CN1978448B - 10-羟基喜树碱精氨酸盐(i)及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及如式(I)结构的10-羟基喜树碱精氨酸盐，该化合物的制备是在无水溶剂中，10-羟基喜树碱与精氨酸反应，得到相应的精氨酸盐及其复合物，加入精氨酸的量摩尔比可以从1到10倍范围。10-羟基喜树碱精氨酸盐及其缔合物水溶性明显比10-羟基喜树碱强，且具有明显的肝靶向性，克服了喜树碱钠盐毒性强，稳定性差等缺点，为肿瘤患者提供一种疗效可靠、用药安全、价格低廉的药物。

Description

10-羟基喜树碱精氨酸盐(I)及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种10-羟基喜树碱精氨酸盐及其制备方法和用途，属医药化工领域。

背景技术

1966年由美国学者Wall等人从我国特有树种喜树(Campptotheca acuminata)中提取得到喜树碱，并发现具有独特的抗癌疗效，但毒副作用大，限制了喜树碱的临床应用。因此，既保持喜树碱的抗癌活性又具有较低毒性的喜树碱衍生物一直以来就是人们关注的热点。随后又从喜树中分离出了10-羟基喜树碱(HCPT)，而且经临床试用表明对具有抗癌谱广，疗效显著，毒副作用小的特点，特别是对原发性肝性肝癌、胃肠癌膀胱癌、头部颈部皮癌、白血病、宫颈等恶性肿瘤有显著疗效。国内70年代上海药物研究所等制成HCPT钠盐注射液进行临床试验。80年代末90年代初，国内已有许多家药厂生产HCPT钠盐投放市场，用于治疗原发性肝癌、胃肠癌、白血病、头颈部腺源性皮癌、膀胱癌等。10-羟基喜树碱化学结构与喜树碱相似，仅10位上的羟基被取代，现已能全合成，是天然衍生物。如今，10-羟基喜树碱在许多国家已获得广泛临床使用。但由于其制剂本身原因，理化性质不稳定，易氧化，氧化后毒性增大，溶液变色，影响疗效。且10-羟基喜树碱在氯仿、乙醇、甲醇、水等常用溶剂中的溶解性均不好，限制了它的使用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的10-羟基喜树碱盐，既能提高对人体内的抗肿瘤活性，且化学性质又比较稳定，又能降低其毒副作用，同时溶解性好，使喜树碱在临床上的作用得到充分发挥，为肿瘤患者提供一种疗效可靠、用药安全、价格低廉的药物。

本发明的目的是这样实现的：

本发明提供一种10-羟基喜树碱精氨酸盐，具有如式(I)结构：

其中n＝1～10。优选n＝1～7。最优n＝6。

本发明提供的制备10-羟基喜树碱精氨酸盐的方法包括以下步骤：

a、按下列摩尔比称取原料：

10-羟基喜树碱1份，精氨酸1-10份；

b、将10-羟基喜树碱溶于无水溶剂中(如二甲亚砜)，在室温下加入精氨酸，充分搅拌使其完全溶解，避光反应1小时，酚羟基与精氨酸氨基缔合成盐；

c、加入丙酮，使其沉淀析出，干燥，得10-羟基喜树碱精氨酸盐。

进一步地，a步骤所述原料摩尔比为：10-羟基喜树碱1份，精氨酸1～7份。

上述方法，由于是在无水条件下，10-羟基喜树碱内酯未被打开，酚羟基与精氨酸氨基缔合成盐，加入丙酮后使其析出，干燥，得10-羟基喜树碱精氨酸盐。

该工艺的关键是反应溶剂无水及L-精氨酸的用量。反应中应注意避光，参与反应的10-羟基喜树碱一定要处于内酯环状态。当加入过量的精氨酸后10-羟基喜树碱仍然可以以分子间氢键方式结合多余的精氨酸。从而形成一种大分子的复合物。经采用HPLC测定结果显示，n在1-7之间，其在乙醇、甲醇中的溶解性随着缔合程度的增加，溶解度也相应增加。

本发明还提供了10-羟基喜树碱精氨酸盐在制备抗肿瘤药物中的用途。

以10-羟基喜树碱精氨酸盐为有效药物成分，与药物中可以接受的相应药用辅料或载体等辅助添加成分组合，并按相应的制药方法加工，可制成为相应的剂型的药物制剂。例如，与口服制剂中可以被接受的崩解剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂、填充剂等常用的辅助添加成份混合后，按相应的常规工艺方法处理，即可制成为片剂、丸剂、胶囊剂或适当形式的缓释剂、控释剂等固体制剂形式的口服药物；与常用的增溶剂、乳化剂、润湿剂、起泡或消泡剂等表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、乳化剂、润湿剂、起泡或消泡剂等表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、增稠剂等混合，按相应的常规工艺方法处理，即可制成为水剂、糖浆等液体制剂形式的口服药物或口含制剂。与注射药物中允许使用的适当溶剂和/或附加剂配合并按相应的工艺操作处理后，即可以制备成相应的水针或粉针等肌肉或静脉形式的注射制剂药物。还可以制备成包括普通皮肤粘膜用药、滴眼剂、滴鼻剂或滴耳剂等适当形式的外用制剂。

所述药物组合物为口服制剂、注射型制剂或外用制剂。其中，所述注射型制剂为注射液或冻干粉针；所述外用制剂为：口腔贴片、栓剂、滴眼剂、滴鼻剂或滴耳剂。

本发明所制得的10-羟基喜树碱精氨酸盐具有以下特点：

1、该盐的毒性比10-羟基喜树碱钠盐明显降低，其LD₅₀是羟基喜树碱的2.05倍(10-羟基喜树碱钠盐LD₅₀其为104mg/kg，10-羟基喜树碱精氨酸盐为213.2mg/kg)，临床应用更安全。

2、该盐的抑肿瘤活性较强。对ECA(艾氏腹水癌)有显著的抑制作用，HCTP(3mg/kg)对小鼠生命延长率到194％，而10-羟基喜树碱精氨酸盐(3mg/kg按HCTP计)对小鼠生命延长率为315％。10-羟基喜树碱精氨酸盐对S₁₈₀(肉瘤)和HEPA(腹水性肝癌)治疗疗效也优于等剂量的HCTP，对S₁₈₀小鼠生命延长率到104％(HCTP为82％)，对HEPA小鼠生命延长率为205％(HCTP为103％)。结果显示该盐的抗肿瘤活性比10-羟基喜树碱稍强。

3、该盐的溶解性比羟基喜树碱好，与羟基喜树碱钠盐相似，在乙醇，甲醇和水中的溶解度明显增强，可制备高浓度的溶液。

以下通过具体实施例的方式对本发明做进一步详述，但不应理解为是对本发明的限制，本领域技术人员凡基于上述技术思想，结合本领域公知常识所作的各种形式的修改、替换、变更均属于本发明。

具体实施方式

实施例1  本发明10-羟基喜树碱精氨酸盐(n＝1)的制备

取10-羟基喜树碱728mg加二甲亚砜100ml，置水浴中加温使溶解，在回流搅拌下加入L-精氨酸348mg，继续回流至溶液澄明，减压下回收二甲亚砜，干涸物加甲醇25ml加热回流溶解，过滤，滤液加丙酮250ml，静置，避光反应，过滤，沉淀于60℃减压干燥即得黄色粉末状沉淀。

对所得到产物进行了下属的结构分析鉴定试验：在200-500nm波长范围内扫描，在210，266，367，383nm波长处有最大吸收，主要为羟基喜树碱芳杂环共轭吸收。

红外吸收光谱：KBr压片，用Nicolet FourierTransform IR型光谱仪检测，聚苯乙烯薄膜进行校正。特征吸收峰(cm^-1)：

3170(υN-H)，1740(内酯)，1655，1641，1625，1600(υC＝O，C＝N，C＝C，)，1553(υas COO^-)，1406(υs COO^-)，1262(υC-O)

核磁共振光谱：在Bruker Avance 600核磁共振光谱仪检测：

¹H-NMR光谱的化学位移(ppm)质子数及归属解析：

8.48(1H，s，C7-H)，8.02(1H，d，J＝8.8HZ，C12-H)，7.80(1H，s，C9-H)，7.42(1H，d，J＝8.8，C11-H)，7.28(1H，s，C14-H)，5.43(2H，s，C17-H)，5.23(1H，s，C5-H)，3.02～3.10(3H，m，argC2，C3-H)，1.62～1.91(2H，m，C19-H)，1.45～1.60(4H，m，argC4，C5-H)，0.889(3H，t，J＝8HZ，C18-H)

¹³C-NMR光谱的化学位移(ppm)质子数及归属解析：

174.41(arg-C1)，173.13(C21)，157.82(arg-C6)，157.34(C16a)，157.02(C15)，150.58(C2)，150.01(C13)，146.65(C3)，142.94(C7)，131.03(C6)，130.35(C12)，130.05(C11)，129.60(C10)，123.40(C8)，118.52(C16)，109.20(C9)，96.30(C14)，79.80(C20)，55.66(C17)，55.25(arg-C2)，50.46(C5)，41.02(arg-C5)，39.87(C18)，31.75(arg-C3)，30.97(C19)，25.77(arg-C4)

质谱分析：采用HP1101色质联用仪，主要负离子ESI-MS峰归属如下：

537.4[M-H]^-，363.2[C₂₀H₁₅N₂O₆]^-，319.2[C₁₉H₁₅N₂O₃]^-

上述产物的分子式组成为C₂₆H₃₀N₆O₇；由质谱图分子离子峰538.4即为其分子量；由¹H-NMR谱的化学位移、裂分情况及质子数目，以及¹³C-NMR谱，并结合紫外和红外图谱的综合解析证明其结构为式(II)形式。

本品茚三酮反应呈阳性，加酸后析出羟基喜树碱，经HPLC检查和羟基喜树碱保留时间不一致，在酸性条件下进行TLC检查有精氨酸斑点。通光光谱分析证明为羟基喜树碱精氨酸盐。

羟基喜树碱精氨酸盐。

实施例2  本发明10-羟基喜树碱精氨酸盐(n＝6)的制备

分别取L-精氨酸240mg，1.70g，加二甲亚砜100ml，置水浴中加温使溶解，在回流搅拌下加入10-羟基喜树碱500mg，继续回流至溶液澄明，减压下回收二甲亚砜，干涸物加甲醇25ml加热回流溶解，过滤，滤液加丙酮250ml，静置，避光反应，过滤，沉淀于60℃减压干燥即得黄色粉末状沉淀。本品茚三酮反应呈阳性，经HPLC检查和羟基喜树碱保留时间不一致。采用酸性流动相进行分析，出现与羟基喜树碱保留时间一致的谱峰。在酸性条件下进行TLC检查有精氨酸斑点，即在中性条件下结合成盐，在酸性条件下分解为羟基喜树碱和精氨酸。

实施例3  10-羟基喜树碱精氨酸盐注射液制备

R_X1：    100ml:50mg

羟基喜树碱精氨酸盐    0.5g(由实施例1制备)

氯化钠           8.5g

0.1M氢氧化钠     适量

注射用水         1000ml

称取处方量的羟基喜树碱精氨酸盐，加注射用水500ml溶解后，加氯化钠8.5g，搅拌使溶解，用0.1M氢氧化钠调PH至9.2，加注射用水至1000ml，过滤，分装即得。

实施例4  10-羟基喜树碱精氨酸盐冻干粉针剂制备

取10-羟基喜树碱精氨酸盐(由实施例1制备)1.10g，加注射用水50ml溶解，加市售20％甘露醇注射液300ml，搅拌均匀，再加注射用水至1000ml，除菌过滤，测含量，分装，2ml/瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，贴标签。

实施例5  10-羟基喜树碱精氨酸盐片剂制备

R_X1：    1片:5mg

羟基喜树碱精氨酸盐    5g(由实施例1制备)

淀粉      500g

淀粉浆    24g

干淀粉    23g

共制成    1000片

将羟基喜树碱精氨酸盐过80目筛，与淀粉混匀，加淀粉浆制成软材，以14目筛制粒，置70～80℃干燥后于12目筛整粒，加入干淀粉及硬脂酸镁混匀后，压片，即得。

实施例6  10-羟基喜树碱精氨酸盐胶囊剂制备

R_X1：                 1粒:5mg

羟基喜树碱精氨酸盐    5g(由实施例1制备)

淀粉                  250g

共制成                硬胶囊剂1000个

淀粉干燥，过120目筛，与羟基喜树碱精氨酸盐最细粉按等量递加法混合，过两次120目筛，充分混合均匀，送检合格后，填入胶囊中，即得。

实施例7  10-羟基喜树碱精氨酸盐栓剂制备

R_X1：                 1粒:10mg

羟基喜树碱精氨酸盐    1g(由实施例2制备)

半合成脂肪酸脂        适量

共制成                100粒

取羟基喜树碱精氨酸盐研细过100目筛备用，另取半合成脂肪酸脂在水浴上熔化(水温60℃为宜)，加入羟基喜树碱精氨酸盐细粉，搅拌至混悬均匀，注入栓模中稍溢，冷却后削去多于基质，取出包装即得。

实施例8  10-羟基喜树碱精氨酸盐滴眼剂制备

R_X1：                 10ml:10mg

羟基喜树碱精氨酸盐    1g(由实施例2制备)

硼酸                  19g

硼砂                  0.38g

硫柳汞                0.04g

灭菌蒸馏水            加至1000ml

取灭菌蒸馏水适量，煮沸，加入硼酸、硼砂使溶解，冷至60℃，加入羟基喜树碱精氨酸盐、硫柳汞搅拌使溶解，滤过，自滤器上添加适量灭菌蒸馏水至1000ml，检查澄明度合格后，分装。

以下通过试验例的方式对本发明的有意效果进一步详述。

试验例1  羟基喜树碱精氨酸盐中羟基喜树碱与精氨酸的摩尔比

采用高效液相色谱法分析羟基喜树碱精氨酸盐中羟基喜树碱与精氨酸的摩尔比。

称取羟基喜树碱对照品和羟基喜树碱精氨酸盐(实施例1和2制备)各15mg，加水溶解并稀释至100ml，十八烷基硅烷键合硅胶柱(C₁₈)，流动相甲为甲醇-0.4％磷酸(57∶43)pH值2.5，紫外检测波长为342nm，流速1ml/min。测定结果显示，羟基喜树碱与精氨酸之比按摩尔比分别为1∶1、1∶6。

试验例2  毒性试验

取小鼠50只，称重标记，按分层随机分组法分成5组，每组10只。每组注射一个剂量的羟基喜树碱精氨酸盐，观察小鼠的死亡情况，记录。

实验结果，10-羟基喜树碱水合精氨酸盐的LD50(n＝6)，分别为253.2，LD50(n＝1)为243mg/kg。

试验例3  药效试验

实验方法：取接种ECA(艾氏腹水癌)、S₁₈₀肉瘤和HEPA(腹水性肝癌)小鼠，分别随机分为A、B、C 3组。接种瘤细胞24h后腹腔给药。A组(对照组)单用生理盐水，B组单用HCPT(10mg/kg)，C组用羟基喜树碱精氨酸盐(n＝6)(10mg/kg)。每组实验均重复3次。

观察指标：①每组小鼠的体质量变化及生存天数，计算生命延长率(％)＝(治疗组生存天数-对照组生存天数)/治疗组生存天数×100％]。②实验进行到第60天终止，计数存活的小鼠数量，小鼠生存超过60天视为治愈[治愈率(％)＝生存超过60天的小鼠数/小鼠总数×100％]。

实验结果：对ECA(艾氏腹水癌)有显著的抑制作用，HCTP(3mg/kg)对小鼠生命延长率到194％，而10-羟基喜树碱精氨酸盐(3mg/kg按HCTP计)对小鼠生命延长率为315％。10-羟基喜树碱精氨酸盐对S180(肉瘤)和HEPA(腹水性肝癌)治疗疗效也优于等剂量的HCTP，对S180小鼠生命延长率到104％(HCTP为82％)，对HEPA小鼠生命延长率为205％(HCTP为103％)。

试验例4  溶解性试验

分别称取实施例2制备得到的羟基喜树碱盐一定量，加入一定容量的溶剂，在25±2℃，每隔5分钟振摇30秒钟，30分钟内观察溶解情况，如看不见溶质颗粒时，即认为完全溶解，结果如表1：

表1溶解性试验

上述结果表明本发明10-羟基喜树碱精氨酸盐易溶于水、甲醇、乙醇，可制备高浓度的溶液，易于人体吸收，并利于临床应用。

总之，本发明提供的10-羟基喜树碱精氨酸盐，水溶性明显比10-羟基喜树碱增强，克服了喜树碱钠盐毒性强，稳定性差等缺点，为肿瘤患者提供一种疗效可靠、用药安全、价格低廉的药物。

Claims (10)

1.一种10-羟基喜树碱精氨酸盐，其特征在于：具有如式(I)结构：

其中n＝1～7。

2.根据权利要求1所述的10-羟基喜树碱精氨酸盐，其特征在于：n＝6。

3.一种制备权利要求1或2所述的10-羟基喜树碱精氨酸盐的方法，其特征在于：包括以下步骤：

a、按下列摩尔比称取原料：

10-羟基喜树碱1份，精氨酸1-7份；

b、将10-羟基喜树碱溶于二甲亚砜，在室温下加入精氨酸，充分搅拌使其完全溶解，避光反应，酚羟基与精氨酸氨基缔合成盐；

c、加入丙酮使其析出，干燥，得10-羟基喜树碱精氨酸盐。

4.根据权利要求3所述的制备10-羟基喜树碱精氨酸盐的方法，其特征在于：a步骤所述原料摩尔比为：10-羟基喜树碱1份，精氨酸6份。

5.权利要求1或2所述的10-羟基喜树碱精氨酸盐在制备抗肿瘤药物中的用途。

6.抗肿瘤药物组合物，其特征在于：它是由权利要求1或2所述的10-羟基喜树碱精氨酸盐的一种或多种为活性成分加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成。

7.根据权利要求6所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于：所述药物组合物为口服制剂、注射型制剂或外用制剂。

8.根据权利要求7所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于：所述口服制剂为：片剂、丸剂、胶囊剂、水剂或糖浆。

9.根据权利要求7所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于：所述注射型制剂为注射液或冻干粉针。

10.根据权利要求7所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于：所述外用制剂为：口腔贴片、栓剂、滴眼剂、滴鼻剂或滴耳剂。