CN1969957B - 一种由苦参、五味子和黄芪配伍组成的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种用于肝炎的药物组合物以及含有该药物组合物的制剂及其制备方法和用途，制成它所含药效组分的原料药的组成为苦参、五味子和黄芪，或者为苦参提取物、五味子提取物和黄芪提取物。其重量配比范围为：苦参4～64份、五味子0.5～20份、黄芪0.5～20份，或者为苦参提取物120～1930份、五味子提取物15～600份、黄芪多糖5～240份，或者为苦参提取物120～1930份、五味子提取物15～600份、黄芪总皂苷5～250份。该药物组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型，优选口服制剂或注射剂。该药物组合物具有抗肝炎作用，可用于制备治疗甲肝、乙肝、丙肝等各种类型的肝炎的药物。

Description

一种由苦参、五味子和黄芪配伍组成的药物组合物
1、技术领域
本发明涉及一种由苦参或其提取物、五味子或其提取物和黄芪或其提取物制成的用于治疗肝炎类疾病的药物组合物，及其制备方法和制剂，属于医药技术领域。
2、背景技术
中国是病毒性肝炎的高发区，约有8％～10％的人群为乙肝病毒携带者，约为1.3亿人，占全球乙肝病毒携带者的1/3，其中约有3000万人患慢性肝炎，平均年发病例数约140万左右，每年因肝炎病死亡约30万人。丙型肝炎病毒携带者0.38亿人，加上其他类型的肝炎，患肝炎的总人数近2亿人，估计每年因病毒性肝炎导致直接经济损失300亿～500亿人民币。因此，研究开发安全有效的治疗肝炎的药物，成为迫切需要解决的问题。
苦参是常用临床中药之一，是豆科植物苦参SopHora flavescens Ait.的干燥根，又名枯骨、草槐、地槐等，具有清热燥湿、杀虫、止痒、安神之功效。现代临床药理研究表明苦参有抗病原体、抗肿瘤、调节免疫、抑制变态反应、镇静、利尿等作用。苦参具有抗肝损伤作用，实验发现，苦参碱对巨噬细胞、肝枯否细胞分泌的IL-1，IL-6，TNF-a有明显抑制作用，氧化苦参碱对大鼠贮脂细胞增殖和胶原合成有抑制作用。苦参碱和氧化苦参碱对肝细胞的保护作用，表现在丙氨酸转氨酶降低，肝脏病理变化明显减轻，抑制了巨噬细胞释放肿瘤坏死因子。苦参碱和氧化苦参碱的抗炎、免疫抑制、清除自由基、利尿和解毒等作用，是治疗各种肝损害、自身免疫性疾病及变态反应性疾病的药理学基础。
五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。五味子具有如下药理作用：它能增强大脑皮层兴奋和抑制过程，使其相互平衡；明显镇静作用，与戊巴比妥钠、氯丙嗪等协同作用，拮抗兴奋药引起的惊厥，有安定药的特点；调节免疫、稳定肝脏细胞膜、保护细胞器、细胞核，促进病理修复、改善肝机能。
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，是一种常用中药，味甘、性温，有补气升阳、固表止汗、托毒排脓和生肌等功效。黄芪的主要药理作用有：抗衰老；清除自由基；黄芪多糖可显著提高机体的免疫力；黄芪多糖可增强人体细胞的生理代谢作用，能显著促进骨髓造血细胞DNA合成，加快有核细胞分裂过程，对体内血糖水平有双向调节作用；黄芪多糖在体外具有增强LAK细胞杀伤活性的作用，在体内对荷黑色素瘤B16细胞的小鼠具有显著增强IL-2/LAK抗肿瘤作用。
目前，利用苦参、五味子和黄芪的相互作用，配伍组方，用于制备治疗肝炎的药物，尚未见报道。
3、发明内容
为了满足临床需要，更好的治疗肝炎类疾病，提高人民健康水平，本发明提供了一种新的药物组合物及其制备方法和制剂。
按照重量组份计算，制成本发明药物组合物所含药效组分的原料药的组成为苦参、五味子和黄芪，其重量份数为：苦参400～6400份、五味子50～2000份、黄芪50～2000份；优选为：苦参800～3200份、五味子100～1000份、黄芪100～1000份，最佳为：苦参1600份、五味子300份、黄芪400份。
上述药物组合物中的原料药可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。总提取物中主要的有效成分为：苦参总碱(苦参碱和氧化苦参碱的总量)、五味子木质素类、黄芪多糖或黄芪总皂苷。
苦参的提取制备
苦参可以用适宜的溶剂经过提取加工得到苦参提取物，其主要有效成分为苦参总碱，溶剂优选酸水或乙醇，提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续提取法、树脂法中的一种或几种，也可参照文献方法制备。
本发明提供了苦参的优选提取制备工艺，具体如下：
取苦参药材，粉碎成粗粉，用0.2％盐酸渗漉至无生物碱反应为止，收集渗漉液，并通过已处理好的强酸型阳离子树脂，交换完毕后，将树脂用水洗至中性，干燥。用浓氨水碱化树脂，装入索氏提取器用氯仿连续回流提取至提取液无生物碱反应。氯仿提取液用无水硫酸钠脱水，减压回收氯仿，得稠膏状物。通过本工艺制备的苦参提取物得率为2～5％，含总碱即苦参碱(C15H24N2O)和氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量不低于70％。
苦参提取物还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法：
方法1：取苦参药材，粉碎成粗粉，用95％乙醇浸泡五次，过滤浸出液，薄膜蒸发浓缩至相对密度为1.04～1.09，减压蒸馏除尽乙醇，加2倍体积的2％盐酸，充分搅拌，放置过夜，滤过，弃去沉淀物。滤液用乙醚洗涤，弃去乙醚液，滤液用氢氧化钠碱化至pH9～10，加氯化钠饱和，用氯仿萃取至无生物碱反应，减压蒸馏得棕色稠膏状物质。通过本工艺制备的苦参提取物得率不低于1～6％，含总碱即苦参碱(C15H24N2O)和氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量不低于50％。
方法2：取苦参药材，粉碎成粗粉，加2倍量浓氨水，湿润1小时，加氯仿浸泡4次，滤过，滤液减压回收氯仿，加2倍体积的2％盐酸，充分搅拌，放置过夜，滤过，弃去沉淀物。滤液用乙醚洗涤，弃去乙醚液，滤液用氢氧化钠碱化至pH9～10，加氯化钠饱和，用氯仿萃取至无生物碱反应，减压蒸馏得棕色稠膏状物质。通过本工艺制备的苦参提取物得率不低于1～6％，含总碱即苦参碱(C15H24N2O)和氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量不低于60％。
五味子的提取制备
五味子可以用适宜的溶剂经过提取加工得到五味子提取物，溶剂优选水或醇，提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、超临界CO2萃取法、回流提取法或连续提取法。
本发明提供了五味子的优选提取制备工艺，具体如下：
取五味子药材，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，2小时/次，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15的浓缩液，加乙醇使含醇量达60％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15的浓缩液，再加乙醇使含醇量达80％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制备的五味子提取物中提取物得率为2～4％，五味子醇甲含量不低于10％，醚溶性浸出物含量不低于30％。
五味子还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法：
方法1：取五味子药材，粉碎成粗粉，加60％乙醇煎煮二次，每2小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15的浓缩液，再加乙醇使含醇量达80％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制备的五味子提取物得率为1～5％，五味子醇甲含量不低于6％，醚溶性浸出物含量不低于20％。
方法2：取五味子药材，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，每2小时，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15的浓缩液，加乙醇使含醇量达70％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15的浓缩液，再加乙醇使含醇量达90％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制备的五味子提取物得率为1.5～5.5％，五味子醇甲含量不低于8％，醚溶性浸出物含量不低于25％。
黄芪的提取制备
黄芪可以用适宜的溶剂经过提取加工得到黄芪提取物，提取溶剂优选水或乙醇，黄芪的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。
黄芪多糖和黄芪总皂苷均为治疗肝炎的主要有效成分，下面分别提供二者的制备方法。
以多糖为主要有效成分的黄芪提取物(以下简称黄芪多糖)的优选提取制备工艺：
取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。通过本工艺制备的黄芪多糖的得率为0.5～2％，多糖的含量不低于70％。
黄芪多糖还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法：
方法1：取黄芪药材，加水回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.23，加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，沉淀加水溶解，滤过，再加乙醇使含醇量达85％，静置24小时，滤过，收集沉淀，真空干燥即得。通过本工艺制备的黄芪多糖得率为2～4％，多糖含量不低于40％。
方法2：取黄芪药材，加10倍量80％乙醇提取4小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液合并，过滤，滤液加乙醇使含醇量达85％，过滤，滤液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的黄芪多糖得率为3～4％，多糖含量不低于35％。
以总皂苷为主要有效成分的黄芪提取物(以下简称黄芪总皂苷)的优选提取制备工艺：
取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪总皂苷得率为0.5～2％，总皂苷含量不低于50％，其中黄芪甲苷含量不低于2.0％。
黄芪总皂苷还可由如下方法制备，但不仅限于下述方法：
方法1：取黄芪，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含乙醇量为60％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪总皂苷得率为3～5％，总皂苷含量不低于30％，其中黄芪甲苷含量不低于1％。
方法2：取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理1次使含乙醇量为60％，冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，并减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪总皂苷得率为2～4％，总皂苷含量为不低于40％，其中黄芪甲苷含量不低于1％。
本发明药物组合物除可以用上述药材投料制得外，还可由提取物代替药材直接投料制成。根据苦参提取物相对于药材的平均得率3.01％，五味子提取物相对于药材的得率3.0％，黄芪多糖相对于药材的得率1.2％，黄芪总皂苷相对于药材的得率1.25％，分别计算，可以有以下两种不同配比，其重量份数分别为：
配比1：苦参提取物12～193份、五味子提取物1.5～60份、黄芪多糖0.5～24份；优选为：苦参提取物24～96份、五味子提取物3～30份、黄芪多糖1～12份；最优为：苦参提取物48份、五味子提取物9份、黄芪多糖5份。
配比2：苦参提取物12～193份、五味子提取物1.5～60份、黄芪总皂苷0.5～25份；优选为：苦参提取物24～96份、五味子提取物3～30份、黄芪总皂苷1～12.5份；最优为：苦参提取物48份、五味子提取物9份、黄芪总皂苷5份。
上述配比中，苦参提取物的主要有效成分为总碱即苦参碱和氧化苦参碱的总量不低于50％，最好不低于70％；五味子提取物中五味子醇甲含量不低于6％，最好不低于10％，醚浸出物含量不低于20％，最好不低于30％；黄芪多糖中多糖含量不低于35％，最好不低于70％；黄芪总皂苷中总皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，其中黄芪甲苷的含量不低于1％，最好不低于2％。
以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。
以上组成，若以克为单位，可以制成100～10000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作为片剂，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
本发明进一步要求保护本发明药物组合物在制备治疗肝炎方面疾病的药物中的应用。本发明药物组合物具有抗炎、保肝、调节免疫、促进病理修复、改善肝机能的作用，可用于甲肝、乙肝、丙肝等各种类型的肝炎。药理实验表明，本发明药物组合物对醋氨酚所致小鼠肝损伤具有显著保护作用，可显著降低谷丙转氨酶(ALT)和过氧化脂质(LPO)的活性；对D-氨基半乳糖所致的小鼠急性肝损伤具有显著保护作用，可显著降低谷草转氨酶(AST)活性，增加血清蛋白(ALB)的数量，缩短凝血时间(CT)；对四氯化碳(CCl4)所致的小鼠急性肝损伤具有显著保护作用，可显著降低肝指数；对CCl4所致的大鼠肝纤维化具有显著保护作用，可显著降低ALT、AST的活性，显著降低透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)的含量；对鸭乙肝病毒具有显著抑制作用，且停药后无明显反跳；可显著降低小鼠慢性酒精肝血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平。
本发明药物组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的制剂，优选口服制剂或注射剂，以口服或肠胃外给药等方式施用于需要这种治疗的患者。
用于肠胃外给药时，可将其制成注射剂，注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，包括注射液、注射用无菌粉末和注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，其标示装量可以为0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，一般不小于100ml的供静脉滴注用的大体积注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，无菌粉末可以用溶媒结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液。
用于口服给药时，可将其制成常规的固体制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂和口服溶液剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂；片剂以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅料充填于空心胶囊或密封于软质囊材中的固体制剂；胶囊剂依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊(通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊。颗粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的干燥颗粒状制剂；颗粒剂可分为可溶颗粒(通称为颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。丸剂系指药物与适宜的辅料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂；丸剂包括滴丸、糖丸、小丸等。口服溶液剂系指药物溶解于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。
本发明药物组合物的制剂可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。
本发明药物组合物在制成注射剂时，所用溶剂可以是水性溶剂和非水性溶剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂，如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。水性溶剂最常用的水性溶剂为注射用水，也可用0.9％氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；非水性溶剂常用的非水性溶剂为植物油，主要为供注射用大豆油，其他还有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。常用的渗透压调节剂包括氯化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠或葡萄糖；常用的pH值调节剂包括醋酸+醋酸钠、乳酸、枸橼酸+枸橼酸钠、碳酸氢钠+碳酸钠等；常用的增容剂包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的抗氧剂包括亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等；常用抑菌剂包括苯酚、甲酚、三氯叔丁醇、苯甲醇等。
本发明药物组合物在制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。填充剂包括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等。
本发明的药物组合物具有以下优点：
(1)本发明提供了一种新的用于治疗肝炎的药物组合物，满足了临床需要。
(2)对本发明药物组合物中药物组份的用量进行了摸索研究，通过对本发明药物组合物对醋氨酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用、对小鼠四氯化碳中毒所致急性肝损伤的研究，筛选出具有显著疗效的重量份范围。
(3)首次通过药效学实验研究证明：本发明的药物组合物对醋氨酚、D-氨基半乳糖、四氯化碳所致的小鼠急性肝损伤有保护作用，可抗四氯化碳所致的大鼠肝纤维化，可以抑制鸭乙肝病毒的繁殖，对小鼠慢性酒精肝损伤具有保护作用，三药具有协同增效作用，疗效显著，是本领域普通技术人员所意想不到的。
(4)苦参具有良好的抗肝炎作用，五味子和黄芪作辅助药可显著提高抗肝炎活性，合并用药疗效确切，且减小了相对用药剂量，具有广泛的应用前景。
以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些实验例包括本发明药物组合物的药效学实验。
苦参、五味子和黄芪药材的组合物以下简称KWH组合物，苦参提取物、五味子提取物和黄芪多糖的组合物以下简称KWH组合物I，苦参提取物、五味子提取物和黄芪总皂苷的组合物以下简称KWH组合物II。实验例中所用的苦参提取物取自实施例1，五味子提取物取自实施例2，黄芪多糖取自实施例3，黄芪总皂苷取自实施例4。
实验例1 KWH组合物对醋氨酚损伤小鼠肝组织ALT和LPO的影响
实验动物：ICR小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
模型组：0.9％生理盐水，自制；
苦参组：苦参颗粒剂，自制；
五味子组：五味子颗粒剂，自制；
黄芪组：黄芪颗粒剂，自制；
KWH颗粒剂不同配比组，配比见表1，自制。
实验方法：取小鼠230只，随机分成23组，每组10只。空白对照组和模型组每日灌胃给与生理盐水，给药组灌胃给药，每日1次，连续10d。空白对照组在末次给药6h后给与生理盐水，模型组和给药组在末给药6h后给与醋氨酚300mg/kg，16h后断头，取血液、肝脏，进行生化指标血清ALT(谷丙转氨酶)和肝组织LPO(过氧化脂质)的测试。
表1 KWH组合物对醋氨酚损伤小鼠肝组织ALT和LPO的影响(X±SD，n＝10)
Figure G061E9186220061130D000081
注：与空白对照组比，&&p＜0.01；与模型组比，*p＜0.05，**p＜0.01；与苦参组比，#p＜0.05，##p＜0.01；与五味子组比，△p＜0.05，△△p＜0.01；与黄芪组比，☆p＜0.05，☆☆p＜0.01。
实验结果和结论：结果见表1。与空白对照组相比，模型组的ALT和LPO的活性显著升高，差异显著(p＜0.01)，说明造模可靠。与模型组相比，苦参组、五味子组、黄芪组和KWH组合物不同配比组ALT和LPO的活性显著降低(p＜0.05，p＜0.01)，说明各药均对醋氨酚所致小鼠肝损伤有保护作用。其中KWH组合物各配比组疗效更好(p＜0.01)，均优于单用苦参、五味子、黄芪，说明苦参、五味子和黄芪三药合用，有协同增效作用，其中以苦参800～3200份、五味子100～1000份、黄芪100～1000份内效果更好，苦参1600份、五味子300份、黄芪400份时效果最好。
实验例2KWH对四氯化碳中毒所致急性肝损伤小鼠肝指数的影响
受试动物：健康昆明种小鼠，体重18～2g。
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
模型组：CCl4注射液，自制；
苦参组：苦参胶囊，自制；
KWH胶囊剂不同配比组：配比见表2，自制。
实验方法：取小鼠160只，随机分为16组，分别为空白对照组、模型组、苦参组、KWH不同配比组，每组10只。各给药组均用生理盐水配置成混悬液后灌胃给药。空白对照组灌胃0.9％生理盐水10ml/kg，其余各组动物均腹腔注射CCl410ml/kg，禁食过夜。空白对照组给相应体积的生理盐水，给药组灌胃给药，每日1次，连续10天，于最后一次给药后，断头处死动物，取肝脏，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精确称重。
表2KWH对四氯化碳中毒所致急性肝损伤小鼠肝指数的影响(X±SD，n＝10)
注：与空白对照组比，**p＜0.01；与模型组比，#p＜0.05，##p＜0.01；与苦参组比，&p＜0.05，&&p＜0.01。
实验结果和结论：结果见表2。与空白对照组比较，模型组的肝指数极显著增大(p＜0.01)，说明造模成功。与模型组比较，各给药组的肝指数有显著差异(p＜0.05，p＜0.01)，说明上述药物对于四氯化碳所致肝损伤均有保护作用。与苦参组比，KWH各配比组的作用均优于单用苦参(p＜0.05，p＜0.01)，说明苦参、五味子和黄芪三药合用有协同增效作用，且在苦参8～32份、五味子1～10份、黄芪1～10份范围内效果较好，苦参16份、五味子3份、黄芪4份时效果最好。
实验例3KWH组合物对醋氨酚损伤小鼠肝组织ALT和LPO的影响
实验动物：ICR小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；模型组：0.9％生理盐水注射液，自制；苦参提取物组：苦参提取物注射液，自制；五味子提取物组：五味子提取物注射液，自制；黄芪多糖组：黄芪多糖注射液，自制；黄芪总皂苷组：黄芪总皂苷注射液，自制；
组合物I不同配比组：组合物I注射液(苦参提取物+五味子提取物+黄芪多糖)不同配比，自制(制备方法参见实施例8)；
组合物II不同配比组：组合物II注射液(苦参提取物+五味子提取物+黄芪总皂苷)不同配比，自制(制备方法参见实施例8)。
实验方法：实验方法同实验例1。取小鼠180只，随机分成18组，每组10只。
表3KWH组合物对醋氨酚损伤小鼠肝组织ALT和LPO的影响(X±SD，n＝10)
Figure 956443DEST_PATH_G200610149186201D00011
注：与空白对照组比，◇◇p＜0.01；与模型组比，*p＜0.05，**p＜0.01；与苦参总碱组比，#p＜0.05，##p＜0.01；与五味子组比，△p＜0.05，△△p＜0.01；与黄芪多糖组比，☆p＜0.05，☆☆p＜0.01；与黄芪总皂苷组比，&p＜0.05，&&p＜0.01。
实验结果和结论：结果见表3。与空白对照组相比，模型组ALT和LPO的活性显著升高，差异显著(p＜0.01)，说明造模可靠。与模型组相比，苦参总碱组、五味子组、黄芪多糖组、黄芪总皂苷组和KWH组合物I和KWH组合物II各配比组ALT和LPO的活性明显降低(p＜0.05，p＜0.01)，说明各药均对醋氨酚所致小鼠肝损伤有保护作用。其中KWH组合物I和KWH组合物II各配比组疗效更好(p＜0.01)，均优于单用苦参总碱、五味子、黄芪多糖或黄芪总皂苷，说明苦参、五味子和黄芪三药合用，有协同增效作用。
实验例4 KWH组合物对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
模型组：0.9％生理盐水注射液，自制；
苦参提取物组：苦参提取物注射液，自制；
KWH组合物I低、中、高剂量组：组合物I注射液，苦参+五味子+黄芪1600+300+400，自制(制备方法参见实施例9)；
KWH组合物II低、中、高剂量组：组合物II注射液，苦参+五味子+黄芪1600+300+400，自制(制备方法参见实施例9)。
实验动物：ICR小鼠，体重20～25g，雌雄各半。
实验方法：取小鼠90只，随机分为9组，分别为空白对照组、模型组、苦参提取物组、KWH组合物I注射液低、中、高剂量组和KWH组合物II注射液低、中、高剂量组，每组10只。空白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg鼠重，每日1次，连续10d；给药组尾静脉注射给药，每日1次，连续10d。空白对照组在最后一次尾静脉注射1h后腹腔注射生理盐水，其余各组动物均腹腔注射100g/L的D-氨基半乳糖500mg/kg。24h后处死动物取血，离心，取血清，全自动生化分析仪检测。处死前动物断尾取血玻片法测定动物凝血时间。检测指标为天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清白蛋白(ALB)、凝血时间(CT)。
表4 组合物对D-氨基半乳糖致急性肝损伤小鼠血清和凝血时间的影响(X±SD，n＝10)
Figure G061E9186220061130D000111
注：与空白对照组比较，◇◇p＜0.01，◇◇◇p＜0.001；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与苦参总碱组比较，#p＜0.05，##p＜0.01
实验结果和结论：结果见表4。与空白对照组相比，模型组天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性显著升高(p＜0.001)，血清白蛋白(ALB)数量显著减少(p＜0.01)，凝血时间(CT)闲显著延长(p＜0.001)，说明造模可靠。与模型组相比，苦参总碱组、KWH组合物各剂量组天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性明显降低(p＜0.05，p＜0.01)，血清白蛋白(ALB)数量明显增加(p＜0.01)，凝血时间(CT)闲明显缩短(p＜0.001)，说明各药均有保肝作用，对D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤有保护作用。KWH组合物I和KWH组合物II各剂量组疗效均优于单用苦参总碱，说明苦参、五味子和黄芪三药合用，有协同增效作用。其中KWH组合物I和KWH组合物II中、高剂量保护作用更明显(p＜0.01)。
实验例5组合物抗鸭乙肝病毒作用
实验动物：市售1日龄北京鸭。
病毒：DHBV(乙型肝炎病毒)阳性血清，复旦大学医学院微生物学教研室。
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
模型组：0.9％生理盐水注射液，自制；
苦参提取物组：苦参提取物注射液，自制；
五味子提取物组：五味子提取物注射液，自制；
阳性对照组：注射用阿昔洛韦，石药集团中诺药业(石家庄)有限公司；
KWH组合物I高、中、低剂量组：组合物I注射液，相当于苦参+五味子+黄芪1600+300+400，自制(制备方法参见实施例9，处方1)；
KWH组合物II高、中、低剂量组：组合物II注射液，相当于苦参+五味子+黄芪1600+300+400，自制(制备方法参见实施例9，处方2)。
实验方法：北京鸭经足静脉注射0.2mlDHBV阳性血清，7d后取血，分离血清，-20℃保存待检。筛选出感染成功的阳性鸭60只，随机分为10组，每组6只，分别为空白对照组、阳性对照组、苦参提取物组、五味子提取物组、组合物I注射液高、中、低剂量组和组合物II注射液高、中、低剂量组。空白对照组每日静脉注射生理盐水20ml/kg，每日2次，连续14d；给药组注射给药，每日2次，连续14d。阳性药物作为治疗对照组，以ACV按100mg/kg给药，2次/d，给药2周。分别用于药前(1d)、用药第7天(T7)，用药第14天(T14)和停药后第7天(P7)。自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-20℃保存待检。采用DHBV-DNA Dot Blot法，以杂交斑点吸光度值(A)作为标本DHBV-DNA水平值。
实验结果和结论：结果见表5。阳性对照(阿昔洛韦)组在给药后第7天和第14天，与给药前及与空白对照组比较，差异有显著性(p＜0.01)，但停药后又显著升高，与给药前比较差异无显著性(p＞0.05)。不同剂量组合物I和组合物II均对DHBV有抑制作用，且停药后无反跳，其中高、中剂量组抑制作用更为明显。组合物I和组合物II各给药组疗效均优于单用苦参提取物或五味子提取物，说明苦参、五味子和黄芪三药合用，有协同增效作用。
表5 组合物对DHBV-DNA的抑制作用(X±SD，n＝6)
Figure G061E9186220061130D000131
注：与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与给药前相比#p＜0.05，##p＜0.01。
实验例6 KWH组合物抗大鼠肝纤维化作用
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
苦参总碱组：苦参总碱注射液，自制；
KWH组合物I低、中、高剂量组：KWH组合物I注射液，苦参+五味子+黄芪1600+300+400，自制(制备方法参见实施例8，处方1)；
KWH组合物II低、中、高剂量组：KWH组合物II注射液，苦参+五味子+黄芪1600+300+400，自制(制备方法参见实施例8，处方2)。
实验动物：Wistar大鼠，体重180～230g，雄性。
实验方法：取健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每日1次，共10周，作为对照组。肝纤维化模型组应用40％CCl4花生油溶液按3ml/kg皮下注射，每周2次，共8周，诱导肝纤维化模型。取肝纤维化模型大鼠80只，随机分为8组，分别为模型组、苦参提取物组、KWH组合物I注射液低、中、高剂量组和KWH组合物II注射液低、中、高剂量组，每组10只。除对照组外，其余各组继续以40％CCl4花生油溶液3ml/kg皮下注射，每日1次。苦参总碱组、KWH组合物I注射液低、中、高剂量组和KWH组合物II注射液低、中、高剂量组同时灌胃给药相应药物，剂量见下表。继续给药2周。10周后宰杀大鼠，无菌操作取血2ml，分离血清，-20℃保存，用放射免疫法检测肝纤维化指标：透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)；用生化法检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)，采用全自动生化分析仪进行检测。
表6 KWH组合物对CCl4所致肝纤维化大鼠的血清学指标的影响(X±SD，n＝10)
Figure G061E9186220061130D000141
注：与空白对照组比较，◇◇p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与苦参总碱组比较，#p＜0.05。
实验结果和结论：结果见表6。与空白对照组比较，模型组大鼠血清ALT、AST、HA、LN含量有显著性差异，说明模型稳定可靠。硫普罗宁、KWH组合物I和KWH组合物II治疗后肝纤维化大鼠血清ALT和AST均低于模型组，差异具有显著性(p＜0.05或p＜0.01)，提示苦参、KWH组合物I和KWH组合物II有降酶和保护肝功能的作用；苦参总碱组、KWH组合物I和KWH组合物II治疗后血清HA和LN水平均显著低于模型组，差异具有显著性(p＜0.05或p＜0.01)，提示苦参、KWH组合物I和KWH组合物II均可改善肝纤维化血清学指标，具有抗肝纤维化的作用。其中，KWH组合物I和KWH组合物II组疗效优于苦参总碱组，提示苦参、五味子和黄芪三药合用，有协同增效作用。
实验例7 KWH组合物对小鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用
动物健康小鼠，100只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为10组，每组10只。
供试品氯化钠注射液(正常对照组)：250ml:2.25g，山东长富洁晶药业有限公司；
苦参提取物组：苦参提取物片剂
KWH组合物I低、中、高剂量组：KWH组合物I片剂，苦参+五味子+黄芪1600+300+400，自制(制备方法参见实施例5，处方1)；
KWH组合物II低、中、高剂量组：KWH组合物II片剂，苦参+五味子+黄芪1600+300+400，自制(制备方法参见实施例5，处方2)。
实验方法健康小鼠10只，灌胃给予蒸馏水12ml/kg，每天1次，共5周，作为正常对照组。其余小鼠，灌胃给予50％乙醇12ml/kg，每天1次，共5周；随后随机分为8组，分别为模型组和各给药组。此后，各组按表1-4腹腔注射给药，每日1次，共8周。末次给药24h后，下腔静脉采血，测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平；同时，取肝组织作常规病理组织学检查。
表7KWH组合物对小鼠慢性酒精性肝损伤的影响(X±SD，n＝10)
Figure DEST_PATH_GSB00000117441800021
注：与正常对照组相比较，##p＜0.01；与模型组相比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与苦参提取物组比较，&p＜0.05，&p＜0.01。
实验结果和结论结果见表7。与正常对照组相比较，模型组的血清ALT、AST、TG水平均显著升高(p＜0.01)，病理组织学检查发现肝组织明显受损，肝细胞脂肪性病变、空泡变性、凋亡等，说明造模成功。与模型组相比较，各给药组对小鼠慢性酒精性肝损伤均具有保护作用，能降低血清血清ALT、AST、TG水平，减轻肝组织病变(p＜0.05，p＜0.01)。与苦参提取物组比，KWH组合物I和II的低剂量组优于苦参(p＜0.05)，中、高剂量组有极显著差异(p＜0.01)，说明苦参提取物、五味子提取物和黄芪提取物合并用药有协同增效作用。
4、具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例5～11中所用的苦参提取物取自实施例1，五味子提取物取自实施例2，黄芪多糖取自实施例3，黄芪总皂苷取自实施例4。
实施例1苦参提取物的制备(以苦参总碱为主要有效成分)
取苦参药材，粉碎成粗粉，用0.2％盐酸渗漉至无生物碱反应为止，过滤渗漉液，并通过阳离子树脂，交换完毕后，将树脂洗至中性，干燥。用浓氨水碱化树脂，装入索氏提取器用氯仿连续回流提取至提取液无生物碱反应。氯仿提取液用无水硫酸钠脱水，减压回收氯仿，得稠膏状物。
苦参提取物鉴别实验
(1)取本品约10mg，加1％盐酸溶液10ml使溶解，滤过，滤液分置三支试管中，一管中加碘化铋钾实验生成红棕色沉淀；一管中加碘化汞钾试液，生成黄白色沉淀；另一管中加碘化钾碘实验，生成棕褐色沉淀。
(2)取本品适量，加乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作为供试品溶液。另取苦参药材粉末0.5g，加氯仿25ml，浓氨试液0.3ml，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液。再取苦参碱和氧化苦参碱对照品适量，分别加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述四种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试夜(50∶6∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的两个斑点。
苦参提取物含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验用氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液(75∶10∶15)为流动相；检测波长为220nm。理论板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，分别加乙腈-无水乙醇(80∶20)溶解，制成每1ml含苦参碱0.05mg，氧化苦参碱0.15mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0.5ml，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，通过中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7∶3)各20ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇适量使溶解，并转移至10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取上述对照品溶液各5μl与供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
根据上述工艺制得三批样品，提取物得率和含量见表8。由结果可知，苦参提取物得率为2～5％，含量不低于70％。
表8苦参提取物的得率和含量
实施例2五味子提取物的制备
取五味子药材，粉碎成粗粉，加水煎煮2次，每次2小时，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15的浓缩液，加乙醇使含醇量达60％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15的浓缩液，再加乙醇使含醇量达80％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
五味子提取物的鉴别
取本品粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
五味子提取物的含量测定
6色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13∶7)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13∶7)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备取五味子醇甲对照品15mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含五味子醇甲0.3mg)。
供试品溶液的制备取本品粉末约0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理(功率250W，频率44kHz)20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
醚溶性浸出物的含量测定照挥发性醚浸出物测定法(附录X)测定。
取本品粉末(过四号筛)4g，置五氧化二磷干燥器中干燥12小时，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流8小时，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸发皿中，放置，挥去乙醚，残渣置五氧化二磷干燥器中干燥18小时，精密称定，缓缓加热至105℃，并于105℃干燥至恒重。其减失重量即为挥发性醚浸出物的重量。计算醚浸出物含量。
根据上述工艺，制得三批样品，得率和含量见表9。由结果可知，通过本工艺制备的五味子提取物，得率2～4％，其中五味子醇甲的含量不低于10％，醚溶性浸出物含量不低于30％。
表9五味子提取物的得率和含量
Figure DEST_PATH_G061E9186220070929D000091
实施例3以多糖为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪多糖的制备
黄芪多糖制备工艺：
取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。
黄芪多糖的含量测定
标准溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。
标准曲线绘制 精密量取标准溶液0.1ml～0.6ml共6份，分别置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，铝片0.3g，碳酸氢钠0.15g，混合蒸馏，收集182℃馏分，配制成5％水溶液)1.0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，置水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温，另以2.0ml水同上平行操作作为空白对照，在490nm波长处测定吸收值，计算回归方程。
测定方法取黄芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法自“加水至2.0ml”起，依法测定吸收值，依回归方程计算多糖的含量。
黄芪多糖的鉴别
黄芪多糖的鉴别
(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节pH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。
(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。
根据上述工艺，制得黄芪提取物三批样品，得率和含量见表10。由结果可以看出，通过本工艺制备的黄芪提取物中黄芪多糖的含量不低于50％，提取物得率为0.5～2％。
表10黄芪多糖的得率和含量
Figure DEST_PATH_G061E9186220070929D000101
实施例4以总皂苷为主要有效成分的黄芪提取物即黄芪总皂苷的制备
黄芪总皂苷制备工艺：
取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。
黄芪总皂苷鉴别实验
鉴别实验一取本品0.01g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～120目，5g，内径10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。
鉴别实验二取本品0.01g，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液加0.3％氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙脂15ml振摇提取，分取乙酸乙脂液，用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙脂1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作为展开剂，展开，取出，凉干，置氨蒸气中熏后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
黄芪总皂苷含量测定
总皂苷的含量测定
对照品溶液的制备精密称取于105℃干燥至恒重的黄芪甲苷对照品约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芪甲苷0.1mg)。
供试品溶液的制备取本品0.1g，精密称定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次10ml，弃去水液，正丁醇至水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法精密量取对照品溶液、供试品溶液各1ml，置25ml钠氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中显色15分钟，取出，立即置冰浴中冷却至室温，加入8ml冰醋酸，摇匀，在538nm波长处测定吸光度，计算，即得。
黄芪甲苷的含量测定
色谱条件与系统适用性实验  以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙睛-水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。
对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密称取本品0.04g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得。
表11黄芪总皂苷和黄芪甲苷的得率及含量
Figure 778906DEST_PATH_G061E9186220070929D000111
根据上述工艺，制得黄芪提取物三批样品，得率和含量见表11。由结果可以看出，通过本工艺制备的黄芪总皂苷得率0.5～2％，总皂苷含量不低于50％，黄芪甲苷含量不低于2.0％。
实施例5 本发明药物组合物片剂的制备
处方1：
苦参提取物                 481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物               90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪多糖                   48.0g(相当于黄芪4kg)
淀粉                       40.0g
微晶纤维素                 40.0g
2％HPMC水溶液              适量
硬脂酸镁                   5.0g
羧甲淀粉钠                 10.0g
共制备                     1000片
处方2：
苦参提取物                 481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物               90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪总皂苷                 50.0g(相当于黄芪4kg)
淀粉                       40.0g
微晶纤维素                 40.0g
2％HPMC水溶液              适量
硬脂酸镁                   5.0g
羧甲淀粉钠                 10.0g
共制备                     1000片
处方3：
苦参提取物                 240g(相当于苦参8kg)
五味子提取物               30.0g(相当于五味子1kg)
黄芪多糖                   12.0g(相当于黄芪1kg)
淀粉                       40.0g
微晶纤维素                 40.0g
2％HPMC水溶液              适量
硬脂酸镁                   5.0g
羧甲淀粉钠                 10.0g
共制备                     1000片
处方4：
苦参提取物        240g(相当于苦参8kg)
五味子提取物      30.0g(相当于五味子13kg)
黄芪总皂苷        12.5g(相当于黄芪1kg)
淀粉              40.0g
微晶纤维素        40.0g
2％HPMC水溶液     适量
硬脂酸镁          5.0g
羧甲淀粉钠        10.0g
共制备            1000片
处方5：
苦参提取物        120g(相当于苦参4kg)
五味子提取物      300g(相当于五味子10kg)
黄芪多糖          120g(相当于黄芪10kg)
淀粉              100.0g
微晶纤维素        100.0g
2％HPMC水溶液     适量
硬脂酸镁          10.0g
羧甲淀粉钠        20.0g
共制备            5000片
处方6：
苦参提取物        120g(相当于苦参4kg)
五味子提取物      300g(相当于五味子10kg)
黄芪总皂苷        125g(相当于黄芪10kg)
淀粉              100.0g
微晶纤维素        100.0g
2％HPMC水溶液     适量
硬脂酸镁          10.0g
羧甲淀粉钠        20.0g
共制备            5000片
制备工艺：原料和淀粉、微晶纤维素加2％HPMC水溶液制软材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸镁、羧甲淀粉钠整粒，半产品检验后确定片重，压片、包装得成品。
实施例6 本发明药物组合物胶囊剂的制备
处方1：
苦参提取物        481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物      90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪多糖          48.0g(相当于黄芪4kg)
淀粉              20.0g
微晶纤维素        60.0g
2％HPMC水溶液     适量
硬脂酸镁          5.0g
共制备            5000粒
处方2：
苦参提取物      481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物    90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪总皂苷      50.0g(相当于黄芪4kg)
淀粉            20.0g
微晶纤维素      60.0g
2％HPMC水溶液   适量
硬脂酸镁        5.0g
共制备          5000粒
处方3：
苦参提取物      240g(相当于苦参8kg)
五味子提取物    30.0g(相当于五味子1kg)
黄芪多糖        12.0g(相当于黄芪1kg)
淀粉            20.0g
微晶纤维素      60.0g
2％HPMC水溶液   适量
硬脂酸镁        5.0g
共制备          5000粒
处方4：
苦参提取物      240g(相当于苦参8kg)
五味子提取物    30.0g(相当于五味子1kg)
黄芪总皂苷      12.5g(相当于黄芪1kg)
淀粉            20.0g
微晶纤维素      60.0g
2％HPMC水溶液   适量
硬脂酸镁        5.0g
共制备          5000粒
处方5
苦参提取物      120g(相当于苦参4kg)
五味子提取物    300g(相当于五味子10kg)
黄芪多糖        48g(相当于黄芪4kg)
淀粉            20.0g
微晶纤维素      60.0g
2％HPMC水溶液   适量
硬脂酸镁        5.0g
共制备          5000粒
处方6
苦参提取物      120g(相当于苦参4kg)
五味子提取物    300g(相当于五味子10kg)
黄芪总皂苷      50g(相当于黄芪4kg)
淀粉            20.0g
微晶纤维素      60.0g
2％HPMC水溶液   适量
硬脂酸镁        5.0g
共制备          5000粒
制备工艺：原料和淀粉、微晶纤维素加2％HPMC水溶液制软材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸镁整粒，半产品检验后确定装量，装胶囊、包装得成品。
实施例7 本发明药物组合物颗粒剂的制备
处方1：
苦参提取物           481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物         90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪多糖             48.0g(相当于黄芪4kg)
糖粉                 1000g
糊精                 500g
2％HPMC50％乙醇溶液  适量
共制备               1000包
处方2：
苦参提取物           481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物         90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪总皂苷           50.0g(相当于黄芪4kg)
糖粉                 1000g
糊精                 500g
2％HPMC50％乙醇溶液  适量
共制备               1000包
处方3：
苦参提取物           240g(相当于苦参8kg)
五味子提取物         90g(相当于五味子3kg)
黄芪多糖             120g(相当于黄芪10kg)
糖粉                 1000g
糊精                 500g
2％HPMC50％乙醇溶液  适量
共制备               1000包
处方4：
苦参提取物           240g(相当于苦参8kg)
五味子提取物         90g(相当于五味子3kg)
黄芪总皂苷           125g(相当于黄芪10kg)
糖粉                 1000g
糊精                 500g
2％HPMC50％乙醇溶液  适量
共制备               1000包
制备工艺：原辅料用注射用水溶解配液，经活性炭吸附处理后过滤、定容、精虑、半成品检验、灌封、灭菌、检漏、灯检、包装制成成品。
实施例8 本发明药物组合物水针剂的制备
处方1：
苦参提取物        481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物      90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪多糖          48.0g(相当于黄芪4kg)
聚山梨酯80        10.0g
注射用水          加至5000ml
共制备            1000支
处方2：
苦参提取物        481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物      90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪总皂苷        48.0g(相当于黄芪4kg)
聚山梨酯80        10.0g
注射用水          加至5000ml
共制备            1000支
处方3：
苦参提取物        481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物      30g(相当于五味子1kg)
黄芪多糖          12g(相当于黄芪1kg)
聚山梨酯80        10.0g
注射用水          加至5000ml
共制备            1000支
处方4：
苦参提取物        481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物      30g(相当于五味子1kg)
黄芪总皂苷        12.5g(相当于黄芪1kg)
聚山梨酯80        10.0g
注射用水          加至5000ml
共制备            1000支
制备工艺：原辅料用注射用水溶解配液，经活性炭吸附处理后过滤、定容、精虑、半成品检验、灌封、灭菌、检漏、灯检、包装制成成品。
实施例9 本发明药物组合物粉针剂的制备
处方1：
苦参提取物        481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物      90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪多糖          48.0g(相当于黄芪4kg)
聚山梨酯80        10g
甘露醇            400.0g
无菌注射用水      加至3000ml
共制备            1000支
处方2：
苦参提取物        481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物      90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪总皂苷        50.0g(相当于黄芪4kg)
聚山梨酯80        20.0g
甘露醇            400.0g
无菌注射用水      加至3000ml
共制备            1000支
制备工艺：原辅料用无菌注射用水配液，经活性炭吸附处理后过滤、定容、精虑、半成品检验、灌装、冻干、压塞、轧盖、包装制成成品。
实施例10 本发明药物组合物氯化钠输液的制备
处方1：
苦参提取物        481.6g(相当于苦参1kg)
五味子提取物      90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪多糖          48.0g(相当于黄芪4kg)
聚山梨酯80        10.0g
氯化钠            900g
注射用水          加至100000ml
共制备            1000瓶
处方2：
苦参提取物        481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物      90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪总皂苷        50.0g(相当于黄芪4kg)
聚山梨酯80        20.0g
氯化钠            900g
注射用水          加至100000ml
共制备            1000瓶
制备工艺：制备工艺：原辅料用注射用水溶解配液，经活性炭吸附处理后过滤、定容、精虑、半成品检验、灌封、灭菌、检漏、灯检、包装制成成品。
实施例11 本发明药物组合物葡萄糖输液的制备
处方1：
苦参提取物       481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物     90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪多糖         48.0g(相当于黄芪4kg)
聚山梨酯80       10.0g
葡萄糖           5000g
注射用水         加至100000ml
共制备           1000瓶
处方1：
苦参提取物       481.6g(相当于苦参16kg)
五味子提取物     90.0g(相当于五味子3kg)
黄芪总皂苷       48.0g(相当于黄芪4kg)
聚山梨酯80       10.0g
葡萄糖           5000g
注射用水         加至100000ml
共制备           1000瓶
制备工艺：原辅料用注射用水溶解配液，经活性炭吸附处理后过滤、定容、精虑、半成品检验、灌装、加塞、轧盖、灭菌、检漏、灯检、包装制成成品。

Claims (10)

1.一种用于肝炎的药物组合物，其特征在于，按照重量组份计算，制成它所含药效组分的原料药的组成为：苦参400～6400份、五味子50～2000份、黄芪50～2000份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，按照重量组份计算，制成它所含药效组分的原料药的组成为：苦参800～3200份、五味子100～1000份、黄芪100～1000份。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，按照重量组份计算，制成它所含药效组分的原料药的组成为：苦参1600份、五味子300份、黄芪400份。
4.如权利要求1～3任一权利要求所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，其中的原料药用适宜的溶剂和方法制备得到提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂，总提取物中所含的主要有效成分为苦参总碱、五味子木质素类和黄芪多糖，或者为苦参总碱、五味子木质素类和黄芪总皂苷，主要有效成分的总含量不低于50％。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，按照重量组份计算，制成该药物组合物所含药效成分的原料药的组成为：苦参提取物12～193份、五味子提取物1.5～60份、黄芪多糖0.5～24份；或者为：苦参提取物12～193份、五味子提取物1.5～60份、黄芪总皂苷0.5～25份。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，按照重量组份计算，制成该药物组合物所含药效成分的原料药的组成为：苦参提取物24～96份、五味子提取物3～30份、黄芪多糖1～12份；或者为：苦参提取物24～96份、五味子提取物3～30份、黄芪总皂苷1～12.5份。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，按照重量组份计算，制成该药物组合物所含药效成分的原料药的组成为：苦参提取物48份、五味子提取物9份、黄芪多糖5份；或者为：苦参提取物48份、五味子提取物9份、黄芪总皂苷5份。
8.如权利要求5～7任一权利要求所述的药物组合物，其特征在于，所述的苦参提取物的主要有效成分总碱的含量不低于50％；五味子提取物中，五味子醇甲含量不低于6％，醚浸出物含量不低于20％；黄芪多糖中多糖含量不低于35％；黄芪总皂苷中总皂苷的含量不低于30％，其中黄芪甲苷的含量不低于1％。
9.如权利要求1～3、5～7任一权利要求所述的药物组合物，其特征在于，该组合物与药学上可接受的辅料混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述的临床上或药学上可接受的剂型为注射剂或口服制剂。
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