CN1963518A

CN1963518A - 一种o157∶h7大肠杆菌抗原胶体金检测试纸条

Info

Publication number: CN1963518A
Application number: CN 200510086856
Authority: CN
Inventors: 刘明
Original assignee: BEIJING ZHUANGDI HAOHE BIOMEDICINE SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: BEIJING ZHUANGDI HAOHE BIOMEDICINE SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2005-11-10
Filing date: 2005-11-10
Publication date: 2007-05-16

Abstract

本发明提供了一种检测试纸条，它包含：(1)同时包被O157抗体、H7抗体和质控抗鼠IgG三个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记O157单克隆抗体和胶体金标记H7单克隆抗体的玻璃纤维膜。应用膜层析双抗体夹心法的原理检测标本中的O157∶H7大肠杆菌。应用本发明试纸条检测，减少了许多繁琐的程序，且方便快捷，特异准确，10－15分钟判读结果，不需特殊仪器也不需专业培训，适合医院等基层单位，适合大规模的流行病学调查及应对突发事件。

Description

一种O157:H7大肠杆菌抗原胶体金检测试纸条

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种O157:H7大肠杆菌抗原检测试纸条及其应用。

背景技术

O157:H7大肠杆菌中“O”是指脂多糖的表面抗原性，按其结构可分为173种；“H7”是指鞭毛的抗原，它有57种。这样单一的检测“O”抗原或“H”抗原交叉菌都很多，不能确诊O157:H7大肠杆菌。同时检测O157和H7抗原都阳性方可确诊。目前O157:H7大肠杆菌的实验室检测方法包括：生化反应常用山梨醇麦康凯琼脂、H7抗血清-山梨醇发酵培养基有助于O157:H7菌株的分离与筛选：根据96％大肠杆菌具有葡萄糖醛酸酶，故能水解MUG，产生荧光，而O157:H7则为阴性的特征设计的MUG试验可提高筛选O157:H7特异性和敏感性。血清学反应方法有试管凝集和玻片法不适合大量流行病学调查。免疫学检测常用ELISA、IHA(间接血凝试验)、LAT(乳胶凝集试验)进行快诊。在分子生物学检测常用基因探针和多聚酶链反应(PCR)，但以上方法需在有条件的实验室内进行，需要昂贵的仪器，操作繁琐复杂、时间长、需专业人员等问题。

发明内容

(一)、要解决的技术问题

本发明的目的是提供一种方便、快捷地同时能够检测O157:H7大肠杆菌中含有的O157和H7抗原试纸条。

本发明再一个目的是提供所述试纸条在检测O157:H7大肠杆菌中的应用。

(二)、技术方案

本发明为一种检测试纸条，它包含：

(1)同时包被O157抗体、H7抗体和抗鼠IgG三个条带的硝酸纤维膜；

(2)含有胶体金标记O157单克隆抗体和胶体金标记H7单克隆抗体的玻璃纤维膜。

本发明所述的试纸条中，O157抗体为抗O157抗原的单克隆抗体或多克隆抗体；H7抗体为抗H7抗原的单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明所述的试纸条，它还包含：

(1)反应支持物；

(2)吸水垫；

(3)金标抗体保护膜。

本发明所述的试纸条，其中反应支持物选用PVC板。

本发明所述的试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。

本发明所述的试纸条，其中金标抗体保护膜同时具有吸水功能，选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。

本发明还公开了所述试纸条在检测O157:H7大肠杆菌中的应用(见图2)。将0.5克或0.3ml的标本，放入装有稀释液的小瓶内，将试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果：

如含有O157和/或H7抗原，则与试纸条上胶体金标记的O157和/或H7单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的O157和/或H7抗体结合，形成红色线条，即在“A”或“B”处形成红色条带。

无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。

阳性结果会出现2条或3条红色沉淀线，阴性结果出现1条红色沉淀线，如不出现线条说明试纸条失效。

本发明的技术方案是：采用纯化的O157抗体、H7抗体和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的O157单克隆抗体、H7单克隆抗体，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测标本中的O157:H7大肠杆菌。

(三)、有益效果

使用本发明，一份标本、一个试纸条同时能检测O157和H7两种抗原，一举三得：其一能够一次性的捕获出血性大肠杆菌O157:H7；其二单独的O157阳性表明，所检测到的是含有O157的大肠杆菌；其三如果单独H7阳性，表明检测到的是含H7鞭毛的一类细菌。这为下一步的分离鉴定创造了有利条件，节省了大量人力物力，方便、快速、简捷，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合基层，适合于突发事件的大批量现场检测，适合流行病学调查，对O157:H7的感染诊断起到辅助作用。

附图说明

图1：A本发明试纸条的正面示意图；B本发明试纸条的侧面示意图；1：吸水垫；2：硝酸纤维膜(A：包被O157抗体的条带；B：包被H7抗体的条带；C：包被抗鼠IgG的质控条带)；3：含有胶体金标记O157单克隆抗体和胶体金标记H7单克隆抗体的玻璃纤维膜；4：金标抗体保护膜；5：反应支持物。

图2：检测结果示意图；从左至右依次为：O157:H7阳性：A、B、C三条线显色；O157阳性：A、C两条线显色；H7阳性：B、C两条线显色；阴性：C一条线显色；无效：三条线均不显色。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1 O157:H7抗原联合检测试纸条(参见图1)

反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG，O157抗体、H7抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的O157单克隆抗体、H7单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了O157:H7大肠杆菌抗原联合检测试纸条。

实施例2 O157:H7抗原联合检测试纸条(参见图1)

反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG，O157抗体、H7抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的O157单克隆抗体、H7单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的玻璃纤维；即形成了O157:H7大肠杆菌抗原联合检测试纸条。

实施例3 O157:H7抗原联合检测试纸条(参见图1)

反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG，O157抗体、H7抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的O157、H7单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的滤纸纤维；即形成了O157:H7大肠杆菌抗原联合检测试纸条。

实施例4 检测方法(参见图2)

将0.5克或0.3ml的标本，放入装有稀释液的小瓶内，将实施例1试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果：

如含有O157和/或H7抗原，则与试纸条上胶体金标记的O157和/或H7单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的O157和/或H7单克隆抗体结合，形成红色线条，即在“A”或“B”处形成红色条带。

实验例1 临床标本检测

检测可疑阳性标本52例，在用试纸条(T2法)检测的同时，以传统的细菌培养法和生化鉴定(T1法)为对照，结果见下表：

细菌培养法(T1)与试纸条法(T2)对比实验统计表

	O157:H7		O157		H7		对照
	O157:H7		O157		H7		对照		阳性	阴性	阳性	阴性	阳性	阴性	阴性
T1	25	27	32	32	39	39	41		阳性	阴性	阳性	阴性	阳性	阴性	阴性
T1	25	27	32	32	39	39	41	T2	24	28	30	34	38	40	41
	灵敏度96％	特异度100％	灵敏度94％	特异度100％	灵敏度97％	特异度100％	特异度100％	T2	24	28	30	34	38	40	41

Claims

1、一种检测试纸条，其特征在于，它包含：

(2)含有胶体金标记O157单克隆抗体和胶体金标记H7克隆抗体的玻璃纤维膜。

2、根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于O157抗体为抗O157的单克隆抗体或多克隆抗体；H7抗体为抗H7的单克隆抗体或多克隆抗体。

3、根据权利要求1所述试纸条，它还包含：

(1)反应支持物；

(2)吸水垫；

(3)金标抗体保护膜。

4、根据权利要求3所述试纸条，其中反应支持物选用PVC板。

5、根据权利要求3所述试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。

6、根据权利要求3所述试纸条，其中金标抗体保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。

7、权利要求1-6之任一所述试纸条在检测O157:H7大肠杆菌中的应用。