CN1948455A - 以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体及其培育方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体及其培养方法。本发明蛹虫草子实体其特征是大蜡螟幼虫体呈浅黄色，体表略带橙黄色的菌丝，子实体棒形或分枝状，橙黄色，单个或多条丛生于大蜡螟幼虫蛹体表，并由蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)菌种经一级菌种培养和二级菌种培养后，以二级液体菌种感染大蜡螟(Galleria mellonella L.)幼虫，并经子实体培养得到。本发明的蛹虫草的子实体部分与野生蛹虫草相似，营养成分相近，因此具有广阔的商业化应用前景。

Description

以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体及其培育方法
技术领域
本发明涉及一种蛹虫草子实体，具体来说是涉及一种以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体，还涉这种蛹虫草子实体的培育方法。
背景技术
蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)又称为北虫草，属于子囊菌门Ascomycota、子囊菌纲Ascomycetes、肉座菌目Hyocreales、麦角菌科Clavicipitaceae、虫草属Cordyceps。蛹虫草在自然界主要寄生于鳞翅目昆虫的蛹。蛹虫草广布世界各地，我国各省都有分布。
与蛹虫草同属的冬虫夏草(C.sinensis(Berk)Sacc.)是传统的中药资源，具有保健和药用价值，特别是抗肿瘤的功效。蛹虫草的营养成分和药用价值与冬虫夏草相似，因而也受到消费者的青睐，市场需求旺盛。自然资源难以满足需求。蛹虫草的人工栽培是解决这一需求的最佳选择。
目前除了利用含米饭的培养基栽培蛹虫草子实体外，还通过以昆虫为寄主来培养蛹虫草。潘中华等(江苏蚕业，2002，24：21-24)和汪西强等(安徽农业科学，2002，30：965-968)分别利用家蚕蛹(Bombyx mori L.)和蚱蝉蛹(Cryptotympana pustulata F.)培植蛹虫草。李如春等(菌物学报，2005，24：349-355)以台湾虫草(C.formosana Lobayasi et al.)菌感染黄粉虫(Tenebrio molitor L.)形成菌索。李泰辉等(中国专利200510101348.0)利用人工培养的黄粉虫蛹成功培植出蛹虫草子座。另外中国专利87106987，中国专利00130381.3，中国专利01141386.7，中国专利97113190.2等也描述了利用蚕蛹培植蛹虫草的方法。
大蜡螟(Galleria mellonella L.)属螟蛾科蜡螟亚科昆虫，自然生活于蜜蜂蜂巢中。大蜡螟幼虫含有丰富的蛋白质、脂肪、微量元素和维生素等营养物质，目前业已人工大量饲养，用作重要的实验和测定昆虫，也是淡水鱼类、鸟类和两栖爬行类动物的优良生物饵料。但是，到目前为止都未见利用大蜡螟幼虫培植虫草子实体的报道。
发明内容
本发明的目的是利用大蜡螟培养出一种营养成分与野生蛹虫草营养相近的蛹虫草子实体，另一目的是开发出这种蛹虫草实体的培育方法。
本发明通过将蛹虫草菌种感染大蜡螟幼虫，得到的蛹虫草子实体与野生蛹虫草的营养成分相近，从而实现了本发明的目的。
本发明的以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体，其特征是由蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)菌种感染大蜡螟幼虫培育得到，所述的大蜡螟幼虫体呈浅黄色，体表略带橙黄色的菌丝，子实体棒形或分枝状，橙黄色，单个或多条丛生于大蜡螟幼虫蛹体表。
所述的大蜡螟幼虫由室内人工培养基培养获得，所述的蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)菌种可以从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得，编号为3.4655。
本发明的以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体的培育方法，其特征包括以下的步骤：
(1)将蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)菌种经一级菌种培养和二级菌种培养，用蛹虫草二级液体菌种感染大蜡螟(Galleria mellonella L.)幼虫；
(2)将受感染的大蜡螟幼虫置于无菌的组培瓶内，于空气相对湿度在80％～100％，温度为18～25℃的条件下进行保湿培养，当大蜡螟幼虫体表出现白色菌丝时进行光照诱导，光照强度为200～2000Lux，至体表菌丝变成黄色，幼虫体表产生蛹虫草子实体原基后，继续培养50～60天；在幼虫体萎缩时采收蛹虫草子实体。
步骤(1)所述的菌种培养采用现有方法，一级菌种培养是将分离纯化的菌种接种至固体斜面培养基，20～25℃，避光培养7～10天，至白色绒毛状菌丝长满斜面，所述的培养基可以采用常规的配方；所述的二级菌种培养是将一级菌种从平板接至经灭菌的二级菌种的液体培养基中，25℃、120r/min振荡培养7～10天，至菌球充满液体培养基，所述的培养基可以采用常规的配方；在一级菌种和二级菌种中最好加入质量分数0.5％～5.0％的大蜡螟幼虫物质，有利于菌种的生长和保持菌种的活力，所述的大蜡螟幼虫物质是大蜡螟幼虫匀浆或幼虫血淋巴等。
步骤(1)所述的大蜡螟幼虫接种蛹虫草前可以用质量分数为75％的乙醇进行体表消毒，对于人工清洁饲养的大蜡螟幼虫可以不进行体表消毒，所述的感染可以采用通常的方法，例如用无菌注射器将0.01～0.2mL菌种注射进大蜡螟幼虫体内，或者将菌种浸泡大蜡螟幼虫，浸泡时间为1～5分钟。
分析本发明蛹虫草子实体的氨基酸含量，结果见表1。
表1本发明蛹虫草子实体的氨基酸含量
  氨基酸种类   含量(g/100g)   氨基酸种类   含量(g/100g)
  天门冬氨酸苏氨酸丝氨酸谷氨酸干氨酸丙氨酸缬氨酸蛋氨酸异亮氨酸   2.121.081.243.120.831.080.810.220.42   亮氨酸酪氨酸苯丙氨酸赖氨酸组氨酸精氨酸脯氨酸色氨酸胱氨酸   0.961.240.750.870.451.430.870.090.21
  水解氨基酸总和   17.79g/100g
分析本发明蛹虫草子实体的蛋白质，脂肪和多糖含量，结果见表2。
表2本发明蛹虫草子实体的蛋白质、脂肪和多糖含量
  分析项目   含量(％)
  粗蛋白粗脂肪多糖   24.8712.4522.23
分析本发明蛹虫草子实体的维生素含量，结果见表3。
表3本发明蛹虫草子实体的维生素含量
  分析项目   含量
  维生素C(mg/100g)维生素B1(μg/100g)维生素B2(μg/100g)维生素A(IU/100g)维生素D(IU/100g)维生素E(IU/100g)   15.433.868.68＜25＜263
从上述数据可见本发明的蛹虫草的子实体部分与野生蛹虫草相似，营养成分相近，因此具有广阔的商业化应用前景。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
用马铃薯20％(质量分数，下同)，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO4.7H2O0.15％，维生素B120mg/L，琼脂2％，大蜡螟幼虫物质0.5％制得一级培养基，用葡萄糖2％，蛋白胨0.4％，KH2PO40.4％，MgSO4.7H2O 0.4％，维生素B1 20mg/L，大蜡螟幼虫物质0.5％，pH6.5制得二级培养基。
将分离纯化的蛹虫草菌种接种至固体斜面一级培养基，20℃，避光培养7天，至白色绒毛状菌丝长满斜面，然后将一级菌种从平板接至经灭菌的二级菌种的液体培养基中，25℃、120r/min振荡培养7天，至菌球充满液体培养基。用质量分数为75％的乙醇进行体表消毒大蜡螟幼虫，然后用无菌注射器将0.01mL菌种注射进大蜡螟幼虫体内。
将受感染的大蜡螟幼虫置于无菌的组培瓶内，于空气相对湿度在80％，温度为18℃的条件下进行保湿培养，当大蜡螟幼虫体表出现白色菌丝时进行光照诱导，光照强度为200Lux，至体表菌丝变成黄色，幼虫体表产生蛹虫草子实体原基后，继续培养50天；在幼虫体萎缩时采收蛹虫草子实体。通过上述的氨基酸含量，蛋白质含量，脂肪含量，多糖含量和维生素含量，证实其营养成分与野生蛹虫草相近。
实施例2：
用马铃薯20％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO4.7H2O0.15％，维生素B1 20mg/L，琼脂2％，大蜡螟幼虫物质5.0％制得一级培养基，用葡萄糖2％，蛋白胨0.4％，KH2PO40.4％，MgSO4.7H2O0.4％，维生素B1 20mg/L，大蜡螟幼虫物质5.0％，pH6.5制得二级培养基。
将分离纯化的蛹虫草菌种接种至固体斜面一级培养基，25℃，避光培养10天，至白色绒毛状菌丝长满斜面，然后将一级菌种从平板接至经灭菌的二级菌种的液体培养基中，25℃、120r/min振荡培养10天，至菌球充满液体培养基，然后用无菌注射器将0.2mL菌种注射进人工清洁饲养的大蜡螟幼虫体内。
将受感染的大蜡螟幼虫置于无菌的组培瓶内，于空气相对湿度在100％，温度为25℃的条件下进行保湿培养，当大蜡螟幼虫体表出现白色菌丝时进行光照诱导，光照强度为2000Lux，至体表菌丝变成黄色，幼虫体表产生蛹虫草子实体原基后，继续培养60天；在幼虫体萎缩时采收蛹虫草子实体。通过上述的氨基酸含量，蛋白质含量，脂肪含量，多糖含量和维生素含量，证实其营养成分与野生蛹虫草相近。
实施例3：
用马铃薯20％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO4.7H2O0.15％，维生素B1 20mg/L，琼脂2％，大蜡螟幼虫物质3.0％制得一级培养基，用葡萄糖2％，蛋白胨0.4％，KH2PO40.4％，MgSO4.7H2O0.4％，维生素B1 20mg/L，大蜡螟幼虫物质3.0％，pH6.5制得二级培养基。
将分离纯化的蛹虫草菌种接种至固体斜面一级培养基，23℃，避光培养8天，至白色绒毛状菌丝长满斜面，然后将一级菌种从平板接至经灭菌的二级菌种的液体培养基中，25℃、120r/min振荡培养8天，至菌球充满液体培养基。用质量分数为75％的乙醇进行体表消毒大蜡螟幼虫，然后用菌种浸泡大蜡螟幼虫，浸泡时间为1分钟。
将受感染的大蜡螟幼虫置于无菌的组培瓶内，于空气相对湿度在85％，温度为20℃的条件下进行保湿培养，当大蜡螟幼虫体表出现白色菌丝时进行光照诱导，光照强度为500Lux，至体表菌丝变成黄色，幼虫体表产生蛹虫草子实体原基后，继续培养55天；在幼虫体萎缩时采收蛹虫草子实体。通过上述的氨基酸含量，蛋白质含量，脂肪含量，多糖含量和维生素含量，证实其营养成分与野生蛹虫草相近。
实施例4：
用马铃薯20％，葡萄糖2％，KH2PO4O.3％，MgSO4.7H2O0.15％，维生素B1 20mg/L，琼脂2％，大蜡螟幼虫物质2.0％制得一级培养基，用葡萄糖2％，蛋白胨0.4％，KH2PO40.4％，MgSO4.7H2O0.4％，维生素B1 20mg/L，大蜡螟幼虫物质3.0％，pH6.5制得二级培养基。
将分离纯化的蛹虫草菌种接种至固体斜面一级培养基，22℃，避光培养9天，至白色绒毛状菌丝长满斜面，然后将一级菌种从平板接至经灭菌的二级菌种的液体培养基中，25℃、120r/min振荡培养9天，至菌球充满液体培养基。用质量分数为75％的乙醇进行体表消毒大蜡螟幼虫，然后用菌种浸泡大蜡螟幼虫，浸泡时间为5分钟。
将受感染的大蜡螟幼虫置于无菌的组培瓶内，于空气相对湿度在95％，温度为23℃的条件下进行保湿培养，当大蜡螟幼虫体表出现白色菌丝时进行光照诱导，光照强度为1000Lux，至体表菌丝变成黄色，幼虫体表产生蛹虫草子实体原基后，继续培养58天，在幼虫体萎缩时采收蛹虫草子实体。通过上述的氨基酸含量，蛋白质含量，脂肪含量，多糖含量和维生素含量，证实其营养成分与野生蛹虫草相近。

Claims (6)

1.一种以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体，其特征是由蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)菌种感染大蜡螟(Galleria mellonella L.)幼虫培育得到，所述的大蜡螟幼虫体呈浅黄色，体表略带橙黄色的菌丝，子实体棒形或分枝状，橙黄色，单个或多条丛生于大蜡螟幼虫蛹体表。
2.一种以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体的培育方法，其特征包括以下的步骤：
(1)将蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)菌种经一级菌种培养和二级菌种培养，用蛹虫草二级液体菌种感染大蜡螟(Galleria mellonella L.)幼虫；
(2)将受感染的大蜡螟幼虫置于无菌的组培瓶内，于空气相对湿度在80％～100％，温度为18～25℃的条件下进行保湿培养，当大蜡螟幼虫体表出现白色菌丝时进行光照诱导，光照强度为200～2000Lux，至体表菌丝变成黄色，幼虫体表产生蛹虫草子实体原基后，继续培养50～60天；在幼虫体萎缩时采收蛹虫草子实体。
3.根据权利要求2的一种以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体的培育方法，其特征是步骤(1)所述的一级菌种培养是将分离纯化的一级菌种接种至固体斜面培养基，20～25℃，避光培养7～10天，至白色绒毛状菌丝长满斜面，所述的二级菌种培养是将一级菌种从平板接至经灭菌的二级菌种的液体培养基中，25℃、120r/min振荡培养7～10天，至菌球充满液体培养基。
4.根据权利要求3的一种以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体的培育方法，其特征是步骤(1)所述的一级和二菌种培养的培养基中含质量分数0.5％～5.0％的大蜡螟幼虫物质。
5.根据权利要求2或3或4的一种以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体的培育方法，其特征是步骤(1)所述的大蜡螟幼虫接种蛹虫草前用质量分数为75％的乙醇进行体表消毒，所述的感染是用无菌注射器将0.01～0.2mL菌种注射进大蜡螟幼虫体内进行感染，或者将菌种浸泡大蜡螟幼虫进行感染，浸泡时间为1～5分钟。
6.根据权利要求4的一种以大蜡螟幼虫培育的蛹虫草子实体的培育方法，其特征是所述的大蜡螟幼虫物质是大蜡螟幼虫匀浆或幼虫血淋巴。
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