CN1963512A - 乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属临床血液免疫检测技术领域，涉及一种乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法，该方法通过乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒表面抗原，通过乙型肝炎病毒表面抗体(抗－HBs)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒表面抗体，通过乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒e抗原，通过乙型肝炎病毒e抗体(抗－HBe)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒e抗体，通过乙型肝炎病毒核心抗体(抗－HBc)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒核心抗体。本发明检测乙肝病毒准确、方便、快捷，能够更好地满足临床的需要。
Description
技术领域
本发明属于临床血液免疫检测方法技术领域，涉及一种乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法。
背景技术
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种世界性的传染病，我国是高流行区，全国人群感染率为60％左右。据我国疾病检测点传染病发病率推算全国每年肝炎发病人数达到269万例，其中15-40岁病人占63.1％。据统计，我国现患肝炎的病人数约3000万人，其中60％以上为慢性乙肝患者。乙肝五项是目前最常用的HBV感染指标。五项的检测有助于乙肝病毒感染的早期发现、监视病情发展、治疗效果监测。目前临床实验室检测的方法，仍多是自60年代发展起来的放射免疫分析法和80年代兴起的酶联免疫分析法。但由于放免法必须使用放射性标记物，检测设备复杂，必需用专门的放射性探测器对检测结果进行测定，对操作人员也存在有放射性污染与伤害。同时，常用的碘-125、碘-131和磷-32等半衰期短的核素，其保存时期不长，也给临床使用带来了不便。而酶免法虽然避免了放免法的污染、烦琐、保存期短等问题，但由于其检测范围窄、灵敏度低等缺点仍不能满足临床的需求。
发明内容
本发明目的是提供一种精密度高、灵敏度高和稳定性强，以及能有更好的特异性和准确性的乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法。
本发明采用以下技术方案来实现上述目的：
乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法，是通过乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒表面抗原，通过乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒表面抗体，通过乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒e抗原，通过乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒e抗体，通过乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒核心抗体。
乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒表面抗原抗体的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒特异性表面抗原标准品、酶标记乙肝病毒表面抗原抗体、发光底物构成，乙型肝炎病毒表面抗体(抗-MBs)化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒表面抗体系列标准品、酶标记乙肝病毒表面抗原、发光底物构成，乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒e抗原(HBeAg)抗体的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒特异性e抗原系列标准品、酶标记乙肝病毒e抗原抗体、发光底物构成，乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒e抗原(HBeAg)的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒表面抗体系列标准品、酶标记乙肝病毒e抗原、发光底物构成，乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒核心抗体系列标准品、酶标记乙肝病毒核心抗体、发光底物构成。
免疫反应滴定微孔板包被抗表面抗原单克隆抗体或多克隆抗体，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒表面抗原纯品或人血清中乙肝病毒表面抗原，并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记HBsAg单克隆抗体或多克隆抗体，辣根过氧化物酶标记HBsAg抗体的工作浓度为1∶3000以上，发光底物为HRP-鲁米诺发光体系。
免疫反应滴定微孔板包被有基因工程合成乙肝病毒表面抗原，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒表面抗体纯品或人血清中乙肝病毒表面抗体并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记基因合成乙肝病毒表面抗原，辣根过氧化物酶标记HBsAg的工作浓度为1∶3000以上，发光底物为HRP-鲁米诺发光体系。
免疫反应滴定微孔板包被有抗e抗原单克隆抗体或抗e抗原多单克隆抗体，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒e抗原纯品或人血清中乙肝病毒e抗原并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记HBeAg单克隆抗体或多克隆抗体，辣根过氧化物酶标记HBeAg抗体的工作浓度为1∶3000以上，发光底物为HRP-鲁米诺发光体系。
免疫反应滴定微孔板包被基因工程合成乙肝病毒e抗原时，先过量包被单克隆抗体，再包被e抗原，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒e抗体纯品或人血清中乙肝病毒e抗体并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记乙肝病毒e抗原单克隆抗体，辣根过氧化物酶标记抗-HBe的工作浓度为1∶3000以上，酶标记物中加入鼠抗，发光底物为HRP-鲁米诺发光体系。
免疫反应滴定微孔板包被基因工程合成乙肝病毒核心抗原，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒核心抗体纯品或人血清中乙肝病毒核心抗体并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记基因合成乙肝病毒核心抗体，辣根过氧化物酶标记抗-HBc的工作浓度为1∶3000以上，发光底物为HRP-鲁米诺发光体系。
包被板制作：
在包被缓冲液中加入单抗制成工作液，滴入免疫反应滴定微孔板的孔中包被，然后甩去液体，用洗液洗涤，用封闭液封闭。
其中包被缓冲液选用：碳酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液或PBS缓冲液。
碳酸盐缓冲液由Na2CO31.59g、NaHCO32.94g、H2O1000ml组成，PH9.6。
Tris-HCl缓冲液由Tris6.06g、NaCl8.2g、蒸馏水1000ml组成，PH7.4。
PBS缓冲液由Na2HPO42.9g、KH2PO40.2g、NaCl8.0 g、KCl0.2g、
蒸馏水1000ml组成，PH7.4
封闭液选用PBS-BSA缓冲液。
PBS-BSA缓冲液由Na2HPO42.9g、KH2PO40.2g、NaCl8.0g、KCl0.2g、
蔗糖25.0g、BSA10.0g、蒸馏水1000ml组成，PH7.4
抗体标记：取辣根过氧化物酶溶于去离子水，加入过碘酸钠溶液活化，加入乙二醇反应，将反应混合物装入透析袋，用醋酸缓冲液透析，加入待标记物混匀，碳酸缓冲液调PH至碱性，加入NaHB4溶液反应后，装入透析袋，用磷酸盐缓冲液透析，分装后加入蛋白保护剂，-20℃保存。
标准品的配制：用分析缓冲液将高值阳性血清(基因合成抗原)做倍比稀释，以国家标准品(购自中国生物制品检定所)为标准进行标定。分装2-8℃保存备用，标准品设置5-10个。
分析缓冲液由0.05M磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、0.01M氯化钠的3％牛血清白蛋白(BSA)组成，PH为7.2。
发光底物系统HRP-鲁米诺发光体系：
A液：0.15mM高效发光剂；0.59 mM羟基香豆素；0.35mM没食子酸；
pH7.4，0.2MTris-Hcl缓冲液。
B液：0.85mM氨基酸氧化酶；0.8％吐温-20(V/V)；0.5mM金属离子络合
剂(DTPA)；0.12mM维生素C；pH6.5，0.2M乙酸-乙酸盐缓冲液。
本发明是针对临床实验室，为其提供一种既可手工操作，又可适用于某些标准全自动检测仪器的检测手段，本发明采用的化学发光免疫分析法，是利用辣根过氧化物酶催化发光底物，则发光底物发生化学反应并释放大量的能量，产生激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子，利用发光信号检测仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。因此，可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。其中，表面抗原的最小检出量为0.1ng/ml；标准曲线范围为0-200ng/ml，检测范围大，精密度高，变异＜10％，在检测实验中具有很好的重复性，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。表面抗体的最小检出量为2mIU/ml；标准曲线范围为0-1000mIU/ml，检测范围大，精密度高，变异＜10％，在检测实验中具有很好的重复性，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。e抗原的最小检出量为0.05NCU/ml；标准曲线范围为0-10NCU/ml，检测范围大，精密度高，变异＜10％，在检测实验中具有很好的重复性，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。e抗体的最小检出量为0.5NCU/ml；标准曲线范围为0-30 NCU/ml，检测范围大，精密度高，变异＜10％，在检测实验中具有很好的重复性，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。核心抗体的最小检出量为0.05NCU/ml；标准曲线范围为0-8NCU/ml，检测范围大，精密度高，变异＜10％，在检测实验中具有很好的重复性，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。
本发明对人血清中的乙肝病毒标示物进行测定，只需取少量样品即可进行，对被检测者没有任何伤害，测定所用时间较短，测定一般仅需一个多小时即可完成，方便快捷。本发明避免了放射免疫法的放射性污染、有效期短、操作复杂等缺点，为临床提供了一种检测乙肝病毒的更准确、方便、快捷的方法，能够更好地满足临床的需要。
附图说明
图1是实施例表面抗原的标准曲线；
图2是实施例表面抗体的标准曲线；
图3是实施例e抗原的标准曲线；
图4是实施例e抗体的标准曲线；
图5是实施例核心抗体的标准曲线。
具体实施方式
实施例，(一)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定量检测试剂盒的制备：
1、包被板制作：采用PH9.6 0.05M碳酸盐(CB)缓冲液作为包被缓冲液，加入表面抗原4ug/ml，按照100ul/孔进行包被，37度3小时后4℃过夜，然后甩去液体，用洗液洗涤，采用1％牛血清白蛋白-磷酸盐(BSA-PBS)-2.5％蔗糖(0.01 M，PH＝7.2)作为封闭液，4℃封闭过夜方式进行封闭。
2、抗体标记：
1)取辣根过氧化物酶12mg溶于3ml新鲜配制的去离子水中。
2)按51ul/1mg酶加入0.1mol/L的过碘酸钠溶液，混匀，4℃60分钟活化。
3)按26ul/1mg酶加入乙二醇，充分混匀，4℃反应30分钟，终止反应。
4)按上述反应混合物装入透析袋，对1mmol/L醋酸缓冲液透析，4℃过夜，换透析液2-3次。
5)按1.5mg待标记物/1mg酶加入待标记的HBsAg单克隆抗体或多克隆抗体，充分混匀，用PH9.6的0.2mol/L碳酸缓冲液调PH至9.3±0.1。
6)按47ul/1mg酶加入0.106M(4mg/nl)NaHB4溶液，混匀，4℃反应2小时。
7)装入透析袋，用0.067mol/L PH7.0磷酸盐缓冲液中4℃条件下透析过夜，其间换液3-4次。
8)取出，测体积，暂存4℃，质检后分装，加入蛋白保护剂(BB2)，-20℃保存。
3、标准品的配制：
选用3％分析缓冲液，将高值阳性血清做倍比稀释，以国家标准品(购自中国生物制品检定所)为标准进行标定。分装成0.5ml/瓶，2-8℃保存备用。
表面抗原标准品设置为0ng/ml、0.2ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、60ng/ml、200ng/ml。
分析缓冲液由0.05M磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、0.01M的氯化钠的3％牛血清白蛋白(BSA)组成，PH7.4。
(二)、乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)化学发光定性定量检测试剂盒的制备：制备方法同表面抗原定量检测试剂盒。表面抗体标准品设置为0mIU/ml、5mIU/ml、40mIU/ml、250mIU/ml、600mIU/ml、1000mIU/ml。
(三)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)化学发光定性定量检测试剂盒的制备：制备方法同表面抗原定量检测试剂盒。e抗原标准品设置为0NCU/ml、0.1NCU/ml、0.3NCU/ml、1NCU/ml、4NCU/ml、10NCU/ml。
(四)、乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)化学发光定性定量检测试剂盒的制备：制备方法同表面抗原定量检测试剂盒。e抗体标准品设置为0NCU/ml、1NCU/ml、3NCU/ml、8NCU/ml、15NCU/ml、30NCU/ml。
(五)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)化学发光定性定量检测试剂盒的制备：制备方法同表面抗原定量检测试剂盒。核心抗体标准品设置为0NCU/ml、0.1NCU/ml、0.3NCU/ml、1.5NCU/ml、4NCU/ml、8NCU/ml。
(六)、本发明中检测试剂盒的使用操作程序如下：
实验前准备
1、选择低、中、高3个血清标本。将所有检测试剂及血清标本恢复至室温18-25℃(约需30分钟)。
2、将恒温箱或水浴锅调至反应温度。
3、将发光底物A、B液等比例混合至本次实验所需体积(每孔需100μl，可按照每条包被板8孔需混合后的发光底物1ml混合，依次推类)。
实验操作步骤
1、将所需用量的包被板条放置在支架上；
2、在包被孔中分别加入50μl标准品、血清样品。
3、每孔再分别加入酶标记抗体溶液50μl。微量震荡器上振荡1分钟混合均匀。
4、置37℃温浴60分钟。
5、用洗板机以洗液洗6次，然后在吸水纸上拍干。
6、每孔加入混合后的发光底物50μl，室温(18-25℃)反应5分钟。
7、化学发光检测仪器测发光强度值。
以标准品浓度值的对数值为横坐标(X轴)，以标准品发光强度值的对数值为纵坐标(Y轴)，建立标准曲线，进行计算。
图1是表面抗原的标准曲线，表面抗原标准品设置为0ng/ml、0.2ng/ml、lng/ml、10ng/ml、60ng/ml、200ng/ml，标准品按照每孔50μl加入包被板，加入样本50μl，然后每孔加入酶标记抗体溶液50μl，震荡1分钟，贴封膜，放入温箱温育。底物在温育开始后混合，等体积混合A、B，按每孔需50μl。温育1小时后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上机检测。检测结果如下表：
| 表面抗原标准品浓度值(ng/ml) | 相对发光值(RLU) | 浓度回算值 |
| 0 | 9.3 | 0.0 |
| 0.2 | 100.2 | 0.2 |
| 1 | 503.2 | 1.0 |
| 10 | 4938.4 | 10.6 |
| 60 | 25004.6 | 55.7 |
| 200 | 89323.7 | 205.3 |
| 血清1：0.1ng/ml | 55.2 | 0.1 |
| 血清2：30ng/ml | 14938.4 | 32.9 |
| 血清3：150ng/ml | 66963.1 | 152.8 |
由此可以看出，表面抗原的最小检出量为0.1ng/ml；标准曲线范围为0-200ng/ml，检测范围大，精密度高，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。
图2是表面抗体标准曲线，表面抗体标准品设置为0mIU/ml、5mIU/ml、40mIU/ml、250mIU/ml、600mIU/ml、1000mIU/ml。标准品按照每孔50μl加入包被板，加入样本50μl，然后每孔加入酶标记抗体溶液50μl，震荡1分钟，贴封膜，放入温箱温育。底物在温育开始后混合，等体积混合A、B，按每孔需50μl。温育1小时后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上机检测。检测结果如下表：
| 表面抗体标准品浓度值(mIU/ml) | 相对发光值(RLU) | 浓度回算值 |
| 0 | 8.7 | 0.3 |
| 5 | 87.0 | 4.9 |
| 40 | 535.9 | 42.3 |
| 250 | 2396.8 | 251.3 |
| 600 | 4746.2 | 566.7 |
| 1000 | 7817.4 | 1026.3 |
| 血清1：2.0mIU/ml | 40.9 | 2.0 |
| 血清2：280mIU/ml | 2687.3 | 288.0 |
| 血清3：800 mIU/ml | 6299.3 | 793.7 |
由此可以看出，表面抗体的最小检出量为2mIU/ml；标准曲线范围为0-1000mIU/ml，检测范围大，精密度高，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。
图3是e抗原标准曲线，e抗原标准品设置为0NCU/ml、0.1NCU/ml、0.3NCU/ml、1NCU/ml、4NCU/ml、10NCU/ml。标准品按照每孔50μl加入包被板，加入样本50μl，然后每孔加入酶标记抗体溶液50μl，震荡1分钟，贴封膜，放入温箱温育。底物在温育开始后混合，等体积混合A、B，按每孔需50μl。温育1小时后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上机检测。检测结果如下表：
| e抗原标准品浓度值(NCU/ml) | 相对发光值(RLU) | 浓度回算值 |
| 0 | 7.2 | 0.0 |
| 0.1 | 84.9 | 0.1 |
| 0.3 | 415.6 | 0.3 |
| 1 | 2034.1 | 1.0 |
| 4 | 11900.3 | 4.0 |
| 10 | 38856.4 | 9.7 |
| 血清1：0.05NCU/ml | 38.4 | 0.05 |
| 血清2：2.0NCU/ml | 5050.3 | 2.1 |
| 血清3：8.0NCU/ml | 29305.0 | 7.9 |
由此可以看出，e抗原的最小检出量为0.05NCU/ml；标准曲线范围为0-10NCU/ml，检测范围大，精密度高，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。
图4是e抗体标准曲线，e抗体标准品设置为0NCU/ml、1NCU/ml、3NCU/ml、8NCU/ml、15NCU/ml、30NCU/ml。标准品按照每孔50μl加入包被板，加入样本50μl，然后每孔加入酶标记抗体溶液50μl，震荡1分钟，贴封膜，放入温箱温育。底物在温育开始后混合，等体积混合A、B，按每孔需50μl。温育1小时后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上机检测。检测结果如下表：
| e抗体标准品浓度值(NCU/ml) | 相对发光值(RLU) | 浓度回算值 |
| 0 | 199856.4 | 0.2 |
| 1 | 11900.1 | 1.0 |
| 3 | 2033.9 | 2.9 |
| 8 | 385.6 | 7.6 |
| 15 | 114.8 | 15.5 |
| 30 | 36.1 | 30.4 |
| 血清1：0.5NCU/ml | 44900.1 | 0.5 |
| 血清2：10NCU/ml | 240.1 | 10.1 |
| 血清3：25NCU/ml | 49.9 | 25.2 |
由此可以看出，e抗体的最小检出量为0.5NCU/ml；标准曲线范围为0-30NCU/ml，检测范围大，精密度高，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。
图5是核心抗体标准曲线，核心抗体标准品设置为0NCU/ml、0.1NCU/ml、0.3NCU/ml、1.5NCU/ml、4NCU/ml、8NCU/ml。标准品按照每孔50μl加入包被板，加入样本50μl，然后每孔加入酶标记抗体溶液50μl，震荡1分钟，贴封膜，放入温箱温育。底物在温育开始后混合，等体积混合A、B，按每孔需50μl。温育1小时后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上机检测。检测结果如下表：
| 核心抗体标准品浓度值(NCU/ml) | 相对发光值(RLU) | 浓度回算值 |
| 0 | 259814.4 | 0.0 |
| 0.1 | 12471.2 | 0.1 |
| 0.3 | 4644.3 | 0.3 |
| 1.5 | 840.6 | 1.4 |
| 4 | 248.1 | 4.2 |
| 8 | 119.7 | 8.3 |
| 血清1：0.05NCU/ml | 30371.4 | 0.05 |
| 血清2：2.0NCU/ml | 581.2 | 1.9 |
| 血清3：6.0NCU/ml | 163.6 | 6.2 |
由此可以看出，核心抗体的最小检出量为0.05NCU/ml；标准曲线范围为0-8NCU/ml，检测范围大，精密度高，准确性高，本发明试剂盒可以准确回算国家标准品。
本发明临床结果和酶免临床结果比较：本发明对临床上所使用的试剂对照阴阳性，总共对照临床血清3607份(男性2001人，女性1606人)：
表面抗原测定结果分析
| 本发明结果 | 合计 | |||
| - | + | |||
| 酶免结果合计 | -+ | 320853213 | 23371394 | 32313763607 |
如上表，表面抗原有28份不符合样本的经临床病历分析，有23份与本发明结果一致。其中2份是由于酶免灵敏度低漏检所致。
表面抗体测定结果分析
| 本发明结果 | 合计 | |||
| - | + | |||
| 酶免结果合计 | -+ | 1930451975 | 9015421632 | 202015873607 |
如上表，表面抗体有135份不符合样本的经临床病历分析，有130份与本发明结果一致，其中27份是由于酶免灵敏度低漏检所致。
e抗原测定结果分析
| 本发明结果 | 合计 | |||
| - | + | |||
| 酶免结果合计 | -+ | 3616273188 | 18401419 | 31794283607 |
如上表，e抗原有45份不符合样本的经临床病历分析，有40份与本发明结果一致，其中5份是由于酶免灵敏度低漏检所致。
e抗体测定结果分析
| 本发明结果 | 合计 | |||
| - | + | |||
| 酶免结果合计 | -+ | 2215372252 | 6312921355 | 227813293607 |
如上表，e抗体有100份不符合样本的经临床病历分析，有82份与本发明结果一致，其中45份是由于酶免灵敏度低漏检所致。
核心抗体测定结果分析
| 本发明结果 | 合计 | |||
| - | + | |||
| 酶免结果合计 | -+ | 1431201451 | 7620802156 | 150721003607 |
如上表，核心抗体有96份不符合样本的经临床病历分析，有79份与本发明结果一致，其中31份是由于酶免灵敏度低漏检所致。
通过以上对照，可以明确显示出本发明灵敏度高、特异性好，定量准确，与临床高度符合，而且没有产生任何污染，具有很高的临床推广价值。
Claims (7)
1、乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法，其特征在于，通过乙型肝炎病毒表面抗原化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒表面抗原，通过乙型肝炎病毒表面抗体化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒表面抗体，通过乙型肝炎病毒e抗原化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒e抗原，通过乙型肝炎病毒e抗体化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒e抗体，通过乙型肝炎病毒核心抗体化学发光定性定量检测试剂盒检测乙型肝炎病毒核心抗体。
2、如权利要求1所述的乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法，其特征在于，乙型肝炎病毒表面抗原化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒表面抗原抗体的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒特异性表面抗原标准品、酶标记乙肝病毒表面抗原抗体、发光底物构成；乙型肝炎病毒表面抗体化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒表面抗原的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒表面抗体系列标准品、酶标记乙肝病毒表面抗原、发光底物构成，乙型肝炎病毒e抗原化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒e抗原抗体的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒特异性e抗原系列标准品、酶标记乙肝病毒e抗原抗体、发光底物构成；乙型肝炎病毒e抗体化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒e抗原的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒表面抗体系列标准品、酶标记乙肝病毒e抗原、发光底物构成；乙型肝炎病毒核心抗体化学发光定性定量检测试剂盒由包被有乙肝病毒核心抗原的免疫反应滴定微孔板、乙肝病毒核心抗体系列标准品、酶标记乙肝病毒核心抗体、发光底物构成。
3、如权利要求2所述的乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法，其特征在于，免疫反应滴定微孔板包被抗表面抗原单克隆抗体或多克隆抗体，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒表面抗原纯品或人血清中乙肝病毒表面抗原，并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体或多克隆抗体，辣根过氧化物酶标记乙型肝炎病毒表面抗原抗体的工作浓度为1∶3000以上，发光底物为用HRP-鲁米诺发光体系。
4、如权利要求2所述的乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法，其特征在于，免疫反应滴定微孔板包被有基因工程合成乙肝病毒表面抗原，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒表面抗体纯品或人血清中乙肝病毒表面抗体并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记基因合成乙肝病毒表面抗原，辣根过氧化物酶标记乙肝病毒表面抗原的工作浓度为1∶3000以上，发光底物为HRP-鲁米诺发光体系。
5、如权利要求2所述的乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法，其特征在于，免疫反应滴定微孔板包被有抗乙肝病毒e抗原单克隆抗体或抗乙肝病毒e抗原多单克隆抗体，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒e抗原纯品或人血清中乙肝病毒e抗原并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记乙肝病毒e抗原的单克隆抗体或多克隆抗体，辣根过氧化物酶标记乙肝病毒e抗原抗体的工作浓度为1∶3000以上，发光底物为HRP-鲁米诺发光体系。
6、如权利要求2所述的乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法，其特征在于，免疫反应滴定微孔板包被基因工程合成乙肝病毒e抗原时，先过量包被单克隆抗体，再包被e抗原，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒e抗体纯品或人血清中乙肝病毒e抗体并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记乙肝病毒e抗原单克隆抗体，辣根过氧化物酶标记乙肝病毒e抗原单克隆抗体的工作浓度为1∶3000以上，酶标记物中加入鼠抗，发光底物为HRP-鲁米诺发光体系。
7、如权利要求2所述的乙肝病毒的化学发光定性定量检测方法，其特征在于，免疫反应滴定微孔板包被基因工程合成乙肝病毒核心抗原，系列标准品由分析缓冲液为基质，加入乙肝病毒核心抗体纯品或人血清中乙肝病毒核心抗体并添加色素配制而成，辣根过氧化物酶标记基因合成乙肝病毒核心抗体，辣根过氧化物酶标记乙肝病毒核心抗体的工作浓度为1∶3000以上，发光底物为HRP-鲁米诺发光体系。
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