CN1966532A - 高度组织相容性羧化氨基多糖及其医用制剂的工艺 - Google Patents

Abstract

本发明提供一项医用防止手术粘连和伤疡恶性疤痕的高度组织相溶性、可以在体内被融和吸收、高度安全性和贴附力强的生物高分子膜剂、海绵块、涂剂、糊剂和灌注、注射用溶液剂的制作技术，包括壳氨基多糖及衍生物羧化氨基多糖的精制纯化技术，其特点是采用了一步法或多步法去除重金属有害离子以及过敏源、热源等杂蛋白及亲脂性杂质，以及用离心、沉降法和溶剂析出法去除悬浮粒子和小分子杂质的技术。本发明的膜剂和海绵体的制作技术，其特点是将壳氨基多糖和羧化氨基多糖交互层叠式的复合，而无须采用交联剂的技术。

Description

高度组织相容性羧化氨基 多糖及其医用制剂的工艺

一.技术领域

本发明涉及医用级羧化氨基多糖及其钠盐的纯化工艺，特别还涉及使用该医用级羧化氨基多糖进一步制作防治伤疡疤痕及手术后组织粘连并抑制炎症的制剂工艺，以供各项医学用途。其降解速度可以随控，而无需采用任何交联剂。

二.发明背景

伤疡疤痕和组织粘连仍是长期来困扰人们的医学难题，问题的实质是人类组织液、渗出液、体液中普遍含有纤维蛋白以及成纤维细胞、巨噬细胞、单核细胞、淋巴细胞等炎症细胞。这种组织渗出液一旦在受破损的组织表面、切口或伤疡面沾染，其中活跃的成纤维细胞便会牢固附着在其它细胞组织上，并会利用纤维蛋白等天然的生长基质、细胞因子进行繁衍，无组织性繁衍结果便导致疤痕和粘连。最明显的例子发生在“膜”上。活体组织如血管或器官如心脏、肾、肝、脾、胰、肠借粘膜或浆膜而彼此相隔各司独立功能。最大块的粘膜或浆膜是胸膜、腹膜壁层和肠系膜。这些部位经常因手术创伤或炎症，不论范围多大，都会产生上述含纤维蛋白和成纤维细胞的组织渗出液。这类手术(或炎症)引发的粘连或疤痕块，轻则造成疼痛不适，重则引起组织器官功能的潰创或活动、弹性的永久丧失。粘连还经常发生在与急慢性关节炎、化脓性关节炎、类风湿病或结核性关节炎或关节损伤、骨折、扭伤等相关的骨科或整形外科手术，结果会导致骨关节强直性障碍，也就是构成关节的相邻骨头之间相互粘连而致僵硬，失却柔顺的活动性。近年，一种有关“椎板切除(术)膜”的治疗措施也备受关注。“椎板切除(术)膜”是在脊柱椎板切除手术之后形成的粘连现象。其实，广义的粘连包括疤痕现象会发生在几乎一切手术所造成的创面，涉及的组织包括：皮肤、粘膜、软骨、靱带、脏器、血管、神经、肌肉，且往往不限于手术部位，还牵连周围的组织、器官。这样，可例举的常见粘连就有：肠粘连、纵隔粘连、关节粘连、肌腱粘连、妇产科术后粘连、神经粘连、耳鼻喉粘连、眼科手术粘连等等。

迄今尚无满意的制剂材料真正解决这项医学难题。脂肪隔离法、酶分解法及一些物理方法等均疏忽了成纤维细胞增殖问题而效果不好，大剂量时的危险性往往会抵消它们的有益作用。迄今用过的材料对正常的伤口愈合和康复往带来负面影响。合成材料的缺点是永久性残留或需进行二次折卸手术。其他如液体石腊、樟脑油、硫酸软骨素以及脲(尿素)因作用短暂而效用受限。主要问题是这类材料大多是外源性或惰性材料，或缺乏良好组织相容性，不能被机体融合、吸收。

高纯度透明质酸及其钠盐和甲壳素衍生物都兼备组织相容性(可被融合、吸收)对皮肤、粘膜无刺激性，在体内不产生免疫抗原及热源反应，不溶血、无致突变及无致死性突变效应，具备优良的体内可植入性，具有防止疤痕形成和组织粘连的优点，但两者的高纯制品并不容易获得，加之前者的价格、资源限制，后者往往出现程度不同的炎症反应(促进免疫细胞生长)。

羧化氨基多糖及其钠盐具有比壳氨基多糖更好的组织相容性和相似的安全性，最早公布其可用于防止组织粘连的专利有U.S.4,141,973，EP 0507604，但专利却认为最好的材料是透明质酸。近期还有专利用它以阻断成纤维细胞及其生长基质类的附着(US00,13,693)，以及用于抗潰疡抑菌(ChoYW，etal Biomaterial，1999，20(22)：2139--2145.JP 63，14，714.)羧化氨基多糖具有卓异功效的原理是：①阻断成纤维细胞、表皮细胞和巨噬细胞、内皮细胞等在组织面上的附着；②优良的组织相容性和被组织融和吸收性；③优良的水溶性；④可与壳氨基多糖适度混合、交联，使两者实现功能互补、协同。生产这类羧化氨基多糖的原材料极其丰富和普通，制备工艺也较简易，作为一项新型医用材料除防止组织粘连和疤痕之外，尤其在口腔科、眼科、骨科、药剂缓释等方面，近十年以来不断还有新的用途出现，但迄今仍未有高纯度即高度组织相容性羧化氨基多糖或其钠盐制取的有效方法，对其用途的推广已形成障碍。

三.发明内容

本发明的目的：(1)提供一种纯化制作医用级别的羧化氨基多糖及其钠盐的方法；(2)应用本发明的工艺方法制作的高纯度羧化氨基多糖及其钠盐，进一步制造一类实用性强、贴附性强的临床制剂，用以防止手术粘连，也可施用于伤疡组织防止、疤痕恶性生长。

本发明上述两项目的所涉及的相应技术均具有相当的普遍性，既包括母体(前体)壳氨基多糖也包括羧化氨基多糖，因而可以被掌握了这些相应技术的人员，进一步推延至可以设想到的有关领域，如化妆，整形，人体组织和细胞的培养，细胞和组织工程，生物制品的生产，实验室研究工作等等。

通常制造壳氨基多糖及将其衍生化为羧化氨基多糖的方法可见于文献、专利，如US 4,619,995。但按照所公布的这类方法以及其它既有的方法，不可能制造出合乎其医用尤其是体内植入方式护理、治疗目的、具有专门品质规格的合格产品。一般的商业产品大多必须重新进行纯化、精制，造成不可避免的浪费，且大多数产品即便采用了种种措施也无法逆转其品质规格指标，如粘度、脱乙酰度、取代度、pH值、外观色泽等。本文所指的医用目的是指“可以植入体内”的种种医学用途，其细胞毒性不大于一般对医用材料规定的细胞毒性，不产生热源、排斥、过敏不良反应，而且在预期规定期限内可以被组织融化、吸收。

对于一项医用材料尤其是与许多其它高分子、低分子物质共生共存的天然生物高分子，如甲壳素及其衍生物而言，首先，精制纯化步骤主要用以针对可能带入终产品的诸多杂质，主要是蛋白质(包括原料本身及外来沾染的各种蛋白质、脂蛋白、糖蛋白、多肽、氨基酸以及微生物细胞)，重金属及有害元素和化合物，以及其他如致敏原、热原(死的活的菌体及其它代谢物，异体细胞、尘埃、花粉粒子)。其次，终产品的物化性能和生理活性必须满足使用目的。以上两个方面合计可代表一项医用材料品质规格的基本指标。

本发明所述壳氨基多糖，是以α或β-甲壳素(几丁质)为前体衍生的，也称甲壳胺、聚葡萄糖氨、多聚氨基葡萄糖、壳聚糖等等。α和β-甲壳素则来源于乌贼内骨骼、贝类、节肢动物、昆虫外壳、真菌菌丝体、植物细胞壁等。

1.纯化工艺及步骤

本发明针对壳氨基多糖、羧化氨基多糖及其钠盐的纯化工艺，主要由既可以分开、也可以合併或部分合併的三个步骤组成。步骤1针对壳氨基多糖，步骤2、3既可针对壳氨基多糖也可针对羧化氨基多糖，步骤2既可与步骤1合并也可与步骤3合并操作。这三个步骤对样品实情供选择的相应目标是：

步骤1：深度脱蛋白及热源性杂质：＜0.01％(蛋白质含量)

步骤2：深度脱重金属及灰分：＜10ppm；＜0.1％(重金属总量；灰分)

步骤3：深度脱亲脂性(色素等)杂质及非水溶微粒：溶液的澄明度及无色

壳氨基多糖和羧化氨基多糖的共同前体-甲壳素是以β-1.4-甲壳二糖残基作为重复单元形成的，具有从1级到4级结构的长链分子(因氢键)绕成的聚集体，其分子内外存在着诸多可与共生的蛋白质，脂类及金属元素、无机盐结合成离子键、共价键等等的活性基团。晶体及分子集团具有相当的刚性。由甲壳素制备壳氨基多糖的典型条件是在“非均相”条件下进行脱蛋白、脱钙及脱乙酰即“三脱”步骤。一般条件下不可能将原始构架结构中的杂质脱尽，除非进行均相反应，在分子彻底分散摆脱晶态的条件下进行深度处理。

步骤1.工作原理及操作：

羧化氨基多糖是以壳氨基多糖为起始原材料，在碱性非均相反应条件下生成的，有水存在的碱性条件决定了壳氨基多糖分子只能以固态存在，一旦羧化反应完成后，原本壳氨基多糖分子中因羧基出现而转变成可以在较广pH、特别是碱性条件下水溶的兼性离子型高聚物。蛋白质属于带负电、在碱性水介质中可以溶解(或溶出)的另一类高分子。这样，要将溶解性随pH而变的特点恰好一致的羧化氨基多糖分子团中的微量蛋白质分离尽，十分困难。但是恰好相反，当壳氨基多糖粒子在酸性条件下溶解时，由于随pH而变的不一致性，蛋白质即可以微粒状态悬浮在壳氨基多糖溶液中，这时便可借助通常的固液分离法—离心或过滤达到两相分离，即初步纯化。进而，为了达到深度纯化，可以接着将该壳氨基多糖溶液在高速剪切搅拌下，转速100-20000转/分，同时滴加氢氧化钠溶液将pH调至＞6.5＜10，使壳多糖分子析出、晶粒高度分散。持续剪切1-30分钟然后将微晶态的壳氨基多糖采用离心、挤压、过滤等分离法进行固液分离，经清洗、干燥即可。在适当稠度下的固液分离一个轮回，即完成“溶解-搅拌下调pH-分离”足可使蛋白质杂质含量下降0.5-1个量级。纯化效率取决于溶液的稀度(或中和后的稠度)及随固液分离的彻底性，越稀，越分散，分离越彻底，则脱蛋白效率越高。

步骤2.工作原理及操作：

甲壳质、壳氨基多糖、羧化氨基多糖分子长链上的众多乙酰氨基、氨基、羟基或羧基决定了该类天然高分子具有对各种多价重金属离子的熬合特性，在生物体、存在环境或制造工艺都可能从周围吸收这类金属离子(尤其是对重金属离子的吸附)。在一般用于制取的非相反应条件下(酸浸)即便多次反复也不可能从片状或粒子材料中彻底解吸这类金属离子的残余。除非同步骤1一样将壳氨基多糖及羧化氨基多糖制成溶液，再与另一种同样是存在于溶液但熬合作用更强的化合物如EDTA，进行均相反应，然后再利用变更pH使达到＞6.5＜10，剪切和进行相分离的办法将壳氨基多糖或羧化氨基多糖从液相析出彻底回收，使取而代之与金属离子形成了熬合物的EDTA留在液相。

这一步骤可以与步骤1或步骤3先后分开或合并操作，方法相同。即既可以针对壳氨基多糖也可以针对羧化氨基多糖，关键是调控适合的pH-剪切搅拌—相分离。EDTA的投加量取决于壳氨基多糖、羧化氨基多糖的量及所含金属离子的量。如一般可以在含壳氨基多糖或羧化氨基多糖0.5-10％的浓度下投入EDTA达到0.5-10％浓度的。pH范围在4-10。

步骤3.工作原理及操：

得自非均相反应即“三脱”工艺的壳氨多糖及羧化的产物，多半未经溶解状态下的均相反应和分离，同前述步骤1和2深度脱蛋白和脱重金属一样，还应经过均相反相，进一步脱去可能拌生的或被污染的亲脂杂质。甲壳动物含有丰富的植物源(藻类)次生代谢物的转化物、脂蛋白、固醇、色素，均是可疑的亲脂性过敏源。这类物质则极易借助既亲水又具一定亲脂性的低碳醇或酮如丙酮、甲、乙醇通过在适合的pH下形成相分离，而得到有效清除。本步骤操作时，仅需通过调节pH将壳氨基多糖或羧化氨基多糖成为溶液状态，然后加入丙酮或无水乙醇使高分子折出成絮状物，将溶剂相分离即可。具体操作也与步骤1、2相似，即溶解(调控pH)-剪切搅拌-相分离。溶剂的投加量取决于待处理样品量及所含杂质量，在溶液∶溶剂＝1∶10至10∶1的范围下完成。这一操作既适于壳氨基多糖也适合于羧化氨基多糖(钠盐)，羧化氨基多糖产品pH值指标的精确控制，可以通过本步骤3完成即：具体操作时靠滴加适量的NaOH或乙酸溶液，同时进行快速剪切。经过本步骤产品溶液的澄明度及色度可得到明显提高

2.制剂工艺：

涂剂、糊剂及灌注用溶液剂的制作

将按本发明制得的医用级羧化氨基多糖用蒸馏水或生理盐水配制成0.5-20％的水溶液，依据不同浓度可得粘度，流动性不同的、从灌注溶液到极粘稠状糊剂或涂剂，供临床应用。可进行蒸气(120℃、＜10分钟)或环氧乙烷、辐照等灭菌措施。可常温存放＜1年左右。

膜剂的制作：

可将壳氨基多糖和羧化氨多糖制成“双层式”膜剂，其方法是将两者交替流延二至三次，即待一层膜已干后在其上流延另一层，待干后再流延第三层，使成为壳氨基多糖和羧化氨基多糖交替流延“双层式”或“三层式”膜。这种膜实际可成为壳氨基多糖在外或羧化氨基多糖在外的二种方式、特点的交联，功用有所区别，但防粘连和疤痕以及促愈功用是共同的。也可将壳氨基多糖和羧化氨基多糖按照质量比例0.01-99.99％直接制成混合溶液再流延成膜，即“混合膜”。

①.将按本法制得的高纯壳氨基多糖和羧化氨基多糖分别用蒸馏水配制成2.5％浓度的水溶液，前者含冰醋酸0.70％，徹底溶解后经离心备用。

②.将羧化氨基多糖溶液在水平平板或皿盘中流延展开，空气中晾干。按照膜的厚度要求控制溶液的加入量，膜的厚度以达到0.1-0.2mm范围为宜。

③.在接近干或已干的羧化氨基多糖薄膜上流延壳氨基多糖的溶液，使分布均匀，使膜厚度的增加控制在0.05-0.1mm再进行凉干。

④.在上述复膜上再流延一层羧化氨基多糖溶液厚度增加控制在0.1-0.2mm。

⑤.将上述含复膜的平板或皿盘置于60-90℃的烘箱中30-60分钟，揭下的干膜即为产品复合膜剂。

海绵体的制作：

①.将按本法制得的高纯度医用级羧化氨基多糖用蒸馏水配制成2.5-5.0％浓度的水溶液。

②.将上述溶液在所需尺寸的模具中铺展成3-15mm厚度真空脱气泡20-30分钟。

③.将真空脱气泡后的模块在从0℃至45℃下缓慢冻结、降温速度~0.5℃/分并接着在-45℃至-70℃下冻干成海绵体。

④.将冻干的海绵体模块置于烘箱中70--110℃下作韧化处理30分钟，即得本产品--海绵体。

⑤.制作复合海绵体时，应将羧化氨基多糖层铺展在壳氨基多糖上部或反之，操作如同膜剂。但进行二次③步的冻结，再最后进行冻干。

膜剂和海绵体，均可按照类似的技术制作，而无需经过交联避免交联剂的干扰，并可获得理想的强度、柔韧性、吸水膨张性以及可控的体内吸收融化性、粘附性等交联制品往往缺少的特点。

(三)羧化氨基多糖制剂在体内的持留时间

羧化氨基多糖不同剂型如膜剂、海绵块、糊剂、溶液剂(灌注用)在体内的滞(持)留时间随羧化氨基多糖的用量、涂布的组织器官面积以及渗出液的量三者而定。涂布的面积越大，渗出液越多，羧化氨基多糖用量越低，则滞留时间越短，或反之，面积越小，渗出液越少，羧化氨基多糖用量越高，则滞留时间越长。例如，在一般少量渗出情况下，假设羧化氨基多糖用量为0.01-0.1克/平方厘米(组织)，则滞留时间大致应在1-20周。期间，羧化氨基多糖将被体液或渗出液中的溶菌酶分解成低分子寡糖，被转移或吸收利用。

在体内的滞留，除上述三个因素之外，也可以由交联度来控制。羧化氨基多糖分子链上的羧基、氨基、乙酰氨基及羟基可被物理的(辐射、热)及化学的(多价金属Fe、Al等及醛、胺等有机物)离子进行交联(搭桥)。实施例3阐述了本发明两种甲壳素衍生物形成的特殊形式的复合设计和工艺，其优点可想而知。

羧化氨基多糖各种剂型具有快速吸水膨胀并粘附在湿润的、或有渗出液的膜或组织面上，表现理想的粘附性，藉此可以阻断(屏蔽或隔离)成纤维细胞，纤维蛋白与受保护组织的接近，起到抗粘连、抗附着、抗疤痕形成的作用。尽管其作用机理仍不明了，但一个现象却是反复被确切验证的，即：羧化氨基多糖的任何制品一旦与成纤维细胞、炎症细胞、巨噬细胞等接触，这些细胞不会表现附着过程出现的任何特征形态，或出现附着的迹象，似乎羧化氨基多糖在膜等组织界面上给成纤维细胞划定一个不可逾越的屏障。透明质酸并无这一个特点。

(四)辅助成分的添加

在整个制剂或临床应用阶段，为使各制剂的性能和功能更趋合理，或配合特定药物效应，可以往本发明的制剂型中添加各种辅助性成分，如：(1)药物型的止疼、麻醉剂、抗菌素、杀菌剂、抗凝血或止血剂等等，各类维生素、植化微量营养素、生物类黄酮、氨基酸、酞类、酶类等等，中草药提取物，生物制品，营养性制品等等。这种情况下各剂型中的壳氨基多糖或(和)羧化氨基多糖便成为其主要功效(防粘连和疤痕)之外兼负缓释载体的功能；(2)理化机械改性型的添加剂，如：甘油、丙二醇、聚乙二醇、山梨醇、透明质酸、胶原、丝蛋白、丝素肽、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮等等；(3)(外用型)芳香型的精油、萜类，如百里香酚、冰片、薄荷等等。

实施例1-壳氨基多糖的高度纯化

以商品壳氨基多糖(蟹壳为原料)作为起始材料，其质量规格如下：

乳白光泽质地均匀；粒度：20目(片状)；水份：8％；灰份：1.5％；脱乙酰度：75％；粘度：150cps；重金属含量(以pb计)：30ppm；蛋白质含量：0.5％。

操作步骤：

①称取1.0Kg上述壳氨基多糖与5Kg50％NaOH溶液和硼氢化钠10g充分混合后浸渍在聚乙烯塑料桶盖紧后放入保温箱，60℃下反应24至36小时。保温10小时后倒腾壳片一次。

②将反应物沥尽碱液后倒入约20-30升的塑料桶中以10升95℃热自来水搅洗反应物壳片。沥去洗涤液后，再投以10升95℃自来水。加入十二烷基硫酸钠50克，EDTA钠100克、硼氢化钠10克。在pH＞10下搅拌保温85℃2-8小时。沥尽反应液，以去离子水洗至中性。

③将所得壳氨基多糖溶入50升盐酸浓度为1.5-3.0％的去离子水，在1000-10000转/分的剪切均质机中彻底溶解后，加入10％氢氧化钠溶液及25克EDTA钠盐，同时剪切均质，使沉淀物的pH达到6-10持续均质5分钟以上，60-85℃保温2-8小时然后进行固液分离，反复悬浮—脱水使析出的壳氨基多糖达到pH中性。60℃下真空干燥，即得高纯度医用级壳氨基多糖产品950克。

其质量规格为：

脱乙酰度：＞85％；粘度：100cps；重金属含量(以pb计)：＜10ppm；蛋白质含量0.01％。

用本纯化品制取溶液时，溶液的溶解度、透明度明显提高。

实施例2-高度纯化医用级别羧化氨基多糖的制

操作步骤：

①.以类似上述规格的壳氨基多糖作为前体材料进行羧化反应。反应用化学品异丙醇、氯乙酸、硼氢化钠、乙酸、乙醇等均采用分析纯品。得到羧化氨基多糖产品(钠盐)1400克。依照US 4,619,995所给的反应条件，该产品为N.O-取代，其取代度为0.8。

②.羧化氨基多糖的高度纯化：

●取上述羧化氨基多糖钠盐以去离子水配成1-2.5％浓度的溶液。以剪切均质机均质后经10000rpm离心30-60分钟去除悬浮粒子。

●往离心后上清液中加入95％乙醇，以10000rpm剪切均质令羧化氨基多糖钠盐析出。

●以40-75％的乙醇浸洗析出物三次每次用乙醇量约为析出物的30倍

●离心甩除乙醇后，以析出物20倍的丙酮或无水乙醇进一步脱除水份。

●60℃以下真空干燥，经粉碎即得纯白色的医用级别羧化氨基多糖的钠盐。

其质量规格为：

脱乙酰度：＞90％；粘度：70cps；重金属含量(以pb计)：＜10ppm；蛋白质含量：＜0.01％；取代度；0.8；pH值：6.9

实施例3-防止组织粘连的膜剂的制作

操作步骤：

①将按本发明方法制得的纯化壳氨基多糖和羧化氨基多糖(钠盐)分别用去离子水配制成2.5％浓度的溶液，溶解壳氨基多糖时应加壳氨基多糖量四分之三的冰醋酸，为加速溶解过程，采用破碎均质机捣散粒状胶束，静止数小时后再在5000rpm下离心20分钟脱气泡。

②将羧化氨基多糖溶液倒在平底盘中流延成厚度2.5m的薄层；置真空干燥箱60℃以下干燥。

③将壳多糖溶液加在上述羧化氨基多糖膜上流延展开成厚度为2.5mm的薄层，置真空干燥箱60℃进行第二次干燥。

④再将羧化氨基多糖溶液加在上述二次干燥薄膜上流延展开成厚度2m的薄层，置真空干燥箱60℃进行第三次干燥。

⑤将温度升至80℃烘干20-30分钟。所得薄膜厚度0.5mm，透明度、拉伸性、柔顺性、吸水性均可满足手术要求。

动物植入试验：

实施例4-烧伤创面防止严重疤痕的涂制

II°和III°烧烫伤创面如不及早护理提供“人工皮”样的复盖以防止感染，极易造成严重结疤。因为表皮缺失后成纤维细胞在创伤面的愈合过程中缺少生长“模板”而进行疯狂的无序性生长繁殖，其结果是造成大量胶原纤维组织块的堆积，僵硬难堪。护理这类创面，膜剂固然也很适用，但从医护人员及与本发明者的试验合作中，体验到涂膜剂的长处以及操作的便利性。它的主要优点是：创面既需要复盖物，又必要保持利于细胞组织生长的湿润性；有些弯曲复杂的创面如手足指间，外生殖器以及颜面部复盖膜剂，难作到平整周全；大面积的创面如胸背和腹部，用软毛刷或手掌(戴手套操作)极为方便周全；在愈合过程早期可以每天施涂一次(共计3-5次)，补充蒸发的水份并使创面的复盖非常平整契合。一旦施涂、无需揭换、直至全愈随痂块自行脱落。

前面已述，因为羧化氨基多糖具有一方面与创面组织粘膜、浆膜等紧密粘附，因时又阻止成纤维细胞叠堆性生长，防止组织粘连的作用。本涂(糊)剂也非常适合有大量纤维蛋白渗出的潰疡性创面的护理。愈合后的疤痕将明显减轻甚至不易察觉。

涂(糊)剂可以制成非常高的稠度，再依据临床上创面的实际情况而决定(用或不用)生理盐水进行适度的稀释。一般渗出液量多的创面以不经稀释为佳，以防在创面造成流延。较干燥的重度创面，往往缺少渗出液，需补充水份，因而以稀释液多次涂布为宜。

制作方法：

①称取适量按本发明制得的医用级羧化氨基多糖，以生理盐水(或蒸馏水、注射用水)配成5-10％浓度的粘稠液。配制过程宜探用剪切或均质机，促进颗粒状胶束分散溶解。

③稀释法：用生理盐水或蒸馏水依所需稠度稀释，浓度仅仅0.5％的灌注液，即可满足一般需要。

临床观察：

在取得动物植入试验(北京口腔医学研究所)及毒理，安全试验(医学科学院药理所)的肯定后，在北京积水潭医院第三病房作了40余例烧伤II°-III°、面积15-85％、年龄姓别范围较宽的病案观察。临床效果受到了医患人员的肯定。认为本剂的突出优点是：极少发生感染、愈合速度比一般磺胺嘧啶银涂剂加快25％、愈合后伤面疤痕很轻，浅II°以下伤面几乎辩不出疤痕。

实施例5：胶原海绵块的贴附性改进

用于止血的胶原海绵块通常都要进行交联处理。交联的好处是赋予海绵块靭固性和抗溶性，但弊端是在手术创口贴附性的损失，常常需要在组织面附加加固措施，带来不便。我们将已经冻干的海绵块的贴肤面涂上簿簿的一层浓度为2.5-3.5％羧化氨基多糖的涂膜剂(同实施例4)，再将海绵块冻干或晾干。经过这样处理，便使海绵块获得了极好的贴附性，而原海绵体的物化性能不变。其效果包括制剂的安全性，已在临床得到肯定。

Claims (7)

1.高纯度即高度组织相溶性羧化氨基多糖的制取、纯化工艺，其特点是采用了预先将制取羧化氨基多糖的前体原料壳氨基多糖制成高纯度制品，再以壳氨基多糖高纯度制品为原料进而制取并精制成合乎医用规格的羧化氨基多糖及其钠盐，从而实现整个纯化工艺。

2.以权利要求1为前提的制剂工艺，即利用本纯化工艺制得的壳氨基多糖及羧化氨基多糖产物制品以制作各种体内(外)手术护理或植入式医用目的的制剂。医用目的包括防止手术和创伤中各种类型和程度的疤痕现象和组织粘连现象，以及其它可以类推的后遗症。制剂包括液态的灌注剂、注射剂、涂剂、糊剂等，固态的膜剂、海绵块等。

3.根据权利要求1，纯化工艺由步骤1，步骤2和步骤3可以分开，也可以合并或部分合并的三个步骤组成，这三个步骤是：步骤1：深度脱蛋白及热原性杂质；步骤2：深度脱重金属及灰分；步骤3：深度脱亲脂杂质及疏水性微粒。

其中步骤1是在壳氨基多糖，即羧化氨基多糖的前体阶段进行；步骤2既可在前体阶段、与步骤1分开或合并操作，也可在羧化氨基多糖阶段单独或与步骤3合并操作。步骤3可在壳氨基多糖前体及羧化氨基多糖阶段操作。

4.根据权利要求1和3，在纯化工艺的三个步骤中运用pH调节、在实施固→液及液→固的相转变阶段借助高速剪切式均质以及接着的固——液相分离，使杂质与高分子基材彻底离析。

纯化工艺步骤1的控制条件：

·壳氨基多糖的溶解及5000-20000rpm离心30-60分钟。

·壳氨基多糖溶液碱化成pH＞6.5＜10，100-20000rpm剪切均质1-30分钟。～85℃下放置2-8小时

·固—液相分离(离心或过滤)

纯化工艺步骤2的理论

·将壳氨基多糖(或羧化氨基多糖)配成溶液及5000-20000rpm下离心30-60分钟

·往溶液中投加EDTA钠盐，投加量为溶质的0.5-10％。

·调节pH至＞6.5＜10使相转变，进行100-20000rpm剪切均质1-30分钟。~85℃下放置2-8小时

·固—液相分离(离心或过滤)

纯化工艺步骤3的控制条件：

·溶液状态的壳氨基多糖(或羧化氨基多糖)

·乙醇投加量在50-200％，1000-20000rpm剪切均质1-5分钟，静止24小时。

·固—液相分离(离心或过滤)。

5.根据权利要求1、2、3、4制得的壳氨基多糖及羧化氨基多糖分别按0.5-20％配成溶液，按通常的方法制成单一羧化氨基多糖(钠盐)或羧化氨基多糖与壳氨基多糖复合的各种本内外手术医用制剂，包括灌注剂、涂剂、糊、膏剂及膜剂、海绵块，以及应用壳氨基多糖及羧化氨基多糖溶液作为其它体内外手术医用材料的贴附增粘剂。

6.根据权利要求1、2、3、4而制得的医用级壳氨基多糖和羧化氨基多糖，制备防止组织粘连和防止伤疡疤痕的制剂，包括膜剂和海绵体和制作技术，其特点在于可以将壳氨基多糖和羧化氨基多糖根据需要结合成复合膜的制作工艺。这种新型、无需经过交联剂交联的复合制品，可以用来控制膜和海绵体等等壳氨基多糖、羧化氨基多糖相关制剂在体内的持留时间。

7.根据权利要求6，壳氨基多糖与羧化氨基多糖在复合制剂中的重量(质量)比例为0.01-99.99％。