CN101456881A - 木犀草素及其衍生物的铂类配合物、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了涉及医药技术领域中一类新的具有药用价值的木犀草素或其衍生物与铂的配合物及其盐类，其化学结构式如式(I)或(II)，本发明还公开了涉及了一种前述配合物及其盐类的制备方法和所述配合物及其盐类在制备治疗癌症的药物方面的用途。

Description

木犀草素及其衍生物的铂类配合物、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一类木犀草素及其衍生物的铂类配合物、制备方法及其应用。

背景技术

癌症(恶性肿瘤)是目前威胁人类生命的最主要的疾病之一。近年来肿瘤的发病率和死亡率急剧上升，世界卫生组织曾披露的肿瘤发展趋势表明，从1996年以来全球每年新确诊的肿瘤患者均在1030万以上，到1999年底全球肿瘤患者总数已逾4000万人，全世界每年约有700万人死于各种肿瘤，2001年世界肿瘤发病率和死亡率比1990年上升了22％，是仅次于心血管疾病的第2大死因。通过我国卫生部较为系统的国家卫生服务调查分析报告结果表明，我国全国肿瘤患数量达到286.5万人左右，同时每年约有212.7万名新增肿瘤患者，全国肿瘤死亡人数每年约有154万人左右。

目前临床上抗肿瘤药物的主要分为烷化剂、抗代谢药、金属铂类、植物生物碱和其它天然药、细胞毒素类抗生素等。铂类抗肿瘤药是一类最重要的抗肿瘤药物，是20世纪60年代开发的新型抗肿瘤药。与传统的细胞毒类抗肿瘤药物的重要区别是，其作用机制独特，抗肿瘤的选择性好。其主要作用靶点为DNA，作用于DNA链间及链内交链，形成DDP～DNA复合物，干扰DNA复制，或与核蛋白及胞浆蛋白结合，属周期非特异性药。现已相继成功开发了顺式-二氯二氨合铂即顺铂(Cisplatin)、顺式-1，1-环丁烷二羧酸二氨铂即卡铂(Carboplatin)、(Z)—二氨(羟基乙酸-O₁，-O₂)铂即奈达铂(Nedaplatin)、1R—反式—(1，2—环已二胺—N，N′)[草酸(Z—)—O，O′]合铂即奥沙利铂(Oxaliplatin)、顺式-[(4R，5R)-4，5-双(氨甲基)-2-异丙基1，3-二恶烷](双齿)铂即舒铂(Sunpla)和1，2二氨甲基-环丁烷-乳酸合铂即洛铂(Lobaplatin)等，铂类抗肿瘤药具有抗肿瘤谱广、作用强等特点，而且铂类抗肿瘤药还与其它抗肿瘤药物有很好的协同作用，不但提高了对已有肿瘤的抑制率，而且扩大了抗肿瘤谱，由此巩固了铂类抗肿瘤药在临床治疗中的地位。1995年WHO对上百种抗肿瘤药物进行排名，顺铂在疗效及市场等方面的综合评价位于第二位。有统计数据表明，我国所有的化疗方案中有70％～80％以铂为主或有铂类药物参加配伍。

但目前铂类抗肿瘤药物存在毒性较大，如骨髓抑制、肾脏毒性、神经损伤等，溶解度不好、抗癌谱相对较窄、还有耐药性等缺点。因此，设计和合成新型的铂类抗肿瘤药物仍是现在抗癌药研究的主要方向之一(M A Jakuper，M.Galanski，B.K.Keppler.Tumour-inhibitingplatinum complexes-state of art and future perspectives.Rev Physiol BiochemPharmacol，2003；146：1-53)。

中药中有很多具有抗肿瘤、解毒作用的成分。近两年为减少铂类化疗药物的毒副作用、提高疗效、减少肿瘤复发和避免抗药性的产生，把中药中的有效成分与铂结合寻找新药是一个新的开发方向，这类化合物的水溶性好、毒性低、抗肿瘤作用强的特点，可有效解决上述问题。如中药斑蝥的有效成分斑蝥素与铂配合物的研究(ZL 97102797.8、200510085430.9)，经过临床前的动物试验研究，显示了较好的抗肿瘤效果和较低的副作用。另外，还有使用中药有效成分与铂类联合用药的研究，如将木犀草素与铂类药物进行联合应用(专利申请号：200610074209.8)，具有协同抗肿瘤作用，且减少两者用量，减低其毒副作用。

木犀草素(luteolin)属于黄酮类化合物，主要存在于木犀草、金银花、白毛夏枯草、辣椒等天然药物、蔬菜和果实中。其化学名为3’，4’，5，7一四羟黄酮，分子式为C₁₅H₁₀O₆，分子量为286.2，结构式如下：

文献报道木犀草素具有抗菌、抗炎、保护心血管、解痉、祛痰、抑制酶活性、免疫调节、抗氧化、抗辐射、利尿、利胆等药理作用。目前研究证实木犀草素对多种实体瘤、腹水癌和白血病细胞都有显著抑制作用，既可以直接专用于肿瘤细胞干扰细胞代谢，抑制细胞生长，又可以增强肌体免疫功能，发挥抗肿瘤作用(李星霞。木犀草素的药理活性研究。中国药房，2007；18：1421—1424)。利用这些作用与铂类药物联合使用或形成配合物使用将得到更好的治疗效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一类木犀草素及其衍生物的铂类配合物，其结构式为：

或

式(II)中R可以为H，

R₃NR₄R₅，但不限于这些取代基。

其中R₁可以为(CH₂)_n，n＝1-4；R₂可以为H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，羟甲基、羟乙基、羟丙基，但不限于这些取代基。

R₃＝(CH₂)_n，n＝1-4；R₄和R₅＝H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，但不限于这些取代基。

A₁和A₂可以是H、Na⁺、K⁺、NH₄ ⁺，优选H、Na⁺，A₁和A₂可以相同或不同。

当R为H时，且A₁和A₂均为H，结构式(II)即为式(I)；A₁和A₂为Na⁺、K⁺、NH₄ ⁺时，式(II)即为式(I)的钠盐、钾盐或铵盐。

当R为哌嗪衍生物

时，R₁可以为(CH₂)_n，n＝1-4，优选1-2；R₂可以为H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，羟甲基、羟乙基、羟丙基，优选甲基、乙基、异丙基、羟乙基，但不限于这些取代基。A₁和A₂可以为H、Na⁺、K⁺、NH₄ ⁺，优选H、Na⁺，A₁和A₂可以相同或不同。

当R为R₃NR₄R₅时，R₃可以为(CH₂)_n，n＝1-4，优选1-2；R₄和R₅可以为H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，但不限于这些取代基。R₄和R₅可以相同或不同，优选H、甲基、乙基、丙基。A₁和A₂可以为H、Na⁺、K⁺、NH₄ ⁺，优选H、Na⁺，A₁和A₂可以相同或不同。

本发明另一目的为提供一种前述化合物的制备方法。

一、式(I)的制备方法如下：

(1)先将氯亚铂酸钾合成中间体二碘二氨合铂，具体合成路径及化学反应式如下：

(2)再将合成的二碘二氨合铂与木犀草素(C₁₅H₁₀O₆)合成木犀草素合氨络铂，具体合成路径及化学反应式如下：

二碘二氨合铂制备的具体步骤：

先将氯亚铂酸钾合成中间体二碘二氨合铂：取含有20g氯亚铂酸钾(K₂(PtCl₄)，48mmol)水溶液，与4-10倍量的KI饱和溶液混合，水浴加热，反应溶液成黑色，加入2-4倍量的氨水(1：1)，形成深黑黄色结晶，溶液为无色溶液，过滤，用冷水洗涤，再用冰冷的乙醇和乙醚洗涤，空气干燥，得到二碘二氨合铂(Pt(NH₃)₂I₂)。

KI饱和溶液用量优选4-6倍量。

木犀草素合氨络铂制备的具体步骤：

将合成的二碘二氨合铂与木犀草素合成木犀草素合氨络铂：依次加入12.5g二碘二氨合铂(Pt(NH₃)₂I₂，26mmol)、2—4倍量AgNO₃溶液，过滤除去AgI。向滤液中加入1-1.2倍量木犀草素，避光、加热搅拌20-50小时，反应混合物过滤后，得溶液，减压浓缩析出固体，过滤得到棕黑色固体，少量水洗，避光空气干燥，得到木犀草素合氨络铂。

二、式(II)的制备方法如下：

(一)R＝H时：

取制备式(I)所得木犀草素铂配合物适量，加入2-6倍量氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液搅拌溶解，再加入2-6倍量乙醇，静置，过滤并用乙醇洗涤，得木犀草素合氨络铂钠盐或钾盐。

(二)R＝为

时：

①取适量氯亚铂酸钾加水搅拌溶解，称取4-10倍量碘化钾投入反应液中，在20-40℃水浴下反应1-4小时，得黑色溶液(碘亚铂酸钾)。再加入2-3倍量氨水(1：1)，继续反应2-4小时，过滤，并用水、乙醇、乙醚洗涤，干燥得黄色粉末，即二碘二氨合铂〔Pt(NH₃)₂I₂〕。

②取步骤①制得的二碘二氨合铂〔Pt(NH₃)₂I₂，〕适量、加入2—4倍量AgNO₃溶液，于20-40℃下反应24-36小时。滤除碘化银沉淀，并用水洗涤，得[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液。

③取木犀草素溶解于无水乙醇中，搅拌下加入1-1.2倍摩尔量的醛水溶液和哌嗪衍生物，20-40℃下反应5-10小时，冷却至有固体生成，滤集固体，重结晶，得到木犀草素与哌嗪衍生物的缩合物。

④取步骤②制备的[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液，加入1-1.2倍量步骤③制备的缩合物(用4-8倍量的氢氧化钠或氢氧化钾溶液溶解)，60-80℃反应24-48小时，再加入2-6倍量乙醇，静置、过滤并用乙醇洗涤、干燥，得木犀草素哌嗪基衍生物合氨络铂钠盐或钾盐。

⑤将步骤④制备的木犀草素哌嗪基衍生物合氨络铂钠盐或钾盐溶于水，加入2-4倍量的盐酸溶液，搅拌、静置，有沉淀生成，过滤并用水、乙醇、乙醚洗涤，得产物哌嗪基衍生物木犀草素合氨络铂。

(三)当R为R₃NR₄R₅时：

①取适量氯亚铂酸钾加水搅拌溶解，称取8-14倍量碘化钾投入反应液中，在20-40℃下反应1-4小时，得黑色溶液(碘亚铂酸钾)。再加入2—4倍量氨水(1：1)，继续反应2-4小时，过滤，并用水、乙醇、乙醚洗涤，抽干得黄色粉末，即二碘二氨合铂〔Pt(NH₃)₂I₂〕。

②取步骤①制得的二碘二氨合铂〔Pt(NH₃)₂I₂，〕适量、加入2—4倍量AgNO₃溶液，于20-40℃下反应24-36小时。滤除碘化银沉淀，并用水洗涤，得[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液。

③取木犀草素溶解于无水乙醇中，搅拌下加入等摩尔的R₃CHO水溶液和R₄R₅NH，20-40℃下反应5-10小时，冷却至有固体生成，滤集固体，重结晶，得到缩合物。

④取步骤②制备的[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液，加入1-1.2倍量步骤③制备的缩合物(用4-8倍量的氢氧化钠或氢氧化钾溶液溶解)，60-80℃反应24-48小时，再加入2-6倍量乙醇，静置、过滤并用乙醇洗涤、干燥，得8—取代胺基烷基木犀草素衍生物合氨络铂钠盐或钾盐。

⑤将步骤④制备的8—取代胺基烷基木犀草素衍生物合氨络铂钠盐或钾盐溶于水，加入2-4倍量的盐酸溶液搅拌，静置，有沉淀生成，过滤并用水、乙醇、乙醚洗涤，得8—取代胺基烷基木犀草素衍生物合氨络铂。

上述制备方法中提及的用量均为摩尔比。

本发明目的之三为提供所述铂类配合物在制备治疗癌症的药物方面的用途。

本发明还提供含有本发明铂配合物的药物组合物，本发明所述铂配合物还可包括其药学上可接受的盐，溶剂化物和相应的结晶形态的物质。

本发明的药物组合物必要时可含有药物可接受的载体。本发明的组合物，在制成药剂时可以制成任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂、缓释制剂、控释制剂。本发明的制剂，优选注射剂型，如：冻干粉针剂、无菌粉针、小水针、大输液、注射用乳剂等。

本发明的药物组合物，在制成药物制剂时，可按照制剂学常规技术制备。

本发明的药物组合物，在制成药物制剂时，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，如黏合剂、填充剂、稀释剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、湿润剂和包衣剂等。

适用的填充剂包括纤维素、甘露醇、乳糖和其他类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。

可通过混合、填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、口服液、乳剂、糖浆剂，或者可以是一种在使用前可用水或其他适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、硬质酸铝凝胶或氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的调味剂和着色剂。

对于注射剂，制备的液体剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水分除去。

本发明的药物制剂，在制备成药剂时可选择性地加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的药物载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠、一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖酐、淀粉、蔗糖、甘露醇、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的药物制剂在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服1—3次，每次可1—3剂。

本发明的药物组合物，可以是单位剂量形式，在制成药剂时，单位剂量的药剂可含有本发明的铂配合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、和相应的结晶形态的物质0.1—1000mg，占单位制剂总重量的0.1-99.9％，其余为药学上可接受的载体。药学上可接受的载体以重量计可以是制剂总重量的0.1-99.9％。

本发明的铂配合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、和相应的结晶形态的物质可以是它们的碱金属、碱土金属或铵类物质的盐，如果必要，也可以是酸式盐，如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、甲磺酸、苯磺酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、丁二烯酸、乳酸、乳糖酸、富马酸等药学上常用的酸形成的盐。溶剂化物可以是水合物，包括一水合物、二水合物、三水合物等。

本发明所用原料的纯度只要达到化学纯以上即可，来源均可从市场购得。

发明人发现所合成的目标配合物体内外具有明显的抑癌作用，活性优于现有药物顺铂，且毒性降低，可以应用其治疗癌症。

具体实施方式

下面的实施例、试验例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。

〔实施例1〕制备二碘二氨合铂

取氯亚铂酸钾20g(48mmol)加水1000ml在三口烧瓶中搅拌溶解，称取碘化钾47g(283mmol)投入反应液中，在氮气保护、避光室温反应2小时，得黑色溶液(碘亚铂酸钾)。取16ml浓度为7.5mmol/ml氨水(120mmol)，继续避光室温反应2小时，过滤，并用水(30ml×2次)、乙醇(30ml×2次)、乙醚(30ml×2次)洗涤，抽干得黄色粉末，即二碘二氨合铂Pt(NH₃)₂I₂共21.129g，收率93.4％。

〔实施例2〕[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂

取硝酸银8.16g(48mmol)和纯净水240ml投入到500ml茄瓶中搅拌，加入实施例1制备二碘二氨合铂共11.592g(24mmol)，通入氮气保护、避光、室温反应24小时。滤除碘化银沉淀，并用水(20ml×3次)洗涤，得[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液。

〔实施例3〕制备木犀草素合氨络铂(II)

取实施例1制备的二碘二氨合铂12.5g(26mmol)，加入9.3g AgNO₃(55mmol)AgNO₃溶液，过滤除去AgI。向滤液中加入7.5g(26mmol)木犀草素，避光60±5℃搅拌35小时，反应混合物经硅胶藻土层过滤后，得溶液，减压浓缩至150ml，过滤得到棕黑色固体，少量水洗，避光空气干燥，得到木犀草素合氨络铂10.9g，收率82％。

红外光谱3424(NH)，1651(C＝O)，549(Pt-O)

元素分析理论值：C(％)35.09；H(％)2.73；N(％)5.46

实测值：C(％)35.17；H(％)2.66；N(％)5.53

〔实施例4〕木犀草素合氨络铂钠盐

取实施例3所得木犀草素铂配合物0.513g(1mmol)，加入3ml2Mol/L氢氧化钠溶液搅拌溶解，继续反应1小时，加入10ml无水乙醇，析出沉淀，静置2小时，过滤并用无水乙醇洗涤3次、乙醚洗涤2次，得木犀草素合氨络铂钠盐0.49g，收率为88.3％。

红外光谱

3429(NH)，1657(C＝O)，558(Pt-O)

元素分析理论值：C(％)32.32；H(％)2.15；N(％)5.03

实测值：C(％)32.20；H(％)2.27；N(％)5.01

〔实施例5〕制备8-乙基哌嗪亚甲基木犀草素二氨合铂(II)

取木犀草素12.2g(42mmol)，室温下溶解于750ml无水乙醇中，搅拌下加入甲醛(45mmol)水溶液，5.12g(45mmol)乙基哌嗪，室温下反应5小时，冰浴冷却至5℃有大量固体生成，用丙酮重结晶，得8-乙基哌嗪亚甲基木犀草素10.5g。取8-乙基哌嗪亚甲基木犀草素10.4g(25.2mmol)，加入200ml0.5Mol/L氢氧化钠溶液(100mmol)搅拌溶解，加入实施例2制备的[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液25mmol，通入氮气保护、避光、60℃反应24小时。将反应液冷却至5℃，加入105ml0.5mol/L盐酸溶液(52.5mmol)搅拌30分钟，静置2小时，有大量沉淀生成，过滤并依次用水(50ml×2次)、乙醇(50ml×2次)、乙醚(50ml×2次)洗涤，得产物共7.9g，收率为51.5％。

红外光谱

3420(NH)，1658(C＝O)，573(Pt-O)

元素分析理论值：C(％)41.31；H(％)4.38；N(％)8.76

实测值：C(％)41.44；H(％)4.26；N(％)8.88

〔实施例6〕制备8-异丙基哌嗪乙基木犀草素二氨合铂(II)

取木犀草素6.1g(21mmol)，室温下溶解于300ml无水乙醇中，搅拌下加入乙醛(25mmol)水溶液，3.2g(25mmol)异丙基哌嗪，室温下反应6小时，冰浴冷却至5℃有大量固体生成，用丙酮重结晶，得8-异丙基哌嗪乙基木犀草素5.8g。取8-异丙基哌嗪乙基木犀草素5.5g(12.5mmol)，加入100ml0.5mol/L氢氧化钠溶液(50mmol)搅拌溶解，加入实施例2制备的[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液12mmol，通入氮气保护、避光、60℃反应20小时。将反应液冷却至5℃，加入55ml0.5mol/L盐酸溶液搅拌30分钟，静置2小时，有沉淀生成，过滤并用水(20ml×2次)、乙醇(20ml×2次)、乙醚(20ml×2次)洗涤，得产物共4.9g，收率为61％。

红外光谱

3424(NH)，1653(C＝O)，559(Pt-O)

元素分析理论值：C(％)43.18；H(％)4.80；N(％)8.40

实测值：C(％)43.34；H(％)4.73；N(％)8.51

〔实施例7〕制备8-羟乙基哌嗪亚甲基—木犀草素二氨合铂(II)

取木犀草素4.1g(14mmol)，室温下溶解于260ml无水乙醇中，搅拌下加入甲醛(15mmol)水溶液和羟乙基哌嗪(15mmol)，室温下反应4小时，冰浴冷却至5℃有固体生成，用丙酮重结晶，得8-羟乙基哌嗪亚甲基木犀草素3.9g。取8-羟乙基哌嗪亚甲基木犀草素3.4g(7.9mmol)，加入60ml0.5mol/L氢氧化钠溶液(30mmol)搅拌溶解，加入实施例2制备的[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液7.9mmol，通入氮气保护、避光、60℃反应15小时。将反应液冷却至5℃，加入40ml 0.5mol/L盐酸溶液搅拌20分钟，静置2小时，有沉淀生成，过滤并用水(10ml×2次)、乙醇(10ml×2次)、乙醚(10ml×2次)洗涤，得产物共2.8g，收率为55％。

红外光谱

3426(NH)，1656(C＝O)，571(Pt-O)

元素分析理论值：C(％)40.31；H(％)4.27；N(％)8.55

实测值：C(％)40.44；H(％)4.15；N(％)8.51

〔实施例8〕制备8-(N-甲基-N-乙基胺基)亚甲基—木犀草素二氨合铂(II)

取木犀草素4.3g(15mmol)，于室温下溶解于280ml无水乙醇中，搅拌下加入甲醛(18mmol)水溶液和CH₃NHCH₂CH₃(18mmol)，室温下反应5小时，冰浴冷却至5℃有固体生成，用丙酮重结晶，得8-(N-甲基-N-乙基胺基)亚甲基—木犀草素4.0g。取8-(N-甲基-N-乙基胺基)亚甲基—木犀草素3.6克(10mmol)，加入70ml0.5mol/L氢氧化钠溶液搅拌溶解，加入实施例2制备的[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液10mmol，通入氮气保护、避光、55℃反应18小时。将反应液冷却至5℃，加入45ml0.5mol/L盐酸溶液搅拌30分钟，静置2小时，有沉淀生成，过滤并用水(10ml×2次)、乙醇(10ml×2次)、乙醚(10ml×2次)洗涤，得产物共3g，收率为52％。

红外光谱3428(NH)，1657(C＝O)，555(Pt-O)

元素分析理论值：C(％)39.04；H(％)3.94；N(％)7.19

实测值：C(％)38.91；H(％)4.07；N(％)7.28

〔实施例9〕制备8-(N，N-二甲基胺基)乙基—木犀草素二氨合铂(II)

取木犀草素2.6g(9mmol)，室温下溶解于150ml无水乙醇中，搅拌下加入乙醛(10mmol)水溶液和CH₃NHCH₃(10mmol)，室温下反应4小时，冰浴冷却至5℃有固体生成，用丙酮重结晶，得8-(N，N-二甲基胺基)乙基—木犀草素2.4g。取8-(N，N-二甲基胺基)乙基—木犀草素2.3克(6.4mmol)，加入50ml 0.5mol/L氢氧化钠溶液搅拌溶解，加入实施例2制备的[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液6.5mmol，通入氮气保护、避光、65℃反应16小时。将反应液冷却至5℃加入40ml0.5mol/L盐酸溶液搅拌30分钟，静置2小时，有沉淀生成，过滤并用水(10ml×2次)、乙醇(10ml×2次)、乙醚(10ml×2次)洗涤，得产物共2.1g，收率为56％。

红外光谱3427(NH)，1653(C＝O)，564(Pt-O)

元素分析理论值：C(％)39.04；H(％)3.94；N(％)7.19

实测值：C(％)39.16；H(％)3.99；N(％)7.07

〔试验例1〕抗肝癌活性研究

取4～6周龄、体重17～20g雄性裸小鼠110只，在右腋窝皮下接种浓度为1×10⁷/ml的人肝癌细胞株单细胞悬液0.2ml，接种24小时后将小鼠随机分为11组，每组分别静脉给顺铂3、5mg/kg(阳性对照组)、等体积的生理盐水(阴性对照组)、实施例5化合物组3、5、10、15mg/kg、实施例8化合物组3、5、10、15mg/kg，连续给药隔天给药一次，给药4次，均为腹腔注射给药，10天后取出皮下瘤体称重，计算抑瘤率。抑瘤率的计算公式：

表1.目标化合物抗肝癌活性研究结果

*与顺铂5mg组比较，p<0.05

注：由于溶解度限制，静脉注射给药顺铂对裸鼠的最大给药剂量为5mg/kg。

〔试验例2〕抗卵巢癌活性研究

取体重17～20g、4～6周龄雄性裸小鼠110只，在背部皮下近腋窝处接种浓度为1×10⁸/ml的人卵巢癌细胞株单细胞悬液0.2ml，2周后将小鼠随机分为11组，每组分别静脉给顺铂3、5mg/kg(阳性对照组)、等体积的生理盐水(阴性对照组)、实施例4化合物组3、5、10、15mg/kg、实施例8化合物组3、5、10、15mg/kg，隔2天给药1次，给药4次，均为腹腔注射给药，接种后30天试验结束，取出皮下瘤体称重，计算抑瘤率。

表2.目标化合物抗卵巢癌活性研究结果

*与顺铂5mg组比较，p<0.05

〔试验例3〕毒性初步研究

取体重120～160g、6周龄大鼠100只，随机分为10组，每组分别静注顺铂5mg/kg(阳性对照组)、等体积的生理盐水(阴性对照组)、实施例4化合物组5、10、15、20mg/kg、实施例8化合物组5、10、15、20mg/kg，连续给药5天。大鼠死亡后立即解剖。试验前后观察大鼠一般情况，结束后处死大鼠，称取胸腺、脾脏湿重，取肝脏、肾脏、脊髓制作切片，HE染色后镜检，观察对这些脏器的毒性。

用药后，可观察到大鼠的摄食和活动明显减少，其中胸腺、脾脏重量见下表：

表3.目标化合物对免疫器官的影响研究结果

*与顺铂5mg组比较，p<0.05，**与顺铂5mg组比较p<0.01

〔制剂实施例1〕实施例3化合物注射液的制备

处方

实施例3化合物              20.0g

亚硫酸钠                   2.0g

加氢氧化钠溶液调PH值至     7.0～8.0

注射用水加至               2000ml

制成1000支

工艺：①取1600ml注射用水置配液缸中，加入处方全量的亚硫酸钠，搅拌至溶解；②加入处方量的实施例3化合物，搅拌，用氢氧化钠溶液调PH值至7.0～8.0，加注射用水至全量；先用0.45μm的微孔滤膜过滤，再用0.22的微孔滤膜精滤至澄明；③将滤液灌封于西林瓶中，压盖，贴标签，包装，检验合格后即得成品。

〔制剂实施例2〕实施例3化合物冻干粉针剂的制备

实施例3化合物              25.0g

甘露醇                     200.0g

用氢氧化钠溶液调PH值至     7.0～8.0

注射用水加至               3000ml

制成1000支

工艺：①取2500ml注射用水置配液缸中，加入处方全量甘露醇，搅拌至溶解；②加入处方量的实施例3化合物，搅拌并用氢氧化钠溶液调PH值至7.0～8.0，加注射用水至全量；先用0.45μm的微孔滤膜过滤，再用0.22微孔滤膜精滤至澄明；③将滤液灌封于西林瓶中；④冷冻干燥(预冻，使温度下降至—40℃，4小时后以每分钟0.15℃的升温速率将温度升至—5℃，在此温度下升华干燥16小时，再以每分钟0.4℃的升温速率将温度升至40℃，在此温度下干燥7～10小时)；⑤压盖，贴标签，包装，检验合格后即得成品。

〔制剂实施例3〕实施例5化合物冻干粉针剂的制备

实施例5化合物               25g

普朗尼克(F-68)              2g

甘露醇                      125g

注射用水加至                2500ml

制成1000支

工艺：①取2000ml注射用水置配液缸中，加入处方全量的普朗尼克(F-68)和甘露醇，搅拌至溶解；②加入处方量的实施例5化合物，搅拌至溶解，加注射用水至全量；先用0.45μm的微孔滤膜过滤，再用0.22μm的微孔滤膜精滤至澄明；③将滤液灌封于西林瓶中；④冷冻干燥(预冻，使温度下降至—40℃，4小时后以每分钟0.15℃的升温速率将温度升至—5℃，在此温度下升华干燥16小时，再以每分钟0.4℃的升温速率将温度升至40℃，在此温度下干燥7～10小时)；⑤压盖，贴标签，包装，检验合格后即得成品。

〔制剂实施例4〕实施例8化合物片剂的制备

实施例8化合物             20.0g

乳糖                      45.0g

微晶纤维素                30.0g

羧甲基纤维素钠            4.0g

硬脂酸镁                  1.0g

3％聚维酮溶液             适量

制成1000片

工艺：将实施例8化合物粉碎，过80目筛，取处方量化合物与乳糖、微晶纤维素，混合均匀，加3％聚维酮溶液制软材，过18目筛制颗粒，50℃以下通风干燥30—40分钟后整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片即得。

Claims (9)

1、一个木犀草素铂类配合物，其化学结构式如式(I)：

2、一类木犀草素衍生物铂类配合物，其化学结构式如式(II)：

其中R代表H，

R₃NR₄R₅。

R₁代表(CH₂)_n，n＝1-4；R₂代表H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，羟甲基、羟乙基、羟丙基。

R₃代表(CH₂)_n，n＝1-4；R₄和R₅代表甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基。R₄和R₅可以相同或不同。

A₁和A₂可以是H、Na⁺、K⁺、NH₄ ⁺，A₁和A₂可以相同或不同，R、A₁、A₂不同时为H。

3、权利要求2的铂配合物，当R为哌嗪衍生物时，R₁优选CH₂、CH₂CH₂；R₂优选甲基、乙基、异丙基、羟乙基。A₁和A₂优选H、Na⁺，A₁和A₂可以相同或不同。

当R为R₃NR₄R₅时，R₃优选CH₂、CH₂CH₂；R₄和R₅可以相同或不同，优选甲基、乙基、丙基。A₁和A₂优选H、Na⁺，A₁和A₂可以相同或不同。

4、权利要求1的铂配合物的制备方法，依次包括以下步骤：

(1)先将氯亚铂酸钾合成中间体二碘二氨合铂：取含有20g氯亚铂酸钾(K₂(PtCl₄)，48mmol)水溶液，与4-10倍量的KI饱和溶液混合，水浴加热，反应溶液成黑色，加入2-3倍量的氢氧化氨溶液，形成深黑黄色结晶，溶液为无色溶液，过滤，用冷水洗涤，再用冰冷的乙醇和乙醚洗涤，空气干燥，得到二碘二氨合铂(Pt(NH₃)₂I₂)。

KI饱和溶液优选4-6倍量。

(2)将合成的二碘二氨合铂与木犀草素合成木犀草素合氨络铂：依次加入12.5g二碘二氨合铂(Pt(NH₃)₂I₂，26mmol)、1-1.5倍量AgNO₃，过滤除去AgI。向滤液中加入1-1.2倍量木犀草素，避光、加热搅拌20-50小时，反应混合物过滤后，得溶液，减压浓缩析出固体，过滤得到棕黑色固体，少量水洗，避光空气干燥，得到木犀草素合氨络铂。

5、权利要求4制备所得木犀草素铂配合物适量，加入2-6倍量氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液搅拌溶解，再加入2-6倍量乙醇，静置，过滤并用乙醇洗涤，得木犀草素合氨络铂钠盐或钾盐。

6、权利要求2或3的铂配合物的制备方法，依次包括以下步骤：

(1)当R为

时：

①取适量氯亚铂酸钾加水搅拌溶解，称取4-10倍量碘化钾投入反应液中，在20-40℃水浴下反应1-4小时，得黑色溶液(碘亚铂酸钾)。再加入2-3倍量氨水，继续反应2-4小时，过滤，并用水、乙醇、乙醚洗涤，干燥得黄色粉末，即二碘二氨合铂〔Pt(NH₃)₂I₂〕。

②取步骤①制得的二碘二氨合铂〔Pt(NH₃)₂I₂，〕适量、加入1-1.5倍量AgNO₃，20-40℃下反应24-36小时。滤除碘化银沉淀，并用水洗涤，得[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液。

③取木犀草素溶解于无水乙醇中，搅拌下加入1-1.2倍摩尔量的醛水溶液和哌嗪衍生物，20-40℃下反应5-10小时，冷却至有固体生成，滤集固体，重结晶，得到木犀草素与哌嗪衍生物的缩合物。

④取步骤②制备的[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液，加入1-1.2倍量步骤③制备的缩合物(用4-8倍量的氢氧化钠或氢氧化钾溶液溶解)，60-80℃反应24-48小时，再加入2-6倍量乙醇，静置、过滤并用乙醇洗涤、干燥，得木犀草素哌嗪基衍生物合氨络铂钠盐或钾盐。

⑤将步骤④制备的木犀草素哌嗪基衍生物合氨络铂钠盐或钾盐溶于水，加入2-4倍量的盐酸溶液，搅拌、静置，有沉淀生成，过滤并用水、乙醇、乙醚洗涤，得产物哌嗪基衍生物木犀草素合氨络铂。

(2)当R为R₃NR₄R₅时：

①取适量氯亚铂酸钾加水搅拌溶解，称取8-14倍量碘化钾投入反应液中，在20-40℃下反应1-4小时，得黑色溶液(碘亚铂酸钾)。再加入2—3倍量氨水，继续反应2-4小时，过滤，并用水、乙醇、乙醚洗涤，抽干得黄色粉末，即二碘二氨合铂〔Pt(NH₃)₂I₂〕。

②取步骤①制得的二碘二氨合铂〔Pt(NH₃)₂I₂，〕适量、加入1-1.5倍量AgNO₃，20-40℃下反应24-36小时。滤除碘化银沉淀，并用水洗涤，得[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液。

③取木犀草素溶解于无水乙醇中，搅拌下加入等摩尔的R₃CHO水溶液和R₄R₅NH，20-40℃下反应5-10小时，冷却至有固体生成，滤集固体，重结晶，得到缩合物。

④取步骤②制备的[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)₂无色透明滤液，加入1-1.2倍量步骤③制备的缩合物(用4-8倍量的氢氧化钠或氢氧化钾溶液溶解)，60-80℃反应24-48小时，再加入2-6倍量乙醇，静置、过滤并用乙醇洗涤、干燥，得8—取代胺基烷基木犀草素衍生物合氨络铂钠盐或钾盐。

⑤将步骤④制备的8—取代胺基烷基木犀草素衍生物合氨络铂钠盐或钾盐溶于水，加入2-4倍量的盐酸溶液搅拌，静置，有沉淀生成，过滤并用水、乙醇、乙醚洗涤，得8—取代胺基烷基木犀草素衍生物合氨络铂。

上述制备方法中提及的用量均为摩尔比。

7、以权利要求1-3任何一项铂配合物为活性成分的药物组合物。

8、权利要求7所述的组合物，是注射剂。

9、权利要求1—3所述任一铂类配合物在制备抗肿瘤药物中的应用。