8)，6.55(s，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝377。
实施例64：化合物1-r(4′-氯-3，6-二羟基-5，7-二甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶1∶0.25)＝0.16；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.89(s，3H，OCH3)，3.93(s，3H，OCH3)，4.47(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，6.35(s，1H，H-8)，7.40(d，J＝8.0Hz，2H，H-3′，5′)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝351。
实施例65：化合物1-s(5，7-二甲氧基-3，6，3′，4′-四羟基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶4∶025)＝0.11；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.84(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，3.92(s，3H，OCH3)，4.48(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，5.00(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.36(s，1H，H-8)，6.81(d，J＝8.4Hz，1H，H-5′)，6.90(dd，J＝2.0，8.4Hz，H-6′)，6.96(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝349。
实施例66：化合物1-t(3′，4′-亚甲二氧基-3，6-二羟基-5，7-二甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.21；1zHNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.92(s，3H，OCH3)，3.949s，3H，OCH3)，4.56(d，J＝1.2Hz，1H，H-3)，5.26(d，J＝1.2Hz，1H，H-2)，5.96(s，2H，OCH2O)，6.35(s，1H，H-8)，6.81(d，J＝8.4Hz，1H，H-5′)，6.91(dd，J＝1.2，8.4Hz，H-6′)，7.01(d，J＝1.2Hz，1H，H-2′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]＝361。
实施例67：化合物I-u(3，2′-二羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶4∶0.25)＝0.11；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.75(s，3H，OCH3)，3.83(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，4.43(d，J＝2.0Hz，1H，H-3)，4.97(d，J＝2.0Hz，1H，H-2)，6.35(s，1H，H-8)，6.71-7.15(m，4H，Ar-H)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝347。
实施例68：化合物I-v(3，4′-二羟基-5，6，7，3′，5′-五甲氧基二氢黄酮)的制备：Rf(氯仿/乙酸乙酯/甲酸＝25∶2∶0.25)＝0.21；1HNMR(400MHz，氘代丙酮)δ：3.86(s，3H，OCH3)，3.88(s，6H，OCH3)，3.90(s，6H，OCH3)，3.93(s，6H，OCH3)，4.53(d，J＝1.2Hz，1H，H-3)，5.20(d，J＝1.2Hz，1H，H-2)，6.33(s，1H，H-8)，6.91(s，2H，H-2′，6′)，ESI-MS(m/z)：[M+1]+＝407。
式(1)化合物具有重要的生物活性。该类化合物(具体见药理实施例)具有 抑制人体乙肝病毒脱氧核糖核酸HBVDNA以及降低乙肝病毒表面抗原HBsAg和乙肝e抗原HBeAg的活性，从而可以预期作为治疗病毒性乙型肝炎及相关病毒性疾病的药物。此类二氢黄酮醇类化合物(具体见药理实施例)显示出具有体外清除超氧化自由基、抑制自由基诱导的脂过氧化物生成的活性。以上活性表明该类化合物可以预期用于制备预防或治疗急性慢性肝损伤类疾病以及由氧自由基引起或与氧自由基有关的其他生理改变或疾病的药物。本发明还对该类化合物对四氯化碳致大鼠原代肝细胞损伤体内模型以及体外模型进行了肝细胞损伤保护活性筛选。该类化合物被发现具有保护肝细胞的作用。从而可以预期成为保肝、治疗肝损伤疾病类药物。此外，此类二氢黄酮醇类化合物及其中间体系列化合物还被发现具有抗真菌活性的作用，因而可以预期作为治疗真菌感染类疾病的药物。
本发明式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与药学上常用的辐料或载体结合，制备得到具有保护肝细胞急性和慢性损伤活性从而可以用于预防以及治疗肝脏疾病的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与药学上常用的辐料或载体结合，制备得到具有抑制乙肝病毒表面抗原和乙肝病毒e抗原以及抑制乙肝病毒脱氧核糖核酸复制活性，从而可以用于预防以及治疗乙型病毒性肝炎的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与现已上市的治疗乙型病毒性肝炎药物如阿昔络韦、拉米呋啶、干扰素、阿德福韦酯、恩替卡伟等联合使用，制备得到具有治疗乙型病毒性肝炎的药物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与现已上市的肝脏保护及肝病治疗药物药物如联苯双酯、水飞蓟素、水飞蓟宾葡甲胺、齐墩果酸、二氯乙酸二异丙胺、原卟啉钠(protoporphyrin disodium)、马洛替酯(malotilate)、熊去氧胆酸等联合使用，制备得到具有保护肝脏活性的组合物，可用于治疗急慢性病毒肝炎、慢性肝炎、早期肝硬化、肪肝肝及中毒性肝损伤疾病药品。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与药学上常用的辐料或载体结合，制备得到具有防御自由基引起的损害活性的抗氧化组合物，可用于治疗一些病变过程中产生自由基的疾病，如炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗后遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应、动脉粥样硬化等疾病 的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与现已上市的抗自由基氧化剂药物如超氧化物歧化酶(SOD)等联合使用，制备得到具有防御自由基引起的损害活性的抗氧化药物组合物，用于治疗上述疾病。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与药学上常用的辐料或载体结合，制备得到具有抑制真菌生长活性，从而可以用于治疗真菌感染类疾病的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与现已上市的抗真菌感染药物如两性霉素(amphotericin B)、球红霉素(globlrubermycin)、美帊曲星(mepartricin)、咪康唑(miconazole)、酮康唑(ketoconazole)、益康唑(econazole)、噻康唑(tioconazole)、硫康唑(sulconazole)、布康唑(butoconazole)、联苯苄唑(bifonazole)、芬替康唑(fenticonazole)、氟康唑(fluconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、氟胞嘧啶(flucytosine)、阿莫罗芬(amorolfine)等药物联合使用，制备得到具有抗真菌活性药物组合物，用于治疗该类疾病。此类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明中所述剂型如片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂和软膏剂以及各种缓释、控释剂型都可以根据现已公认的药剂学常识常规制备而得，在这些公知知识和技术基础上制备出的含有本发明权利要求化合物的药物或药物组合物其他剂型都在本发明的保护范围内。
为了更好地理解本发明的实质和本发明所述化合物在药物开发上的应用前景，下面以药理实施例形式分别用本发明中制备出的化合物对乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的抑制活性、对乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的抑制试验、对乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)的抑制试验、对过氧化氢致大鼠原代肝细胞损伤保护活性、对大鼠急性四氯化碳肝损防(动物体内肝损伤模型)保护活性、体外清除超氧化自由基、抑制自由基诱导的脂过氧化物生成的活性和体外抗真菌的药理实验结果，说明其在制药领域中的新用途。药理实施例给出了代表性化合物的部分活性数据。必须说明，本发明的药理实施例及所采用的药效学模型是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改 进，以及在本发明实施例所涵盖的病因基础上的简易扩充的其他适应症都属于本发明要求保护的范围。
药理实施例1：化合物1-r对乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的抑制活性
1、材料与方法：
1.1仪器与试剂：PE7700自动荧光PCR仪，美国Perkin Elmer公司生产；HBV-DNA荧光定量检测试剂盒由中山医科大学达安基因诊断中心提供，胎牛血清、DMEM、G418、胰蛋白酶均购自Gibco公司。
1.2体外细胞模型：转染乙肝病毒的2.2.15细胞株(HepG 2.2.15)由浙江大学中药与天然药物研究室培养提供，将HepG 2.2.15细胞接种于DMEM培养液(含10％胎牛血清，380ug/mLG418)，置5％CO2 37℃培养箱中培养。
1.3药物作用：HepG2.2.15细胞用0.06％胰蛋白酶消化液消化，稀释成8×104/mL悬液，每孔200uL，两天后换含药培养液，药物浓度分别为100μg/mL，50μg/mL，25μg/mL，每个浓度设6个平行孔，每三天换含药培养基一次，吸取换出的培养上清于-20℃冻存待检。以同样条件下不含药物的培养液培养的细胞作为对照，以拉米呋啶作为阳性对照，测试时吸上清液用酶联免疫法(ELISA)测定乙肝病毒表面抗原(HBsAg)，得到结果如表所示。余下细胞用MTT法测定药物细胞毒性。试验另设培养液空白对照组四孔。
2、MTT法检测样品对细胞的毒性；
化合物1-r对细胞的细胞毒活性：细胞用DMEM培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，800,000U/mL青霉素和1mg/mL的链霉素。细胞在37C，含5％CO2 潮湿空气的培养箱中培养。细胞存活率的测定用改良MTT法，在孵育结束时每孔加入20μL MTT[溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑](5mg/mL，用磷酸缓冲液PBS配制)，在37℃条件下继续孵育4小时，然后每孔加入100μL终止液(10％十二烷基硫酸钠SDS，用1∶1的异丁醇和2M盐酸配制)以裂解细胞和溶解甲臢(formazan)结晶。微孔反应板在黑暗潮湿的条件下放置过夜。所形成的甲臢用酶标仪在570nm波长下比色，细胞存活率由样品相对于对照的比值计算。
3、ELISA法(标准HBsAg诊断试剂盒)检测样品对HBsAg的抑制作用：加入药物孵育5，7，14天后的细胞培养上清液，吸出少许，用ELISA法测定，在450nm检测OD值。测定HBsAg，结果以P/N值表示。以同样条件用不含样品的培养基培养的细胞作为对照。将6个平行孔的P/N比取平均值后，计算抑制率。
抑制率＝(对照孔P/N值-实验孔P/N值)÷(对照孔P/N值-2.1)
4、阳性药物对照：拉米呋啶(3-TC)。
检测结果：实施例1中测试对HBsAg抑制率的试验结果如表一所示。
表一.化合物1-r对HepG 2.2.15分泌的乙肝表面抗原的抑制率(％)以及第12天对细胞生长的抑制率(％)
试验结果说明：目前最具价值的判断乙型肝炎病毒感染的标志有：乙型表面抗原与抗体(HBsAg与抗-HBs)、乙型肝炎e抗原与抗体(HBeAg与抗-HBe)、乙型肝炎核心抗原与抗体(HBcAg与抗-HBc)等。其中HBsAg是判断HBV感染的重要标志，抑制HBsAg并使HBsAg转阴反应是治疗乙型肝炎中的直接目的之一。化合物1-r第四天、第八天和第十二天在不同浓度时对乙肝表面抗原HBsAg均显示出一定的抑制活性，且比阳性对照药品拉米呋啶对乙肝表面抗原的抑制活性强。结论：化合物1-r属于高活的乙肝表面抗原HBsAg抑制剂。具有全新结构的二氢黄酮醉类化合物(化合物1-r为例)属于强效的HBsAg抑制剂。
药理实施例2.化合物1-对乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的抑制试验
材料与方法：按照药理实施例1中描述的方法，我们用ELISA法(标准HBeAg诊断度剂盒)检测了样品对HBeAg的抑制作用。以化合物1-r为例说明。标准试剂盒检测方法：加入药物孵育5，7，14天后的细胞培养上清液，吸出少许，用ELISA法测啶，在450nm检测OD值。测定HBeAg，结果以P/N值表示。以同样条件用不含样品的培养基培养的细胞作为对照。将6个平行孔的P/N比取平均值后，计算抑制率。阳性药物对照：拉米呋啶(3-TC)。
抑制率＝(对照孔P/N值-实验孔P/N值)÷(对照孔P/N值-2.1)
检测结果：药理实施例2中测试对HBeAg抑制率的试验结果见表二。
表二.化合物1-r对HepG 2.2.15分泌的乙肝e抗原的抑制率(％)以及第12天对细胞生长的抑制率(％)
试验结果说明：乙型肝炎e抗原与抗体(HBeAg与抗-HBe)是判断乙型肝炎病毒感染重要标志，抑制HBeAg并使HBeAg转阴反应是治疗乙型肝炎中的直接目的之一。第四天、第八天和第十二天化合物1-r在高浓度时对乙肝e抗原HBeAg均显示出较强的抑制活性，且高于阳性对照药品拉米呋啶对乙肝e抗原的抑制活性。结论：化合物1-r属于有一定活性的乙肝e抗原HBeAg抑制剂。具有全新结构的二氢黄酮醇类化合物(化合物1-r为例)属于强效的HBeAg抑制剂。
药理实施例3.化合物1-r对乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)的抑制试验
1.1仪器与试剂：PE7700自动荧光PCR仪，美国Perkin Elmer公司生产；HBV-DNA荧光定量检测试剂盒由中山医科大学达安基因诊断中心提供，胎牛血清、DMEM、G418、胰蛋白酶均购自Gibco公司。
1.2体外细胞模型：HepG 2.2.15细胞株培养于浙江大学药学院中药与天然药物研究室，将HepG 2.2.15细胞接种于DMEM培养液(含10％胎牛血清，380ug/mL G418)，置5％CO2 37℃培养箱中培养。
1.3药物作用：HepG 2.2.15细胞用胰蛋白酶消化液消化，稀释成8×104/mL悬液，接种于96孔细胞培养板，每孔200uL，24小时后，换含药培养液，药物浓度分别为0.5mg/mL，0.05mg/mL，0.005mg/mL，每个浓度设6个平行孔，继续培养24小时，留取培养上清于-20℃冻存待检。以同样条件下不含药物的培养液培养的细胞作为对照，以拉米呋啶作为阳性对照，用同样的方法测定其对HBV的抑制作用。
1.4HBV-DNA定量：采用常规碱裂解法从培养上清中提取HBV-DNA，按试剂说明书操作，50uL反应体积中含30uL反应缓冲液，5uL MgCl2，5uL引物和探针，7uL样品处理上清液和3uL Taq酶。各反应管放入PCR仪中，按下列条件扩增：92℃ 2分钟预变性，然后按93℃ 45秒-55℃ 120秒，共40个循环。反应结束后，由电脑自动分析计算出结果。
1.5试验结果：化合物1-r对乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)的抑制试验结果如表三所示。
表三.化合物1-r对HepG 2.2.15乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)的抑制率(％)以及第12天对细胞生长的抑制率(％)
结论：第四天、第八天和第十二天化合物1-r对HBV-DNA均显示出一定的抑制活性，但是比阳性对照药品拉米呋啶对HBV-DNA的抑制活性要弱，属于有一定活性的HBV-DNA抑制剂。说明该类具有全新结构的二氢黄酮醇类化合物(化合物1-r为例)属于有效的HBVDNA抑制剂。
药理实施例四化合物1-k对四氯化碳致大鼠原代肝细胞损伤体外模型的肝细胞损伤保护活性试验。
在生理条件下，用“胶原酶(IV型)灌流液”灌流肝脏，借胶原酶消化肝细胞间质组织而达到分散肝细胞的目的。再进行分离纯化而得到肝实质细胞，然后进行原代培养。在体外用化学物质(如：CCl4、H2O2、TTA、GalN等)处理肝细胞，造成肝细胞损伤，以观察试验药物对肝细胞损伤的保护作用。
1、四氯化碳(CCl4)致肝细胞损伤模型的建立：
原代培养的正常大鼠肝细胞经1640培养液(内含10％小牛血清，105U/L青霉素，100mg/L链霉素和10mg/L胰岛素)培养12小时并加入不同浓度的CCl4(1～16mmol/L)，以少量的DMSO助溶，DMSO的终浓度为0.1％(体积分数)。作用不同时间(1～12小时)后，收集24孔板中培养液上清检测AST，以及肝细胞的MDA含量和GSH-px活性。检测肝细胞培养上清：ALT水平，肝细胞：MDA含量。
2.抗肝细胞损伤药物活性检测：
正常大鼠原代肝细胞培养12时后，加入8mmol/L的CCl4作用6小时后，分别加入高、中、低3种不同浓度的化合物1-k试验药液，每一浓度设6个复孔，同时设溶剂对照组。继续培养48小时后，离心(1800r/min，10分钟)收集上清。测定上清液中ALT和水平。弃肝细胞培养上清，收集肝细胞样品，测定肝细胞的MDA含量。
表四 药物对大鼠CCl4损伤肝细胞ALT和MDA的影响
结论：化合物1-k对四氯化碳致大鼠肝细胞损伤体外模型的肝细胞损伤保护活性，属于有一定活性的保肝护肝化合物。说明该类具有全新结构的二氢黄酮醇类化合物(化合物1-k为例)具有保肝护肝作用。
药理实施例五化合物1-k对小鼠急性四氯化碳肝损伤(动物体内肝损伤模型)保护活性的试验
四氯化碳进入体内后，在肝细胞内质网中经细胞色素P-50依赖性混合功能氧化酶的代谢，生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基。这些自由基可与细胞内和细胞膜的大分子共价结合，使酶功能丧失，细胞膜脂质过氧化，胞浆Ca2+浓度升高，导致肝细胞损伤，胞浆内转氨酶渗入血液。
ICR小鼠，全雄，48只。(购自浙江省药品检定所)。分为正常组、模型组、阳性组、低剂量化合物1-k试药(L)组、中剂量化合物1-k试药(M)组、高剂量化合物1-k试药(H)组，每组8只。各组动物给药情况如下：(1)正常组：生理盐水(NS)；(2)模型组：NS；(3)阳性组：联苯双酯100mg/kg；(4)试药(L)组：50mg/kg；(5)试药(M)组：100mg/kg；(6)试药(H)组：200mg/kg；各组药物均用NS溶解。分组后灌胃给药(10ml/kg)，每天给药一次，连续7天。末次给药后1小时，除正常组外，均参加造模。用橄榄油配成1％的CCl4溶液，用前反复振荡混匀。腹腔注射1％的CCl4溶液(10mg/kg)致毒。注射毒物后禁食过夜。末次给药24小时后，摘眼球取血，分离血清，测AST和ALT。取一小块肝组织，立即放入福尔马林溶液中固定，用于制作病理切片。
血清谷草转氨酶(AST/GOT)的检测和血清谷丙转氨酶(ALT/GPT)的检测：
表五 化合物1-K对急性肝损伤小鼠血清AST/GOT和ALT/GPT的影响
组织病理学检测：
1、病理切片制作方法：
取材：每只动物取同一叶肝脏部位大致相同的一小块肝组织(含包膜)，大小0.5cm×0.5cm×0.2cm，纵切或横切，按照标准病理学切片程序进行固定、洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、烤片、脱蜡、清洗、水化、HE染色、分化、返蓝、脱水与透明、封片，编号后进行观察。
2、肉眼观察：模型组小鼠体积和色泽无明显改变。
3、显微镜下观察：模型组小鼠肝小叶中央区细胞变性坏死，数个肝细胞坏死灶融合呈板状。试药组和阳性组小鼠肝细胞损伤均有明显改善。
结论：
(1)生化指标(AST和ALT)检测结果均表明，四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型造模是成功的。(2)血清AST和ALT检测结果表明：试药和阳性药在试验剂量下能明显降低肝损伤小鼠血清AST/GOT和ALT/GPT水平；其中试药(H)能显著降低肝损伤小鼠血清AST/GOT水平；阳性药和试药(L)能显著降低肝损伤小鼠血清ALT/GPT水平；但量效关系均不明显。(3)病理组织学检测表明，试药化合物1-k和阳性药能不同程度改善四氯化碳导致的小鼠肝细胞损伤。说明该类具有全新结构的二氢黄酮醇类化合物(化合物1-k为例)具有体内保肝护肝作用。
药理实施例六化合物1-s体外清除超氧化自由基的活性试验
化合物1-s清除超氧阴离子自由基能力是用比色法检测的。采用非酶系统吩嗪-N甲硫酸盐-NADH(PMS-NADH)产生的超氧阴离子与还原性硝基四唑氮蓝(NBT)反应产生甲臜，根据其在560nm处吸光度的变化来判断化合物的自由基清除能力。3mL反应体系中含有16mM Tris-HCl缓冲液(pH8.0，体积)、78μM的NADH、50μM NBT、各种不同浓度的待测化合物，当加入10μM PMS时启动反应。室温反应5分钟后用分光光度计在560nm波长下检测，试验结果见表六。
表六化合物1-s清除超氧化自由基活性
表内数字为4个独立试验之平均值±标准误。
从表中可以看出，化合物1-s在体外实验中显示出清除超氧化阴离子自由基的能力。在这些化合物存在的情况下，由吩嗪-N甲硫酸盐-NADH产生的超氧化阴离子自由基可以被剂量依赖性地清除。还原性四唑氮蓝的量可以由560nm吸光度的变化来表示，与对照组比较，化合物1-s有很强的清除超氧阴离子自由基之能力，故560nm吸光度迅速下降。说明该类具有全新结构的二氢黄酮醇类化合物(化合物1-s为例)具有较强的清除超氧自由基的能力。
药理实施例七化合物1-s抑制自由基诱导之脂过氧化物生成活性试验
化合物1-s抑制自由基诱导之脂过氧化物生成使用大鼠肝匀浆脂质过氧化系统。鼠肝匀浆用雄性SD大鼠制备。在含FeSO4及0.1mM维生素C的1mL磷酸钾缓冲液(10mM，pH7.4)中分别加入适量肝匀浆和待测化合物，37℃保温30分钟后加入1mL三氯醋酸(20％)终止反应，随后加入15ml硫代巴比妥酸(0.8％)，100℃水浴20分钟，然后3,000rpm离心5分钟去除蛋白沉淀，在532nm波长下测定上清吸光度。脂过氧化物合量由反应中生成的氰尿酰胺二醛(malondialdehyde)表示，槲皮素作为阳性对照。试验结果见表七。
表七化合物1-s对小鼠肝微粒体抗脂质过氧化活性
结论：由表七可以看出，化合物1-s对由自由基引发的肝匀浆脂过氧化物的生成具有抑制活性，氰尿酰胺二醛之生成量大幅减少。且成剂量依赖型抑制模式，说明与对照组比较，化合物1-s具有较高的抗氧化能力。
药理实施例八化合物1-i体外抑制真菌生长的活性试验
一、检测方法：采用“微量稀释法”，用RPMI-640-MOPS培养液将待测样品进行一系列二倍稀释后，再定量接种检测菌，35℃孵育24小时后观察检测菌的生长情况。抑制检测菌肉眼可见生长的最低药物浓度为测定药物对检测菌的最低抑菌浓度(MIC)。
二、检测菌：
白色念珠菌10231，浙江大学中药与天然药物研究室提供。阳性对照药物：氟康唑， 购于杭州市第三人民医院，配置成1000μg/ml溶液。菌液用RPMI-1640-MOPS培养液稀释至10-6待用。待测样品化合物1-i用20μl DMSO溶解后，用培养液稀释成500μl。96孔细胞培养板取50μl稀释好的菌液依次由低浓度加至高浓度的样品孔和检测菌生长对照孔中。每孔加入20μl氯霉素(100μg/ml)，混匀后35℃培养24小时后观察菌液生长情况，肉眼未见菌落生长的最低样品浓度为该样品的MIC。
表八.化合物1-i抑菌活性测试结果
表九.氟康唑(阳性对照)抑菌活性测试结果
结果表明：样品化合物1-i对白色念珠菌10231具有抑制作用，MIC为375.0μg/ml。而阳性对照氟康唑显示较强的抗菌活性，MIC小于1.46μg/ml。说明该类具有全新结构的二氢黄酮醇类化合物(化合物1-i为例)属于抑制真菌生长作用。
Claims (13)
1.一种式(1)所示的5，6，7-三氧化取代的二氢黄酮醇类化合物或其可药用盐：
其中：R1，R2和R3相同或者不同，分别选自氢或含1-8个碳的烷基；R4，R5，R6取代在苯环(B环)任意位置，R4，R5，R6相同或不同，分别选自氢、1-8个碳的烷基、卤素、硝基，1-8个碳的烷氧基，或氨基；R7为氢。
2.根据权利要求1的式(1)所示的5，6，7-三氧化取代的二氢黄酮醇类化合物或其可药用盐，它们是：
化合物1-b：3-羟基-5，6，7，4′-四甲氧基二氢黄酮；
化合物1-c：3-羟基-4′-甲基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-f：3-羟基-5，6，7，3′，4′-五甲氧基二氢黄酮；
化合物1-g：3-羟基-5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基二氢黄酮；
化合物1-h：4′-氯-3-羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-l：3，6-二羟基-5，7，4′-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-m：3，6-二羟基-4′-甲基-5，7-二甲氧基二氢黄酮；
化合物1-p：3，6-二羟基-5，7，3′，4′-四甲氧基二氢黄酮；
化合物1-q：3，6-二羟基-5，7，3′，4′，5′-五甲氧基二氢黄酮；
化合物1-r：4′-氯-3，6-二羟基-5，7-二甲氧基二氢黄酮。
3.一类5，6，7-三氧化取代的二氢黄酮醇类化合物或其可药用盐，它们是：
化合物1-a：3，4′-二羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-d：3，4′-二羟基-5，6，7，3′-四甲氧基二氢黄酮；
化合物1-e：3，3′-二羟基-5，6，7，4′-四甲氧基二氢黄酮；
化合物1-i：3，3′，4′-三羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-j：3′，4′-亚甲二氧基-3-羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-k：5，7-二甲氧基-3，6，4′-三羟基二氢黄酮；
化合物1-n：3，6，4′-三羟基-5，7，3′-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-o：3，6，3′-三羟基-5，7，4′-三甲氧基二氢黄酮；
化合物1-s：5，7-二甲氧基-3，6，3′，4′-四羟基二氢黄酮；
化合物1-t：3′，4′-亚甲二氧基-3，6-二羟基-5，7-二甲氧基二氢黄酮；
化合物I-u：2′，3-二羟基-5，6，7-三甲氧基二氢黄酮；
化合物I-v：3，4′-二羟基-5，6，7，3′，5′-五甲氧基二氢黄酮
。
4.权利要求1中式(1)化合物的制备方法，包括将式(I-5)化合物酸化环合得到式(1)化合物：
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6的定义如权利要求1，该反应在单独的甲醇，乙醇，丙醇，丁醇中进行，或者在其与四氢呋喃的混合溶剂中进行；酸为盐酸，硫酸或醋酸。
5.根据权利要求4的制备方法，其中式(I-5)化合物由式(I-4)化合物在碱催化下，经过氧化氢氧化制备得到：
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6的定义如权利要求1，反应式中碱为氢氧化钠或氢氧化钾，醇为甲醇，乙醇，丙醇或丁醇。
6.根据权利要求5的制备方法，其中式(I-4)化合物由式(I-2)和式(I-3)化合物制备得到：
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6的定义如权利要求1，反应式中碱为氢氧化钠或氢氧化钾，醇为甲醇，乙醇，丙醇或丁醇。
7.根据权利要求6的制备方法，其中式(I-2)化合物由式(I-1)化合物制备得到：
其中R1，R2，R3的定义权利要求1，碱为氢氧化钠或氢氧化钾，相转移催化剂为四丁基卤化铵，四丁基氢氧化铵，苄基三甲基卤化铵，有机溶剂为二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯。
8.一种环氧查尔酮类化合物，它们是：
I-5-2：6-甲氧甲氧基-2，3，4，4′-四甲氧基环氧查尔酮；
I-5-3：4′-甲基-6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基环氧查尔酮；
I-5-6：6-甲氧甲氧基-2，3，4，3′，4′-五甲氧基环氧查尔酮；
I-5-7：6-甲氧甲氧基-2，3，4，3′，4′，5′-六甲氧基环氧查尔酮；
I-5-8：4′-氯-6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基环氧查尔酮；
I-5-10：3′，4′-亚甲二氧基-6-甲氧甲氧基-2，3，4-三甲氧基环氧查尔酮。
9.根据权利要求1-3任一的化合物或者它们的混合物用于制备防治乙型病毒性肝炎、保肝护肝、治疗真菌感染、防治病变过程中产生自由基的疾病的药物组合物的用途。
10.根据权利要求9的用途，其中所述病变过程中产生自由基的疾病为炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗后遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应或者动脉粥样硬化疾病。
11.一种用于防治乙型病毒性肝炎、保肝护肝、治疗真菌感染、防治病变过程中产生自由基的疾病的药物组合物，其中含有治疗有效量的作为活性成分的根据权利要求1-3任一的化合物或者它们的混合物和药用辅料。
12.权利要求11的药物组合物，其中该组合物构成注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂剂型药物。
13.权利要求11的药物组合物，其中所述病变过程中产生自由基的疾病为炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应、动脉粥样硬化疾病。
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