CN1969937A - 一种治疗肝炎的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，公开了一种药物组合物及其制备方法，该药物组合物主要由硫普罗宁、黄芩苷和黄芪制成，其重量配比为：硫普罗宁1～100份、黄芩苷5～250份、黄芪10～10000份。该组合物还可以由下列原料药制成：硫普罗宁、黄芩苷、黄芪多糖或总皂苷，其重量配比为：硫普罗宁1～100份、黄芩苷5～250份、黄芪多糖0.1～150份，或者为：硫普罗宁1～100份、黄芩苷5～250份、黄芪总皂苷0.1～150份。该药物组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。该药物组合物具有抗肝炎作用，可用于甲肝、乙肝、丙肝等各种类型的肝炎。
Description
1、技术领域
本发明涉及一种由硫普罗宁、黄芩苷和黄芪或其提取物制成的用于治疗肝炎的药物组合物，及其制备方法和用途，属于医药技术领域。
2、背景技术
中国是病毒性肝炎的高发区，约有8％-10％的人群为乙肝病毒携带者，约为1.3亿人，占全球乙肝病毒携带者的1/3，其中约有3000万人患慢性肝炎，平均年发病例数约140万左右，每年因肝炎病死亡约30万人。丙型肝炎病毒携带者0.38亿人，加上其他类型的肝炎，患肝炎的总人数近2亿人，估计每年因病毒性肝炎导致直接经济损失300亿～500亿人民币。因此，研究开发安全有效的治疗肝炎的药物，成为迫切需要解决的问题。
硫普罗宁化学名为N-(2-巯基丙酰基)-甘氨酸，是一种含游离巯基的甘氨酸衍生物。临床用于改善各类急慢性肝炎的肝功能，脂肪肝、酒精肝、药物性肝损伤的治疗及重金属的解毒；硫普罗宁可降低放化疗的毒副作用，并可预防放化疗所致的外周白细胞减少和二次肿瘤的发生；对老年性早期白内障和玻璃体浑浊有显著的治疗作用。硫普罗宁结构式如下：
黄芩苷是从中药材黄芩(Scutellariabaicalensis georgi)中提取的一种黄酮类化合物，具有广泛的药理作用。主要药理作用有：(1)抗菌作用。黄芩苷是黄芩中主要的抗菌活性成份，抗菌谱广，可抑制多种细菌的繁殖与生长。(2)抗炎作用。有对抗组织胺，抑制炎症水肿，降低毛细血管通透性的作用，能抑制炎症反应的红、肿、热、痛。(3)利尿作用。可提高实验动物的尿生成速度。(4)降压作用。可引起多种实验动物的血压下降。(5)保肝作用。本品对乙型肝炎表面抗原、e抗原、核心抗原有较显著的保护作用，对乙型肝炎病毒DNA复制也有抑制作用；用药后能显著降低谷丙转氨酶，对肝脏有较好的保护作用。本品降谷丙转氨酶作用较好，用药期间可见乙肝表面抗原阳性度下降，但不巩固。
黄芪为豆科植物蒙古黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或膜荚黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.)的干燥根，是一种常用中药，味甘、性温，有补气升阳、固表止汗、托毒排脓和生肌等功效。黄芪的主要药理作用有：(1)抗衰老。(2)清除自由基。(3)黄芪多糖可显著提高机体的免疫力。(4)黄芪多糖可增强人体细胞的生理代谢作用，能显著促进骨髓造血细胞DNA合成，加快核细胞分裂过程，对体内血糖水平有双向调节作用。(5)黄芪多糖在体外具有增强LAK细胞杀伤活性的作用，在体内对荷黑色素瘤B16细胞的小鼠具有显著增强IL-2/LAK抗肿瘤作用，延长其生存期。
目前，利用硫普罗宁、黄芩苷和黄芪的相互作用，配伍组方，用于制备治疗肝炎方面的药物，尚未见报道。
3、发明内容
为了满足临床需要，更好的治疗肝炎，提高人民健康水平，本发明提供了一种新的药物组合物及其制备方法。
本发明的药物组合物主要由硫普罗宁、黄芩苷和黄芪制成，三者的重量配比为：硫普罗宁1～100份、黄芩苷5～250份、黄芪10～10000份，优选为：硫普罗宁2～50份、黄芩苷10～100份、黄芪100～1000份，最佳为：硫普罗宁10份、黄芩苷25份、黄芪400份。
本发明的药物组合物中的黄芪可以用适宜的溶剂和方法制备得到提取物，提取物再与其它原料药和药学上可接受的辅料混合制成任一制剂，提取物中所含的主要有效成分为：黄芪多糖或黄芪总皂苷，提取物中的主要有效成分的总含量最好不低于30％。
黄芪可以用适宜的溶剂经过提取加工得到黄芪提取物，提取溶剂优选水或乙醇，黄芪的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。如可通过醇提后上柱的方法制备得到黄芪提取物，还可以通过根据文献方法制备。
本发明提供了一种以多糖为主要有效成分的黄芪提取物(以下简称：黄芪多糖)的优选制备工艺，具体如下：
取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。
通过本工艺制备的黄芪提取物中，黄芪多糖得率为0.5～2％，黄芪多糖的含量不低于70％，。
黄芪多糖还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法：
方法一：取黄芪药材，加水回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.23，加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，沉淀加水溶解，滤过，再加乙醇使含醇量达85％，静置24小时，滤过，收集沉淀，真空干燥即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为2～4％，黄芪多糖含量不低于40％。
方法二：取黄芪药材，加10倍量80％乙醇提取4小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液合并，过滤，滤液加乙醇使含醇量达85％，过滤，滤液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为3～4％，黄芪多糖含量不低于35％。
本发明提供了一种以总皂苷为主要有效成分的黄芪提取物(以下简称：黄芪总皂苷)的优选制备工艺，具体如下：
取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。
通过本工艺制备的黄芪总皂苷提取物得率为0.5～2％，总皂苷含量不低于50％，黄芪甲苷含量不低于2.0％。
黄芪总皂苷还可由如下方法制备，但不仅限于下述方法：
方法一：取黄芪，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含乙醇量为60％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为3～5％，总皂苷含量不低于30％，黄芪甲苷含量不低于1％。
方法二：取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理1次使含乙醇量为60％，冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，并减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为2～4％，总皂苷含量为不低于40％，黄芪甲苷含量不低于1％。
上述药物组合物，可用黄芪提取物代替黄芪投料制得，按照提取物相对于药材的得率计算，本发明组合物可以有以下2种不同配比，按重量份数比分别为：
配比1：硫普罗宁1～100份、黄芩苷5～250份、黄芪多糖0.1～150份：优选为：硫普罗宁2～50份、黄芩苷10～100份、黄芪多糖1～15份；最优为：硫普罗宁10份、黄芩苷25份、黄芪多糖2～8份；
配比2：硫普罗宁1～100份、黄芩苷5～250份、黄芪总皂苷0.1～150份；优选为：硫普罗宁2～50份、黄芩苷10～100份、黄芪总皂苷1～15份；最优为：硫普罗宁10份、黄芩苷25份、黄芪总皂苷2～8份。
上述药物组合物中，以黄芪多糖的含量最好不低于30％；黄芪总皂苷的含量最好不低于30％，黄芪甲苷含量最好不低于1％。黄芪多糖和黄芪总皂苷可按前述方法制得。
以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。
本发明提供了一种用于制备治疗肝炎方面疾病的药物，可用于甲肝、乙肝、丙肝等各种类型的肝炎。
本发明的药物组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服、鼻吸入或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本组合物的优选的剂型是注射剂或口服制剂。
本发明的药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
本发明的药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本发明的组合物具有以下优点：
(1)本发明提供了一种新的用于治疗肝炎的药物组合物，满足了临床需要。
(2)首次通过药效学实验研究证明：本发明的药物组合物对醋氨酚、D-氨基半乳糖、四氯化碳所致的小鼠急性肝损伤有保护作用，可以抑制鸭乙肝病毒的繁殖，可抗四氯化碳所致的大鼠肝纤维化。三药具有协同增效作用，疗效显著。这是本领域普通技术人员所预想不到的。
(3)对本发明的药物组合物各配比进行了药效学研究，得出了本发明组合物的最优配比。
(4)本发明可以以药材或提取物直接投料，制备工艺简单，可以使不同批次药品间质量差异小，药品质量更均匀稳定。
(5)通过特殊安全性试验和稳定性实验证实，本发明的药物组合物注射剂安全稳定。
(6)硫普罗宁具有良好的抗肝炎作用，黄芩苷和黄芪作辅助药可显著提高抗肝炎活性，合并用药疗效确切，且减小了相对用药剂量，具有广泛的应用前景。
以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些实验例包括本发明的药物组合物的药效学实验，硫普罗宁、黄芩苷和黄芪多糖的组合物以下简称
LHH组合物I，硫普罗宁、黄芩苷和黄芪总皂苷的组合物以下简称
LHH组合物II。实验例中所用黄芪多糖取自实施例1、黄芪总皂苷取自实施例2。
实验例1 LHH组合物合并用药药效研究
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
模型组：0.9％生理盐水注射液，自制；
硫普罗宁组：注射用硫普罗宁，河南省新谊药业股份有限公司；
黄芩苷组：黄芩苷注射液，自制；
黄芪多糖组：黄芪多糖，自制，取自实施例1所制的黄芪多糖；
黄芪总皂苷组：黄芪总皂苷，自制，取自实施例2所制的黄芪总皂苷；
LHH组合物I不同配比组：注射用LHH组合物I(硫普罗宁+黄芩苷+黄芪多糖)不同配比，自制(制备方法参见实施例3)；
LHH组合物II不同配比组：注射用LHH组合物II(硫普罗宁+黄芩苷+黄芪总皂苷)不同配比，自制(制备方法参见实施例4)。
实验动物：ICR小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
实验方法：取小鼠180只，随机分成18组，每组10只，组别见下表。空白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg鼠重，每日1次，连续10d；给药组尾静脉注射给药，每日1次，剂量见下表，连续10d。空白对照组在最后一次尾静脉注射6h后腹腔注射生理盐水。模型组和给药组在最后一次尾静脉注射6h后腹腔注射醋氨酚300mg/kg鼠重，各组在腹腔注射生理盐水及醋氨酚16h后断头，取血液、肝脏，进行生化指标血清ALT(谷丙转氨酶)和肝组织LPO(过氧化脂质)的测试，结果见表1。
表1 LHH组合物对醋氨酚损伤小鼠肝组织ALT和LPO的影响
| 组别 | 配比(硫普罗宁+黄芩苷+黄芪mg+mg+g) | 小鼠数量 | 给药剂量(mg/kg) | ALT含量(U/L) | LPO含量(nmol/L) |
| 空白对照组模型组硫普罗宁组黄芩苷组黄芪多糖组黄芪总皂苷组LHH组合物I组(硫普罗宁+黄芩苷+黄芪多糖)LHH组合物II组(硫普罗宁+黄芩苷+黄芪总皂苷) | ------20mg+100mg+1g100mg+250mg+4g100mg+500mg+6g200mg+250mg+4g200mg+500mg+6g500mg+1000mg+10g20mg+100mg+1g100mg+250mg+4g100mg+500mg+6g200mg+250mg+4g200mg+500mg+6g500mg+1000mg+10g | 101010101010101010101010101010101010 | --160160160160160160160160160160160160160160160160 | 34.25±5.08274.42±21.46◇◇173.24±11.33*182.45±12.09*196.45±14.22*201.33±13.29*149.23±11.35**#△☆&118.56±12.21**##△△☆☆&&127.24±14.17**##△△☆☆&&132.44±15.45**##△△☆☆&&137.64±12.26**##△△☆☆&&146.65±13.19**#△☆&158.47±12.41**△☆&125.96±11.07**##△△☆☆&&135.64±12.13**##△△☆☆&&143.58±14.31**#△☆&149.66±13.35**#△☆&153.21±15.27**△☆& | 4.60±0.188.56±0.48◇◇7.37±0.33*7.56±0.41*7.69±0.36*7.74±0.32*6.44±0.37**#△☆&5.24±0.22**##△△☆☆&&5.38±0.25**##△△☆☆&&5.51±0.46**##△☆&5.59±0.35**##△△☆☆&&5.64±0.29**#△☆&6.15±0.32**#△☆&5.38±0.34**##△△☆☆&&5.49±0.28**##△△☆☆&&5.55±0.40**##△△☆☆&&5.62±0.34**##△△☆☆&5.79±0.43**#△☆ |
与空白对照组比较，◇◇P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与硫普罗宁组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与黄芩苷组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与黄芪多糖组比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01；与黄芪总皂苷组比较，&P＜0.05，&&P＜0.01。
结论：与空白对照组相比，模型组ALT和LPO的活性显著升高，差异显著(P＜0.01)，说明造模可靠。与模型组相比，硫普罗宁组、黄芩苷组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组和LHH组合物I和LHH组合物II各配比组ALT和LPO的活性明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，说明各药均对醋氨酚所致小鼠肝损伤有保护作用。其中LHH组合物I和LHH组合物II各配比组疗效更好(P＜0.01)，均优于单用硫普罗宁、黄芩苷、黄芪多糖或黄芪总皂苷，说明硫普罗宁、黄芩苷和黄芪三药合用，有协同增效作用。LHH组合物I和LHH组合物II各配比组中，均以硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)组疗效最为显著。
实验例2 LHH组合物对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
模型组：0.9％生理盐水注射液，自制：
硫普罗宁组：注射用硫普罗宁，河南省新谊药业股份有限公司；
LHH组合物I低、中、高剂量组：注射用LHH组合物I，硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，自制(制备方法参见实施例3)；
LHH组合物II低、中、高剂量组：注射用LHH组合物II，硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，自制(制备方法参见实施例4)。
实验动物：ICR小鼠，体重20～25g，雌雄各半。
实验方法：取小鼠90只，随机分为9组，分别为空白对照组、模型组、硫普罗宁组、注射用LHH组合物I低、中、高剂量组和注射用LHH组合物II低、中、高剂量组，每组10只。空白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg鼠重，每日1次，连续10d；给药组尾静脉注射给药，每日1次，剂量见下表，连续10d。空白对照组在最后一次尾静脉注射1h后腹腔注射生理盐水，其余各组动物均腹腔注射100g/L的D-氨基半乳糖500g/kg。24h后处死动物取血，离心，取血清，全自动生化分析仪检测。处死前动物断尾取血玻片法测定动物凝血时间。检测指标为天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清白蛋白(ALB)、凝血时间(CT)。结果见表2。
表2 LHH组合物对D-氨基半乳糖致急性肝损伤小鼠血清AST、ALB含量和凝血时间(CT)的影响
| 组别 | 小鼠数量 | 给药剂量(mg/kg) | AST含量(U/L) | ALB含量(g/L) | CT(s) |
| 空白对照组模型组硫普罗宁组LHH组合物I高剂量组LHH组合物I中剂量组LHH组合物I低剂量组LHH组合物II高剂量组LHH组合物II中剂量组LHH组合物II低剂量组 | 101010101010101010 | --1601601208016012080 | 284.5±29.7415.6±41.2◇◇◇356.5±35.8*287.7±34.2**##296.9±29.1**##324.3±34.5**#291.9±29.7**##304.4±31.9**##332.6±32.7**# | 28.52±2.5520.21±1.44◇◇21.53 ±2.24*25.65±1.73**##24.94±2.06**##22.17±2.03**#25.32±1.86**##23.84±2.32**##22.39±1.97**# | 11.81±2.3627.95±7.04◇◇◇21.63±4.02*14.54±4.56**##16.35±4.32**##17.59±3.96*#15.16±4.22**##16.28±3.56**##17.54±4.15*# |
与空白对照组比较◇◇P＜0.01，◇◇◇P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与硫普罗宁组比较，#P＜0.05，##P＜0.01
结论：与空白对照组相比，模型组天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性显著升高(P＜0.001)，血清白蛋白(ALB)数量显著减少(P＜0.01)，凝血时间(CT)闲显著延长(P＜0.001)，说明造模可靠。与模型组相比，硫普罗宁组、LHH组合物I和LHH组合物II各剂量组天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，血清白蛋白(ALB)数量明显增加(P＜0.01)，凝血时间(CT)闲明显缩短(P＜0.001)，说明各药均有保肝作用，对D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤有保护作用。LHH组合物I和LHH组合物II各剂量组疗效均优于单用硫普罗宁，说明硫普罗宁、黄芩苷和黄芪三药合用，有协同增效作用。其中LHH组合物I和LHH组合物II中、高剂量保护作用更明显(P＜0.01)。
实验例3 LHH组合物对四氯化碳(CCl4）致小鼠急性肝损伤的保护作用
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
模型组：0.9％生理盐水注射液，自制；硫普罗宁组：注射用硫普罗宁，河南省新谊药业股份有限公司；
LHH组合物I低、中、高剂量组：注射用LHH组合物I，硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，自制(制备方法参见实施例3)；
LHH组合物II低、中、高剂量组：注射用LHH组合物II，硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，自制(制备方法参见实施例4)。
实验动物：ICR小鼠，体重22～26g，雌雄各半。
实验方法：取小鼠90只，随机分为9组，分别为空白对照组、模型组、硫普罗宁组、注射用LHH组合物I低、中、高剂量组和注射用LHH组合物II低、中、高剂量组，每组10只。空白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg鼠重，每日1次，连续7d；给药组尾静脉注射给药，每日1次，剂量见下表，连续7d。空白对照组在最后一次尾静脉注射2h后腹腔注射花生油10ml/kg，其余各组动物均腹腔注射0.12％CCl4花生油溶液10ml/kg，禁食过夜。16h后断头处死动物，取血清测试ALT、AST的值。断头取血后，立即剖腹取出肝脏、脾脏，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精确称重肝脏、脾脏重量。结果见表3。
表3 LHH组合物对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝、脾指数和血清ALT、AST含量的影响
| 组别 | 小鼠数量 | 给药剂量(mg/kg) | 肝指数(g/100g) | 脾指数(g/100g) | ALT含量(U/L) | AST含量(U/L) |
| 空白对照组模型组硫普罗宁组LHH组合物I高剂量组LHH组合物I中剂量组LHH组合物I低剂量组LHH组合物II高剂量组LHH组合物II中剂量组LHH组合物II低剂量组 | 101010101010101010 | --1601601208016012080 | 6.123±1.0118.256±0.674◇7.628±0.632*6.723±0.801*#7.056±0.759*#7.344±0.6986.825±0.654*#7.124±0.812*#7.369±0.734 | 0.627±0.1430.756±0.086◇0.732±0.097*0.644±0.064*#0.678±0.076**#0.705±0.0830.656±0.062*#0.684±0.076*#0.712±0.091 | 36.56±5.12267.42±24.56◇◇165.23±16.49*113.56±17.56**##128.46±18.23**#137.24±17.44*#124.12±16.38**##135.26±15.64**#148.77±19.22*# | 252.37±28.56411.49±43.56◇◇342.78±34.56*283.44±26.98**##304.56±32.16**#334.56±38.24*#287.44±26.54**##298.64±28.96**#332.14±34.65*# |
与空白对照组比较◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与硫普罗宁组比较，#P＜0.05，##P＜0.01
结论：CCl4模型组小鼠肝指数、脾指数较正常对照组小鼠数值增高(P＜0.05)，CCl4模型组小鼠血清ALT、AST值较正常对照组小鼠数值增高(P＜0.01)，说明小鼠注射CCl4花生油溶液后肝脏损，造模成功，模型稳定可靠。与模型组相比，LHH组合物I和LHH组合物II中、高剂量组小鼠肝指数、脾指数降低(P＜0.05)，肝、脾肿大减轻，LHH组合物I和LHH组合物II各剂量组血清ALT、AST值明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，说明本发明组合物对CCl4所致急性肝损伤有保护作用。其中LHH组合物I和LHH组合物II各剂量组疗效均优于单用硫普罗宁，说明硫普罗宁、黄芩苷和黄芪三药合用，有协同增效作用。
实验例4 LHH组合物抗鸭乙肝病毒作用
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
硫普罗宁组：注射用硫普罗宁，河南省新谊药业股份有限公司；
阳性对照组：注射用阿昔洛韦，石药集团中诺药业(石家庄)有限公司；
LHH组合物I低、中、高剂量组：注射用LHH组合物I，硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，自制(制备方法参见实施例3)；
LHH组合物II低、中、高剂量组：注射用LHH组合物II，硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，自制(制备方法参见实施例4)。
实验动物：市售1日龄北京鸭；
DHBV(乙型肝炎病毒)阳性血清，复旦大学医学院微生物学教研室。
实验方法：
4.1动物模型北京鸭经足静脉注射0.2mlDHBV阳性血清，7d后取血，分离血清，-20℃保存待检。
4.2药物治疗筛选出感染成功的阳性鸭54只，随机分为9组，每组6只，分别为空白对照组、硫普罗宁组、阳性对照组、注射用LHH组合物I低、中、高剂量组和注射用LHH组合物II低、中、高剂量组，每组6只。空白对照组每日灌胃生理盐水20ml/kg，每日2次，连续14d；给药组灌胃给药，每日2次，剂量见下表，连续14d。阳性药物作为治疗对照组，以阿昔洛韦(ACV)按100mg/kg灌胃，2次/d，给药2周。分别用于药前(1d)、用药第7天(T7)，用药第14天(T14)和停药后第7天(P7)。自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-20℃保存待检。采用DHBV-DNA Dot Blot法，以杂交斑点吸光度值(A)作为标本DHBV-DNA水平值。结果见表4。
结论：阳性对照(阿昔洛韦)组在给药后第7天和第14天，与给药前及与空白对照组比较，差异有显著性(P＜0.01)，但停药后又显著升高，与给药前比较差异无显著性(P＞0.05)。不同剂量LHH组合物I和LHH组合物II均对DHBV有抑制作用，且停药后无反跳，其中中、高剂量组抑制作用更为明显。LHH组合物I和LHH组合物II各给药组疗效均优于单用硫普罗宁，说明硫普罗宁、黄芩苷和黄芪三药合用，有协同增效作用。
表4 LHH组合物对DHBV-DNA的抑制作用
| 组别 | 给药剂量(mg/kg) | 治疗前DHBV-DNA滴度 | 治疗后7dDHBV-DNA滴度 | 治疗后14dDHBV-DNA滴度 | 停药后7dDHBV-DNA滴度 |
| 空白对照组阳性对照组硫普罗宁组LHH组合物I高剂量组LHH组合物I中剂量组LHH组合物I低剂量组LHH组合物II高剂量组LHH组合物II中剂量组LHH组合物II低剂量组 | --1601601208016012080 | 1.65±0.041.63±0.041.66±0.051.62±0.041.64±0.031.63±0.051.65±0.031.64±0.041.64±0.02 | 1.62±0.030.84±0.03◇◇@@1.42±0.121.09±0.07◇@1.18±0.06◇@1.34±0.131.12±0.09◇@1.18±0.06◇@1.35±0.09 | 1.63±0.040.75±0.08◇◇@@1.31±0.10◇@0.84±0.06◇◇@@0.96±0.08◇◇@@1.17±0.06◇@0.88±0.09◇◇@@1.06±0.05◇◇@@1.23±0.08◇@ | 1.65±0.061.62±0.051.60±0.081.05±0.11◇@1.16±0.09◇@1.30±0.071.13±0.11◇@1.16±0.13◇@1.31±0.12 |
注：与空白对照组比较◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；与给药前相比@P＜0.05，@@P＜0.01。
实验例5 LHH组合物抗大鼠肝纤维化作用
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
硫普罗宁组：注射用硫普罗宁，河南省新谊药业股份有限公司；
LHH组合物I低、中、高剂量组：注射用LHH组合物I，硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，自制(制备方法参见实施例3)；
LHH组合物II低、中、高剂量组：注射用LHH组合物II，硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，自制(制备方法参见实施例4)。
实验动物：Wistar大鼠，体重180～230g，雄性。
实验方法：取健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每日1次，共10周，作为对照组。肝纤维化模型组应用40％CCl4花生油溶液按3ml/kg皮下注射，每周2次，共8周，诱导肝纤维化模型。取肝纤维化模型大鼠80只，随机分为8组，分别为模型组、硫普罗宁组、注射用LHH组合物I低、中、高剂量组和注射用LHH组合物II低、中、高剂量组，每组10只。除对照组外，其余各组继续以40％CCl4花生油溶液3ml/kg皮下注射，每日1次。硫普罗宁组、注射用LHH组合物I低、中、高剂量组和注射用LHH组合物II低、中、高剂量组同时灌胃给药相应药物，剂量见下表。继续给药2周。10周后宰杀大鼠，无菌操作取心血2ml，分离血清，-20℃保存，用放射免疫法检测肝纤维化指标：透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)；用生化法检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)，采用全自动生化分析仪进行检测。结果见表5。
结论：与空白对照组比较，模型组大鼠血清ALT、AST、HA、LN含量有显著性差异，说明模型稳定可靠。硫普罗宁、LHH组合物I和LHH组合物II治疗后肝纤维化大鼠血清ALT和AST均低于模型组，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示硫普罗宁、LHH组合物I和LHH组合物II有降酶和保护肝功能的作用；硫普罗宁、LHH组合物I和LHH组合物II治疗后血清HA和LN水平均显著低于模型组，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示硫普罗宁、LHH组合物I和LHH组合物II均有改善肝纤维化血清学指标，具有抗肝纤维化的作用。其中，LHH组合物I和LHH组合物II组疗效优于硫普罗宁组，提示硫普罗宁、黄芩苷和黄芪三药合用，有协同增效作用。
表5 LHH组合物对CCl4所致肝纤维化大鼠的血清学指标的影响
| 组别 | 动物数量 | 给药剂量(mg/kg) | ALT(U/L) | AST(U/L) | LN(μg/L) | HA(μg/L) |
| 空白对照组模型组硫普罗宁组LHH组合物I高剂量组LHH组合物I中剂量组LHH组合物I低剂量组LHH组合物II高剂量组LHH组合物II中剂量组LHH组合物II低剂量组 | 101010101010101010 | --1601601208016012080 | 37.86±6.33245.61±16.45◇◇◇164.25±18.24*122.52±13.21**#135.24±12.56**#148.56±15.45*124.35±14.23**#136.87±15.36**#154.21±16.48* | 273.24±24.56419.87±45.66◇◇◇331.24±34.17*276.35±35.26**#293.31±32.19**#312.14±35.42*262.41±29.48**#294.56±30.12**#324.17±37.64* | 42.35±1 3.86112.45±20.54◇◇◇96.75±15.67**56.98±14.26**#67.84±15.62**#82.35±13.47*58.96±18.62**#70.26±16.78**#85.77±12.54* | 134.56±17.45412.35±38.69◇◇◇348.94±34.52*168.47±16.87**#243.56±24.56**#289.64±32.15*176.35±18.64**#238.64±21.77**#291.76±28.34* |
与空白对照组比较◇◇◇P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与硫普罗宁组比较，#P＜0.05。
实验例6小鼠注射给药急性毒性实验
(1)实验方法
供试品：注射用LHH组合物I，剂型：冻干粉针，规格：硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，来源于实施例3；
注射用LHH组合物II，剂型：冻干粉针，规格：硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，来源于实施例4。
受试动物：小鼠，每组雌雄各5只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。
给药途径：静脉注射、腹腔注射。
观察项目：死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死剂量。
(2)实验结果
按照急性毒性实验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也未见明显的毒性反应，故进行一日内最大给药量实验。给药剂量：尾静脉分别注射注射用LHH组合物I、注射用LHH组合物II各16mg/10g，腹腔分别注射注射用LHH组合物I、注射用LHH组合物II各16mg/10g，一日2次。
死亡数：未出现死亡。
一般状态；未见异常变化。
体重：于给药前1天，给药日，给药后1、3、7、14天测量；未见异常变化。
剖检：心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。
(3)结论
本实验中未出现死亡，推测注射用LHH组合物I、II对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量均为32mg/10g，相当于50kg体重人日最大用量1600mg的100倍。表明本品低毒，安全性高。
实验例7注射用LHH组合物稳定性实验
供试品：注射用LHH组合物I，剂型：冻干粉针，规格：硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，来源于实施例3；
注射用LHH组合物II，剂型：冻干粉针，规格：硫普罗宁+黄芩苷+黄芪(100mg+250mg+4g)，来源于实施例4。
考察项目：性状、pH值。
长期稳定性实验方法及结果：将本品各组合物置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明本品各组合物粉针剂长期放置基本稳定。
4、具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例3～17所用的黄芪多糖取自实施例1，黄芪总皂苷取自实施例2。
实施例1 以多糖为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪多糖的制备
黄芪多糖制备工艺：
取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。
黄芪多糖的含量测定
标准溶液的制备取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。
标准曲线绘制精密量取标准溶液0.1ml～0.6ml共6份，分别置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，铝片0.3g，碳酸氢钠0.15g，混合蒸馏，收集182℃馏分，配制成5％水溶液)1.0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，置水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温，另以2.0ml水同上平行操作作为空白对照，在490nm波长处测定吸收值，计算回归方程。
测定方法取黄芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法自“加水至2.0ml”起，依法测定吸收值，依回归方程计算多糖的含量。
黄芪多糖的鉴别
(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节pH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。
(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。
黄芪多糖的含量和得率
| 批次 | 药材重量(kg) | 黄芪多糖重量(kg) | 黄芪多糖得率(％) | 多糖含量(％) |
| 123平均 | 50505050 | 0.5650.8800.4300.625 | 1.131.760.861.25 | 68.253.064.562.0 |
根据上述工艺，制得黄芪提取物三批样品，其含量和得率见上表。由结果可以看出，通过本工艺制备的黄芪多糖的得率为0.5～2％，多糖含量不低于50％。
实施例2 以总皂苷为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪总皂苷的制备
黄芪总皂苷制备工艺：
取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。
黄芪总皂苷鉴别实验
鉴别实验一 取本品0.01g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～120目，5g，内径10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。
鉴别实验二取本品0.01g，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液加0.3％氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙脂15ml振摇提取，分取乙酸乙脂液，用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙脂1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作为展开剂，展开，取出，凉干，置氨蒸气中熏后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
黄芪总皂苷含量测定
总皂苷的含量测定
对照品溶液的制备精密称取于105℃干燥至恒重的黄芪甲苷对照品约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芪甲苷0.1mg)。
供试品溶液的制备取本品0.1g，精密称定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次10ml，弃去水液，正丁醇至水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 精密量取对照品溶液、供试品溶液各1ml，置25ml钠氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中显色15分钟，取出，立即置冰浴中冷却至室温，加入8ml冰醋酸，摇匀，在538nm波长处测定吸光度，计算，即得。
黄芪甲苷的含量测定
色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙睛-水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。
对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密称取本品0.04g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得。
黄芪总皂苷和黄芪甲苷的含量及得率
| 批次 | 药材重量(kg) | 黄芪总皂苷重量(kg) | 黄芪总皂苷得率(％) | 黄芪总皂苷含量(％) | 黄芪甲苷含量(％) |
| 123平均 | 50505050 | 0.3950.910.4950.6 | 0.791.820.991.20 | 66.853.460.760.3 | 3.22.23.63.0 |
根据上述工艺，制得黄芪提取物三批样品，其含量和得率见上表。由结果可以看出，通过本工艺制备的黄芪总皂苷提取物得率为0.5～2％，总皂苷含量不低于50％，黄芪甲苷含量不低于2.0％。
实施例3 LHH组合物I粉针剂的制备
处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 25g
甘露醇 100g
无菌注射用水 加至3000ml
共制备 1000支
制备工艺：
1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将硫普罗宁和黄芪多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将黄芩苷加入少量注射用水，用少量氢氧化钠溶液溶解完全，加入处方量的聚山梨酯80搅拌均匀。合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.22um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
实施例4 LHH组合物II粉针剂的制备
处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 30g
甘露醇 100g
无菌注射用水 加至3000ml
共制备 1000支
制备工艺：
1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将硫普罗宁加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将黄芩苷和黄芪总皂苷加入少量注射用水，用少量氢氧化钠溶液溶解完全，加入处方量的聚山梨酯80搅拌均匀。合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.22um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
实施例5 LHH组合物I水针剂的制备
处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 25g
注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
制备工艺：
1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将硫普罗宁和黄芪多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将黄芩苷加入少量注射用水，用少量氢氧化钠溶液溶解完全，加入处方量的聚山梨酯80搅拌均匀。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例6 LHH组合物II水针剂的制备
处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 30g
注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
制备工艺：
1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将硫普罗宁加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将黄芩苷和黄芪总皂苷加入少量注射用水，用少量氢氧化钠溶液溶解完全，加入处方量的聚山梨酯80搅拌均匀。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例7 LHH组合物I氯化钠输液的制备
处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 25g
氯化钠 900g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
制备工艺：
1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将硫普罗宁和黄芪多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将黄芩苷加入少量注射用水，用少量氢氧化钠溶液溶解完全，加入处方量的聚山梨酯80搅拌均匀。将氯化钠用适量注射用水溶解完全，合并上述溶液，补加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
5)经0.45um的微孔滤膜精滤。
6)检查溶液的澄明度，半成品化验。
7)灌装于100ml的输液瓶中。
8)115℃热压灭菌30分钟。
9)灯检，成品全检，包装入库。
实施例8 LHH组合物II氯化钠输液的制备
处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 30g
氯化钠 900g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
制备工艺：
1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将硫普罗宁加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将黄芩苷和黄芪总皂苷加入少量注射用水，用少量氢氧化钠溶液溶解完全，加入处方量的聚山梨酯80搅拌均匀。将氯化钠用适量注射用水溶解完全，合并上述溶液，补加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
5)经0.45um的微孔滤膜精滤。
6)检查溶液的澄明度，半成品化验。
7)灌装于100ml的输液瓶中。
8)115℃热压灭菌30分钟。
9)灯检，成品全检，包装入库。
实施例9 LHH组合物I葡萄糖输液的制备
处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 25g
葡萄糖 5000g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
制备工艺：
1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将硫普罗宁和黄芪多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将黄芩苷加入少量注射用水，用少量氢氧化钠溶液溶解完全，加入处方量的聚山梨酯80搅拌均匀。合并上述溶液，补加注射用水至全量。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例10 LHH组合物II葡萄糖输液的制备
处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 30g
葡萄糖 5000g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
制备工艺：
1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将硫普罗宁加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将黄芩苷和黄芪总皂苷加入少量注射用水，用少量氢氧化钠溶液溶解完全，加入处方量的聚山梨酯80搅拌均匀。合并上述溶液，补加注射用水至全量。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例11 LHH组合物片剂的制备
LHH组合物I处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
淀粉 40.0g
微晶纤维素 40.0g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 5.0g
羧甲淀粉钠 10.0g
共制备 1000片
LHH组合物II处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
淀粉 40.0g
微晶纤维素 40.0g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 5.0g
羧甲淀粉钠 10.0g
共制备 1000片
制备工艺：
1)将硫普罗宁、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)和黄芩苷分别粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将黄芪多糖(或黄芪总皂苷)、黄芩苷、硫普罗宁、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的片重压片。
10)成品全检，包装入库。
实施例12 LHH组合物胶囊剂的制备
LHH组合物I处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
淀粉 20.0g
微晶纤维素 60.0g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 5.0g
共制备 1000粒
LHH组合物II处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
淀粉 20.0g
微晶纤维素 60.0g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 5.0g
共制备 1000粒
制备工艺：
1)将硫普罗宁、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)和黄芩苷分别粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将黄芪多糖(或黄芪总皂苷)、黄芩苷、硫普罗宁、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的装量装入胶囊。
10)成品全检，包装入库。
实施例13 LHH组合物颗粒剂的制备
LHH组合物I处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
糖粉 2000.0g
2％HPMC50％乙醇溶液 适量
共制备 1000包
LHH组合物II处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
糖粉 2000.0g
2％HPMC50％乙醇溶液 适量
共制备 1000包
制备工艺：
1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将硫普罗宁、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)和黄芩苷分别粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将硫普罗宁、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)、黄芩苷与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，
4)过20目筛制颗粒。
5)颗粒在60℃的条件下烘干。
6)干颗粒过18目筛整粒。
7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
8)包装，成品全检，包装入库。
实施例14 LHH组合物滴丸剂的制备
LHH组合物I处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
聚乙二醇6000 1000g
LHH组合物II处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
聚乙二醇6000 1000g
制备工艺：
将硫普罗宁、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)和黄芩苷粉碎过100目筛后备用。将聚乙二醇6000在水浴中加热熔融，待全部熔融后加入硫普罗宁、黄芪多糖(或黄芪总皂苷)和黄芩苷，搅拌溶解，60目筛过滤，保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸。
实施例15 LHH组合物软胶囊剂的制备
LHH组合物I处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
大豆油 300.0g
大豆磷脂 40g
蜂蜡 20g
共制备 1000粒
LHH组合物II处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
大豆油 300.0g
大豆磷脂 40g
蜂蜡 20g
共制备 1000粒
制备工艺：
将处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷，加入黄芪多糖(或黄芪总皂苷)、黄芩苷、硫普罗宁研匀，压制成软胶囊即可。
实施例16 LHH组合物口服液体剂的制备
LHH组合物I处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪多糖 50g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 25g
苯甲酸钠 15g
甜菊甙 10g
纯化水 加至10000ml
共制备 1000支
LHH组合物II处方：
硫普罗宁 100g
黄芩苷 250g
黄芪总皂苷 48g(相当于黄芪药材4g)
聚山梨酯80 30g
苯甲酸钠 15g
甜菊甙 10g
纯化水 加至10000ml
共制备 1000支
制备工艺：
1)将硫普罗宁和黄芪多糖(或黄芪总皂苷)加入配液量30％的水中加热搅拌溶解完全。将黄芩苷加入少量水，用少量氢氧化钠溶液溶解完全，加入处方量的聚山梨酯80搅拌均匀。合并上述溶液，补加纯化水至全量。
2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述两个溶液，补加水至全量。
4)过0.8um的微孔滤膜过滤。
5)半成品化验。
6)灌装。成品全检，包装入库。
Claims (10)
1.一种药物组合物，其特征在于该组合物主要由下列重量份的原料药制成：硫普罗宁1～100份、黄芩苷5～250份、黄芪10～10000份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于原料药的重量份数为：硫普罗宁2～50份、黄芩苷10～100份、黄芪100～1000份。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于原料药的重量份数为：硫普罗宁10份、黄芩苷25份、黄芪400份。
4.如权利要求1-3所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于，其中的黄芪可以用适宜的溶剂和方法制备得到提取物，提取物再和药学上可接受的辅料混合制成任一制剂，提取物中所含的主要有效成分为：黄芪多糖或黄芪总皂苷。
5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，提取物中的主要有效成分的总含量不低于30％。
6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该组合物还可以由下列原料药制成：硫普罗宁、黄芩苷和黄芪多糖或黄芪总皂苷，其重量配比为：硫普罗宁1～100份、黄芩苷5～250份、黄芪多糖0.1～150份；或者为：硫普罗宁1～100份、黄芩苷5～250份、黄芪总皂苷0.1～150份。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其原料药的重量配比为：硫普罗宁2～50份、黄芩苷10～100份、黄芪多糖1～15份；或者为：硫普罗宁2～50份、黄芩苷10～100份、黄芪总皂苷1～15份。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其原料药的重量配比为：硫普罗宁10份、黄芩苷25份、黄芪多糖2～8份；或者为：硫普罗宁10份、黄芩苷25份、黄芪总皂苷2～8份。
9.如权利要求6-8所述的任一药物组合物，其特征在于，其中的黄芪多糖的含量不低于30％；黄芪总皂苷的含量不低于30％，黄芪甲苷含量不低于1％。
10.如权利要求1-3、6-8所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物可以与药学上可接受的辅料混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。
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