CN1974554A - 环酰亚胺类肽金属蛋白酶抑制剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
环酰亚胺类肽金属蛋白酶抑制剂及其应用。本发明提供了一类强效的类肽金属蛋白酶抑制剂，并且在内肽酶和外肽酶之间体现出显著的选择性，可有效治疗金属蛋白酶活性异常表达的疾病。具体而言，本发明涉及具有通式(I)结构的类肽化合物，还涉及其各种光学异构体，药学上可接受的盐，溶剂合物以及前药。本发明还涉及含有式(I)结构类肽化合物的药物组合物及其制药用途。
Description
技术领域
本发明涉及一类具有环酰亚胺类肽骨架的选择性抑制金属蛋白酶作用的类肽化合物的制备方法、活性试验和含该类肽化合物的组合物，以及这些组合物的用途。
背景技术
1、基质金属蛋白酶(MMPs)
MMPs是一类依赖钙离子和锌离子的内肽酶，MMPs的活性由基因表达水平和酶原激活/抑制因子的分泌水平严格控制。MMPs在细胞外基质降解、组织重建过程中起重要作用。在很多病理过程，如关节炎、组织溃烂、恶性肿瘤的生长和转移中，MMPs也起到了重要作用。
目前在哺乳动物中发现了MMPs家族的28个成员(Szabo，K.A.et al.Clinical andApplied Immunology Reviews.2004，4，295)，根据其结构、特异性底物和不同的细胞位置，分为不同的亚型，包括种胶原酶(MMP-1，-8，-13，-18)，2种明胶酶(MMP-2，-9)，3种基质降解酶(MMP-3，-10，-11)，6种膜型-基质金属蛋白酶(MMP-14，-15，-16，-17，-24，-25)，以及其他未归类的如基质溶解素(MMP-7和-26)和巨噬细胞金属弹性蛋白(MMP-12)等。其中明胶酶(MMP-2和-9)已被证明于侵袭性肿瘤的恶性表型及癌症病人的不良预后密切相关，他们参与了肿瘤细胞对基底膜、基质的侵袭，对血管壁的穿透，以及肿瘤细胞的转移。近年来研究表明，MMPs还与原发瘤和继发瘤的生长、以及血管生成有关，甚至对肿瘤增值过程亦起促进作用。因此，瞄准以这些酶为作用靶点的治疗策略也迅速发展起来，MMPs抑制剂已成为癌症治疗药物研究中的热点。
可用MMPs抑制剂治疗的例子包括：类风湿性关节炎(Mullins，D.E.；et al.Biochim.Biophys.Acta.1983，695，117)；骨关节炎(Henderson，D.；et al.Drugs ofthe Future，1990，15，495)；癌症；肿瘤细胞转移(Deryugina，E.I.；et al.Cancer Metastasis Rev.2006，25，9)；多发性硬化症(Rosenberg，G.A.et al.Ann Neurol.2001，50，431)；以及各种组织溃疡或组织溃疡性病症。如发生在角膜的溃疡可能是因碱灼伤所致，或因感染铜绿假单孢菌、Acanthamoeba、单纯性疱疹和牛痘病毒所致。
以金属蛋白酶活性过度为特征的病症的其他例子包括牙周病、大疱性表皮松懈症、发热、炎症和巩膜炎(Cf.Decicco，et al WO95/29892)。
2、氨肽酶N
氨肽酶N(APN/CD13)为依赖于锌离子的金属外肽酶，参与底物N端氨基酸的降解。正常条件下，APN在哺乳动物的肾脏、小肠以及中枢神经系统等组织中广泛低水平表达，参与机体的生理调节。研究证明，氨肽酶N在肿瘤发生、免疫功能调节以及病毒感染中发挥重要的作用。1)APN在肿瘤细胞表面高水平表达。该酶可使细胞外基质(ECM)的主要成分降解，破坏了机体的天然屏障，促进肿瘤细胞的侵袭、生长和转移，参与肿瘤新血管生成。(Saiki，I.；et al.Int.J.Cancer.，1993，54，137；Sato，Y.Biol.Pharm.Bull.，2004，772，776)。2)APN在粒细胞及淋巴细胞表面大量表达，同时也参与了T淋巴细胞依赖的炎症反应；还能够表达于抗原递呈细胞表面，降解免疫活性物质(如白介素-8)；参与抗原处理和细胞表面的主要组织相容性复合体II型(MHC-II)粘附抗原决定簇依赖的T细胞对抗原的识别，降低了T细胞的识别能力，同时削弱了巨噬细胞和NK细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤能力，使机体免疫力下降。3)APN作为人冠状病毒HCoV-229E和传染性胃肠炎病毒(TGEV)表面的受体，在上呼吸道感染(如：SARS)和急性肠炎中扮演重要角色，且其发挥作用与酶的活性相关(Delmas，B.，et al.Nature，1992，357，417；Yeager，C.L.；etal.Nature，1992，357，420)。4)APN参与HIV病毒颗粒进入宿主细胞的过程。研究表明，在感染HIV的患者体内APN活性远远高于健康志愿者。在HIV-1入侵宿主细胞时，高表达的APN通过降解能够使HIV-1辅助受体CCR5脱敏的趋化因子fMLP，从而降低细胞的天然免疫功能，并使CCR5增敏，促进病毒进入宿主细胞。(Shen W，Li B，et al.Blood，2000，96(8)，2887；Shipp MA，et al.Blood，1993，82(4)，1052)5)APN参与内源性镇痛物质内啡肽和脑啡肽的降解，从而引起P物质的过度释放，导致疼痛。6)APN降解血管紧张素，参与机体血压的调节(Mitsui，T.；et al.Biol. Pharm.Bull.，2004，27，768.)。
90年代以来，开发出许多MMPs抑制剂，大多数为肽或肽的类似物，对酶的降解比较敏感，另外由于大多数具有长链结构，所含的可旋转单键数目比较多，因此对同家族中的成员选择性不好，这也是大多数MMPs抑制剂在临床阶段被枪毙的原因所在。另外针对APN的抑制剂多为天然产物，唯一一个上市的药物乌苯美司具有含β-氨基酸的类二肽结构，目前作为免疫增强剂用于白血病的治疗，但由于是从橄榄网状链霉菌(Streptomycesolivorecticuli)的培养液中分离得到，来源有限。目前文献中所报道的金属蛋白酶抑制剂并没有考虑到对这两者(内肽酶和外肽酶)的选择性问题，因此从作用机制方面没有做深入的探讨。
众所周知，由于多肽分子一般都存在着溶解度小、生物利用度低、代谢稳定性差，极易被体内广泛存在的各种肽酶降解等缺点而限制了其临床应用，类肽(Peptidomimetics，又名肽类似物或肽模拟物)由于其自身的优点有望取代多肽而成为新型的抗肿瘤、抗病毒药物设计与开发的策略：一方面，类肽具有底物的内在活性，可以通过识别酶的活性中心来抑制酶的活性，同时提高对靶部位的选择性和效能；另外，类肽与天然肽类底物存在着结构上的差异不易被肽酶降解，生物稳定性和利用度高，且化合物的作用时间长；另一方面，类肽可以模拟配体的天然构象，与受体的结合部位相匹配，发挥其激动剂或拮抗剂的作用。总之，类肽设计策略为新药设计与开发提供了一个有效的途径，同时也将成为抗肿瘤、抗HIV药物开发的热点领域。
本发明将MMP和APN结合起来进行研究，由于基质金属蛋白酶和氨肽酶N均属于锌离子依赖性水解酶，且均参与细胞外基质主要成分IV型胶原酶的降解和肿瘤新血管的生成，区别仅在于前者为分泌型内肽酶，后者为膜型外肽酶。本发明中在设计化合物时引入了类肽和构象限制策略，一方面可以提高对靶标的识别和选择性，另一方面提高对水解酶的稳定性。本项专利中涉及所设计的类肽化合物对两者的选择性问题，而且通过对类肽化合物结构的优化有望分别开发出特异性选择性抑制剂。本发明中所设计的类肽化合物对MMP的抑制活性处于微摩尔级别且体现出特异的选择性(IC50APN/IC50MMP接近150)，另外针对于APN活性筛选发现几个药物分子其活性相当于目前唯一上市的乌苯美司。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种环酰亚胺类肽金属蛋白酶抑制剂及其应用，还提供环酰亚胺类肽金属蛋白酶抑制剂的制备方法。
本发明以光学纯度谷氨酸或天冬氨酸为起始原料，在此基础上我们将没食子酸、咖啡酸、苯乙酸、阿魏酸以及非甾体抗炎药有机酸(吲哚-3-乙酸、双氯芬酸)拼合到谷氨酸或天冬氨酸母核上，形成二羧酸然后再经过环合，转化为构象限制的环酰亚胺骨架，提高对靶标的选择性。而且这些有机酸自身具有抗肿瘤活性，可以增强抑酶活性。氨基酸由于具有天然性质，因此可以提高化合物对组织的相容性。另外，也可以以光学纯的谷胺酰胺或天冬酰胺为原料，通过Boc或Cbz保护、环合、取代等步骤合成关键中间体，然后脱保护，再通过与具有生物活性的不同酰氯(如没食子酸、咖啡酸、苯乙酸、阿魏酸、非甾体抗炎药有机酸)以及氨基酸衍生物得到不同系列类二肽或类三肽。目的均是为了增强化合物与酶或受体的亲和力以及代谢稳定性。
本发明设计合成了一类具有全新结构母核的金属蛋白酶抑制剂。体外试验表明其无细胞毒活性但体现出显著的体外抑酶活性，有望成为一类非细胞毒类抗癌候选药物。
本发明的技术方案如下：
具有通式I的类肽化合物，以及其光学异构体、非对映异构体和消旋体混合物，其药学上可接受的盐，溶剂合物或前药。
其中，
R1是芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，杂芳基C2-6炔基，C1-6烷基，N端保护或未保护天然或非天然氨基酸衍生物，任选被一个或多个如下基团取代：羟基，卤素，硝基，氰基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基。
R2是氢，芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，杂芳基C2-6炔基，以及各种天然或非天然氨基酸侧链，任选被一个或多个如下基团取代：卤素，硝基，氰基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基。
R3是OH，NHOR10(这里R10是氢或C1-8烷基)，C1-8烷氧基，NHR11(这里R11是C1-8烷基，芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，杂芳基C2-6炔基，NHCH(R2)COR4(这里R4是OH或NHOR10)，任选被一个或多个如下基团取代：卤素，硝基，氰基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰，
n是1或2，
*是立体构型为S或R光学纯度或其消旋体。
优选的，R1是芳基，芳基C1-6烷基，芳基C2-6烯基，非甾体类抗炎药有机酸，N端保护或未保护天然或非天然氨基酸衍生物，任选被一个或多个如下基团取代：羟基，卤素，硝基，氰基，C1-8烷氧基；
R2是氢，以及各种天然或非天然氨基酸侧链；
R3是OH，OCH3，NHCH(R2)COR4，这里R4是OCH3或NHOH。
上述的类肽化合物(I)具体包括如下化合物：
(S)-甲基-2-(2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)乙酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-甲基丁酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-4-甲基戊酸酯
(2S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-甲基戊酸酯
(S)-甲基1-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰基)吡咯烷-2-羧酸酯
(S)-methyl 2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-5-(3-硝基胍基)戊酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-4-(甲硫基)丁酸酯
(S)-甲基6-(苄氧羰酰胺基)-2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)己酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(4-羟基苄基)丙酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸酯
(R)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-苯基丙酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-羟基丙酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-苯基丙酸酯
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-巯基丙酸酯
(S)-二甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)邻苯二甲酸酯
(S)-甲基3-氯-2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯
(S)-甲基3-(2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯
(S)-甲基2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酸酯
(S)-N-(1-(2-(羟胺基)-2-氧乙基)-2，6-二氧哌啶-3-基)-3，4，5-三甲氧苯胺。
上述通式(I)的类肽化合物中间体为：3，4，5-三甲氧基苯甲酸；3，4，5-三甲氧基苯甲酰氯；(S)-2-(3，4，5-三甲氧苯胺基)戊二酸；(S)-N-(2，6-二氧-四氢-2H-吡喃-3-基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺；(S)-2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)乙酸，(S)-叔丁基-2，6-二氧哌啶-3-基氨基甲酸酯，(S)-乙基-2-(3-(叔丁氧羰基氨基)-2，6-二氧哌啶-1-基)乙酸酯，(S)-苄基-2，6-二氧哌啶-3-基氨基甲酸酯，(S)-乙基2-(3-(苄氧羰基氨基)-2，6-二氧哌啶-1-基)乙酸酯。
上述类肽化合物的制备方法，以光学纯度酸性氨基酸为原料，在碱性条件下缩合，所得的化合物再经过脱水环合，亲核取代，多肽缩合试剂缩合等反应最终分离纯化而得；或以光学纯的谷胺酰胺或天冬酰胺为原料，通过Boc或Cbz保护、环合、取代等步骤合成关键中间体，然后脱保护，再通过与具有生物活性的不同酰氯以及氨基酸衍生物得到不同系列的类二肽或类三肽。
这些类肽化合物在预防或治疗与金属蛋白酶，包括基质金属蛋白酶或氨肽酶N，活性异常表达相关的哺乳动物疾病的药物的应用。
所述的与金属蛋白酶活性异常表达的相关哺乳动物疾病包括：炎症，癌症，多发性硬化症，各种组织溃疡或组织溃疡性病症，牙周病，大疱性表皮松懈症，白血病等。因此，本发明还涉及含有(I)结构化合物的药物组合物。
一种药物组合物，包含(1)上述任一项的类肽化合物，和(2)一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
此外，本发明还包括一种适于口服给予哺乳动物的药物组合物，包含(1)上述任一类肽化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。
此外，本发明还包括一种适于胃肠外给予哺乳动物的药物组合物，包含(1)上述任一类肽化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本发明含有通式(I)的化合物的设计首次采用了类肽和构象设计策略。类肽和构象限制策略已经被广泛应用于抗病毒、抗肿瘤药物的设计和开发领域，其结构由天然或非天然氨基酸组成类似于肽的结构，但总体构象由不同于天然的多肽物质，一方面，类肽具有底物的内在活性，可以通过识别酶的活性中心来抑制酶的活性，同时提高对靶部位的选择性和效能；另外，类肽与天然肽类物质存在着结构上的差异不易被肽酶降解，生物稳定性和利用度高，且化合物的作用时间长。
发明详述
所用的定义和术语
本文中所用的术语和定义含义如下：
“杂烷基”指饱和或不饱和、含碳原子和至少一个杂原子的链，其中任意一个杂原子不相邻。杂烷基中含有2-15个原子(碳原子)，优选含有2-10个原子。杂烷基可以是直连或支链、取代或未取代的。
“芳基”是指芳族碳环基团。优选的芳环含有6-10个碳原子。
“卤”，或“卤素”包括氟、氯、溴或碘，优选未氟和氯。
“环烷基”是取代或未取代的，饱和或不饱和的环状基团，其含有碳原子和/或一个或多个杂原子。该环可以是单环或稠环，桥环或螺环的环系。单环通常有3-9个原子，优选有4-7个原子，多环含有7-17个原子，优选含有7-13个原子。
“杂芳基”是芳族杂环，可以是单环或双环基团。较佳的杂芳基包括，例如噻吩基，呋喃基、吡咯基、吡啶基、吡嗪基、噻唑基、嘧啶基、喹啉基、以及四氮唑基、苯并噻唑基、苯并呋哺基、吲哚基等。
“药学上可接受的盐”是指式(I)化合物具有疗效且无毒的盐形式。其可由任一酸性基团(如羧基)形成阴离子盐，或由任一碱性基团(如氨基)形成阳离子盐。本领域已知许多这样的盐。在任何酸性基团(如羧基)上形成的阳离子盐，或是在任何碱性基团(如氨基)上形成的阴离子盐。这些盐由许多式本领域已知的，如阳离子盐包括碱金属(如钠和钾)和碱土金属(如镁和钙)的盐以及有机盐(如铵盐)。还可通过使用相应的酸处理碱性形式的(I)方便地获得阴离子盐，这样的酸包括无机酸如硫酸、硝酸、磷酸等；或有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、2-羟基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、2-羟基-1，2，3-丙三酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲磺酸、4-甲基苯磺酸、环己基亚磺酸、2-羟基苯甲酸、4-氨基-2-羟基苯甲酸等。这些盐式熟练技术人员熟知的，熟练的技术人员可制备本领域知识所提供的任何盐。此外，熟练技术人员可根据溶解度、稳定性、容易制剂等取某种盐而舍另一种盐。这些盐的测定和最优化在熟练技术人员的经验范围内。
“溶剂合物”是溶质(如金属蛋白酶抑制剂)和溶剂(如水)组合形成的配合物。参见J.Honig等，The Van Nostrand Chemist’s Dictionary，p.650(1953)。本发明采用的药学上可接受的溶剂包括不干扰金属蛋白酶抑制剂的生物活性的那些溶剂(例如水、乙醇、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜以及该领域技术人员所知的或容易确定的溶剂)。
本文所用的“光学异构体”、“对映体”、“非对映体”、“消旋体”等定义了本发明化合物或其生理上的衍生物所有可能的立体异构体的形式。除非另有指示，本发明化合物的化学命名包括所有可能的立体化学形式的混合物，所属混合物包含基本结构分子的所有非对映体和对映体，以及基本纯净的本发明化合物的单个异构体形式，即其中含有低于10％，优选低于5％，特别是低于2％，最优选低于1％的其它异构体。本发明类肽化合物各种立体异构体形式均明显包含于本发明的范围内。
式(I)类肽化合物还可以其它被保护的形式或衍生物的形式存在，这些形式对本领域技术人员而言是显而易见的，均应该包含于本发明的范围内。
如上所述的取代基自身还可被一个或多个取代基取代。这样的取代基包括在C.Hansch和A.Leo，Substituent Constants for Correlation Analysis in Chemistry and Biology(1979)中列出的那些取代基。优选的取代基包括，例如烷基，烯基，烷氧基，羟基，氧基，硝基，氨基，氨基烷基(如氨甲基等)，氰基，卤，羧基，羰基烷氧基(如羰基乙氧基等)，硫基，芳基，环烷基，杂芳基，杂环烷基(如哌啶基，吗啉基，吡咯基等)，亚氨基，羟烷基，芳基氧基，芳基烷基，及其结合。
合成
目标化合物经如下路线合成。
简言之，上述通式(I)的类肽化合物的制备方法，本发明以光学纯度谷氨酸或天冬氨酸为起始原料，在此基础上我们将没食子酸、咖啡酸、苯乙酸、阿魏酸以及非甾体抗炎药有机酸(吲哚-3-乙酸、双氯芬酸)拼合到谷氨酸或天冬氨酸母核上，形成二羧酸然后再经过环合，转化为构象限制的环酰亚胺骨架，提高对靶标的选择性。而且这些有机酸自身具有抗肿瘤活性，可以增强抑酶活性。氨基酸由于具有天然性质，因此可以提高化合物对组织的相容性。另外，也可以以光学纯的谷胺酰胺或天冬酰胺为原料，通过Boc或Cbz保护、环合、取代等步骤合成关键中间体，然后脱保护，再通过与具有生物活性的不同酰氯(如没食子酸、咖啡酸、苯乙酸、阿魏酸、非甾体抗炎药有机酸)以及氨基酸衍生物得到不同系列类二肽或类三肽。目的均是为了增强化合物与酶或受体的亲和力以及代谢稳定性。具体合成路线根据所要制备的某种具体的化合物结合本领域的现有技术进行设计。下面以没食子酸环酰亚胺类肽衍生物为例，说明部分该类化合物的合成路线及制备方法。
试剂：a.1)硫酸二甲酯，氢氧化钠2)盐酸；b.氯化亚砜，苯；c.L-谷氨酸，碳酸钠，2)盐酸；d.乙酸酐，55-60℃；e.甘氨酸，N，N-二甲基甲酰胺，110℃，5h；f.氨基酸甲酯盐酸盐，1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，1-羟基苯并三唑，二氯甲烷/二甲基亚砜；g.1)羟胺，氢氧化钾，甲醇2)三溴化硼，二氯甲烷，-78℃；h.氯化亚砜，甲醇；i.羟胺，氢氧化钾，甲醇。
用Me2SO4保护没食子酸的游离羟基，然后与L-谷氨酸在碱性条件下缩合，所得的(S)-2-(3，4，5-三甲氧苯胺基)戊二酸，在乙酸酐中脱水环合，所得的产物在非质子性溶剂中与甘氨酸亲核取代，再在DCM或THF中经多肽缩合剂EDCI缩合，分离纯化即得最终产物。
本领域技术人员可以对上述步骤进行变动以提高收率，他们可据本领域的基本知识确定合成的路线，如选择反应物，溶剂和温度，可以通过使用各种常规保护基以避免副反应的发生从而提高收率。这些常规的保护方法可参见例如T.Greene，Protecting Groups inOrganic Synthesis.
显然，上述路线为立体选择性合成，可通过上述路线还可制备得到其光学活性的类肽化合物。例如将原料L-谷氨酸替换为其光学异构体(R构型)。本领域技术人员可方便地获得环酰亚胺衍生物的各种其他异构体，并可通过常规的分离手段纯化，如手性盐或手性层析柱等。
MMPs抑制活性的测试描述于Vijaykumar，M.B.等，Matrix Biol.2000，19，26中。琥珀酰明胶已证明能被明胶酶(包括MMP-2，-9)水解，肽键水解产生的游离氨基浓度的高低与酶活性大小呈正相关。琥珀酸酐保护明胶中的游离氨基，水解后暴露的伯氨与2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)反应显色，通过检测450nm处的吸收度确定氨基含量，从而确定明胶酶的活性。
APN抑制活性的测试描述于Lejczak，B等.Biochemistry，1989，28，3549中。底物L-亮氨酰-p-硝基苯胺被APN降解，产生在405nm有吸收的p-硝基苯胺，并且p-硝基苯胺的浓度与酶活性的大小呈正相关。通过检测405nm处的吸收度确定p-硝基苯胺的含量，从而确定氨肽酶的活性，间接反映出抑制剂对酶活性抑制程度的大小。
通式(I)的类肽化合物的体外抑酶试验证明该类肽化合物为一种环酰亚胺类肽金属蛋白酶抑制剂
本发明的环酰亚胺衍生物在空间上与金属蛋白酶的活性位点相匹配，因此在体外显示了较高的抑制活性。而且，其可在体内代谢成活性片段，如没食子酸衍生物，仍具有抗肿瘤活性，因此在体内也显示了较高的抗肿瘤活性。
制剂，药物组合物，剂量和服用
本发明的环酰亚胺衍生物可以游离形式或以盐形式存在。本领域熟练人员已知许多化合物类型的药学上可接受的盐及其制备方法。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐，包括这样的化合物碱与无机或有机酸形成的季铵盐。
本发明的化合物可形成水合物或溶剂合物。本领域熟练人员已知将化合物与水一起冻干时所形成的水合物或在溶液中与合适的有机溶剂浓缩时形成溶剂合物的方法。
本发明包含含有治疗量本发明化合物的药物，和一种或多种药学上可接受载体和/或赋形剂的药物组合物。载体包括如盐水，缓冲盐水，葡萄糖，水，甘油，乙醇和它们的结合物，下文更详细地论述。如果需要，该组合物还可以包含较小量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。该组合物可以是液体，悬浮液，乳剂，片剂，丸剂，胶囊，持续释放制剂或粉末。该组合物可以用传统的黏合剂和载体如三酸甘油酯配制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体如药物品级的甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，纤维素和碳酸镁等等。视需要制剂而定，配制可以设计混合，制粒和压缩或溶解成分。在另一个途径中，该组合物可以配制成纳米颗粒。
使用的药物载体可以为，例如，固体或者液体。
典型的固体载体包括乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石，凝胶，琼脂，果胶，阿拉伯胶，硬脂酸镁，硬脂酸等等。固体载体可以包括一种或多种可能同时作为增香剂，润滑剂，增溶剂，悬浮剂，填料，助流剂，压缩助剂，粘合剂或片剂-崩解剂的物质；它还可以是包封材料。在粉末中，载体为精细粉碎的固体，它与精细粉碎的活性成分的混合。在片剂中，火星成分与具有必要的压缩性质的载体以合适的比例混合，以需要的形状和大小压缩。粉末和片剂优选包含至多99％活性成分。合适的固体载体包括，例如，磷酸钙，硬脂酸镁，滑石，糖，乳糖，糊精，淀粉，凝胶，纤维素，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠盐，聚乙烯吡咯烷酮烷酮，低熔点蜡和离子交换树脂。
典型的液体载体包括糖浆，花生油，橄榄油，水，等等。液体载体用于制备溶液，悬浮液，乳剂，糖浆，酊剂和密封的组合物。活性成分可以溶解或悬浮于药学上可接受的液体载体如水，有机溶剂，二者的混合物或药学上可接受的油类或脂肪。液体载体可以包含其他合适的药物添加剂如增溶剂，乳化剂，缓冲剂，防腐剂，增甜剂，增香剂，悬浮剂，增稠剂，颜料，粘度调节剂，稳定形或渗透压-调节剂。用于口服和肠胃外给药的液体载体的合适的例子包括水(部分地包含如同上述的添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠盐溶液)，醇(包括一元醇和多元醇，例如乙二醇)和它们的衍生物，和油类(例如分馏椰子油和花生油)。用于肠胃外给药的载体还可以为油脂如油酸乙酯和异丙基肉豆蔻酸盐。无菌的液体载体用于肠胃外给药的无菌的液态组合物。用于加压组合物的液体载体可以为卤代烃或其他药学上可接受的推进剂。无菌溶液或悬浮溶液液体药物组合物可以用来，例如，静脉内，肌内，腹膜内或皮下注射。注射时可单次推入或逐渐注入，入30分钟的经脉内灌注。该化合物还可以以液体或者固体组合物的形式口服给药。
载体或赋形剂可以包括本领域已知的时间延迟材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，还可包括蜡，乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，异丁烯酸甲酯等等。当制剂用于口服时，公认PHOSALPG-50(phospholipid与1，2-丙二醇浓缩，A.Nattermann & Cie.GmbH)中的0.01％吐温80用于其他化合物的可接受的口服制剂的配制，可以适应于本发明各种化合物的配制。
给予本发明化合物时可以使用各式各样的药物形式。如果使用固体载体，制剂可以为片剂，被放入硬胶囊中的粉末或小药丸形式或锭剂或糖锭形式。固体载体的量在很大程度上变化，但是优选从约25mg到约1.0g。如果使用液体载体，制剂可以为糖浆，乳剂，软胶囊，在安瓿或小瓶或非水的液体悬浮液中的无菌注射溶液或悬浮液。
为了获得稳定的水溶性的剂型，可以将化合物或其药学上可接受的盐溶于有机或无机酸的水溶液，0.3M琥珀酸或柠檬酸溶液。选择性地，酸性的衍生物可以溶于合适的碱性溶液。如果得不到可溶形式，可将化合物溶于合适的共溶剂或它们的结合。这样的合适的共溶剂的例子包括，但是不局限于，浓度范围从0-60％总体积的乙醇，丙二醇，聚乙二醇300，聚山梨酸酯80，甘油，聚氧乙烯脂肪酸酯，脂肪醇或甘油羟脂肪酸酯等等。
各种释放系统是已知的并且可以用于化合物或其他各种制剂的给药，这些制剂包括片剂，胶囊，可注射的溶液，脂质体中的胶囊，微粒，微胶囊，等等。引入的方法包括但是不局限于皮肤的，皮内，肌内，腹膜内的，静脉内的，皮下的，鼻腔内的，肺的，硬膜外的，眼睛的和(通常优选的)口服途径。化合物可以通过任何方便的或者其它适当的途径给药，例如通过注入或快速浓注，通过上皮的或粘膜线路(例如，口腔粘膜，直肠和肠粘膜，等等)吸收或通过负载药物的支架以及可以于其他生物活性剂一起给药。可以全身或局部给药。用于鼻，支气管或肺疾病的治疗或预防时，优选的给药途径为口服，鼻给药或支气管烟雾剂或喷雾器。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
实施例1.(S)-2-(3，4，5-三甲氧苯胺基)戊二酸(4)的制备
1)3，4，5-三甲氧基苯甲酸(2)。NaOH(80g，2mol)溶解在500ml蒸馏水中，冷却至室温，加入3，4，5-三羟基苯甲酸(没食子酸，50g，0.294mol)，立即塞紧塞子，搅拌至溶。控制内温低于20℃，加入(CH3)2SO4(89g，67ml，0.71mol)，此时温度可升至30～45℃，不时打开瓶塞放气。20min后，加入第二批等量的(CH3)2SO4，此时温度可升至40～45℃，搅拌10min，升温煮沸2h。再加入50g 40％的NaOH溶液煮沸2h，使可能生成的酯皂化。冷却反应液至室温，用稀盐酸酸化，抽滤，冷水洗涤滤饼，得粗品48g。
粗品的精制。将粗品4g加热溶解在200ml蒸馏水中，加入0.2g活性炭，煮沸20min，趁热过滤，将滤液冰箱放置，析出白色针状结晶，过滤，干燥称重3.4g，mp 168～171℃。
2)3，4，5-三甲氧基苯甲酰氯(3)。3，4，5-三甲氧基苯甲酸(21.2g，0.1mol)溶解在250ml苯中，加入25ml SOCl2，加热回流4h。停止反应，减压蒸干溶剂，再加入苯50ml溶解后蒸干，重复两次，以除尽SOCl2。加入200ml苯溶解备用。
3)(S)-2-(3，4，5-三甲氧苯胺基)戊二酸(4)。无水碳酸钠(19.6g，0.185mol)和L-谷氨酸(16.9g，0.115mol)溶解在150ml水中，机械搅拌下慢慢滴加上述酰氯的苯溶液同时冰盐浴，约1h加完。机械搅拌5h后停止搅拌，用酸水调pH至弱酸性，静置分层，弃去苯层。继续调pH并用氯仿提取，同时用薄层监测至水相只有一个点，弃去氯仿层，水相继续调pH至2，析出大量白色絮状沉淀，冰箱放置过夜。过滤干燥称重28.6g，产率89.3％，mp120～121℃。IR(KBr，cm-1)：3299.7，3255.4，2942.5，1744.7，1699.5，1500.7，1235.5，1127.7；1H-NMR(DMSO-d6，ppm)：12.41(s，2H)，8.53(d，1H，J＝7.2Hz)，7.22(s，2H)，4.41(m，1H)，3.83(s，6H)，3.71(s，3H)，2.35(m，2H)，2.21(m，1H)，1.96(m，1H)；ESI-MS：m/z 341.8。
实施例2.(S)-2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)乙酸(6)的制备
1)(S)-N-(2，6-二氧-四氢-2H-吡喃-3-基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(5)。3，4，5-三甲氧基苯甲酰谷氨酸(10g，2.9mmol)，加入80ml乙酸酐，55～60℃油浴保温5h。趁热过滤除去不溶物，加入适量无水乙醚，冷却，析出白色固体。过滤称重5.2g，产率55％，mp150～152℃。IR(KBr，cm-1)：3310.0，2945.1，1777.0，1640.7，1504.2，1239.6，1129.6；ESI-MS：m/z323.8。
2)(S)-2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)乙酸(6)。化合物5(5.0g)溶解于50mlDMF，1.0g甘氨酸研磨后加入DMF中，110℃加热5小时。混合物冷却致室温，倒如等体积的pH为2的冰水中，放置过夜，析出大量白色结晶。过滤洗涤称重3.0g，产率70％。1H-NMR(DMSO-d6，ppm)：δ12.34(s，1H)，8.88(d，1H)，7.17(s，2H)，4.53(m，1H)，4.42(s，2H)，3.83(s，6H)，3.71(s，3H)，2.18(dt，2H)，2.11(dt，2H)；ESI-MS m/z[M+1]+381.3。
实施例3.(S)-甲基-2-(2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)乙酸酯(7a)的制备。
化合物6(1.90g，5mmol)和HoBt(0.81g，6mmol)溶解于20ml二氯甲烷和2ml二甲基亚砜，冰浴冷却至0℃，缓慢滴加EDCI(1.44g，7.5mmol)的二氯甲烷溶液，约1小时滴加完毕，撤去冰浴室温搅拌2小时。冰浴条件下分批加入甘氨酸甲酯盐酸盐(0.75g，6mmol)，以三乙胺调节pH值7，待冰块自动融化，继续搅拌过夜。反应液先后以lN盐酸，1％碳酸钠，饱和盐水洗涤，硫酸钠干燥，柱层析纯化得到最终产物，产率79％。mp98.7-100.6℃.1HNMR(400MHz，DMSO-d6，ppm)：δ9.04(t，1H)，8.88(d，1H)，7.17(s，2H)，4.53(m，1H)，4.37(s，2H)，4.16(s，2H)，3.83(s，6H)，3.71(s，3H)，3.67(s，3H)，2.18(dt，2H)，2.11(dt，2H)。ESI-MS m/z[M+1]+ 452.5。
实施例4.(S)-甲基-2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酸酯(8)
将化合物6混旋于20ml无水甲醇，冰浴条件下缓慢滴加SOCl2，滴加完毕后，撤去冰浴，于35-40℃搅拌，约4小时溶液变得澄清。旋转蒸除溶剂，再加入50ml甲醇溶解再蒸除，反复两次后，加入50ml甲醇，蒸除致1/3体积，室温放置析出大量白色片状结晶，产率。mp 134-137℃；IR(KBr，cm-1)：3423.5，3216.3，2945.7，1743.1，1675.6，1632.8，1343.3，1127.8；1H-NMR(DMSO-d6，ppm)：δ8.88(d，1H，)，7.17(s，2H)，4.53(m，1H，)，4.44(s，2H)，3.83(s，6H)，3.71(s，3H)，3.67(s，3H)，2.18(dt，2H，)，2.11(dt，2H)；ESI-MS m/z [M+1]+395.4。
实施例5.(S)-N-(1-(2-(羟胺基)-2-氧乙基)-2，6-二氧哌啶-3-基)-3，4，5-三甲氧苯胺(9)。将789mg(2mmol)化合物8溶于7mL无水甲醇中，加入1.5mL NH2OK的甲醇溶液，(按Fieserand Fieser，Vol 1，P 478制备)，室温搅拌，24h后加入1.5g硅胶，旋转蒸除溶剂，所得干粉硅胶上减压硅胶柱，三氯甲烷∶甲醇(50∶1～5∶1)洗脱，得淡黄色固体512mg，遇FeCl3溶液显红色，产率64.7％。熔点117.3-118.8℃。δ8.88(d，1H)，8.0(d，1H)，7.17(s，2H)，4.53(m，1H)，4.37(s，2H)，3.83(s，6H)，3.71(s，3H)，2.18(dt，2H)，2.11(dt，2H)，2.0(brs，1H，OH).ESI-MS m/z[M+1]+ 396.5。
实施例6目标化合物抑制明胶酶活性试验(In vitro)
试验原理及详细步骤参见CN 1528745A吡咯烷类基质金属蛋白酶抑制剂及其制备方法。
实验结果见表一。
实施例7目标化合物抑制氨肽酶N的活性试验(In vitro)
1原理：氨肽酶N与其底物(L-亮氨酰-p-硝基苯胺)相互作用，产生在405nm有吸收的对—硝基苯胺，并且对—硝基苯胺的浓度与酶活性的大小呈正相关。通过检测405nm处的吸收度确定对—硝基苯胺的含量，从而确定氨肽酶的活性，间接反映出抑制剂对酶活性抑制程度的大小。
2材料与方法：
氨肽酶N与底物L-亮氨酰-p-硝基苯胺均购自Sigma公司
溶液的配制：
缓冲液，配制pH7.2，50mM磷酸盐缓冲液，室温放置备用。
氨肽酶N溶解在缓冲液中配成0.2mg/mL的溶液；
底物溶解在DMSO中配成0.5mg/mL溶液，各溶液冰箱放置备用。
3氨肽酶活性分析：
96孔板中加入上述氨肽酶N溶液10μL，底物溶液，用缓冲液补足200μL。室温放置1h，于405nm波长处测定吸收值。
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 |
| 氨肽酶N溶液(μL) | 10 | 10 | 10 | 10 |
| 底物溶液(μL)缓冲液(μL)吸收度 | 51850.247 | 101800.408 | 201700.589 | 401500.934 |
空白组
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 |
| 底物溶液(μL)缓冲液(μL)吸收度 | 51950.050 | 101900.051 | 201800.062 | 401600.071 |
空白组的吸收度与96孔板中的无试剂孔吸收度相差无几(无试剂孔吸收是0.035)，说明空白组几乎无吸收。对照吸收度可以看出，在酶溶液固定时，底物溶液最好选15μL更适宜，所以定底物为15μL。
4抑酶检测：
96孔板中分别加入上述氨肽酶N溶液10μL，底物15μL，不同梯度浓度的化合物20μL，50mM磷酸盐缓冲液(pH7.2)补足200μL。100％组不含抑制剂。空白组用失活的酶代替活性酶，均用缓冲液补足200μL。室温放置1h，于405nm波长处测定吸收值。按照如下公式计算抑制率：
抑制率＝(100％吸收度-化合物吸收度)/(100％吸收度-空白吸收度)
根据化合物的浓度与相应的抑制率，利用origin7.5软件拟合药效曲线，计算各化合物的IC50。
表一、体外抑酶试验结果
| Compds | R | IC50μMa | IC50(APN)/IC50(MMP-2) | |
| APN | MMP-2 | |||
| 67a7b7c7d7e7f7g7h7i7j7k7l | OHGly-OMeVal-OMeLeu-OMeIle-OMeβ-Ala-OMeAla-OMeArg(NO2)-OMeMet-OMeZ-Lys-OMeTyr-OMeTrp-OMeHis-OMe | 49.8±5.555.4±3.521.4±2.646.2±3.249.3±2.953.7±8.418.9±4.442.0±7.620.7±2.738.1±3.844.8±5.243.1±3.25.2±2.1 | 4.0±0.54.4±1.11.0±0.23.8±0.54.3±0.42.2±0.61.2±0.30.3±0.11.2±0.30.6±0.20.3±0.11.2±0.413.0±2.9 | 12.4512.5921.4012.1611.4724.4115.75140.0017.2563.50149.3335.920.40 |
| 7m7n7o7p7q7r89 | D-Phe-OMeThr-OMeL-Phe-OMeCys-OMe2-Cl-Ala-OMeAsp-(OMe)2-OMe-NHOH | 46.2±6.451.9±3.911.0±3.050.3±4.350.0±4.221.7±2.163.4±3.23.1±0.72.4±0.5 | 1.4±0.51.8±0.61.3±0.31.7±0.515.6±2.30.5±0.110.6±2.12.2±0.63.4±0.6 | 33.0028.838.4629.593.2143.405.981.410.71 |
| 乌苯美司 | ||||
a表中数值为三次实验的平均值，“±”后数值表示标准偏差。
实施例8目标化合物抑制荷肝癌H22小鼠血道转移试验(体内试验)
具体方法以及操作步骤见CN 1528745A”吡咯烷类基质金属蛋白酶抑制剂及其制备方法”
表二、体内试验结果
| 化合物 | 小鼠存活数(n) | 体重(g) | 肺重(g) | 肺表面结节数(n) | 抑制率(％) |
| 空白7a7g7h7i7j7k7l7m7n7r89 | 1010109(10)*1010109(10)*10109(10)*1010 | 22.70±3.4521.03.±4.6419.80±3.7220.65±2.3222.20±2.6623.65±3.3120.54±2.4221.12±2.6720.22±4.2623.10±4.0421.00±1.6223.48±3.5020.17±3.35 | 0.170±0.020O.172±0.0390.153±0.0310.163±0.0180.173±0.0140.154±0.022O.168±0.0200.175±0.0420.169±O.0190.172±O.0420.164±0.0890.163±0.0330.165±0.032 | 47.30±2.0115.67±3.789.35±4.2417.5±0.8613.2±0.788.34±2.3410.6±1.329.03±2.6315.16±1.7211.46±0.5711.23±2.4324.3±1.687.25±1.52 | -66.8780.2363.0072.0982.3777.5980.9167.9575.7776.2648.6384.67 |
*()内为实验起始动物数
数据处理采用One-Way ANOVA方法比较组间差异时，各组体重与空白组均无显著性差异(p＜0.05)；各组肺重与空白组均无显著性差异(p＜0.05)；结节数均存在极显著性差异(p＜0.01)。与空白组比较，体重与肺重无显著性差异说明所合成的类肽抑制剂毒副作用较小；结节数明显减少说明所合成的类肽抑制剂显示了极好的体内抑制肿瘤转移活性。
Claims (10)
1.具有通式I的类肽化合物，以及其光学异构体、非对映异构体和消旋体混合物，其药学上可接受的盐，溶剂合物或前药，
其中，
R1是芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，杂芳基C2-6炔基，C1-6烷基，N端保护或未保护天然或非天然氨基酸衍生物，任选被一个或多个如下基团取代：羟基，卤素，硝基，氰基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基；
R2是氢，芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，杂芳基C2-6炔基，以及各种天然或非天然氨基酸侧链，任选被一个或多个如下基团取代：卤素，硝基，氰基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基；
R3是OH，NHOR10(这里R10是氢或C1-8烷基)C1-8烷氧基，NHR11(这里R11是C1-8烷基)，芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，杂芳基C2-6炔基，NHCH(R2)COR4(这里R4是OH或NHOR10)，任选被一个或多个如下基团取代：卤素，硝基，氰基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰，
n是1或2，
*是立体构型为S或R光学纯度或其消旋体。
2.如权利要求1所述的类肽化合物，其特征在于：
R1是芳基，芳基C1-6烷基，芳基C2-6烯基，非甾体类抗炎药有机酸，N端保护或未保护天然或非天然氨基酸衍生物，任选被一个或多个如下基团取代：羟基，卤素，硝基，氰基，C1-8烷氧基；
R2是氢，以及各种天然或非天然氨基酸侧链；
R3是OH，OCH3，NHCH(R2)COR4，这里R4是OCH3或NHOH。
3.如权利要求1-2任一项的化合物，其特征在于是下述化合物：
(S)-甲基-2-(2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)乙酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-甲基丁酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-4-甲基戊酸酯，
(2S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-甲基戊酸酯，
(S)-甲基1-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰基)吡咯烷-2-羧酸酯，
(S)-methyl 2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-5-(3-硝基胍基)戊酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-4-(甲硫基)丁酸酯，
(S)-甲基6-(苄氧羰酰胺基)-2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)己酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(4-羟基苄基)丙酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸酯，
(R)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-苯基丙酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-羟基丙酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-苯基丙酸酯，
(S)-甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-巯基丙酸酯，
(S)-二甲基2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)邻苯二甲酸酯，
(S)-甲基3-氯-2-(2-((S)-2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯，
(S)-甲基3-(2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯，
(S)-甲基2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酸酯，
(S)-N-(1-(2-(羟胺基)-2-氧乙基)-2，6-二氧哌啶-3-基)-3，4，5-三甲氧苯胺。
4.制备权利要求1所述类肽化合物的中间体，其特征在于，是3，4，5-三甲氧基苯甲酸；3，4，5-三甲氧基苯甲酰氯；(S)-2-(3，4，5-三甲氧苯胺基)戊二酸；(S)-N-(2，6-二氧-四氢-2H-吡喃-3-基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺；(S)-2-(2，6-二氧-3-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)乙酸，(S)-叔丁基-2，6-二氧哌啶-3-基氨基甲酸酯，(S)-乙基-2-(3-(叔丁氧羰基氨基)-2，6-二氧哌啶-1-基)乙酸酯，(S)-苄基-2，6-二氧哌啶-3-基氨基甲酸酯，(S)-乙基2-(3-(苄氧羰基氨基)-2，6-二氧哌啶-1-基)乙酸酯。
5.权利要求1所述类肽化合物的制备方法，其特征在于，以光学纯度酸性氨基酸为原料，在碱性条件下缩合，所得的化合物再经过脱水环合，亲核取代，多肽缩合试剂缩合等反应最终分离纯化而得；或以光学纯的谷胺酰胺或天冬酰胺为原料，通过Boc或Cbz保护、环合、取代等步骤合成关键中间体，然后脱保护，再通过与具有生物活性的不同酰氯以及氨基酸衍生物得到不同系列的类二肽或类三肽。
6.权利要求1-3任一项类肽化合物在预防或治疗与金属蛋白酶，包括基质金属蛋白酶或氨肽酶N，活性异常表达相关的哺乳动物疾病的药物的应用。
7.如权利要求6所述的应用，所述的与金属蛋白酶活性异常表达的相关哺乳动物疾病包括：炎症，癌症，多发性硬化症，各种组织溃疡或组织溃疡性病症，牙周病，大疱性表皮松懈症，白血病等。
8.一种药物组合物，包含(1)权利要求1-3任一项的类肽化合物，和(2)一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
9.一种适于口服给予哺乳动物的药物组合物，包含(1)权利要求1-3任一类肽化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。
10.一种适于胃肠外给予哺乳动物的药物组合物，包含(1)权利要求1-3任一类肽化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。
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